海洋天然产物Largazole的酰胺型类似物、其制备方法和用途

摘要

本发明属制药领域，涉及一种新的海洋天然产物Largazole的酰胺型类似物、其制备方法及含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。本发明提供了一种由通式(I)表示的化合物或其盐，以及含有治疗有效剂量的所示化合物或其盐和药学载体的抗肿瘤药物组合物，所述的化合物具有比临床使用的药物SAHA具有更强的抑制肿瘤细胞增殖的作用；所述药物可用于治疗实体瘤，癌，淋巴瘤，霍奇金病，肿瘤疾病或新生瘤疾病等。

说明书

技术领域

本发明属制药领域，涉及一种新的海洋天然产物(即Largazole)的酰胺型类似物、其制备方法及含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。

背景技术

据报道，从20世纪70年代以来，我国癌症发病及死亡人数一直曾上升趋势，预计到2020年肿瘤年发病人数更将高达300万人次，而年死亡人数也会达到250万人次，在我国城镇居民中癌症已占死因首位，因此，研究与发现低毒高效的肿瘤治疗药物，具有重要的商业价值。

国际上已开发的抗肿瘤药物众多，在临床上常用的抗肿瘤亦有80多种。随着人们对肿瘤研究的不断深入，认识到传统的具有细胞毒性的化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时也会对人体某些正常的组织、器官和细胞如骨髓、消化道、肝、肾等带来更大的伤害，极大的制约了这些传统化疗药物的临床应用。目前新型抗肿瘤药物的开发正在从传统细胞毒药物转向针对癌症细胞内异常的信号系统靶点的特异性抗肿瘤药物，即分子靶向治疗药。随着对肿瘤信号网络的不断认识，已开发出一些的分子靶向药物，并进入了临床应用，其中，组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase，HDACs)对肿瘤细胞生长调控具有重要作用的一种蛋白。组蛋白乙酰化转移酶(histone acetylases，HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,HDACs)负责调控核心组蛋白乙酰化和去乙酰化的动态平衡，从而保证人体细胞的正常功能，不致发生癌变。但是，研究证实，在大多肿瘤细胞内HDACs都呈现过度表达，而导致组蛋白呈现低乙酰化状态，组蛋白乙酰化状态的失衡与肿瘤的发生和发展有密切关系，并且发现HDACs抑制剂主要通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制血管新生、诱导自我吞噬、发挥协同作用等作用机制，可以达到治疗癌症的目的。

到目前为止己报道的HDACs抑制剂按结构主要有以下几种类型:1.短链脂肪酸类，包括丁酸、苯丁酸和异戊酸及其盐类；2.羟肟酸类，包括trichostatin A (TSA)和伏利诺他(SAHA)及其衍生物CBHA和MM232等；3.不含环氧酮基的环四肽类结构，包括FR90I228,apicidin和包含环氧酮基的环四肽类结构，包括trapoxin B等；4.酰胺类，包括MS-275,CI-994和cso55等(如下式所示)，

研究发现在哺乳动物细胞中HDACs共有18个HDAC的亚型，根据与酵母菌HDAC序列的同源性，分为一下4大类：第I类HDAC家族包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8，与酵母菌Rpd3蛋白相似；第II类HDAC家族包括HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10，与酵母菌Hda1蛋白相似；第III类HDAC家族与酵母菌的转录抑制因子Sir2序列相近；第IV类只有HDAC11一种。其中I、II和IV类的HDAC家族为Zn2+依赖型靶标，而III类HDAC为保守的尼克酰胺腺嘌呤双核苷酸(NAD+)依赖型靶标。

已发现的HDACs抑制剂大多数对于HDACs亚型的选择性不好，导致较多的潜在不良反应逐渐暴露出来，如伏利诺他(SAHA)对HDAC1～HDAC9显示的活性基本相当，导致如红细胞减少、血小板减少及心电图异常等，这都极大的制约了它们的临床疗效。而随着对HDAC与肿瘤发生、发展研究的不断深入探讨，特别是对HDACs各个亚型结构和功能的不断被揭示，单个亚型或者是属于同一类的多个亚型选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂在发挥疗效和减少副作用上更具优势。

目前已在临床应用的HDACs抑制剂药物主要有：伏利诺他(vorinostat, SAHA)，它对HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10有较高的抑制活性，该化合物于2006年被美国FDA批准用于治疗皮肤T淋巴细胞瘤，而同类羟肟酸类HDACs抑制剂Belinostat也于2014年被美国FDA批准临床应用；罗米地辛(romidepsin,FK-228)归属于第I型的选择性HDAC抑制剂，对HDAC I型具有较好的选择性抑制作用，它对于HDAC 2和HDAC 1的抑制活性要比对HDAC4和HDAC6抑制活性的要强，其结构中的二硫键在体内被还原成巯基后发挥于金属离子的结合作用，于2010年被美国FDA批准用于临床治疗的CTTL患者；西达苯胺，为酰胺类HDACs抑制剂于2015年1月在中国批准上市，用于治疗外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。

海洋天然产物Largazole是由佛罗里达州立大学的天然物质研究院HendrinkLuesch等人从海洋蓝藻Symploca spp.中首次分离得到的一个具有十六元环肽内酯结构天然产物，并证实它是一种强效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，尤其是对I型的组蛋白去乙酰化酶具有极好的选择性抑制作用，能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖，临床前的研究表明合适剂量的Largazole能够选择性地杀死肿瘤细胞而对正常细胞不产生影响(J.Am.Chem.Soc.2008,130,13506)。它与具有16元大环结构的罗米地辛(romidepsin,FK-228)相似，细胞内水解它的硫酯侧链，能够产生一个与FK228在体内发挥药物活性结构相似的活化硫醇结构，该活化硫醇可以协调到催化Zn2+的组蛋白去乙酰化酶中(Org.Lett.2010,12,1368)。

Largazole因其独特的结构、良好的药理活性以及特异的靶向性，已有大量关于其合成改造和代谢活性的相关报道(Nat.Prod.Rep.2012,29,449)，同时，Largazole游离硫醇与HDAC8复合物的X-衍射晶体结构也公开报道(J.Am.Chem.Soc.2011,133,12474)。目前对Largazole的改造及修饰工作均以简化其结构、改善其药学性质、探索其构效关系为主要趋势。由于Largazole的代谢不稳定性可能与该分子中侧链中的反式“C＝C”双键、甲基取代的二氢噻唑啉环等不稳定的基团或片段有关，因此对这些不稳定的结构部位进行结构修饰，有助于开发出结构新颖、药效和药学性质更优的抗肿瘤剂。

Psammaplin A是1987年从海绵动物中提取得到的一种海洋天然产物，经研究发现，该天然产物具有多种药物活性，它可以用作天然的高效抗生素，同时还是一种壳多糖酶抑制剂(J.Org.Chem.2003,68,3866-3873)。随后，人们还发现 psammaplin A与FK228、Largazole等天然产物一样也是一种天然的前体药物，其在体内经过还原得到的硫醇结构化合物，也可以与HDAC中的锌离子结合，对HDAC I具有高度的选择抑制活性，通过降低细胞中谷胱甘肽的含量来降低组蛋白的乙酰化水平，进而使组蛋白的乙酰化及去乙酰化达到平衡，从而可以抑制肿瘤细胞的增生(J.Med.Chem.2012,55,1731-1750)。

值得注意的是，Psammaplin A活性硫醇与FK228及Largazole活性硫醇明显区别是，在与药效团巯基相隔2个碳原子的的部位是通过酰胺键连接的，而FK228及Largazole相应部位是反式双键(见下式所示)，由于该酰胺键由于共轭作用而具有类似反式双键性质，可视为电子等排体。基于此，本发明借鉴二者的结构特征，将有关结构特征融合，设计了通式(I)化合物。

发明内容

本发明的目地是提供一种新的海洋天然产物(即Largazole)的酰胺型类似物、其制备方法及含有该化合物的药物或其组合物作为抗肿瘤治疗剂的用途。

本发明提供了一种由通式(I)表示的化合物或其盐：

其中：

R¹选自H，R³，R³S，R³CO，R³NHCO，R³OCO,(R³O)₂P(O)；

通式(I)的7/8位之间可以是双键或者是单键连接；

当通式(I)的7/8位之间是单键连接时，7位的立体构型可以是R或S构型；当通式(I)的7/8位之间是双键连接时，R²不存在；

R²选自R³；

R³选自C₁-C₁₀的烷基，芳香基，或者选自连接着C1-C10烷基的芳香基或者连接着芳基的C1-C10的烷基或者C1-C10的烷基和芳基成环的组合；

另外，本发明还提供了通式(I)所述化合物的制备方法，该方法按如下合成路线一进行：

本发明的通式(I)所述化合物的制备方法中，

第1步：

L-苹果酸(化合物1)与水合氯醛(化合物2)在一种酸的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物3，所述的水合氯醛，其用量是其是化合物1的0.5-3.0摩尔当量；所述的酸是指不同浓度的盐酸、硫酸、磷酸、高氯酸、四氟硼酸；所述的溶剂为水、四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙醇、甲醇、乙酸、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，或者不用溶剂；所述的反应温度为-10-100℃；

第2步：

化合物3与2-(三甲硅基)乙醇(化合物4)在一种碱以及缩合剂的存在下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物5，所述的化合物4，其用量是化合物3的0.5-5.0摩尔当量；所述的碱是指碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、DIPEA或N-甲基吗啉，其用量是化合物3的0.01-3.0摩尔当量；所述的缩合剂是指DCC、EDCI，其用量是化合物3的0.1-3.0摩尔当量；所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第3步：

化合物5与2-(三苯基甲巯基)乙胺，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物6，所述的化合物2-(三苯基甲巯基)乙胺，其用量是化合物5的0.5-3.0摩尔当量；所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、水、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第4步：

氨基保护的缬氨酸(化合物7)在某种碱和一种添加物的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，活化缬氨酸的羧基，随后与化合物6，生成化合物8，所述的化合物7，其用量是化合物6的0.5-5.0摩尔当量；所述的碱是指碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、DIPEA、N-甲基吗啉或它们的任意组合，其用量是化合物6的0.01-3.0摩尔当量；所述的添加物是指2,4,6-Cl₃-C₆H₄COCl、MeOCOCl、EtOCOCl，其用量是是化合物6的0.5-3.0摩尔当量；所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第5步：

化合物8在某种碱的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物9，所述的碱是指二乙胺、二甲胺、四氢吡咯、哌啶、吗啉或它们的任意组合，其用量是化合物8的1.0-40摩尔当量；所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第6步：

化合物9与一种有机酸，即化合物10，在活化剂和缩合剂的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物11，所述的化合物10，其用量是化合物9的0.5-2.0摩尔当量；所述的活化剂是指HOBT、HATU、HOAT 或PyBOC，其用量是化合物9的0.5-2.0摩尔当量；所述的缩合剂是指DCC或EDCI，其用量是化合物9的0.5-2.0摩尔当量；所述的溶剂为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第7步：

化合物11在某种有机酸的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物12，所述的某种有机酸是指乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟化硼、三溴化硼、氯化氢、高氯酸、四氟硼酸、硫酸，其用量是合适溶剂体积的0.01-1.0倍或为合适溶剂的饱和溶液；所述的溶剂是指四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第8步：

化合物12在某种碱和缩合剂的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成大环的化合物13，所述的某种碱是指碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、DIPEA、N-甲基吗啉或它们的任意组合，其用量是化合物12的1-10摩尔当量；所述的缩合剂是指HOBT、HATU、HOAT、PyBOC、DCC、EDCI或其任意组合，其用量是化合物12的1.0-5.0摩尔当量；所述的溶剂是指四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第9步：

在通式(I)中，当R²为氢时，如需要对噻唑啉环进行芳构化生成噻唑环，则可以通过第9步实验操作实现。即：

化合物13(即7位是R或S构型的化合物13b或化合物13c：R²＝H，7,8-位为单键)在某种有机碱和卤代剂的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成芳构化的产物(即化合物13d：R²＝H，7,8-位为双键)，所述的某种有机碱是指DBU、吡啶、4-N,N-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、DIPEA、N-甲基吗啉或它们的任意组合，其用量是化合物13b或化合物13c的1-10倍；所述的卤代剂是指NIS(N-碘代丁二酰亚胺)、NBS(N-溴代丁二酰亚胺)、NCS(N-氯代丁二酰亚胺)、BrCCl₃或其任意组合，其用量是化合物13b或化合物13c的1.0-5.0摩尔当量；所述的溶剂是指四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第10步：

化合物13在某种有机酸和还原剂的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成化合物14，所述的某种有机酸是指乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟化硼、三溴化硼、氯化氢、高氯酸、四氟硼酸、硫酸，其用量是其用量是合适溶剂体积的0.01-1.0倍或为合适溶剂的饱和溶液；所述的还原剂是指i-Pr₃SiH或Et₃SiH，其用量是化合物12的1.0-5.0摩尔当量；所述的溶剂是指四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

第11步：

化合物14在某种碱与酰氯或酸酐或烃化剂的作用下，在合适溶剂和反应温度条件下，反应若干小时，生成大环的化合物15，所述的某种碱是指碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、DIPEA、N-甲基吗啉或它们的任意组合，其用量是化合物13的1-10摩尔当量；所述的酰氯或酸酐或烃化剂是指R³I，R³SS(O)R³，R³COCl，R³NHCOCl，R³OCOCl，(R³O)₂P(O)Cl，其中R³选自C1-C10的烷基、芳香基、连接着C1-C10烷基的芳香基或者R³选自连接着芳基的C1-C10的烷基或者C1-C10的烷基和芳基成环的组合，所述的酰氯或酸酐或烃化剂用量是化合物13的1.0-10摩尔当量；所述的溶剂是指四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO或它们的混合溶剂，所述的反应温度为-10-100℃；

本发明在上文所述中，涉及的有关官能团、化学试剂或溶剂代号，参照国际通用命名规则或通用习惯，有关官能团、化学试剂或溶剂代号定义如下：

Ac：Acetyl；

Bn：Benzyl；

Boc：tert-Butoxycarbonyl；

Cbz：Benzyloxycarbonyl；

DIBALH：Diisobutylaluminium hydride；

DCE：Dichloromethane；

DCM：Dichloromethane；

DIPEA：Diisopropylethyamine；

DME：1,2-Ethanedioldimethylether；

DMAP：4-Dimethylamino pyridine；

DMF：N,N-Dimethylformamide；

DMP：Dess-Martin periodinane；

DMSO：Dimethylsulfoxide；

DPPA：Diphenylphosphonic azide；

DMPU：1,3-Dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidinone；

EA：Ethyl Acetate；

EDCI：Dimethylaminopropyl-N’-enthylcarbodiimide hydrochloride；

Fmoc-Cl：9-Fluorenylmethylchloroformate；

Fmoc：9-Fluorenylmethylformyl；

HATU：2-(7-Aza-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium

Hexafluorophosphate；

HOAT：1-Hydroxy-7-azabenzotriazole；

HOBT：1-Hydroxybenzotriazole；

LDA：Lithium diisopropylamide；

MeCN：Acetonitrile；

NaHMDS：Sodiumbis(trimethylsilyl)amide；

Py：Pridine；

THF：Tetrahydrofuran；

TIPS：Triisopropylsilane；

TFA：Trifluoroacetic acid；

TMSOTf：Trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate；

Tol：Toluene。

本发明还提供了有所述的化合物和一种以上的辅药组成的药物成分，其中药物成分中含有通式所述的化合物，所述药物成分用于抑制哺乳动物细胞增殖，即给患有肿瘤的哺乳动物服用治疗有效剂量的通式所述的药物，其中哺乳动物患有的肿瘤包括实体瘤，癌，淋巴瘤，霍奇金病，肿瘤疾病，新生瘤疾病等。

本发明还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的本发明通式的化合 物或其盐和药学载体，以及该药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。换言之，本发明的中通式(I)所示化合物的盐可以是游离形式和酸式加成盐或羧酸盐的形式。酸式加成盐的例子包括无机酸盐如：硫酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐等，或者有机酸盐如酒石酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐等。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。

实施例1化合物15a的合成

第1步：

100mL干燥洁净的单口烧瓶中加入化合物1(5g，37.3mmol)，加入浓硫酸(30mL)，将装置置于冰水浴中降温至0℃，加入水合氯醛(6.17mg，37.3mmol)，恢复至室温环境继续搅拌反应10小时。TLC监测反应完全，停止反应。将反应液沿壁倒入100mL冰水中，分液，水相用DCM萃取(100mL×3)，合并有机相，水洗(100mL)，饱和食盐水洗(100mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得白色固体化合物9.4g，化合物3的收率95％。¹H>3)δ5.90(s,1H),4.90(s,1H),3.14(dd,J1＝20Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.06(dd,J1＝20Hz,J2＝4.0Hz,1H).ESI-MS(m/z):285[M+Na]⁺.m.p.:70.8-71.8℃.

第2步：

100mL干燥洁净的单口瓶中加入化合物3(1.06g，4mmol)，2-(三甲硅基)乙醇(化合物4，0.29mL，2mmol)，DMAP(25mg，0.2mmol)，加入50mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，将EDCI(767mg，4mmol)溶于10mL无水DCM中后滴加到上述反应液中，恢复至室温环境继续搅拌反应过夜。TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物用EA溶解(200mL)，水洗(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物，得油状化合物602mg，化合物5收率83％。 ¹H>3)δ5.91(d,J＝4.0Hz,1H),4.84-4.86(m,1H),4.22-4.27(m,2H),3.04(dd,J1＝16,J2＝4.0Hz,1H),2.95(dd,J1＝16Hz,J2＝4.0Hz,1H),1.00–1.04(m,2H),0.05(s,9H).ESI-MS(M/Z):385[M+Na]⁺.

第3步：

100mL单口瓶中加入2-三苯基甲巯基乙胺(2.39g，6.6mmol)，化合物5(1.75g，5.5mmol)，加入50mL无水乙醇溶解，室温环境中搅拌反应过夜，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(DCM/MeOH＝70/1),得油状液体化合物2.06g，化合物6收率90％。¹H>3)δ7.30-7.53(m,15H),7.05(t,J＝4.0Hz,1H),4.47-4.49(m,1H),4.30-4.34(m,2H),4.00(d,J＝4.0Hz,1H),3.14-3.28(m,2H),3.02(dd,J1＝16Hz,J2＝4.0Hz,1H),2.73(dd,J1＝16Hz,J2＝8.0Hz,1H),2.51(t,J＝4.0Hz,2H),1.11(t,J＝8.0Hz,2H),0.15(s,9H).ESI-MS(m/z):536.7[M+H]⁺.

第4步：

50mL单口瓶中加入Fmoc-L-Valine(化合物7，2.79g，8.21mmol)，加入20mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，滴加DIPEA(2.72mL，16.5mmol)，滴加2,4,6-苯甲酰氯(1.72mL，11.0m mol),滴加完毕，保持0℃继续搅拌反应1.5小时，将化合物6(2.89g，5.48mmol)及DMAP(736mg，6.02mmol)溶于10mL无水DCM中后滴入上述反应液中，恢复至室温环境继续搅拌反应3小时，TLC监测反应完全，加入DCM(100mL)，水洗(30mL×3)，饱和食盐水洗(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：PE/EA＝5/1)，得白色固体粉末状化合物3.08g，化合物8收率66％。¹H>3)δ7.91(d,J＝8.0Hz,2H),7.69(t,J＝4.0Hz,2H),7.30-7.56(m,19H),6.82(t,J＝4.0Hz,1H),5.63-5.65(m,1H),5.28(d,J＝4.0Hz,1H),4.48-4.59(m,2H),4.36-4.39(m,1H),4.27-4.32(m,2H),3.14-3.19(m,2H),3.19(dd,J1＝16Hz,J2＝4.0Hz,1H),2.90(dd,J1＝16Hz,J2＝8.0Hz,1H),2.49-2.55(m,2H),2.33-2.42(m,1H),1.09(t,J＝8.0Hz,2H),1.08(d,J＝8.0Hz,2H),1.02(d,J＝8.0Hz,3H).ESI-MS(m/z):879.4[M+Na]⁺.

第5步：

100ml单口瓶中加入化合物8(1.33g，1.55mmol)，加入20mL无水乙腈溶解，滴加二乙胺溶液(0.8mL，7.8mmol)，室温搅拌反应3小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物，得油状液体化合物660mg，化合物9收率68％。¹H>3)δ7.19–7.39(m,15H),6.52(t,J＝8.0Hz,1H),5.46-5.49(m,1H),4.10–4.20(m,2H),3.29(d,J＝4.0Hz,1H),3.01–3.11(m,2H),2.79-2.94(m,2H),2.38(t,J＝8.0Hz,2H),1.97-2.06(m,1H),0.95-0.98(m,2H),0.93(d,J＝8.0Hz,3H),0.86(d,J＝4.0Hz,3H),0.02(s,9H).ESI-MS(M/Z):635.3[M+H]⁺.

第6步：

100mL单口瓶中加入化合物10a(1.53g，2.40mmol)，化合物9(715mg，2mmol)，HOBT(325mg，2.40mmol)，加入20mL无水DCM溶解，将EDCI(461mg，2.4mmol)溶于10mL无水DCM中后滴入上述反应液中，室温环境中搅拌反应3小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物用200mL EA溶解，饱和碳酸氢钠溶液洗(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物，得白色固体粉末状化合物1.5g，化合物11a收率77％。¹H>3)δ7.96(s,1H),7.26-7.48(m,15H),7.16(t,J＝6.0Hz,1H),5.60(dd,J1＝12,J2＝6.0Hz,1H),5.36(s,1H),4.71(d,J＝6.0Hz,2H),4.30(dd,J1＝6.0Hz,J2＝6.0Hz,1H),3.74(d,J＝12Hz,1H),3.27-3.33(m,1H),3.14(d,J＝6.0Hz,1H),3.07(dd,J1＝18Hz,J2＝6.0Hz,1H),2.97-3.02(m,1H),2.77(dd,J1＝18Hz,J2＝12Hz,1H),2.58(dt,J1＝6.0Hz,J2＝12Hz,1H),2.46(dt,J1＝6.0Hz,J2＝12Hz,1H),2.32-2.37(m,1H),1.58(s,3H),1.54(s,9H),1.05(dd,J1＝12Hz,J2＝6.0Hz,2H),0.10(s,9H).¹³C>3)δ178.01,172.00,171.51,171.31,170.10,166.42,157.48,150.41,145.56,131.47,129.80,128.61,123.57,86.73,82.42,86.73,82.42,72.71,68.60,66.21,60.14,44.24,42.60,40.39,38.85,33.34,31.78,30.18,25.67,21.13,19.59,19.15.

ESI-MS(m/z):996.4[M+Na]⁺.m.p.:62.5-64.6℃.

第7步：

25mL单口瓶中加入化合物11a(293mg，0.3mmol),加入15mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，滴加TFA(DCM/TFA＝5/1)，恢复至室温继续搅拌反应12小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物用50mL 甲苯溶解后减压蒸除，重复两次，加入50mL无水乙醚立即析出大量白色固体化合物，过滤干燥后得到的白色固体化合物12a，直接用于下一步反应。

第8步：

将白色固体化合物12a溶于10mL无水DCM中后转移到另一500ml单口瓶中，加入300ml无水乙腈稀释后滴加DIPEA(0.3mL，1.8mmol)，室温下搅拌反应10分钟，将HATU(229mg，0.6mmol)和HOBT(82mg，0.6mmol)溶于10mL无水乙腈中后滴加入上述反应液中，室温下搅拌反应16小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物溶于200ml EA中，50mL饱和碳酸氢钠溶液洗(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：EA)，得白色固体144mg，化合物13a收率64％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(s,1H),7.57(t,J＝4.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.16–7.30(m,15H),6.54(t,J＝8.0Hz,1H),5.46(t,J＝4.0Hz,1H),5.30(s,1H),5.00(dd,J1＝16,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝8.0,J2＝4.0Hz,1H),4.07(dd,J1＝20Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.92(d,J＝12Hz,1H),3.32(d,J＝12Hz,1H),3.20-3.29(m,1H),3.06–3.17(m,2H),2.72–2.80(m,1H),2.36(t,J＝8.0Hz,2H),2.01–2.13(m,2H),1.69(s,3H),0.84(d,J＝4.0Hz,3H),0.70(d,J＝8.0Hz,3H).[α]²⁰_D:+0.256(c＝0.39,CHCl₃).

ESI-HRMS>39H₄₁N₅O₅S₃[M+H]⁺:778.2162found:778.2168.

第10步：

50mL单口瓶中加入化合物13a(144mg，0.2mmol)，加入20mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，加入三异丙基硅烷(0.082mL,0.4 mmol)，加入三氟乙酸(1mL,0.2Min S₁),室温下搅拌反应1.5小时，TLC监测反应完全，减压正除溶剂，硅胶柱层析分离产物(洗脱条件：EA)，得白色固体粉末状化合物72mg，14a收率70％。¹H>3)δ7.77(s,1H),7.75(s,1H),7.25(d,J＝6.0Hz,1H),6.75(brs,1H),5.57(t,J＝6.0Hz,1H),5.16(dd,J1＝12Hz,J2＝6.0Hz,1H),4.57(dd,J1＝12Hz,J2＝6.0Hz,1H),4.39-4.51(m,1H),4.32(dd,J1＝18Hz,J2＝6.0Hz,1H),3.91(dd,J1＝24,J2＝12Hz,2H),3.52-3.58(m,1H),3.89(d,J＝6.0Hz,1H),3.33-3.36(m,2H),3.25(dd,J1＝12Hz,J2＝6.0Hz,1H),2.82(dd,J1＝12Hz,J2＝6.0Hz,1H),2.64-2.70(m,1H),2.45-2.51(m,2H),2.10-2.14(m,2H),1.81(s,3H),0.85(d,J＝6.0Hz,3H),0.74(d,J＝6.0Hz,3H).¹³C>3)δ172.79,169.56,168.10,168.30,147.19,124.52,84.42,84.26,71.87,60.45,58.34,43.15,42.66,41.47,38.46,33.03,32.00,29.75,29.43,24.73,24.48,19.21,17.27,14.23(d,J＝13.5).[α]²⁰_D:-6.061(c＝0.132,CHCl3).

ESI-HRMS>20H₂₇N₅O₅S₃[M+H]⁺:514.1247found:514.1245.

第11步：

25mL单口烧瓶中加入化合物14a(29mg，0.057mmol)和DCM(20mL)，将装置置于冰浴中降温至0℃，滴加三乙胺溶液(0.016mL，0.114mmol)，加入辛酰氯(0.068mL，0.339mmol)，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应完全，将装置再次置于冰水浴中降温至0℃，加入10mL甲醇溶液淬灭反应，减压蒸除溶剂，残留物溶于150mlLDCM中，饱和碳酸氢钠溶液洗(30mL×3)，水洗(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：EA)，得白色固体化合物23mg，15a收率63％。¹H>3)δ7.76(s,1H),7.66(brs,1H),7.24(d,J＝6.0Hz>13C>3)δ173.27,169.85,168.63,168.08,72.23,58.64,44.55,43.57,41.94,40.04,38.72,33.49,32.00,30.10,29.28,28.47,25.97,25.06,22.98,19.56,17.61,14.45.[α]²⁰_D:-2.607(c＝0.537,CHCl3).ESI-HRMS>28H₄₁N₅O₆S₃[M+H]⁺640.2292found:640.2293。

实施例2化合物15b和15c的合成

按照实施例1的方法和实验步骤1-5制备的中间体9，随后按照实施例1的方法和实验步骤6-11制备化合物13b和化合物13c：

第6步：

方法1

100mL干燥洁净的圆底烧瓶中加入化合物9(413mg，1.2mmol)、化合物10bc(890mg，1.4mmol)及HOBT(190mg，1.4mmol)，加入无水DCM(20mL)溶解，将EDCI(269mg,1.4mmol)溶于无水DCM中后滴入上述反应液中，滴毕，室温下搅拌反应过夜，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物溶于EA(200mL)中，饱和碳酸氢钠溶液洗(50mL×3)，水洗(50mL)，饱和碳酸氢钠溶液洗(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：PE/EA＝4/3)，真空干燥，得白色泡沫状固体化合物842mg，化合物11bc收率73％。ESI-MS(m/z):960.4[M+H]⁺。

方法2

100mL干燥洁净的单口瓶中加入化合物9(550mg，1.6mmol)、化合物10bc(996mg，1.6mmol)及HATU(761mg，2mmol)，加入无水DMF(50mL)溶解，滴加DIPEA(0.8mL，4.8mmol)，滴毕，室温下继续搅拌反应2小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物，得白色固体泡沫状化合物863mg，化合物11bc收率56％。ESI-MS(m/z):960.4[M+H]⁺.

第7步：

50mL干燥洁净的单口烧瓶中加入化合物11bc(288mg，0.3mmol)，加入无水DCM(15ml)溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，缓慢滴加三氟乙酸溶液(3mL)，滴毕，恢复至室温继续搅拌反应12小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂及多余的三氟乙酸，加入甲苯溶液(25mL×3)溶解残留物，减压蒸除溶剂，加入无水乙醚(15mL)，有白色固体化合物析出，倾去上清液，重复两次，真空干燥的白色粉末状固体化合物249mg，化合物12bc收率95％。ESI-MS(m/z):782.2[M+Na]⁺.

第8步：

化合物12bc(437mg，0.5mmol)溶于10mL无水DCM中后，转移到另一干燥洁净的1000mL单口瓶中，加入无水乙腈(500mL)稀释后，滴加DIPEA(0.5mL，3.0mmol)，室温下搅拌反应10分钟，将HATU(381mg，1.0mmol)HOBT(136mg，1.0mmol)溶于10mL无水乙腈中后滴加入上述反应液中，室 温下搅拌反应16小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，残留物溶于200mlEA中，50mL饱和碳酸氢钠溶液洗(50mL×3)，饱和食盐水洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：EA)，得白色固体化合物186mg，化合物13b和13c的总收率50％，二者比例约为1：1，通过制备型HPLC分离纯化，可以分别得到化合物13b和13c。ESI-MS(m/z):764.2[M+Na]⁺.

第10步：

50mL单口瓶中加入化合物13b或13c(144mg，0.2mmol)，加入20mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，加入三异丙基硅烷(0.082mL,0.4mmol)，加入三氟乙酸(1mL,0.2M in S₁),室温下搅拌反应1.5小时，TLC监测反应完全，减压正除溶剂，硅胶柱层析分离产物(洗脱条件：EA)，得白色固体粉末状化合物，化合物14b或14c的收率70％。ESI-MS(m/z):500.1[M+H]⁺.

第11步：

25mL单口烧瓶中加入化合物14b或14c(29mg，0.057mmol)和DCM(20mL)，将装置置于冰浴中降温至0℃，滴加三乙胺溶液(0.016mL，0.114mmol)，加入辛酰氯(0.068mL，0.339mmol)，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应完全，将装置再次置于冰水浴中降温至0℃，加入10mL甲醇溶液淬灭反应， 减压蒸除溶剂，残留物溶于150mlLDCM中，饱和碳酸氢钠溶液洗(30mL×3)，水洗(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：EA)，得白色固体化合物23mg，15b或15c收率63％。ESI-MS(m/z):626.2[M+H]⁺。

实施例3化合物15d的合成

按实施例2的方法和实验步骤制备化合物13a和13b的混合物，随后以13a/13b为原料，通过以下步骤制备化合物15d：

第9步：

25mL干燥洁净的单口瓶中加入化合物13a/13b(223mg，0.3mmol)，加入无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，滴加DBU溶液(0.224mL,1.5mmol)，将BrCCl₃(0.15ml,1.5mmol)溶于无水DCM(5mL)后滴入上述反应液中，滴毕，恢复至室温继续搅拌反应7小时，TLC监测反应完全，减压蒸除溶剂，柱层析分离纯化产物(洗脱条件：PE/EA＝1/8)，真空干燥的白色固体化合物50mg，化合物13d收率23％。¹H>3)δ8.08(s,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝12Hz,1H),7.58(t,J＝8.0Hz,1H),7.17-7.38(m,15H),7.10(t,J＝4.0Hz,1H),5.10(d,J＝4.0Hz,1H),4.70(d,J＝8.0Hz,2H),4.37(brs,1H),3.02-3.09(m,2H),288(dd,J1＝16Hz,J2＝4.0Hz,1H),2.84(dd,J1＝12Hz,J2＝4.0>+.

第10步：

50mL单口瓶中加入化合物13b或13c(144mg，0.2mmol)，加入20mL无水DCM溶解，将装置置于冰水浴中降温至0℃，加入三异丙基硅烷(0.082mL,0.4mmol)，加入三氟乙酸(1mL,0.2M in S₁),室温下搅拌反应1.5小时，TLC监测反应完全，减压正除溶剂，硅胶柱层析分离产物(洗脱条件：EA)，得白色固体粉末状化合物，化合物14d的收率65％。ESI-MS(m/z):498.1[M+H]⁺.

第11步：

25mL单口烧瓶中加入化合物14d(29mg，0.057mmol)和DCM(20mL)，将装置置于冰浴中降温至0℃，滴加三乙胺溶液(0.016mL，0.114mmol)，加入辛酰氯(0.068mL，0.339mmol)，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应完全，将装置再次置于冰水浴中降温至0℃，加入10mL甲醇溶液淬灭反应，减压蒸除溶剂，残留物溶于150mlLDCM中，饱和碳酸氢钠溶液洗(30mL×3)，水洗(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析分离纯化产物(洗脱条件：EA)，得白色固体化合物23mg，15d收率57％。ESI-MS(m/z):624.2[M+H]⁺。

实施例4测试例

本发明所述部分化合物用SRB法对EBC-1(人肺癌细胞株，c-Met基因扩增)、EBC-1/SR(人肺癌细胞株，c-Met基因扩增，SGX-523耐药株)和NCI-H3122(人肺癌细胞株，EML4-ALK(variant1))，分别考察其对细胞增殖(72小时)能力的影响，并与和临床使用的药物SAHA作比较。

通过步骤：处于对数生长期的细胞按合适密度接种至96孔培养板，每孔90μL，培养过夜后，加入不同浓度的药物作用72h，每个浓度设三复孔，并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。作用结束后，贴壁细胞倾去培养液，加入10％(w/v)三氯乙酸(100μL/孔)于4℃固定1h，随后用蒸馏水冲洗五次，室温干燥后，每孔加入SRB溶液(Sigma，St.Louis，MO，U.S.A)(4mg/mL，溶于1％冰乙酸)100μL，室温下孵育染色15min后，用1％冰乙酸冲洗五次洗去未结合的SRB，室温干燥后，每孔加入10mM Tris溶液100μL，SpectraMax 190酶标仪测定560nm波长下的光密度(OD值)。

待测化合物对EBC-1细胞增殖的IC₅₀值如表1所示，对EBC-1/SR细胞增殖的IC₅₀值如表2所示，化合物对NCI-H3122细胞增殖的IC₅₀值如表3所示。结果显示，本发明所述的化合物具有比临床使用的药物SAHA具有更强的抑制肿瘤细胞增殖的作用。

表1.化合物对EBC-1细胞的增殖抑制作用

表2.化合物对EBC-1/SR细胞的增殖抑制率(％)

表3.化合物对NCI-H3122细胞的增殖抑制率(％)