1,2,4三嗪并6,1-a异吲哚化合物的盐酸盐及其应用

摘要

本发明属于化学医药领域，涉及一种具有ALK/C‑MET激酶双重抑制活性的[1,2,4]三嗪并[6,1‑a]异吲哚化合物，以及含有该化合物的药物组合物和该化合物或组合物在药物制备中的应用，具体涉及[1,2,4]三嗪并[6,1‑a]异吲哚化合物的盐酸盐及其应用，该化合物具有良好的溶解性和稳定性，为剂型研究提供了更好的选择。

说明书

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体涉及一种具有ALK/C-MET激酶双重抑制活性的[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚化合物，以及含有该化合物的药物组合物和该化合物或组合物在药物制备中的应用。

背景技术

受体型酪氨酸激酶间变性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase，ALK)最早发现于间变性大细胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphoma，ALCL)中，由2号及5号染色体易位所形成的融合蛋白质，包含了ALK的3’端胞内结构域，以及核磷蛋白(Nucleophosmin，NPM)的5’端的结构域。研究发现，在非小细胞肺癌中，ALK阳性率大约为3％-5％，患者会发生特定的染色体易位，形成EML4和ALK融合蛋白，导致肿瘤细胞因基因表达和信号失调而增殖和存活。

C-MET是一种由C-MET原癌基因编码的蛋白产物，为肝细胞生长因子(HGF)受体，具有酪氨酸激酶活性，与多种癌基因产物和调节蛋白有关，参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控，是细胞增殖、分化和运动的重要因素。研究表明，C-MET与多种癌的发生和转移密切相关，大量肿瘤患者在其肿瘤的方式和转移过程中均有C-MET过渡表达和基因扩增。

美国FDA 2011年批准上市的克唑替尼(Crizotinib)，可剂量依赖性抑制肿瘤细胞C-MET和ALK，对ALK基因发生易位或倒位的肿瘤细胞也具有强效抑制作用。临床研究表明克唑替尼对ALK阳性非小细胞肺癌患者的生存情况有显著改善作用，且耐受性良好，安全性较高，可有效治疗ALK阳性的局部晚期或转移的非小细胞肺癌。

因此，开发具有C-MET和ALK双重抑制活性的药物，必将在临床上有着良好的应用前景。

发明内容

本发明的一个目的在于提供具有ALK/C-MET双重抑制活性的化合物呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚盐酸盐或其溶剂合物、结晶或前药，所述化合物具有良好的溶解性和稳定性，为剂型研究提供了更好的选择。

本发明的另一个目的在于提供含有呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚盐酸盐或其溶剂合物、结晶或前药和药学上可接受的载体的药物组合物，以及包含呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚盐酸盐或其溶剂合物、结晶或前药和另一种或多种蛋白酪氨酸激酶抑制剂的组合物。

本发明的再一个目的在于提供呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚盐酸盐或溶剂合物、结晶或前药或其药物组合物治疗和/或预防肿瘤的方法，以及它们在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。

针对上述目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供式一种化合物或其溶剂合物、结晶或前药，

第二方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其溶剂合物、结晶或前药和药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药，还包含选自下列组成的一种或多种：酪氨酸蛋白酶抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、BCR-ABL抑制剂、c-kit抑制剂、c-Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、VEGF抗体、EGF抗体、HIV蛋白激酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂等。

可以将本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。

第三方面，本发明提供本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物治疗和/或预防肿瘤的方法和在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用，包括向肿瘤易发人群或肿瘤患者施用本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物，以有效降低肿瘤发生率、延长肿瘤患者生命。

具体实施方式

下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

4-氯-6,7-二氢-5H-戊环并[3,4]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲醇的合成

步骤1 1-碘-2-对甲苯磺酰基-4-甲酸甲酯-环戊烷的合成

-5℃-5℃下，称取5g 3-环戊烯-1-甲酸甲酯和12.6g对甲苯亚磺酸钠于反应瓶中，加入300mL二氯甲烷/水混合溶剂(体积比1:1)，反应1.5h后，加入10g I₂，升至室温反应2小时，反应完毕，分离有机相，水相萃取，合并，依次用亚硫酸氢钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得标题化合物，无需纯化，直接用于下一步反应。

ESI-MS m/z:409[M+H]⁺,447[M+K]⁺。

步骤2 1-对甲苯磺酰基-4-甲酸甲酯-环戊烯的合成

称取10.6g步骤1所得化合物于反应瓶中，缓慢加入3.5g三乙胺、200mL乙腈，70℃下反应2.5小时，反应完毕，旋干，加入100mL乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得标题化合物，不经纯化，直接用于下一步反应。

ESI-MS m/z:281[M+H]⁺。

步骤3 2,4-二甲酸甲酯-戊环并[3,4]吡咯的合成

称取1g NaH于反应瓶中，加入70mL无水THF，0-5℃下分批加入100mL溶解有2.8g步骤2所得化合物和1.88g异氰基乙酸甲酯的无水THF溶液，0-5℃下继续反应1.5小时，反应完毕，加入1mL无水甲醇，搅拌，旋干，残留物中加入乙酸乙酯溶解，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得黑色油状物，柱层析纯化，得标题化合物。

ESI-MS m/z:224[M+H]⁺,262[M+K]⁺。

步骤4N-氨基-2,4-二甲酸甲酯-戊环并[3,4]吡咯的合成

称取24mg NaH于反应瓶中，加入5mL无水DMF，0-5℃下滴入2mL溶解有90mg步骤3所得化合物的无水DMF溶液，0-5℃下继续反应0.5h，分批加入120mg二苯基膦酰羟胺，室温下继续反应0.5h，反应完毕，加入乙酸乙酯和冰水萃取，取有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得标题化合物。

ESI-MS m/z:239[M+H]⁺。

步骤5 4-羟基-6,7-二氢-5H-戊环并[3,4]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲酸甲酯的合成

称取0.7g步骤4所得化合物于反应瓶中，加入5mL甲酰胺溶解，180-200℃下反应2小时，反应完毕，将反应液倒入10mL冰水中，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得标题化合物。

¹H>6):δ12.45(s,1H),7.68(s,1H),7.26(s,1H),3.72-3.66(m,1H),3.63(s,3H),3.20-3.02(m,4H)。

ESI-MS m/z:234[M+H]⁺。

步骤6 4-氯-6,7-二氢-5H-戊环并[3,4]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲酸甲酯的合成

称取100mg步骤5所得化合物于反应瓶中，加入20mL甲苯溶解，依次加入5当量三氯氧磷，5当量N,N-二异丙基乙胺，110℃下反应6小时，反应完毕，旋干，加入乙酸乙酯溶解，冰浴下加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至6-7，分离有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得标题化合物。

ESI-MS m/z:252[M+H]⁺。

步骤7 4-氯-6,7-二氢-5H-戊环并[3,4]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲醇的合成

于反应瓶中加入20mL四氢呋喃和54mg四氢铝锂，搅拌下滴加20mL溶解有400mg步骤6所得化合物的无水四氢呋喃溶液，搅拌0.5h，反应完毕，淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，旋干，制得标题化合物。

¹H>6):δ10.05(s,1H),6.11(s,1H),3.65-3.62(m,2H),3.40-3.36(m,1H),2.55-2.52(m,3H),2.28-2.25(m,2H)。

ESI-MS m/z:224[M+H]⁺。

实施例2

1-(N-Boc-哌啶-4-基)-3-碘-1H-吡唑的合成

步骤1哌啶-4-基甲磺酸酯的合成

称取10g4-羟基哌啶于反应瓶中，加入无水四氢呋喃200mL溶解，0℃下，缓慢滴加100mL溶解有25g(Boc)₂O的无水四氢呋喃溶液，滴毕，室温反应12h，旋干，加入二氯甲烷溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得标题化合物，无需纯化，直接用于下一步。

ESI-MS m/z:180[M+H]⁺。

步骤2N-BOC哌啶-4-基甲磺酸酯的合成

称取5.4g步骤1所得物于反应瓶中，加入100mL二氯甲烷溶解，0℃下，缓慢滴加4.2mL三乙胺，滴毕，缓慢滴加甲磺酰氯2.32mL和DMAP 40mg，滴毕，室温反应8h，反应结束，加水，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得标题化合物，无需纯化，直接用于下一步。

ESI-MS m/z:218[M+H]⁺。

步骤3 1-(N-Boc-哌啶-4-基)-3-碘-1H-吡唑的合成

称取9.7g 4-碘吡唑于反应瓶中，加入100mL DMF溶解，0℃下分批加入2.4g钠氢，0℃下反应1h后，加入15.3g步骤2所得物，100℃下反应12h，反应结束，加水猝灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得标题化合物。

¹H>3,δppm):7.53(s,1H),7.47(s,1H),4.23(m,3H),2.85-2.88(m,2H),2.07-2.09(m,2H),1.88(m,2H),1.44(s,9H)。

ESI-MS m/z:378[M+H]⁺。

实施例3

呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚的合成

步骤1呋喃-2-甲基4-氯-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚

称取10g实施例1所得物于反应瓶中，加入200mL四氢呋喃溶解，依次加入8.6g 2-羟甲基呋喃和18.6g三苯基膦，室温反应5h后，降温至0℃，加入15mL DIAD，0℃下反应12h，反应完毕，旋干，柱层析纯化得标题化合物。

¹H>3,δppm):10.08(s,1H),7.67-7.68(m,1H),6.47-6.49(m,1H),6.39-6.41(m,1H),6.08(s,1H),4.48(s,2H),3.46-3.49(m,1H),3.19-3.22(m,1H),2.52-2.58(m,3H),2.27-2.29(m,2H)。

ESI-MS m/z:304[M+H]⁺。

步骤2呋喃-2-甲基4-(1-(N-Boc-哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚

称取4.09g PdCl₂(dppf)于反应瓶中，加入9.4g实施例2所得物、9.5g联硼酸频哪醇酯、9.7g醋酸钾和150mL二甲亚砜，80℃下反应3h，冷却至室温，加入30mL溶解有7.6g步骤1所得物的二甲亚砜溶液、20mL溶解有6.6g碳酸钠的水溶液，80℃反应4h，反应完毕，冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，取滤液，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得标题化合物。

¹H>3,δppm):10.05(s,1H),7.94-7.97(m,2H),7.67-7.68(m,1H),6.47-6.49(m,1H),6.37-6.39(m,1H),6.08(s,1H),4.48(s,2H),3.69-3.71(m,1H),3.21-3.46(m,6H),2.55-2.58(m,2H),2.48-2.51(m,2H),2.27-2.33(m,1H),2.06-2.09(m,2H),1.81-1.83(m,2H),1.38(s,9H)。

ESI-MS m/z:519[M+H]⁺。

步骤3呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚

称取1.0g步骤2所得物于反应瓶中，加入二氯甲烷2mL，加入三氟醋酸5mL，室温搅拌8h，蒸除溶剂和三氟醋酸，加入二氯甲烷溶解，用20％氢氧化钠水溶液调节pH至12-13，分离有机层，水层继续用二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得标题化合物。

¹H>3,δppm):10.05(s,1H),7.94-7.97(m,2H),7.67-7.68(m,1H),6.47-6.48(m,1H),6.39-6.41(m,1H),6.08(s,1H),4.48(s,2H),3.70-3.72(m,1H),3.45-3.47(m,1H),3.21-3.23(m,1H),2.69-2.79(m,4H),2.52-2.58(m,3H),2.27-2.30(m,2H),2.00-2.06(m,3H),1.81-1.83(m,2H)。

ESI-MS m/z:419[M+H]⁺。

实施例4

呋喃-2-甲基4-(1-(哌啶-4-基)1H-吡唑-3基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三嗪并[6,1-a]异吲哚-7-甲基醚盐酸盐的合成

称取15g实施例3所得物于反应瓶中，加入乙酸乙酯50ml溶解，滴加氯化氢乙酸乙酯溶液至pH至6,0℃搅拌10min，倾出上清液，加入丙酮50ml，室温搅拌0.5h，析出固体，过滤，40℃真空干燥2h，得到标题化合物。

稳定性实验

称取0.5g实施例4化合物4份，分别在光照4500Lx条件下，RH70％75℃条件下、RH70％60℃条件下和RH70％室温条件下放置6个月，实验结果见表1。

表1

实验结果表明，本发明实施例4化合物具有非常高的稳定性。

溶解度实验

采用HPLC法测定溶解度，实验结果见表2。

表2

水实施例3化合物15.2mg/ml实施例4化合物207.6mg/ml

体外酶活性评价

所用的ALK激酶为人源重组蛋白，该酶在含有50mM HEPES(pH7.5)，10mM MgCl2，2MDTT(1000x)的缓冲溶液及30μM ATP的反应体系中与多肽底物以及不同浓度的受试化合物共同进行反应(25℃，45min)，随后FAM标记抗体对底物进行标记，最后以时间分辨荧光方式对ALK激酶活性进行定量测定，测得的IC₅₀值(为将一定浓度的酶活性抑制至50％时所需的化合物浓度)见表3。

表3

化合物ALK激酶抑制IC₅₀值(nM)克唑替尼0.52实施例3化合物0.35实施例4化合物0.31

从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对ALK激酶具有较好的抑制活性。

尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。