摘要:目的:本实验计划利用itraq技术研究慢性乙肝证侯差异蛋白组学特点,以揭示各证型间差异蛋白的数量,上调和下调,功能及通路的差异. 方法:利用同位素标记的相对和绝对定量(iTRAQ-4plex)结合液相色谱和质谱串联(LC-MS/MS)的蛋白质组学定量分析技术,对慢性乙肝证候差异蛋白组学进行对比研究,然后通过westen-blot进行验证.结果分析采用生物信息学分析技术如Go功能分类与富集分析、Pathway分析以发现差异蛋白的表达特点、功能分类及定位. 结果:基于同位素标记的相对和绝对定量(iTRAQ-4plex)结合液相色谱和质谱串联(LC-MS/MS)1.蛋白裂解有效,充分,蛋白分布均匀,连续.2.质谱鉴定定量结果存在蛋白质501个,可定量的有491个,唯一肽段3920条,3.肝郁脾虚证和肝胆湿热证比较上调的蛋白有59个,下调的蛋白有64个,肝郁脾虚证和脾胃湿热证比较上调的蛋白32个,下调的蛋白有188个,肝郁脾虚证和健康人组比较上调的蛋白68个,下调的蛋白有95个,脾胃湿热证与肝胆湿热证比较上调的蛋白有189个,下调的蛋白有21个,脾胃湿热证与健康人组比较上调的蛋白有144个,下调的蛋白有39个,健康人组与肝胆湿热证比较上调的蛋白有149个,下调的蛋白有72个;4.从KEGG分析得到的各组间均有差别的通路,各组间有显著性意义的通路是hsa04145(吞噬)hsa00480(谷胱甘肽代谢通路)hsa04514(细胞粘附分子通路)等5.从蛋白的功能分析来看,各组间均有差异蛋白的不同功能特点,6.本实验采用蛋白印迹法验证三个差异蛋白,结果可以看到与差异蛋白表达相符的趋势,但并未完全吻合. 结论:在慢性乙肝中医证型客观化研究中,采用先进的差异蛋白质组学itraq方法进行研究是可行的,能够分析出不同证型间的蛋白、蛋白功能及通路的差异特点,有可能成为揭示出中医证候的微观物质基础.