用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂

摘要

本发明公开一种用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂，其特征在于：所述的制剂由以下组分组成：短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、苹果或大枣膳食纤维，其中短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的活菌数量比例为：1-3比？1-4比1-5，且制剂的总活菌数量为120-400亿/g，且制剂中含0.1-0.3g/g的苹果或大枣膳食纤维。这种复合制剂的活菌数用量大，属于医用食品，无剂量限制，无毒副作用，使用方便，可作为营养组件和其他营养素一起用于临床病人的营养治疗，让患者在平时饮食的过程中就能完成辅助治疗，能够大大减轻患者痛苦。

说明书

技术领域

本发明涉及一种复合制剂，特别是一种用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂。

背景技术

随着饮食结构的改变及精神和社会压力的增大，便秘已成为困扰现代人的问题之一，严重的影响着人们的生活质量。便秘人群易出现肠道菌群紊乱，长期便秘还会诱发各种疾病。研究表明，各类传统的治疗便秘的药物在临床研究和应用中显现诸多问题。同样通过研究表明，便秘患者同时伴有结肠动力障碍的问题的几率非常大，因此可以说结肠动力障碍是导致便秘的主要原因。结肠动力障碍最常见的表现是结肠排空迟缓，而结肠动力减弱则是这种结肠排空迟缓的主要原因。由于肠内容物在结肠滞留时间过长，水分过度吸收，粪便干结，加重了排便困难。因此如果能够找到一种促进结肠排空的方法或制剂，则可以从一定程度上解决便秘的问题。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种能够有效改善便秘，同时还可以降低血内毒素的复合益生菌和膳食纤维制剂。

本发明的技术解决方案是：一种用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂，其特征在于：所述的制剂由以下组分组成：短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、苹果或大枣膳食纤维，其中短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的活菌数量比例为：1-3比1-4比1-5，且制剂的总活菌数量为120-400亿/g，且制剂中含0.1-0.3g/g的苹果或大枣膳食纤维。

本发明同现有技术相比，具有如下优点：

本种复合制剂，其所选用的菌株均来源于人体，经筛选、驯化和组方验证，其安全性高，且具有良好的生态互助性，临床应用有保障。这种复合制剂在改善便秘所致的肠道菌群失调、肠蠕动减慢、肠道内水分降低等方面有显著效果，能明显改善肠道菌群的微生态失调，升高肠道内水分，促进肠蠕动。因此这种复合制剂作为肠内微生态营养制剂，用于便秘病人的肠内营养制剂的产品开发，其使用十分广泛。它的活菌数用量大，属于医用食品，无剂量限制，无毒副作用，使用方便，可作为营养组件和其他营养素一起用于临床病人的营养治疗，让患者在平时饮食的过程中就能完成辅助治疗，能够大大减轻患者痛苦。

附图说明

图1为本发明各组DGGE菌群指纹图谱和聚类分析图谱（1-3：control4-6:constipation7-9:probiotics10-12：fiber13-15:p+f）。

图2本发明实施例中各组大鼠结肠组织中Ca²⁺、Cl^-含量变化柱状图。

图3为本发明实施例中各组大鼠结肠组织中C-kit蛋白含量变化柱状图。

图4为本发明实施例中各组大鼠结肠组织中AQP3蛋白含量变化柱状图。

图5为本发明实施例中各组大鼠结肠组织中PKA以及NK1mRNA表达变化柱状图。

具体实施方式

下面将结合附图说明本发明的具体实施方式，如图1至图5所示：一种用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂，由以下四种组分组成：短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、苹果或大枣膳食纤维，其中短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的活菌数量比例为：1-3比1-4比1-5，并且所获得的制剂的总活菌数量为120-400亿/g，同时制剂中还含有0.1-0.3g/g的苹果或大枣膳食纤维。

实施例1

将1份活菌数量（40亿）的短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、1份活菌数量（40亿）的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、1份活菌数量（40亿）的植物乳杆菌（Lactobacillus）和苹果膳食纤维进行混合，最终获得的复合制剂的总活菌数量为120亿/g，苹果膳食纤维0.1g/g。

实施例2

将1份活菌数量（50亿）的短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、1份活菌数量（50亿）的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、2份活菌数量（100亿）的植物乳杆菌（Lactobacillus）和大枣膳食纤维进行混合，最终获得的复合制剂的总活菌数量为200亿/g，大枣膳食含量纤维0.1g/g。

实施例3

将2份活菌数量（160亿）的短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、1份活菌数量（80亿）的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、2份活菌数量（160亿）的植物乳杆菌（Lactobacillus）和苹果膳食纤维进行混合，最终获得的复合制剂的总活菌数量为400亿/g，苹果膳食纤维含量0.2g/g。

下面是针对本申请所述复合制剂的动物和功能实验。

对便秘动物模型作用的研究

取上述短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、植物乳杆菌（Lactobacillus）分别培养，收集菌体后使用生理盐水配制成混合菌悬液。选用SPF级SD大鼠随机分为5组，分别为空白对照组，便秘模型组，益生菌组，膳食纤维组，按实施例1比例制备益生菌联合膳食纤维组。大鼠每天按剂量5mg/kg腹腔注射洛哌丁胺，连续五天建立大鼠便秘模型，正常组不注射。益生菌（2ml/只），膳食纤维（1g/kg），益生菌联合膳食纤维(2ml/只)干预7天。7天后处死。通过各组大鼠一般状况的观察发现各组大鼠饮食活动，精神状态无明显改变。

各组大鼠体重变化情况

见表1，造模第5天与第1天相比体重下降，7天后与第5天相比，经自然恢复的便秘模型组体重下降，而益生菌组，纤维组以及菌+纤维组体重逐渐升高，体重改变在各组间无明显统计学差异。

各组大鼠血浆内毒素含量比较

见表2，单独使用复合益生菌组及益生菌加膳食纤维组具有较明显的降低血内毒素作用，单独使用膳食纤维降低内毒素效果不明显。

应用PCR-DGGE技术测定肠道菌群变化

大鼠粪便的PCR-DGGE菌群指纹图谱如图1及聚类分析如图2所示，便秘模型组单独归为了一类，而空白对照组和三个干预组一起归为了一类。从图中可以看出空白对照组（1～3）和便秘模型组(4～6)大鼠肠道中菌群丰度差异性明显，空白对照组DGGE每个泳道条带数平均为37条，而模型对照组每个泳道条带数平均为19条。益生菌组DGGE图谱显示平均有30条，纤维组为46条，菌+纤维组为40条。说明经益生菌、膳食纤维以及菌+纤维干预后大鼠肠道菌群得到了有效的恢复。

益生菌以及膳食纤维对便秘大鼠结肠组织中Ca²⁺、Cl^-的影响

由图3可以看出，便秘模型组大鼠横结肠组织中Ca²⁺、Cl^-表达量明显低于其他各组（P<0.001）。而益生菌组、纤维组、菌+纤维组与空白对照组相比差异显著（P<0.001）。表明经益生菌、膳食纤维干预后，大鼠横结肠组织中Ca²⁺、Cl^-表达都有改善。益生菌和膳食纤维对结肠组织中Ca²⁺、Cl^-有上调作用，从而调节胃肠运动，改善便秘症状。

各组大鼠结肠组织中C-kit蛋白以及AQP3蛋白表达量检测结果

通过Western-blotting的实验方法，以细胞骨架蛋白（β-actin）为内参校正蛋白上样误差，并通过对蛋白的灰度值进行分析来检测各组大鼠横结肠组织中C-kit蛋白以及AQP3蛋白的相对表达量。

各组大鼠结肠组织中C-kit蛋白表达量检测结果：如图4分析得到与空白对照组相比便秘模型组C-kit蛋白表达量明显下降（P<0.05）。而经干预后益生菌组、纤维组、菌＋纤维组的C-kit蛋白表达水平较便秘模型组均上调（P<0.05）,菌＋纤维组效果尤为显著。

各组大鼠结肠组织中AQP3蛋白表达量检测结果：如图5，与空白对照组相比，便秘模型组AQP3蛋白表达量明显下降（P<0.01）。经干预后益生菌组、纤维组、菌+纤维组的AQP3蛋白表达水平较便秘模型组均上调（P<0.01）,菌+纤维组效果最为显著。

各组大鼠结肠组织中PKA以及NK1的mRNA表达量检测结果

设定空白对照组各基因相对表达量为基准水平100%，其余各组基因表达量分别与空白对照组相应基因比较。

横结肠组织中PKA的相对表达量：与空白对照组相比，各组结肠PKA的表达量都明显降低，具有统计学意义（P<0.001）。益生菌组、纤维组、菌+纤维组较便秘模型组结肠组织中PKA的表达水平上调（P<0.001），菌＋纤维组效果显著（P<0.001）。表明经益生菌、膳食纤维以及菌+纤维干预后，大鼠横结肠组织中NK1表达都有改善。益生菌和膳食纤维对结肠NK1有恢复作用，从而增加粪便含水量，改善便秘症状。

横结肠组织中NK1的相对表达量：与空白对照组相比，各组结肠PKA的表达量都明显降低，具有统计学意义（P<0.001）。益生菌组、纤维组、菌+纤维组较便秘模型组结肠组织中NK1的表达水平上调（P<0.001），菌＋纤维组效果明显（P<0.001）。表明经益生菌、膳食纤维以及菌＋纤维干预后，大鼠横结肠组织中NK1表达都有改善。益生菌和膳食纤维以及菌+纤维对结肠组织中NK1有上调作用，从而调节胃肠运动，改善便秘症状。

益生菌急性毒性试验

3株益生菌分别培养后，离心收集菌体并使用生理盐水制成混合菌悬液。选用雄性SD大鼠20只，随机分为2组，每组10只，其中实验组一次性灌胃大剂量5×10⁹CFU/ml益生菌悬液1ml，对照组灌胃等体积生理盐水，然后连续观察7天，动物于第8天处死。每天记录其体重变化，平均进食量，死亡数量，精神状态以及排泄和分泌物的分泌情况。动物于灌胃后第8天，腹腔注射水合氯醛麻醉后，于腹腔主静脉采血，使用丙二醛测定试剂盒检测血清中MDA浓度。菌手术取出肝脏，使用谷胱甘肽检测试剂盒检测肝脏谷胱甘肽含量。无菌手术分别取等量肝、心、肾、脾组织。匀浆机打碎后，取100μL组织液分别涂布LIM培养基、BS培养基和Lbs培养基37℃厌氧培养48h，检测细菌易位。结果表明，大剂量灌服益生菌后，与对照组相比，大鼠体重明显增加，没有出现死亡，各脏器经解剖观察未发现明显病变，大鼠精神状态无异常，无细菌易位，无腹泻情况。血清MAD和肝脏GSH含量与对照组相比均无明显差异。具体结果见表3

表1各组大鼠体重变化情况（g）（）(n=7)

表2各组大鼠血浆内毒素含量比较

组别内毒素含量（EU/mL）正常组0.07±0.01^b便秘组组0.88±0.31^a益生菌组0.44±0.20^ab苹果纤维组0.71±0.31^ab益生菌+苹果纤维组0.21±0.18^ab

表3大鼠机体指标检测结果

对照组实验组P值GSH(mg/gprot)2.55±0.132.30±0.29>0.05MAD(nmol/ml)6.37±0.246.56±0.09>0.05△体重(g)36.03±6.1148.61±5.20<0.05

注：△体重为处死时体重减去第1天体重。