一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法

摘要

本发明公开了一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，利用80-320KJ/m

说明书

技术领域

本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种调控槲蕨柚皮苷含量的 方法。

背景技术

槲蕨(Drynariaroosii)是中型附生蕨类，其根状茎以骨碎补入 药，并且作为骨碎补的唯一正品收载于《中国药典》中，具有补肾坚 骨、续伤止痛的功效。2001年中国中医科学院在多年临床的基础上 提取槲蕨中的有效成分总黄酮成功研制了中药强骨胶囊，该药填补了 我国治疗骨质疏松症状尚无中药二类新药的空白。目前我国对骨碎补 药材的需求量很大,但槲蕨原材料仍全部来源于野外资源的采挖，不 仅浪费大量的人力财力，还对生态环境造成了不可逆的破坏，所以槲 蕨的人工栽培和工厂化规模生产亟待研究和推广，这也是我国中药现 代化的必然趋势。

大量的试验及临床应用常把柚皮苷和新北美圣草苷两种有效成 分的含量作为槲蕨(骨碎补)药材的质量标准。两者均为黄酮类化合 物，柚皮苷可用于防治心脑血管疾病、镇痛、清热及消炎；新北美圣 草苷可用于治疗骨质疏松。由此可见，在补肾健骨方面，主要是新北 美圣草苷发挥显著效用。本研究组通过对人工栽培3年生槲蕨进行品 质分析发现：其新北美圣草苷的含量不足0.1％，这严重限制了人工 栽培槲蕨作为骨碎补药材使用的生产实践。

已有研究表明，紫外辐射对植物细胞内黄酮类次生代谢产物的合 成和积累有一定的调控作用，但很少将其应用于生产实践中。本发明 首次利用LED光源UVA对人工栽培槲蕨进行辐射处理，用以调控槲 蕨中黄酮类成分—柚皮苷的含量，并将其转化为疗效更为显著的成分 —新北美圣草苷。国内外尚未有相关研究人员或生产企业对槲蕨中柚 皮苷的含量进行调控。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量 的方法。

一方面，本发明一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其为利 用80-320KJ/m²的辐射剂量辐射槲蕨植株，调控槲蕨柚皮苷向新北美 圣草苷转化，优选地，辐射剂量为160KJ/m²。

其中，所述的UVA优选为LED光源UVA。

其中，所述的LED光源UVA的波长优选为365nm，功率优选为 30-50W，光源距离植株优选8-15cm。

其中，所述槲蕨植株为3-5年生槲蕨。

另一方面，本发明提供一种提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法， 其为用UVA辐射槲蕨植株，UVA的辐射剂量为80-320KJ/m²，优选 地，辐射剂量为160KJ/m²。

其中，所述的UVA优选为LED光源UVA。

其中，所述的LED光源UVA的波长优选为365nm，功率优选为 30-50W，光源距离植株优选8-15cm。

其中，所述槲蕨植株为3-5年生槲蕨。

与未用本发明方法处理的对照组相比，处理组柚皮苷的含量降低 了56％，而新北美圣草苷的含量升高了5.4倍，并且两成分的总量与 对照无显著差异。本发明方法有效地调控了槲蕨柚皮苷向药用价值更 高的新北美圣草苷的转化。该发明经济实用、简便易行，可以将此应 用于人工栽培槲蕨有效成分的调控中，进而促进人工栽培槲蕨作为骨 碎补药材的生产实践，缓解生态压力，并推动我国传统中药骨碎补的 大规模开发利用和推广，加快中药现代化的实施进程。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实验材料

植物材料：温室中人工繁殖栽培的三年生槲蕨植株；

光源：LED光源-UVA，波长365nm，功率40W，光源距离植株 10cm；

仪器与设备：培养架、粉碎机、自动磨样机、超低温保存冰箱、 超声波清洗仪、冷冻干燥机、干燥器、离心机、安捷伦高效液相色谱 仪(DAD检测器)等。

试剂：色谱级甲醇、超纯水、柚皮苷标准品、新北美标准品等。

实验方法

应用LED光源UVA连续辐射槲蕨植株一定剂量后取样，测定其 根状茎中柚皮苷和新北美圣草苷的含量变化情况。

辐射剂量：80KJ/m²、160KJ/m²、320KJ/m²。

对照：未经紫外辐射的同批次槲蕨植株。

液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯乙腈、 0.1％甲酸水为流动相，检测波长为280nm。

有效成分提取方法：取辐射处理后的槲蕨植株，去掉叶片和根， 只留根状茎。用刷子刷去泥土，洗净后放入自动磨样机中研磨成粉末， 将粉末装入EP管中，迅速转入液氮中速冻，然后放入冷冻干燥机内 进行干燥，彻底干燥后取槲蕨根状茎干粉20mg，精密称定，置于1.5 ml离心管中，加80％甲醇1mL，超声提取30min，4℃过夜，再次 超声提取30min，离心，将上清液转移到新的离心管中，4℃离心 (10000转/min)3次，每次10min，即得槲蕨有效成分提取液。

柚皮苷标准品配制：取柚皮苷对照品3.2mg，精密称定，加甲醇 552μL制成10Mmol的柚皮苷标准品溶液。

柚皮苷标准曲线的绘制：分别配制1.875Mmol、3.75Mmol、7.5M mol、15Mmol和30Mmol的柚皮苷标准品溶液，按照以上色谱条件 进样，绘制标准曲线并进行回归计算，得出标准曲线为： y＝805.71x+838.59，R²＝0.9981。

新北美圣草苷标准品配制：取新北美圣草苷标准品1mg，精密称 定，加甲醇167.6μL制成10Mmol浓度的标准品溶液。

新北美圣草苷标准曲线的绘制：分别配制0.38Mmol、0.75Mmol、 1.5Mmol、3Mmol、6Mmol的新北美圣草苷标准品溶液，按照以上 色谱条件进样，绘制标准曲线并进行回归计算，得出标准曲线为： y＝870.70x+354.22，R2＝0.9962。

实施例180KJ/m²的UVA辐射槲蕨对柚皮苷和新北美圣草苷含量的 影响

取6株长势一致的3年生槲蕨植株，其中3株作为对照，另3株 置于LED光源UVA下进行辐射，当辐射剂量累积至80KJ/m²时停止 处理。利用HPLC分析两种主效成分柚皮苷和新北美圣草苷的含量， 进样量为40μL。得到色谱图，分析槲蕨中柚皮苷和新北美圣草苷的 含量。

表1

经SPSS分析，LED光源UVA80KJ/m²的辐射剂量处理后，槲 蕨中的柚皮苷、新北美圣草苷及两成分的总含量与对照相比均没有显 著差异。经SPSS分析，LED光源UVA80KJ/m²的辐射剂量处理后， 槲蕨中的柚皮苷及两成分的总含量与对照相比没有显著差异，而新北 美圣草苷的含量显著升高。

实施例2160KJ/m²的UVA辐射槲蕨对柚皮苷和新北美圣草苷含量 的影响

取6株长势一致的3年生槲蕨植株，其中3株作为对照，另3株 置于LED光源UVA下进行辐射，当辐射剂量累积至160KJ/m²时停 止处理。利用HPLC分析两种主效成分柚皮苷和新北美圣草苷的含 量，进样量为40μL。得到色谱图，分析槲蕨中柚皮苷和北美圣草苷 的含量。

表2

经SPSS分析，LED光源UVA160KJ/m²的辐射剂量处理后，槲 蕨中的柚皮苷含量下降，新北美圣草苷极显著上升，为对照的5.4倍， 并且两成分的总含量与对照相比均没有显著差异。由此可见，LED 光源UVA160KJ/m²的辐射剂量极显著调控了柚皮苷向新北美圣草 苷的转化。

实施例3320KJ/m²的UVA辐射槲蕨对柚皮苷和新北美圣草苷含量 的影响

取6株长势一致的3年生槲蕨植株，其中3株作为对照，另3株 置于LED光源UVA下进行辐射，当辐射剂量累积至320KJ/m²时停 止处理。利用HPLC分析两种主效成分柚皮苷和新北美圣草苷的含 量，进样量为40μL。得到色谱图，分析槲蕨中柚皮苷和新北美圣草 苷的含量。

表3

经SPSS分析，LED光源UVA320KJ/m2的辐射剂量处理后，槲 蕨中的柚皮苷含量下降，新北美圣草苷显著上升，为对照的5.0倍， 并且两成分的总含量与对照相比均没有显著差异。由此可见，LED 光源UVA320KJ/m²的辐射剂量同样调控了柚皮苷向新北美圣草苷 的转化。

综上：LED光源UVA80KJ/m²的辐射剂量处理后，槲蕨中新北 美圣草苷的含量显著上升；160KJ/m²的辐射剂量处理后，槲蕨中的 柚皮苷含量下降，新北美圣草苷极显著上升，为对照的5.4倍，并且 两成分的总含量与对照相比没有显著差异；320KJ/m²的辐射剂量处 理后，槲蕨中的柚皮苷含量下降，新北美圣草苷显著上升，为对照的 5.0倍，并且两成分的总含量与对照相比均没有显著差异。由此可见， LED光源160KJ/m²的UVA辐射最大效率地调控了槲蕨柚皮苷向药 用价值更高的新北美圣草苷的转化。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领 域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以 做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。