一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法和用途，该类化合物以4'‑羟基查尔酮为原料，在碳酸钾的催化下，与不同的3‑取代‑5‑溴甲基异噁唑反应得到。并研究了新化合物对非细胞体系中酪氨酸酶活性及细胞体系中黑素合成的作用。实验结果表明：化合物1、2、4、6、9、15表现出较好的酪氨酸酶激动活性，优于阳性对照8‑甲氧基补骨脂素(8‑MOP)；化合物1、2、4、5、7、9、11、15、16、17、18能够促进B16小鼠细胞中黑素的合成，它们的活性亦优于阳性对照8‑MOP。该方法反应条件温和，实验步骤简捷。通过本发明所述方法获得的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物1、2、4、5、6、7、9、11、15、16、17、18均可用于临床上制备治疗白癜风的药物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法和用途，该类化合物经非细胞和 细胞活性筛选，其中12个化合物可用于临床上制备治疗白癜风的药物。

背景技术

黄酮类化合物在自然界分布广泛，具有多种药理作用，如抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒， 抗自由基氧化，抗肿瘤、保肝作用等。

菊科植物驱虫斑鸠菊(Ver-nohiaanthelminticaL.)为新疆独有的中药材，只生长 在新疆的喀什、阿克苏地区，维吾尔语称“卡力孜然”，有散寒止痛、化瘀消肿、杀虫祛斑 的功效。驱虫斑鸠菊临床主要用于治疗白癜风，且已有几种以驱虫斑鸠菊为主要成分的复方 药已经上市。如维药复方卡力孜然酊、驱虫斑鸠菊注射液、驱白片等。

专利[CN200410091322.8]“紫卯素及其衍生物在制备色素代谢疾病药物的用途中”， 发现驱虫斑鸠菊中的紫卯素及其衍生物能够提高酪氨酸酶活性，增殖黑色素细胞，增高黑色 素含量，尤其可以作为治疗色素代谢疾病，如白癜风和白发的药物；专利[CN 201210045334.1]“驱虫斑鸠菊黄酮组分及其制备方法和用途”从驱虫斑鸠菊中分离得到紫 卯素，紫卯花素等七种黄酮组分，并发现这些化合物具备治疗白癜风的作用；Nixha[J. Enzyme.Inhib.Med.Chem,2013,28(4),808-815]Sonmez[Bioorg.Med.Chem.Lett., 2011,21,7479-7482]等分别通过对咔唑类查尔酮A环的修饰和查尔酮A环上苯基脲和苯基 硫脲的构建，得到两个系列具有激活酪氨酸酶活性的查尔酮衍生物；本课题组[Chemcial JournalofChineseUniversities,2014,35(6),1204-1211]分别将酰胺、噻唑酰胺等引 入到查尔酮分子中，亦得到若干活性与阳性对照相当的新型查尔酮类酪氨酸酶激动剂。

取代异噁唑杂环是一类具有广泛生物活性的分子结构。药物分子中引入异噁唑杂环。可 以改善配体与受体结合的性质。

本发明在国内外有关专利、文献的综合分析及本课题组前期研究工作的基础上，将苯基 异噁唑引入到查尔酮分子中，从而合成了一系列含有杂环的新型查尔酮衍生物，并研究了其 对非细胞体系酪氨酸酶活性及细胞体系黑素合成的作用。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法和用途，该方法以 4′-羟基查尔酮为原料，在碳酸钾的催化下，与含有R取代基的溴甲基异噁唑反应得到，并 研究了新型衍生物对非细胞体系酪氨酸酶活性及细胞体系黑素合成的作用。实验结果表明： 化合物1、2、4、6、9、15表现出较好的的酪氨酸酶激动活性，优于阳性对照8-甲氧基补 骨脂素(8-MOP)；化合物1、2、4、5、7、9、11、15、16、17、18能够促进B16小鼠细胞 中黑素的合成，它们的活性亦优于阳性对照8-MOP。该方法反应条件温和，实验步骤简捷。 通过本发明所述方法获得的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物1、2、4、5、6、7、9、11、15、 16、17、18均可用于临床上制备治疗白癜风的药物。

本发明所述的一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法，按下列步骤进行：

a、在室温条件下，将4′-羟基查尔酮、含有R取代基的溴甲基异噁唑和干燥碳酸钾溶 解在20ml干燥的丙酮中，加热至56℃，使其回流反应6h；

b、TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体 积比10:1-5∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得含苯基异噁唑的查尔酮衍生物1-18， 其中：

化合物1为1-(4-((3-(4-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物2为1-(4-((3-(3,4-二氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物3为1-(4-((3-(3-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物4为1-(4-((3-(3,4-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物5为1-(4-((3-(3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物6为1-(4-((3-(4-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物7为1-(4-((3-(3,5-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物8为1-(4-((3-(2-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物9为1-(4-((3-(4-氯-3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物10为1-(4-((3-(4-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物11为1-(4-((3-(3-三氟甲基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯 -1-酮；

化合物12为1-(4-((3-苯基异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物13为1-(4-((3-(4-二甲胺基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯 -1-酮；

化合物14为1-(4-((3-(4-硝基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1- 酮；

化合物15为1-(4-((3-(5-碘呋喃-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯 -1-酮；

化合物16为1-(4-((3-(5-甲基呋喃-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯 -1-酮；

化合物17为1-(4-((3-(噻吩-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮；

化合物18为1-(4-((3-(1,4-苯并二恶烷-6基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2- 丙烯-1-酮。

所述的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物中的化合物1、2、4、5、6、7、9、11、15、16、 17、18在制备治疗白癜风药物中的用途。

本发明所述的一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法，该方法中衍生物的结构为：

本发明所述的一种含苯基异噁唑查尔酮衍生物的制备方法，其结构如通式(I)：

其中R分别为4-氟苯基、3,4-二氟苯基、3-氯苯基、3,4-二氯苯基、3-氟苯基、4-氯 苯基、3,5-二氯苯基、2-甲氧基苯基、4-氯-3-氟苯基、4-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、 苯基、4-二甲胺基苯基、4-硝基苯基、5-碘呋喃-2-基、5-甲基呋喃-2-基、3-噻吩-2-基、 1,4-苯并二恶烷-6基。

所述的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物的制备方法，按下列步骤进行：

在室温条件下，将4′-羟基查尔酮、含有R取代基的溴甲基异噁唑和干燥碳酸钾溶解在 20ml干燥的丙酮中，加热至回流反应，TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱 溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比10:1-5∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得含苯 基异噁唑的查尔酮衍生物1-18。

所述方法获得的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物1、2、4、5、6、7、9、11、15、16、17、 18在制备治疗白癜风药物中的用途。

本发明所述的含苯基异噁唑的查尔酮衍生物，是通过Williamson烃化反应将异噁唑引 入到查尔酮分子的A环中，从而合成一系列含苯基异噁唑的查尔酮衍生物，化学反应式为：

其中R分别为4-氟苯基、3,4-二氟苯基、3-氯苯基、3,4-二氯苯基、3-氟苯基、4-氯 苯基、3,5-二氯苯基、2-甲氧基苯基、4-氯-3-氟苯基、4-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、 苯基、4-二甲胺基苯基、4-硝基苯基、5-碘呋喃-2-基、5-甲基呋喃-2-基、3-噻吩-2-基、 1,4-苯并二恶烷-6基。

附图说明

图1为本发明衍生物1-18对B16细胞中黑素合成的作用结果图。

具体实施方式

依据实施例对本发明进一步说明，但本发明不仅限于这些实施例；

试剂：所有试剂均为市售的分析纯；

实施例1

3-取代-5-溴甲基异噁唑的一般制备方法(c)：

取代苯甲醛肟(a)的合成：

将10.0mmolR取代的苯甲醛溶解在30mL30％甲醇水溶液中，搅拌下加入695mg(10.0 mmol)NH₂OH·HCl，溶解后缓慢加入530mg(5.0mmol)Na₂CO₃，室温反应2h，然后加入 30mL蒸馏水和30mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸 除溶剂得中间体a，未经分离纯化直接进行下步反应；

3-取代-5-羟甲基异噁唑(b)的合成：

将10.0mmol取代苯甲醛肟(a)溶于30mL二氯甲烷中，搅拌下分批加入1.60g(12.0 mmol)N-氯代丁二酰亚胺(NCS)，微微加热至N-氯代丁二酰亚胺全部溶解后，滴加0.56g (10.0mmol)2-丙炔-1-醇，随后滴加1.01g(10.0mmol)三乙胺，加热回流，TLC指示反 应终点，反应完成后，冷却至室温，母液水洗，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，将 残渣采用洗脱剂为体积比5:1-2∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得中间体b；

3-取代-5-溴甲基异噁唑(c)的合成：

将10.0mmol3-取代-5-羟甲基异噁唑(b)置于20ml干燥的二氯甲烷中，冰浴下搅拌 使其溶解，缓慢滴加0.95mL(10.0mmol)三溴化磷，滴加完毕后继续在冰浴下反应，TLC 指示反应结束后，向反应体系中加入20mL蒸馏水，并用10％NaOH调节pH至中性，30mL 二氯甲烷萃取2次，合并有机相，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸除溶剂，将残渣采用洗脱剂为体 积比8:1-5∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得中间体c。

实施例2

1-(4-((3-(4-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物1)的制 备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.307g(1.2mmol)3-(4-氟苯 基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加热至 56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物10.347g。

化合物1-(4-((3-(4-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 1)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.7Hz,2H),7.84–7.77(m,3H),7.67 –7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.6Hz,1H),7.45–7.39(m,3H),7.15(t,J＝8.6 Hz,2H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),6.64(s,1H),5.29(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.78(s),167.98(s),165.30(s),162.81(s),161.44(s),144.54(s),135.09 (s),132.36(s),131.05(s),130.61(s),129.09(s),128.90,128.54(s),121.84(s), 116.36(s),116.14(s),114.71(s),101.69(s),61.47(s)。

实施例3

1-(4-((3-(3,4-二氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 2)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.329g(1.2mmol)3-(3,4-二 氟苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物20.365g。

化合物1-(4-((3-(3,4-二氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化 合物2)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.7Hz,2H),7.82(d,J＝15.7Hz,1H), 7.70–7.62(m,3H),7.58–7.49(m,2H),7.45–7.40(m,3H),7.08(d,J＝8.6 Hz,2H),6.64(s,1H),5.30(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ168.44(s),161.39 (s),161.06(s),144.62(s),135.09(s),131.11(s),130.65(s),129.11(s),128.57 (s),123.45(dd),118.26(s),118.08(s),116.32(s),116.13(s),114.71(s),101.62 (s),61.46(s)。

实施例4

1-(4-((3-(3-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物3)的制 备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.324g(1.2mmol)3-(3-氯苯 基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加热至 56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物30.361g。

化合物1-(4-((3-(3-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 3)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.85–7.78(m,2H),7.70 (d,J＝7.2Hz,1H),7.67–7.62(m,2H),,7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.47–7.37 (m,5H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),6.67(s,1H),5.31(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.81(s),168.25(s),161.68(s),161.41(s),159.24(s),144.56(s),135.18 (s),135.11(s),132.41(s),131.08(s),130.62(s),130.42(s),129.10(s),128.55 (s),127.13(s),125.11(s),121.86(s),114.72(s),101.75(s),61.48(s)。

实施例5

1-(4-((3-(3,4-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物4) 的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.368g(1.2mmol)3-(3,4-二 氯苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物40.401g。

化合物1-(4-((3-(3,4-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化 合物4)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.91(d,J＝1.9Hz,1H), 7.85–7.78(m,2H),7.69–7.60(m,4H),7.57–7.50(m,3H),7.45–7.38(m, 3H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.66(s,1H),5.31(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.80(s),168.53(s),161.30(s),144.60(s),139.18(s),134.62(s),132.42 (s),131.19(s),131.08(s),130.63(s),130.56(s),129.10(s),128.84(s),128.55 (s),128.10(s),126.59(s),126.08(s),121.81(s),114.69(s),101.62(s),61.43 (s)。

实施例6

1-(4-((3-(3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物5)的制 备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.307g(1.2mmol)3-(3-氟苯 基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加热至 56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物50.350g。

1-(4-((3-(3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物5)的核 磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.62(m,2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.53(d,J＝15.5Hz,2H),7.47 –7.39(m,4H),7.15(td,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.67(s, 1H),5.30(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.78(s),168.19(s),164.35(s), 161.41(s),144.53(s),135.08(s),132.37(s),131.05(s),130.82(s),130.60(s), 129.09(s),128.54(s),122.73(s),121.83(s),117.42(s),117.21(s),114.70(s), 114.12(s),113.89(s),101.81(s),61.44(s)。

实施例7

1-(4-((3-(4-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物6)的制 备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.324g(1.2mmol)3-(4-氯苯 基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加热至 56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物60.348g。

1-(4-((3-(4-氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物6)的核 磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.81(d,J＝15.6Hz,1H), 7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.67–7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.6Hz,1H),7.46– 7.40(m,5H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.66(s,1H),5.30(s,2H).¹³CNMR(101 MHz,CDCl₃)δ188.80(s),168.14(s),161.81(s),161.43(s),144.57(s),136.46 (s),135.10(s),132.40(s),131.07(s),130.62(s),129.42(s),129.10(s),128.55 (s),128.27(s),127.23(s),121.85(s),114.71(s),101.68(s),61.48(s)。

实施例8

1-(4-((3-(3,5-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物7) 的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.368g(1.2mmol)3-(3,5-二 氯苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物70.412g。

1-(4-((3-(3,5-二氯苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物7) 的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(d,J＝15.6Hz,1H), 7.72–7.62(m,4H),7.53(d,J＝15.6Hz,1H),7.46–7.39(m,4H),7.08(d,J ＝8.8Hz,2H),6.66(s,1H),5.31(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.64(s), 168.43(s),161.11(s),144.45(s),139.04(s),135.73(s),130.92(s),130.40(s), 130.09(s),128.93(s),128.38(s),127.94(s),126.42(s),125.23(s),121.68(s), 114.49(s),101.48(s),61.17(s)。

实施例9

1-(4-((3-(2-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物8) 的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.321g(1.2mmol)3-(2-甲氧 基苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物80.383g。

1-(4-((3-(2-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物8) 的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(d,J＝8.8Hz,2H),7.89(dd,J＝7.7,1.7Hz, 1H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H),7.67–7.61(m,2H),7.54(d,J＝15.7Hz,1H), 7.45–7.38(m,4H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.04(td,J＝7.6,0.7Hz,1H),7.00 (d,J＝8.3Hz,1H),6.89(s,1H),5.28(s,2H),3.89(s,3H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.77(s),166.22(s),161.66(s),160.36(s),157.32(s),144.38(s),135.09 (s),132.12(s),131.54(s),130.97(s),130.53(s),129.59(s),129.05(s),128.50 (s),121.87(s),121.08(s),114.73(s),111.57(s),105.51(s),61.41(s),55.68 (s)。

实施例10

1-(4-((3-(4-氯-3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 9)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.348g(1.2mmol)3-(4-氯-3- 氟苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物90.401g。

1-(4-((3-(4-氯-3-氟苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物9)的 核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.59(m,3H),7.57–7.47(m,3H),7.45–7.40(m,3H),7.08(d,J＝8.8 Hz,2H),6.66(s,1H),5.31(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.76(s),168.52 (s),161.35(s),161.04(s),159.71(s),157.23(s),144.57(s),135.07(s),132.42 (s),131.42(s),131.06(s),130.62(s),129.09(s),128.54(s),123.34(s),121.81 (s),115.24(s),115.01(s),114.68(s),101.63(s),61.41(s)。

实施例11

1-(4-((3-(4-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物10) 的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.321g(1.2mmol)3-(4-甲氧 基苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物100.377g。

1-(4-((3-(4-甲氧基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物10) 的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.68–7.62(m,2H),7.54(d,J＝15.7Hz,1H),7.44– 7.39(m,3H),7.09(d,J＝8.9Hz,2H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),6.62(s,1H), 5.29(s,2H),3.86(s,3H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.63(s),167.33(s),162.19 (s),161.40(s),161.15(s),144.31(s),134.96(s),132.11(s),130.89(s),130.44 (s),128.94(s),128.40(s),128.25(s),121.72(s),121.07(s),114.58(s),114.36 (s),101.49(s),61.35(s),55.35(s)。

实施例12

1-(4-((3-(3-三氟甲基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 11)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.370g(1.2mmol)3-(3-三氟 甲基苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中， 加热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 10∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物110.420g。

1-(4-((3-(3-三氟甲基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 11)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(d,J＝15.7Hz,1H), 7.75(d,J＝7.8Hz,1H),7.70–7.62(m,3H),7.57–7.48(m,2H),7.44–7.40 (m,3H),7.35–7.29(m,1H),7.09(d,J＝8.9Hz,2H),6.69(s,1H),5.32(s,2H). ¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.81(s),168.41(s),161.60(s),161.41(s),144.58 (s),135.12(s),132.45(s),131.09(s),130.65(s),130.64(s),129.11(s),128.56 (s),125.36(s),122.71(s),121.86(s),119.61(s),114.72(s),101.76(s),61.48 (s)。

实施例13

1-(4-((3-苯基异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物12)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.286g(1.2mmol)3-苯基-5 溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加热至56℃， 使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物120.356g。

1-(4-((3-苯基异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物12)的核磁数 据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.85–7.78(m,3H),7.67 –7.63(m,2H),7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.48–7.40(m,6H),7.09(d,J＝8.8 Hz,2H),6.68(s,1H),5.30(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.78(s),167.74 (s),162.72(s),161.49(s),144.47(s),135.08(s),132.28(s),131.02(s),130.56 (s),130.34(s),129.07(s),129.08(s),128.51(s),126.96(s),121.85(s),114.71 (s),101.84(s),61.47(s)。

实施例14

1-(4-((3-(4-二甲胺基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 13)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.337g(1.2mmol)3-(4-二甲 胺基苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中， 加热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 5∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物130.399g。

1-(4-((3-苯基异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物13)的核磁数 据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(d,J＝8.9Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.72–7.62(m,5H),7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.44–7.39(m,3H),7.09(d,J ＝8.9Hz,2H),6.60(s,1H),5.27(s,2H),3.03(s,6H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.84(s),167.00(s),162.61(s),161.61(s),144.43(s),135.10(s),132.18 (s),131.01(s),130.55(s),129.06(s),128.52(s),128.02(s),121.89(s),115.65 (s),114.73(s),101.43(s),77.48(s),77.16(s),76.84(s),61.55(s),40.64(s)。

实施例15

1-(4-((3-(4-硝基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物14) 的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.340g(1.2mmol)3-(4-二甲 胺基苯基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中， 加热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 5∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物140.404g。

1-(4-((3-(4-硝基苯基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物14) 的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(d,J＝15.7Hz,1H), 7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.70–7.62(m,3H),7.57–7.47(m,2H),7.44–7.40 (m,3H),7.34–7.29(m,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),6.69(s,1H),5.31(s,2H). ¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.74(s),168.37(s),161.46(s),159.42(s),149.77 (s),144.51(s),135.06(s),132.36(s),131.03(s),130.60(s),129.06(s),128.51 (s),125.33(s),122.65(s),121.81(s),119.54(s),114.68(s),101.75(s),61.40 (s)。

实施例16

1-(4-((3-(5-碘呋喃-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 15)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.425g(1.2mmol)3-(5-碘呋 喃-2-基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物150.467g。

1-(4-((3-(5-碘呋喃-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物 15)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(d,J＝8.8Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.44–7.40(m,3H),7.06(d, J＝8.9Hz,2H),6.84(d,J＝3.4Hz,1H),6.68(d,J＝3.5Hz,1H),6.64(s,1H), 5.28(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.72(s),167.62(s),161.22(s),157.96 (s),154.14(s),149.00(s),144.45(s),134.94(s),132.23(s),130.93(s),130.47 (s),128.95(s),128.41(s),122.45(s),121.70(s),114.57(s),113.04(s),101.15 (s),90.64(s),61.19(s)。

实施例17

1-(4-((3-(5-甲基呋喃-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合 物16)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.242g(1.2mmol)3-(5-甲基 呋喃-2-基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中， 加热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物160.346g。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.05(d,J＝8.9Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.44–7.39(m,3H),7.06(d,J ＝8.9Hz,2H),6.79(d,J＝3.3Hz,1H),6.57(s,1H),6.11(dd,J＝3.2,0.8Hz, 1H),5.26(s,2H),2.37(s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.85(s),167.20(s), 161.45(s),155.08(s),154.64(s),144.53(s),142.14(s),135.09(s),132.30(s), 131.04(s),130.59(s),129.08(s),128.54(s),121.86(s),114.72(s),112.06(s), 108.12(s),101.13(s),61.39(s),13.85(s)。

实施例18

1-(4-((3-(噻吩-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物17)的 制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.293g(1.2mmol)3-(3-(噻 吩-2-基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物170.346g。

1-(4-((3-(噻吩-2-基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化合物17)的 核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(d,J＝8.9Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.6Hz,1H),7.47(dd,J＝3.6,1.1Hz,1H), 7.45–7.40(m,4H),7.14–7.10(m,1H),7.10–7.05(m,2H),6.61(s,1H),5.28 (s,2H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ188.83(s),167.79(s),161.43(s),157.97(s), 144.54(s),135.12(s),132.38(s),131.06(s),130.61(s),129.10(s),128.55(s), 128.07(s),127.90(s),127.84(s),127.23(s),126.92(s),121.88(s),114.72(s), 101.85(s),61.44(s)。

实施例19

1-(4-((3-(1,4-苯并二恶烷-6基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化 合物18)的制备：

在室温条件下，将0.224g(1mmol)4′-羟基查尔酮、0.355g(1.2mmol)3-(5-碘呋 喃-2-基)-5溴甲基异噁唑和0.414g(3.0mmol)干燥碳酸钾溶解在50ml干燥的丙酮中，加 热至56℃，使其回流反应6h；

TLC检测反应完全后，停止反应并过滤，滤液真空脱溶剂，将残渣采用洗脱剂为体积比 8∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得化合物180.414g。

1-(4-((3-(1,4-苯并二恶烷-6基)异恶唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-苯基-2-丙烯-1-酮(化 合物18)的核磁数据：

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(d,J＝8.8Hz,2H),7.81(d,J＝15.7Hz,1H), 7.67–7.62(m,2H),7.53(d,J＝15.7Hz,1H),7.44–7.40(m,3H),7.33(d,J ＝2.0Hz,1H),7.29(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,2H),6.93(d, J＝8.4Hz,1H),6.58(s,1H),5.27(s,2H),4.29(s,4H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃) δ188.81(s),167.48(s),162.23(s),161.52(s),145.51(s),144.48(s),143.98 (s),135.11(s),132.27(s),131.04(s),130.58(s),129.08(s),128.54(s),121.89 (s),122.06(s),120.37(s),117.95(s),116.03(s),114.72(s),101.72(s),64.64 (s),64.42(s),61.49(s)。

实施例20

本发明所述的含苯基异噁唑查尔酮衍生物的用途，将实施例1-19获得的化合物1-18对 非细胞体系的酪氨酸酶活性的测定：

(1)测试原理：以L-酪氨酸为底物，测定不同样品促进酪氨酸酶将L-酪氨酸氧化最终生 成黑素的能力；

(2)测试的材料：

底物：L-酪氨酸，Sigma-T3754,5g；

酶：酪氨酸酶，Sigma-T3824；

缓冲液：50mM磷酸盐缓冲液；

(3)样品处理：将样品溶于二甲基亚砜中，配制成适宜的初始浓度，再用二甲基亚砜依 次做5倍稀释，各6个稀释浓度；阳性对照药：8-甲氧补骨脂素(8-MOP)，Sigma-M3501， 1g；

(4)方法：

测试样品溶液的配制：

将各样品溶于20-200μL的二甲基亚砜中，配制成20mg/mL的初始浓度，然后用二甲 基亚砜依次做5倍稀释，各6个稀释度(使药物的最终作用浓度依次为80，16，3.2，0.64， 0.13，0.027μg/mL)；

激活酪氨酸酶活性测试：

采用酪氨酸酶多巴速率氧化法，以酶联免疫检测仪于490nm处检测反应产物特异性吸 光度(A490)值，在96孔培养板中进行反应，总反应体系200μL：其中测试样品2μL，50mM 磷酸缓冲液60μL，25U/ml酪氨酸酶40μL，2mM的L-酪氨酸100μL，加样完毕，将96 孔培养板置于温度37℃的水浴箱中孵育20min，在酶标仪下测定每孔A490值，每个浓度三 复孔，最后计算酪氨酸酶的激活率，酪氨酸酶激活率＝[(C-D)-(A-B)]/(A-B)，其中A为加入 酶不加药的反应体系A490值；B为未加酶及药的反应体系A490值；C为同时加入酶及药的 反应体系A490值；D为只加入药物不加酶的反应体系A490，结果表1所示：

表1.衍生物1-18对非细胞体系中酪氨酸酶活性的作用结果

实验结果如表1所示：说明化合物1、2、4、6、9、15表现出较好的酪氨酸酶激动活性， 优于阳性对照8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)，可用于临床上制备治疗白癜风的药物。

实施例21

本发明所述的含苯基异噁唑查尔酮衍生物的用途，将实施例1-19获得的化合物1-18对 B16黑素瘤细胞的黑素合成的作用测定：

(1)筛选模型：小鼠B16黑素瘤细胞；

(2)细胞来源：中科院细胞库提供；

(3)培养条件：10％胎牛血清、1％双抗的高糖DMEM培养基来培养细胞24h后，加入不同 浓度的药物和阳性对照，在72h后测定黑素含量；

(4)测定方法：

黑素的含量用碱消化法进行测定：

正处于对数生长期的B16黑素瘤细胞接种于6cm培养皿中、浓度为2×10⁵个/ml，各孔 加5ml细胞悬浮液；接种12h后、待细胞完全贴壁后用药，用药浓度分别为5、10、20和 40μg/ml；在72h后收集细胞；在不破碎细胞的情况下加入200μl的1MNaOH/10％二甲基 亚砜溶液，置温度80℃水浴中2h后在470nm处测定吸收值A。未用药的组作为对照组与用 药组进行对比。

实验结果如图1所示：说明化合物1、2、4、5、7、9、11、15、16、17、18能够促进 B16小鼠细胞中黑素的合成，它们的活性亦优于阳性对照8-MOP。可用于临床上制备治疗白 癜风的药物。