(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并2,3-c吡咯-5-基)甲酮类衍生物及其制备和应用

摘要

本发明公开了(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物及其制备和应用。具体地，本发明涉及一种具有热休克蛋白HSP90抑制活性的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物(Ⅰ)，这些结构新颖的化合物及其组合物可用于治疗癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、缺血性脑损伤等用途，具有广阔的应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有热休克蛋白HSP90抑制活性 的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生 物，及其制备和应用

背景技术

热休克蛋白对各种细胞应激因素(比如有毒异物、化疗、放射)起到关键的 保护作用，可以使参与维持正常细胞功能的关键蛋白避免错误折叠。热休克蛋白 HSP90在一系列客户蛋白的构象成熟、稳定及功能化方面起着重要作用，这些客 户蛋白很多是属于原癌基因蛋白家族，例如Bcr-Abl,Raf-1,Akt,ErbB2,EGFR, Hif和其他蛋白以及类固醇激素受体。抑制热休克蛋白HSP90可以触发热休克蛋 白与客户蛋白复合物解聚，随后导致客户蛋白降解而失去功效，从而可以抑制肿 瘤细胞的生长。因此，热休克蛋白HSP90在不同疾病领域已成为重要的靶点，尤 其是在癌症及神经退行性疾病中所起的作用已被确证(SolitD.B.,etal.,Drug Discov.Today,2008,13(1-2),38；TaylorD.M.,etal.,CellStressChaperones,2007, 12,.2.,151；YangZ.,etal.,Nat.Med.,2007,13,.3.,348；LuoW.,etal.,Proc.Natl. Acad.Sci.,2007,104,9511；MacarioA.J.,etal.,N.Engl.J.Med.,2005,353,1489； DouF.,etal.,Int.J.Mol.Sci.,2007,8,51)。

此外，许多HSP90客户蛋白在癌症中过度表达，并且往往以变异形式，导致 癌细胞无限增殖和生存；而且，最近发现HSP90对癌细胞间的浸润与扩散也起到 重要作用。有趣的是，从肿瘤细胞中分离出的HSP90蛋白比从正常细胞中具有特 别高的三磷酸腺苷酶活性，因此，设计特定的化合物可以选择性的抑制肿瘤细胞 中的HSP90而不影响正常细胞的功能是可以实现的(ChiosisG.,etal.,ACSChem. Biol.,2006,1,Ii,279；EustaceB.K.,etal.,NatureCellBiol.,2004,6,.6.,507；Koga F.,etal.,Cellcycle,2007,6,1393)。

因此，HSP90被认为是开发癌症治疗药物的重要靶点，抑制HSP90可以实 现对多种癌症的治疗。自从发现两种天然产物，Geldanamycin和Radicicol，都能 通过结合到热休克蛋白N端区域的三磷酸腺苷口袋中，人们对HSP90抑制剂的开 发越来越感兴趣。天然抗生素Geldanamycin对人类的癌细胞生长显示出了潜在的 抑制作用，但是这个化合物明显的毒性阻止了其进一步的临床开发(WhitesellL., etal.,CancerRes.,1992,52,1721；SupkoJ.G.,etal.,CancerChemother. Pharmacol.,1995,36,305)。

目前FDA还没批准一个HSP90抑制剂作为抗癌药物，而HSP90作为一个很有 前景的抗癌药物靶点仍然吸引着医药界去开发新的HSP90抑制剂。

发明内容

为了克服现有技术的不足之处，发明人经过深入研究发现了(2,4-二羟基-5- 异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物具有明显的 HSP90抑制活性。

本发明的目的在于一方面提供一种具有如下式(I)化合物(2,4-二羟基-5-异丙 基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其 药学上可接受盐：

其中，环A为5-10元杂环或5-10元杂芳环；

R₁选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、卤取代 C_1-8烷基、卤取代的C_1-8烷氧基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、-C_0-8-O-R₅、 -C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8C(O)NR₆R₇、 -N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；

R₂、R₃各自独立的选自氢、卤素、C_1-8烷基、卤取代C_1-8烷基、C_3-8环烷基、 C_1-8烷氧基、C_3-8环烷氧基；

R₄选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯 基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基 硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳 基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；

其中所述的C_1-8烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_5-10芳基或5-10元杂芳 基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、 3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、 5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

R₅、R₆、R₇选自氢、C_l-4烷基、C_3-8环烷基；

n为0、1、2、3、4；

r为0、1、2。

本文所述的“5-10元杂环”、“5-10元杂芳环”是指含一个或多个环原子选自 氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳的包含5至 10个环原子的杂环基或杂芳基。

作为优选的方案，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，n优选为1， 环A优选5-10元含氮杂环B或5-10元含氮杂芳环B，结构式如式(II)化合物：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、r如式(I)化合物所定义。

作为进一步优选的方案，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻 吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其环B 优选5-7元含氮杂单环或5-7元含氮杂芳单环。

作为更进一步优选的方案，5-7元含氮杂单环或5-7元含氮杂芳单环优选自 以下结构：

其中以以下结构为最好：

作为最优的化合物，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自以下 结构：

其中，R₄选自氢、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元 杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、 -C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、 -C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；

其中所述的C_1-8烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_5-10芳基或5-10元杂芳 基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、 3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、 5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；R₁、R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、r如式(I)化合物 所定义。

进一步优选的方案，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R₄选自氢、 C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_2-4链炔基、C_3-6环烷基、3-6元杂环基、3-6元杂环基氧 基、3-6元杂环基硫基、C_5-6芳基、C_5-6芳基氧基、C_5-6芳基硫基、5-6元杂芳基、 5-6元杂芳基氧基、5-6元杂芳基硫基、-C_0-4-S(O)rR₅、-C_0-4-O-R₅、-C_0-4-C(O)R₅、 -C_0-4-C(O)OR₅、-C_0-4-O-C(O)R₅、-C_0-4-NR₆R₇、-C_0-4-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；

其中所述的C_1-4烷基、C_3-6环烷基、3-6元杂环基、C_5-6芳基或5-6元杂芳基 任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷 基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、 3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、 5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；R₁、R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、r如式(I)化合物 所定义。

更进一步优选的方案，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩 并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R₄选自 氢、C_1-4烷基、卤取代C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_2-4链炔基、C_3-6环烷基、3-6元 杂环基、3-6元杂环基氧基、3-6元杂环基硫基、C_5-6芳基、C_5-6芳基氧基、C_5-6芳基硫基、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基、5-6元杂芳基硫基、-C_0-4-S(O)rR₅、 -C_0-4-O-R₅、-C_0-4-C(O)R₅、-C_0-4-C(O)OR₅、-C_0-4-O-C(O)R₅、-C_0-4-NR₆R₇、 -C_0-4-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；R₁、R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、 r如式(I)化合物所定义。

更进一步优选的方案，所述的(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩 并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R₄选自 氢、甲基、乙基、三氟甲基、烯丙基、乙炔基、环丙基、环己基、苯基、呋喃基、 四氢呋喃基、吡啶基、吡咯基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、噻吩基、 噻唑基、咪唑基、-C_0-4-S(O)rR₅、-C_0-4-O-R₅、-C_0-4-C(O)R₅、-C_0-4-C(O)OR₅、 -C_0-4-O-C(O)R₅、-C_0-4-NR₆R₇或-C_0-4-C(O)NR₆R₇；R₁、R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、r 如式(I)化合物所定义。

更进一步优选的方案，前述(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R₁选自氢、 卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-4烷基、卤取代C_1-4烷基、卤取代 的C_1-4烷氧基、C_2-4链烯基、C_2-4链炔基、C_3-6环烷基、-C_0-4-O-R₅、-C_0-4-C(O)R₅、 -C_0-4-C(O)OR₅、-C_0-4-O-C(O)R₅、-C_0-4-NR₆R₇、-C_0-4C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅；R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、r如式(I)化合物所定义。

最优选的方案，前述(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c] 吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R₂、R₃各自独立 的选自氢、卤素、甲基、三氟甲基或C_1-4烷氧基。

最优选的化合物，包括但不限于以下化合物：

本发明所涉及结构式(I)化合物(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩 并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐具有明显 的HSP90抑制活性，具有广阔的应用前景。

本发明另一方面提供一种式(I)化合物(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢 -5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的 制备方法，包括如下合成步骤：

其中，Pg₁、Pg₂为羟基保护基，优选C_1-6烷基、C_3-8环烷基、硅烷基、苄基、C_2-8链烯基、2-四氢呋喃基、酰基、烷氧烷基；L为离去基团，优选卤素，更优选溴； R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、n、r如式(I)化合物所定义。

本发明再一方面提供一种药物组合物，其包含治疗有效剂量的式(I)化合物 (2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、 其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。

本发明又一方面提供所述的式(I)化合物(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(4,6-二氢 -5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮类衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐、 或前述药物组合物在制备用于治疗癌症、神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免 疫性疾病、缺血性脑损伤药物中得到的广泛应用。

具体实施方式

详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下 述含义。

“C_1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的 脂族烃基团，C_0-8是指不含碳原子或者C_1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异 丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二 甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、 1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、 2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、 4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、 5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二 甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基 己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己 基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基 戊基或其各种支链异构体等。

烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连 接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰 基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环 基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基 硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、 -C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、 -C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C_3-8环烷基”指包 括3至8个碳原子的环烷基，例如：

单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环 己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。

多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一 个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个 环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基 分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：

“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的 全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有 完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠 环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：

“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这 些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组 成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实 施例包含：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连 接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基 等。

环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多 个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、 C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂 环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂 芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环 原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S- 或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“5-10元杂环基”指包含5至10个环原子的 环基，“5-7元杂环基”指包含5至7个环原子的环基。

单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫 代吗啉基、高哌嗪基等。

多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指单环之间共用一 个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或 S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个 或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺 原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。螺环烷基的 非限制性实施例包含：

“稠杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多 环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共 轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、 1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四 环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：

“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些 可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个 或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原 子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷 基的非限制性实施例包含：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接 在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：

杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多 个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、 C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂 环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂 芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有 共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，“C_5-10芳基”指含 有5-10个碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，例如苯 基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结 构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：

芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下 基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯 基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、 C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、 5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、 -C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和 S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂 芳族体系，“5-10元杂芳基”指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、 噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。 所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一 起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：

杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多 个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、 C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂 环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂 芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷 基，C_2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、 2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。

烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下 基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯 基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、 C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、 5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、 -C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基， C_2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙 炔基、1-，2-或3-丁炔基等。

炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下 基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯 基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、 C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、 5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、-C_0-8-C(O)OR₅、 -C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C_1-8烷氧基指含1-8个碳的 烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。

烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或 多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、 C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂 环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂 芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“环烷氧基”指和-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。C_3-8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、 环戊氧基、环己氧基等。

环烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或 多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、 C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂 环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂 芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C_0-8-S(O)rR₅、-C_0-8-O-R₅、-C_0-8-C(O)R₅、 -C_0-8-C(O)OR₅、-C_0-8-O-C(O)R₅、-C_0-8-NR₆R₇、-C_0-8-C(O)NR₆R₇、-N(R₅)-C(O)R₅或-N(R₅)-C(O)OR₅的取代基所取代；

“卤取代的C_1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8 个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三 溴甲基等。

“卤取代的C_1-8烷氧基”烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8 个碳烷氧基基团。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三 氯甲氧基、三溴甲氧基等。

“卤素”指氟、氯、溴或碘。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明 包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团” 意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基 团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个 氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可 能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验 或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和 (如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的 盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载 体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进 而发挥生物活性。

下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明， 本发明也并非仅局限于实施例的内容。

本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS) 来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定 是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，氘 代甲醇(CD₃OD)和氘代氯仿(CDCl₃)内标为四甲基硅烷(TMS)。

液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent1200InfinitySeries质谱仪。HPLC的 测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(SunfireC18150×4.6mm色谱柱)和 Waters2695-2996高压液相色谱仪(GiminiC18150×4.6mm色谱柱)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的 规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5 mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用 或按照本领域已知的方法来合成。

在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁搅拌下，在干燥氮 气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。氢气氛 是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

在无特殊说明的情况下，实施例中的溶液是指水溶液。反应的温度为室温。 室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。

实施例一

(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4,6 -二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮

步骤一：5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲醛的制备

将5-异丙基-2,4-二羟基苯甲醛(2.3g,12.7mmol)溶于50mL干燥的DMF中，并 向其中加入无水碳酸钾(5.43g,38mmol)，室温下搅拌20分钟，向反应液中滴加碘 甲烷(3.88g,28mmol)，加热至60℃搅拌过夜。减压蒸去溶剂，用100mL乙酸乙 酯分散稀释残留物，分别用水洗，食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩 得粗产品2.14g，直接用于下步反应。LCMS:t＝2.87min,209.2[M+H⁺]。

步骤二：5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酸的制备

将5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲醛(2.14g,10mmol)溶于60mLDMF和水的混合 溶剂中(V/V,3:1)，并向其中加入KMnO₄(2.44g,15.4mmol)和催化量的冰醋酸， 加热至40℃搅拌48小时，减压蒸去有机溶剂，并向其中加入少量的水，冰水冷却， 向其中滴加饱和的NaHSO₃水溶液至体系变为白色，并有大量的白色固体析出， 过滤，将收集的滤液用2NHCl水溶液酸化至pH＝3，乙酸乙酯萃取，无水硫酸 钠干燥，过滤，浓缩干燥得产品1.2g，收率44.3％。LCMS:t＝2.60min, 225.1[M+H⁺]。

步骤三：3-(溴甲基)噻吩-2-羧酸甲酯的制备

将3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯(10g,64mmol)溶于150mL干燥的氯仿中，并向 其中加入NBS(10.83g,60.82mmol)和催化量的过氧化苯甲酰，氮气保护，加热 至70℃搅拌反应过夜，冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液洗，水洗，食盐水洗， 经无水硫酸钠干燥后，旋干滤液得浅褐色油状粗产品15g，无需分离纯化，直接 用于下步反应。

步骤四：3-(氨基甲基)噻吩-2-羧酸甲酯的制备

将粗产品3-(溴甲基)噻吩-2-羧酸甲酯(15g，63.8mmol)溶于NH₃/MeOH(2.0M, 90mL)，在室温下搅拌2小时，减压蒸去溶剂得黄色油固混合物，将其均匀分散 于乙醚中，捣碎，得白色固体，过滤，乙醚洗涤得白色纯品5.8g。LCMS:t＝1.41min, 172.1[M+H⁺]。

步骤五：4,5-二氢-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6-酮的制备

将3-(氨基甲基)噻吩-2-羧酸甲酯(5.8g,33.8mmol)，溶于MeOH/EtOH (120mL,v/v＝1:1)混合物溶剂中，并向其中加入K₂CO₃(5.15g,37.2mmol)，搅拌， 加热至90℃，反应8小时，冷却至室温，减压蒸去溶剂得粗产品，加入150mL乙 酸乙酯，经水洗，食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得粗产品4.7g，并直接 用于下步反应。LCMS:t＝1.61min,140.1[M+H⁺]。

步骤六：6-羰基-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-羧酸叔丁酯的制备

将4,5-二氢-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6-酮(4.7g,33.77mmol)溶于120mL二氯甲 烷中,并向其中加入三乙胺(10.25g,101.3mmol)和催化量的DMAP(412mg, 3.38mmol)，冰浴冷却，滴加碳酸二叔丁基酯(14.7g,67.5mmol)，室温下搅拌3小 时，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，水洗，食盐水洗，经无水硫酸钠干燥，过滤， 减压浓缩得粗产品，经柱层析分离得产品1.5g。LCMS:t＝2.49min, 140.1[M-100+H⁺],184.1[M-56+H⁺]。

步骤七：4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-羧酸叔丁酯的制备

将4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-羧酸叔丁酯(1.5g,6.27mmol)溶于15mL 干燥的四氢呋喃中,氮气保护，冰水冷却，向其中滴加硼烷二甲硫醚络合物 (15.67mL,31.34mmol)，滴加完毕，缓慢加热至40℃，并搅拌反应18小时。冰水 冷却，用少量的甲醇淬灭反应，加入少量的水，加热回流1小时。减压蒸去溶剂 得粗产品，经柱层析分离得纯产品356mg，收率25.2％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃): δ7.28(s,1H),6.86(s,1H),4.64(s,2H),4.51(s,2H),1.51(s,9H)。

步骤八：5-溴-1,2,3,4-四氢环戊二烯并[c]吡咯氢溴酸盐的制备

将4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-羧酸叔丁酯(356mg,1.58mmol)溶于 10mL氯仿中，并加入催化量的冰醋酸，冰水冷却下滴加液溴(263mg,1.58mmol)， 室温下搅拌过夜，向反应体系中加入适量的乙醚，有大量的固体析出，搅拌分散， 过滤，用乙醚洗涤，得到浅褐色产品氢溴酸盐410mg,收率91％。LCMS:t＝1.53min, 203.9[M+H⁺],206.1[M+2H⁺]。

步骤九：(2-溴-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2- 基)苯基]甲酮的制备

将5-溴-1,2,3,4-四氢环戊二烯并[c]吡咯氢溴酸盐溶于15mL干燥的二氯甲烷 中，并向其中加入N,N-二异丙基乙胺(557.8mg,4.32mmol)，搅拌10分钟，向其中 加入HATU(575mg,1.5mmol)和2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯甲酸(339mg, 1.44mmol)，室温下搅拌反应过夜，将反应体系用二氯甲烷稀释，水洗，食盐水 洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经柱层析分离得纯产品458mg， 收率77.6％。LCMS:t＝3.27min,410.0[M+H⁺],412.0[M+2H⁺]。

步骤十：[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯基]{2-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-4,6- 二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基}甲酮的制备

将(2-溴-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯 基]甲酮(75mg,182umol)和三氟((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)硼酸钾(80mg,365umol) 溶于3mL二氧六环/水(v/v,5:1)的混合溶剂中，并向其中加入碳酸铯(119mg, 365umol),醋酸钯(3.5mg,18umol)和配体Xphos(17mg,36umol)，氮气置换，密闭 反应管，微波条件下加热至130℃反应1小时，冷却至室温，加乙酸乙酯稀释反应 液，经水洗，食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去溶剂得粗产品， 经制备薄层层析分离得纯产品35mg，收率43％。LCMS:t＝2.25min,444.3[M+ H⁺]。

步骤十一：[2,4-二羟基-5-(丙烷-2-基)苯基]{2-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-4,6- 二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基}甲酮的制备

将[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯基]{2-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-4,6-二氢 -5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基}甲酮(35mg,79umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰 水冷却下滴加5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷 却，加少量的水淬灭反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯 甲烷萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得 纯产品10mg，收率32.3％。LCMS:t＝1.99min,416.2[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.15(s,1H),6.82(s,1H),6.38(s,1H),4.84(s, 2H),4.69(s,2H),3.76(s,2H),3.21(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.73(bs,8H),2.47(s, 3H),1.23(t,J＝6.4Hz,6H).

实施例二

(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-(吗啉代甲基)-4,6-二氢 -5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮

步骤一：(5-异丙基-2,4-二甲氧苯基)(2-(吗啉代甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮的制备

将(2-溴-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯 基]甲酮(90mg,219umol)和三氟(吗啉-4-基甲基)硼酸钾(91mg,438umol)溶于3mL 二氧六环/水(v/v,5:1)的混合溶剂中，并向其中加入碳酸铯(143mg,438umol),醋酸 钯(4.2mg,22umol)和配体Xphos(20mg,44umol)，氮气置换，密闭反应管，微波条 件下加热至130℃反应1小时，冷却至室温，加乙酸乙酯稀释反应液，经水洗，食 盐水洗，并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去溶剂得粗产品，经制备薄层层析 分离得纯产品30mg,收率31.7％。LCMS:t＝2.20min,431.2[M+H⁺]。

步骤二：(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-(吗啉代甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮的制备

将(5-异丙基-2,4-二甲氧苯基)(2-(吗啉代甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡 咯-5-基)甲酮(30mg,70umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰水冷却下滴加5mL 的三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷却，加少量的水淬灭 反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯甲烷萃取，无水硫酸 镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得纯产品11mg，收率 39.2％。

LCMS:t＝1.88min,403.1[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.15(s,1H),6.93(s,1H),6.38(s,1H),4.84(s, 2H),4.69(s,2H),3.82–3.63(m,6H),3.21(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.52(s,4H), 1.23(t,J＝6.4Hz,6H).

实施例三

(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-((4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)甲基) -4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮

步骤一：4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡 咯-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将(2-溴-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯 基]甲酮(85mg,207umol)和{[4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基]甲基}(三氟)硼酸钾 (127mg,414umol)溶于4mL二氧六环/水(v/v,5:1)的混合溶剂中，并向其中加入碳 酸铯(135mg,414umol),醋酸钯(4mg,20umol)和配体Xphos(19mg,41umol)，氮气置 换，密闭反应管，微波条件下加热至130℃反应1小时，冷却至室温，加乙酸乙酯 稀释反应液，经水洗，食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去溶剂得 粗产品，经制备薄层层析分离得纯产品45mg，收率41％。LCMS:t＝2.58min, 530.2[M+H⁺]。

步骤二：(5-异丙基-2,4-二甲氧苯基)(2-(哌嗪-1-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮盐酸盐的制备

将4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-基) 甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg,85umol)溶于5mL盐酸二氧六环(2.0M)中，室温下 搅拌2小时，减压浓缩干燥得产品40mg,收率100％。无须纯化直接用于下步反应。 LCMS:t＝2.19min,430.1[M+H⁺]。

步骤三：(2-((4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯 -5-基)(5-异丙基-2,4-二甲氧苯基)甲酮的制备

将(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-(哌嗪-1-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c] 吡咯-5-基)甲酮盐酸盐(40mg,86umol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中，并向其中加入 三乙胺(34mg,343umol)，室温下搅拌10分钟，滴加溴乙醇(32mg,257umol，加热 至40℃，搅拌16小时。将反应液冷却至室温，并用二氯甲烷稀释，经水洗，食盐 水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得产品 28mg，收率68.8％。LCMS:t＝2.21min,474.3[M+H⁺]。

步骤四：(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-((4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)甲基)-4,6- 二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮的制备

将(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-((4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)甲基)-4,6-二氢 -5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)甲酮(28mg,59umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰 水冷却下滴加5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷 却，加少量的水淬灭反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯 甲烷萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得 纯产品6mg，收率22.7％。LCMS:t＝1.96min,446.2[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.15(s,1H),6.82(s,1H),6.38(s,1H),4.84(s, 2H),4.69(s,2H),3.87–3.68(m,4H),3.28–3.11(m,1H),2.79(dd,J＝39.4,34.3 Hz,10H),1.21(t,J＝6.6Hz,6H).

实施例四

1-(4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮

步骤一：1-(4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c] 吡咯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备

将(5-异丙基-2,4-二甲氧苯基)(2-(哌嗪-1-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c] 吡咯-5-基)甲酮盐酸盐(20mg,43umol)溶于3mL干燥的二氯甲烷中，并向其中加入 N,N-二异丙基乙胺(28mg,214umol)，搅拌10分钟，加入醋酸酐(9mg,86umol)，室 温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释反应液，并用水洗，食盐水洗，无水硫酸钠干燥， 过滤，减压蒸去溶剂得粗产品，经柱层析分离得产品20mg，收率100％。LCMS:t ＝2.01min,472.1[M+H⁺]。

步骤二：1-(4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡 咯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备

将1-(4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2- 基)甲基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(20mg,42umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰水冷 却下滴加5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷却， 加少量的水淬灭反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯甲烷 萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得纯产 品10mg，收率53％。LCMS:t＝1.88min,444.1[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.16(s,1H),6.84(s,1H),6.38(s,1H),4.85(s, 2H),4.70(s,2H),3.76(s,2H),3.66–3.48(m,4H),3.17-3.24(m,1H),2.59–2.42(m, 4H),2.13(s,3H),1.22(d,J＝6.9Hz,6H).

实施例五

2-(4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯

步骤一：(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-(哌嗪-1-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基)甲酮氢溴酸盐的制备

将4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-基) 甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(33mg,62umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰水冷却下 滴加5mL三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷却，加少量 的水淬灭反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯甲烷萃取， 无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得纯产品25mg， 收率100％。LCMS:t＝1.88min,402.1[M+H⁺]。

步骤二：2-(4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡 咯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯的制备

将(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)(2-(哌嗪-1-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c] 吡咯-5-基)甲酮氢溴酸盐(15mg,37umol)溶于3mL干燥的二氯甲烷中，向其中加 入溴乙酸乙酯(6.2mg,37umol)，室温下搅拌过夜，用二氯甲烷稀释反应液，经水 洗，食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产品，经柱层析分离 得产品1.5mg，收率8％。LCMS:t＝2.04min,488.2[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.03(s,1H),6.72(s,1H),6.26(s,1H),4.72(s, 2H),4.58(s,2H),4.07(q,J＝7.1Hz,2H),3.62(s,2H),3.13(s,2H),3.05-3.12(m, 1H),2.51(d,J＝19.8Hz,8H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H),1.10(d,J＝6.9Hz,6H).

实施例六

4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-2-基)甲基)哌嗪-2-酮

步骤一：4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡 咯-2-基)甲基)哌嗪-2-酮的制备

将(2-溴-4,6-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)[2,4-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)苯 基]甲酮(100mg,244umol)和三氟[(3-羰基哌嗪-1-基)甲基]硼酸钾(330mg,975umol) 溶于4mL二氧六环/水(v/v,5:1)的混合溶剂中，并向其中加入碳酸铯(158mg, 487umol),醋酸钯(4.7mg,24umol)和配体Xphos(23mg,49umol)，氮气置换，密闭 反应管，微波条件下加热至130℃反应1小时，冷却至室温，加乙酸乙酯稀释反应 液，经水洗，食盐水洗，并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去溶剂得粗产品， 经制备薄层层析分离得纯产品33mg，收率30.5％。LCMS:t＝2.27min, 444.1[M+H⁺]。

步骤二：4-((5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯 -2-基)甲基)哌嗪-2-酮的制备

将4-((5-(5-异丙基-2,4-二甲氧基苯甲酰)-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-2-基) 甲基)哌嗪-2-酮(33mg,74umol)溶于少量的无水二氯甲烷中，冰水冷却下滴加5 mL三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M)，室温下搅拌过夜，冰水冷却，加少量的水淬 灭反应，并用饱和的碳酸氢钠水溶液将体系调至碱性，用二氯甲烷萃取，无水硫 酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产品，经制备薄层层析分离得纯产品15mg，收 率48.5％。

LCMS:t＝1.96min,416.2[M+H⁺]。

¹HNMR(400MHz,MeOD)δ7.04(s,1H),6.73(s,1H),6.26(s,1H),4.73(s, 2H),4.59(s,2H),3.71(s,2H),3.02-3.22(m,1H),3.05(s,2H),2.62(dd,J＝11.3,6.0 Hz,2H),1.10(d,J＝6.9Hz,6H).

生物学评价

1、HSP90抑制化合物的酶学活性检测

HSP90抑制化合物的酶学活性是用荧光偏振(FluorescencePolarization)竞争 性结合方法检测的。在384孔板中，加入反应液，HSP90蛋白，FITC标记的格 尔德霉素,然后在不同孔中加上不同浓度的HSP90抑制化合物，在室温下反应 3小时后用BioTek酶标仪测量平行光和垂直光读值，以及各自的背景吸光度。mP (milli-polarization)的计算方法为：

mP＝1000*[(Is-IsB)-(Ip-IpB)]/[(Is-IsB)+(Ip-IpB)]。

根据各浓度抑制率，采用4参数非线性回归方法计算半数抑制浓度IC₅₀。

本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值见下 表。

实施例编号 IC₅₀(HSP90/BIO)(μM) 一 0.105 二 0.040 三 0.025 四 0.019 五 0.025

六 0.012

结论：本发明实施例化合物对HSP90酶活性均有明显地抑制作用。

2、HSP90抑制化合物的细胞活性检测

应用发光法细胞活力检测试剂盒(Luminescent CellViabilityAssay)检测药物对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用。主要步骤如下： 接种一定数量的对数生长期细胞于96孔培养板。贴壁生长24小时后，加入不同 浓度的药物，每个浓度设复孔，同时设相应浓度的溶媒对照。然后肿瘤细胞在 37℃、5％CO₂条件下再培养72h。将培养板及其内容物平衡到室温大约30分钟， 加入试剂，在振荡器上混合内容物2分钟诱导细胞裂解。将培养 板在室温进一部孵育10-45分钟，用酶标仪(BioTekSynergyH1)测定萤光信号 值。

根据各浓度抑制率，采用非线性回归方法计算半数抑制浓度IC₅₀。

本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值见下 表。

实施例编号 IC₅₀(BT474)(μM) 一 0.072 二 0.055 三 0.021 四 0.030 五 0.023 六 0.018

结论：本发明实施例化合物对BT474细胞活性均有明显地抑制作用。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发 明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当 理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，所述技术方案也不会脱离 本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。