一种新型普鲁兰酶基因和高产菌株的获得方法及产酶工艺

摘要

本发明通过系统比对来源于不同微生物的十个以上的普鲁兰酶基因结构相似性，选择高度保守的区域进行多序列组合设计长引物，并采用短时PCR技术，以上述不同来源的微生物染色体DNA为模板，获得相应的普鲁兰酶疑似基因碎片；并将上述基因碎片克隆入高表达载体pHY‑WZX，在枯草芽胞杆菌中进行异源表达；获得的转化子点种普鲁兰多糖筛选平板，获得透明圈显著的转化子进行摇瓶发酵确认酶活力最高的菌种。并建立了基于特种淀粉水解液的普鲁兰酶高效发酵生产新工艺；分别在25 L和30 m3发酵体系实现了普鲁兰酶的高效制备，最高酶活达到880 U/mL。