法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2020-06-19
授权
授权
2017-09-01
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N30/02 申请日:20160710
实质审查的生效
2017-08-08
公开
公开
技术领域
本发明属于水环境中抗菌药物残留检测技术领域。具体涉及一种同时检测水环境中92种抗菌药物残留的方法,与药物残留分析技术领域相关。
背景技术
兽药作为发展现代畜牧业的物质基础,在降低畜禽的发病率与死亡率、促进动物生长、改善动物产品品质和提高饲料利用率方面起到了重要的作用。抗微生物药物是我国使用最广泛的兽药,包括抗生素如β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、林可胺类、多肽类及泰妙菌素等其他类抗生素、化学合成抗菌药如磺胺类及其增效剂、喹诺酮类、喹噁啉类及硝基咪唑等其他药物。这些抗菌类药物经使用后,有可能以原形或代谢物形式随粪便形式排出,可能进入环境水体,污染水体,破坏水中的微生物环境,进而可能对人类健康带来潜在危害。
目前,检测环境水环境中抗菌类药物的方法主要是液相色谱或液相色谱-串联质谱检测。由于液相色谱-串联质谱法,具有高灵敏度、分析范围广等优点,广泛用于抗菌类药物的检测。目前,测定水环境中抗菌类药物的方法,现有的检测方法主要针对一种或一类抗菌类药物的残留检测,做多类药物残留检测方法的报道较少,目前只有测定6类35种化合物和测定4类12种化合物残留的报道。还没有检测8类92种抗菌类药物残留检测方法的相关报道。同时现有的方法比较繁琐,费时,检测成本还比较高。
本发明同时检测水环境中92种抗菌药物残留的方法,具有样品前处理简便、快速、本发明的方法灵敏度高,检测的药物种类多等特点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供一种同时检测水环境中92种抗菌药物残留的方法,本发明采用一针进样,可同时测定92种抗菌类药物,既降低了检测成本,又提高了检测效率,适用于高通量水环境中抗菌类药物残留检测。
一种同时检测水环境中92种抗菌药物残留的方法,其步骤包括固相萃取-液相色谱-串联质谱测定步骤,所述的步骤如下所述:
(1)水样前处理
水样采用0.45μm滤膜过滤,加入螯合剂Na2EDTA,调节pH至8.0;
(2)固相萃取富集净化
采用甲醇和水活化固相萃取柱,加入待富集的水样,待富集的水样的体积为200mL,控制流速为1.0mL/min,采用水淋洗固相萃取柱HLB,500mg,6cc,用洗脱溶剂洗脱,所述的洗脱溶剂为甲醇和水的溶液(以V/V计的甲醇:水为90:10),洗脱体积为6mL,在40℃用氮气吹干。
(3)液相色谱-串联质谱检测
以V/V计,用甲醇:水=10:90的溶液溶解残渣,并定容至1mL,采用液相色谱-串联质谱检测。
(4)以外标法定量待测抗菌药物浓度,绘制标准曲线
准确量取适量抗菌类药物混合标准储备液,按V/V计的甲醇:水=10:90的溶液作为标准溶液的稀释液,对混合标准储备液进行稀释,配制成浓度为0.5~100μg/L标准溶液依次进行测定,以得到的峰面积为纵坐标,以对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,标准曲线的线性相关系数大于0.99。
其中:
步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱检测条件为:
色谱条件:高效液相色谱柱:C18色谱柱(150mm×2.1mm,5μm);进样量:10μL;柱温:40℃;流速:0.2mL/min;
HPLC洗脱条件:A为乙腈,B为0.1%甲酸水溶液,t0′,A=5%;t5′,A=5%;t10′,A=25%;t25′,A=50%;t40′,A=70%;t42′,A=70%;t50′,A=5%;
质谱条件:API5000三重四级杆串联质谱仪:正负离子模式;电喷雾离子源;扫描方式:多反应监测;离子源温度500℃;碰撞气压力0.021MPa;气帘气压力0.24MPa。
步骤(4)中所述的以外标法绘制标准曲线,抗菌药物浓度范围为0.5-100μg/L。
HPLC洗脱条件见表1。
表1 HPLC洗脱条件
质谱条件:采用API5000三重四级杆串联质谱仪:主要技术参数为:
正负离子模式;电喷雾离子源;
扫描方式:多反应监测;离子源温度500℃;
碰撞气压力0.021MPa;气帘气压力0.24MPa。
本发明所述92种抗菌类药物包括:氟喹诺酮类药物(恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹、西诺沙星、吡哌酸、依诺沙星、左氧氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、司帕沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、二氟沙星、达氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星、麻保沙星);四环素类(美他环素、四环素、多西环素、米诺环素、土霉素、金霉素、去甲基金霉素);大环内酯类(竹桃霉素、红霉素、琥乙红霉素、阿奇霉素、吉他霉素、麦迪霉素、罗红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、3-乙酰泰乐菌素、乙酰异戊酰泰乐菌素);β-内酰胺类(青霉素G、头孢氨苄、阿莫西林、头孢拉定、青霉素V、头孢羟氨苄、头孢克洛、羧苄西林、苯唑西林、氯唑西林、头孢唑林、双氯西林、头孢噻呋、头孢喹肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢西丁、头孢噻吩、头孢匹林、萘夫西林);酰胺醇类(氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考);截短侧耳素类(泰妙菌素、沃尼妙林);磺胺类(氨苯磺胺、磺胺脒、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺噁唑、磺胺甲二唑、磺胺苯酰、磺胺异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺氯吡嗪、甲氧苄啶、二甲氧苄啶、磺胺喹噁林、磺胺地索辛、磺胺苯唑、磺胺硝苯、磺胺甲氧嗪、磺胺二甲氧嘧啶);林可胺类(林可霉素、克林霉素、吡唎霉素)。
本发明有益效果在于:
(1)本发明建立了一种可以同时测定水环境样品中92种抗菌类药物残留的检测方法。
(2)采用固相萃取柱富集净化,净化效果好,操作简便、快速、成本低,具有较高的灵敏度,准确度和精密度好。
(3)本发明采用一针进样,可同时测定92种抗菌类药物,降低了检测成本,提高了检测效率,适用于高通量水环境中抗菌类药物残留检测。
具体实施方式
下面结合具体具体实施实例对本发明作进一步详细说明,但本发明的保护范围并不局限于实施例。
实施例1:水环境中92种抗菌类药物含量的测定
(1)水样前处理
水样采用0.45μm滤膜过滤,取100mL水样,加入螯合剂Na2EDTA,调节pH至8.0。
(2)固相萃取富集净化
采用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱,加入待富集的水样,控制水样流速(1.0mL/min),采用水淋洗固相萃取柱,以6mL的甲醇:水=90:10,以V/V计的洗脱溶剂洗脱固相萃取柱,在40℃用氮气吹干。以V/V计,用甲醇:水=10:90溶解残渣,并定容至1mL,采用液相色谱-串联质谱检测。
(3)液相色谱-串联质谱检测
色谱条件:高效液相色谱柱:C18色谱柱(150mm×2.1mm,5μm);进样量:10μL;柱温:40℃;流速:0.2mL/min;
HPLC洗脱条件:A为乙腈,B为0.1%甲酸水溶液,t0′,A=5%;t5′,A=5%;t10′,A=25%;t25′,A=50%;t40′,A=70%;t42′,A=70%;t50′,A=5%;
表列的HPLC洗脱条件见表2。
表2 HPLC洗脱条件
质谱条件:采用API5000三重四级杆串联质谱仪。
主要技术参数:
正负离子模式;电喷雾离子源;扫描方式:多反应监测;离子源温度500℃;
碰撞气压力0.021MPa;气帘气压力0.24MPa。
(4)以外标法定量,绘制标准曲线,
准确量取适量抗菌类药物混合标准储备液,按V/V计的甲醇:水=10:90的溶液作为标准溶液的稀释液,对混合标准储备液进行稀释,配制成浓度为0.5~100μg/L标准溶液依次进行测定,以得到的峰面积为纵坐标,以对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,标准曲线的线性相关系数大于0.99。
(5)准确度和精密度测定
在样品中添加抗菌类药物,浓度分别为0.01μg/L,0.05μg/L,0.1μg/L,每个浓度样品测定5次,重复5天,进行准确度和精密度试验。样品中抗菌类药物回收率为72.3%~102.3%,批间变异系数小于10.8%(按照标准试验方法,在水中添加92种抗菌类药物都用仪器检测过并得到质量色谱图(0.01μg/L),限于篇幅和图谱格式,说明书附图从略)。
从以上数据可以看出,采用本发明的水环境中92种抗菌类药物残留检测方法,回收率和变异系数能满足该残留检测要求。这表明本发明的检测方法,简便、可靠,完全可以满足水环境中抗菌类药物的检测需要。
机译: 用于水环境的插装阀箱系统,用于水环境的插装阀处理区域中的压力,水环境以及用于水环境的 u0432 u0430 u0446 u0438 u0438中的插装阀的方法
机译: 清洁煤泥中水环境的方法和清洁煤泥中水环境的设备,优选花园池塘,水族馆或海洋水族馆
机译: 水环境中电场强度的非线性分布的产生方法及水环境中电场强度的非线性分布的产生装置