一种非同位素标记肽段加入法结合MRM的蛋白质定量方法

摘要

本发明公开了一种非同位素标记肽段加入法结合质谱多反应监测技术(MRM)的蛋白质定量方法，包括以下步骤：S1：MRM‑MS方法的建立与优化；首先通过UNIPROT数据库获取蛋白的全部序列，然后通过Skyline软件建立和优化MRM质谱监测的肽段和监测方法；S2：非同位素标记肽段加入法结合MRM技术的绝对定量新方法建立；(1)标准肽段标准溶液制备：合成选好的标准肽段，将蛋白的标准肽段干粉用30‑35％的乙腈、0.1‑0.5％的甲酸和70‑75％的水溶液溶解配置成为100‑110pmol/L的储备液；(2)血清样本制备：用Agilent亲和小柱去除高丰度蛋白；(3)配置适量浓度的标准肽段标准溶液和内标多肽，加入血清样品中，用MRM‑MS的方法进行检测并使用标准外推法计算蛋白含量。