白肉灵芝提取物的代谢调节及抗缺氧的用途

摘要

本申请公开了白肉灵芝提取物的代谢调节及抗缺氧的用途。具体公开了所述提取物在制备用于预防和/或治疗代谢疾病及抗缺氧疾病的药物或食品中的应用。所述代谢疾病是高血压、高血脂和高血糖中的至少一种疾病。所述提取物在代谢调节，例如抗高血压、高血脂和/或高血糖方面有显著效果。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药用提取物，具体涉及白肉灵芝提取物在治疗和/或预防代谢疾病及抗缺氧的应用。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.)隶属于真菌门(Eumycota)、担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、灵芝科(Gamodermataceae)、灵芝属(Ganoderma)类。《中华本草》中记录“其性甘；味平；无毒；归肺、心、脾、肾经。益气血；安心神；健脾胃。主治虚劳、心悸、失眠、头晕、神疲乏力、久咳气喘、冠心病、矽肺、肿瘤。”《中国药典》中将灵芝收录为中药材，其中的灵芝多糖、三萜、核苷、生物碱、氨基酸多肽、微量元素等成分是其药效物质的主要基础，以三萜和多糖为其中主要活性成分。现代药理研究表明，灵芝三萜类化合物具有保肝、抗肿瘤、抗HIV-4及HIV-4蛋白酶活性、抗组织胺释放、抑制血管紧张素、抗氧化等作用。

灵芝分类历史悠久，归类各有不同，《本草纲目》等古籍中以“六色”将灵芝归为：青芝、赤芝、黄芝、白芝、黑芝、紫芝。近日广东省微生物研究所李泰辉等人在真菌学杂志《Mycoscience》发表文章宣布他们在西藏林芝地区发现了一个灵芝新种——白肉灵芝Ganoderma leucocontextum(Li TH,Hu HP,Deng WQ,et al.Ganoderma leucocontextum,a new member of the G.lucidum complex from southwestern China；Mycoscience,2015,56(1)：81-85)。中国西藏新闻网2014年8月报道西藏自治区农牧科学院研究人员白肉灵芝人工栽培获得成功。针对白肉灵芝的食用及药用价值急需进行系统研究和开发。

高血压、高血脂、高血糖，俗称三高，也是心脑血管疾病的罪魁祸首， 严重威胁人们的生命安全，目前已成为心脑血管疾病基础预防中的重要环节，特别是对冠心病、动脉粥样硬化的预防。

高血压是指循环系统内血压高于正常，一般指的是高于160/95毫米汞柱为高血压，是一种常见的临床综合症。高血脂是血中胆固醇或甘油三酯过高，或高密度脂蛋白过低，是导致动脉粥样硬化的主要因素。高血糖是机体葡萄糖含量高于正常值而出现的血糖代谢紊乱，也会导致心脑血管疾病的发生。

因此仍需要治疗三高的新的药物。

发明内容

本发明以白肉灵芝Ganoderma leucocontextum为研究对象，对其提取物进行了化学和生物活性研究，发现白肉灵芝提取物具有很好的代谢调节作用，对抗高脂血症、高血糖症和高血压症有显著作用，具有很好的药用和食用价值。

为此，本发明的第一方面，提供白肉灵芝提取物在制备用于预防和/或治疗代谢疾病和/或抗缺氧的药物中的应用，所述提取物中含有式1和式2所示的化合物的组合，

本发明的白肉灵芝Ganoderma leucocontextum提取物是按照如下的方法制备的，所述方法包括如下步骤：

用提取溶剂提取白肉灵芝的子实体至少一次；和

去除溶剂以获得所述提取物。

所述提取溶剂可选自水、C1～C4烷基醇、甲酸C1～C3烷基酯、乙酸C1～C3烷基酯、卤代C1～C3烷烃、R1C(O)R2中的一种，或者两种或更 多种的混合溶剂，其中R1和R2各自独立地为C1～C3烷基。

所述提取溶剂优选选自水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、丙酮、丁酮、戊酮中的一种或多种。

特别优选所述提取溶剂为20～98％(v/v)的乙醇水溶液，更优选40～98％(v/v)、最优选70～95％(v/v)的乙醇水溶液。

白肉灵芝的子实体与所述提取溶剂的重量体积比(g:ml或kg:L)为1:3～10；优选为1:2～5；最优选为1:3。

为提高提取效果，优选事先将白肉灵芝的子实体碎化。

所述提取方法可以是任何适宜的方法，例如但不限于浸渍提取、超声提取、加热回流提取等。

提取温度为室温～105℃，优选20～50℃。本文中所说室温通常指18～30℃。

根据一种实施方式，提取可进行1～5次，优选提取2～4次，最优选为3次。

提取时间为每次15min～2小时，优选为30～70min。

优选地，所述提取溶剂可回收再利用。

去除或回收提取溶剂的方法可根据不同溶剂灵活选取。例如可以进行蒸馏或减压蒸馏等。

根据本发明的另一种实施方式，所述方法进一步包括以下步骤：

将所获得的提取物分散于水中，用弱极性有机溶剂萃取以除去脂溶性杂质；

用萃取剂萃取水相；和

取萃取剂层并去除萃取剂。

所述萃取剂可选自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷和正丁醇中的一种，优选乙酸乙酯。

用于除去脂溶性杂质的弱极性有机溶剂可以是常用用萃取分离有机物的那些非极性溶剂。例如可选自C5～C12的烷烃、C5～C8的环烷烃、卤代C1～C3烷烃、石油醚中的一种或多种。根据一种实施方式，所述有非极性机溶剂可选自正己烷、正庚烷、正辛烷、环己烷、氯仿、二氯乙烷、沸 点60～90℃的石油醚中的一种或多种。优选使用所述石油醚和/或环己烷。

可用所述弱极性有机溶剂进行多次萃取以尽量除去脂溶性杂质。例如可萃取2～5次。

用萃取剂的萃取也同样可进行多次。例如可为2～5次。

所述弱极性有机溶剂以及所述萃取剂的用量分别为每次为水相体积的50～200％；优选用与水相等体积的弱极性有机溶剂(或萃取剂)进行萃取。

根据本发明的一种实施方式，所述提取溶剂为水、或选自C1～C4烷基醇、甲酸C1～C3烷基酯、乙酸C1～C3烷基酯中的一种或多种溶剂的40％(v/v)以下(例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％(v/v))的水溶液，所述方法进一步包括以下步骤：

将所获得的提取物分散于水中，用萃取剂萃取所获得的提取液；和

取萃取剂层并去除萃取剂，

所述萃取剂可为选自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷和正丁醇中的一种，优选乙酸乙酯。

同样的，用萃取剂的萃取可进行多次。例如可为2～5次。

所述萃取剂的用量分别为每次为水相体积的50～200％；优选用与水相等体积的萃取剂进行萃取。

该实施方式可获得水溶性更好的提取物以制备水溶剂或茶饮等产品。

所述代谢疾病可以是选自高血压、高血脂和高血糖中的至少一种。而且对于很多患者，血压、血脂和血糖往往是两种或三种同时存在问题。

所述缺氧是高血压、高血脂和/或高血糖引起的脑缺氧或高原缺氧。

本发明的第二方面提供含有上述白肉灵芝提取物的可食用的产品用于预防和/或辅助治疗代谢疾病和/或抗缺氧的用途。其中白肉灵芝提取物中含有下式1和式2所示的化合物的组合。

所述代谢疾病可以是选自高血压、高血脂和高血糖中的至少一种。所述缺氧是高血压、高血脂和/或高血糖引起的脑缺氧或高原缺氧。

所述可食用的产品具体形式可为口服液、茶饮、含片、胶囊、饮品、泡腾片等等。

本发明的研究发现，白肉灵芝可采用任何常规的溶剂，包括水进行提取，提取方法简单，提取物可溶于水。提取物中含有较大量的三萜类化合物，并对降低脂血、血压和血糖有显著效果。因此，白肉灵芝的提取物具有广阔的药用和食用的应用前景。

附图说明

图1为用不同有机溶剂提取白肉灵芝粗提物的HPLC指纹图谱；和

图2为根据本发明一种实施方式获得的白肉灵芝提取物的HPLC图谱。

具体实施方式

参照附图及以下详细描述的优选实施方式和具体实施例，更加详细地说明本发明的各个方面和上述的及其他的优点。本领域技术人员应理解，下面描述的这些内容是为了更好地理解本发明，本发明的范围并不受限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

白肉灵芝由西藏自治区农科院蔬菜研究所提供。

实施例1 白肉灵芝乙醇提取物的制备

将白肉灵芝子实体剪碎，称重5000克。用15L体积百分含量95％乙醇的水溶液回流提取3次，每次1小时。合并提取液，减压浓缩干燥得到170克提取物，将提取物记作GL-1。

进一步将提取物用蒸馏水600ml溶解，用等体积的正己烷萃取三次，弃去有机相。再用等体积乙酸乙酯萃取水相三次，弃去水相，合并乙酸乙 酯萃取液。用旋转蒸发仪蒸干乙酸乙酯获得浸膏54g，记作GL-1E。

实施例2 纯化及鉴定实施例1GL-1E提取物中的主要化合物

取40g实施例1制备的提取物GL-1E，通过硅胶柱色谱分离，以正己烷:乙酸乙酯体系和二氯甲烷:甲醇体系依次进行梯度洗脱，每个梯度洗3个保留体积，每个体积500ml。在二氯甲烷:甲醇(体积比为100:1)中得到馏分19，命名为GL-E19。

GL-E19(10.5g)利用ODS反相硅胶柱分离，用体积百分含量为10％～100％甲醇的水溶液依次进行洗脱，每个洗脱体系3个保留体积，每个保留体积为500ml，每300ml收集一个馏分。体积百分含量为40％的甲醇水溶液系统的第三个馏分和体积百分含量为50％的甲醇水溶液系统的第三个馏分，分别命名为GL-E19-23和GL-E19-27。

对GL-E19-23以体积百分含量40％乙腈的酸水(此处的酸水为体积百分含量为0.01％三氟乙酸的水溶液)溶液为洗脱剂进行HPLC制备，流速为2ml/min，收集28min的色谱峰，得到化合物1。对GL-E19-27以体积百分含量42％乙腈酸水(此处的酸水为体积百分含量为0.01％三氟乙酸的水溶液)溶液为洗脱剂进行HPLC制备，流速为2ml/min，收集25.2min的色谱峰得到化合物2。上述HPLC色谱条件如下：以色谱纯的甲醇将样品配制为10mg/ml的溶液，上样量为15ul每次，色谱柱为Kromasil10×250mm C18半制备柱，柱温为25℃，210nm波长进行检测。

化合物1和化合物2通过鉴定，结构式如下式1、式2所示，数据归属见表1和2。

表1 化合物1和化合物2的¹³C NMR数据(125MHz，CDCl₃)

Carbon 化合物1 化合物2 Carbon 化合物1 化合物2 1 34.9 34.2 19 19.1 18.6 2 34.5 34.3 20 31.9 35.7 3 219.1 211.8 21 20.9 18.5 4 50.3 51.6 22 26.5 25.8 5 49.5 50.5 23 33.1 34.5 6 27.0 39.5 24 143.8 144.5 7 65.6 198.7 25 127.6 127.5 8 157 147.0 26 172.2 173.0 9 140.9 149.9 27 12.1 12.2 10 37.5 39.5 28 22.0 22.5 11 192.4 199.6 29 65.5 65.8 12 79.7 44.1 30 24.5 21.6 13 60.5 57.3 1' 170.4 171.6 14 49.7 49.1 2' 20.7 44.8 15 216.7 208.0 3'   69.9 16 37.7 37.1 4'   44.7 17 46.1 45.3 5'   175.2 18 13.6 16.2 6'   27.3

表2 化合物1和化合物2的¹H NMR数据(J in Hz,500MHz，CDCl₃)

实施例3 提取物GL-1的指纹图谱检测

高效液相化学指纹图谱分析条件如下：使用Agilent1200高效液相色谱仪，四元梯度泵，DAD检测器，Agilent色谱工作站。色谱柱YMC C8分析柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相为乙腈-体积百分含量0.04％的三氟乙酸的水溶液，温度室温(20～30℃)的条件下进行梯度洗脱(洗脱程序以及各成分的体积百分含量如下所示)，流速1.00mL/min。将粗提物G1用乙腈溶解，配成10mg/mL的溶液，进样量10μl，紫外检测波长为210nm。

梯度洗脱步骤如下表3：

表3

按照上述洗脱条件得到提取物GL-1的色谱图如图1所示，并对实施例2分离得到的2个化合物进行指认，这两个化合物的峰面积占总峰面积的10.82％。

实施例4 用甲醇提取白肉灵芝

将所述白肉灵芝子实体剪碎，按照子实体:甲醇＝1g:3ml的量加入甲醇，浸泡超声提取3次，每次30分钟，将提取液用旋转蒸发仪蒸干获得浸膏，得到提取物GL-2。甲醇纯度为分析纯，购自北京化学试剂公司。

将GL-2进行高效液相色谱检测，分析条件同实施例3所述。如图1所示，1和2标示的峰与从GL-1E中分离得到的2个化合物一致，这两个化合物的峰面积占总峰面积的6.58％。

实施例5:用乙酸乙酯提取白肉灵芝

将所述白肉灵芝子实体剪碎，按照子实体:乙酸乙酯＝1g:3ml的量加入乙酸乙酯，浸泡超声提取3次，每次30分钟，将提取液用旋转蒸发仪蒸干获得浸膏，即提取物GL-3。乙酸乙酯纯度为分析纯，购自北京化学试剂公司。

将GL-3进行高效液相色谱检测，分析条件同实施例3所述。如图1所示，1和2标示的峰与从GL-1E中分离得到的2个化合物一致，这两个化合物的峰面积占总峰面积的8.45％。

实施例6:用二氯甲烷提取白肉灵芝

将所述白肉灵芝子实体剪碎，按照子实体:二氯甲烷＝1g:3ml的量加入二氯甲烷，浸泡超声提取3次，每次30分钟，将提取液用旋转蒸发仪蒸干获得浸膏，得到粗提物GL-4。所述二氯甲烷纯度为分析纯，购自北京化学试剂公司。

将GL-4进行高效液相色谱检测，分析条件同实施例3所述。如图1所示，1和2标示的峰与从GL-1E中分离得到的2个化合物一致，这两个化合物的峰面积占总峰面积的12.38％。

实施例7:用丙酮提取白肉灵芝

将所述白肉灵芝子实体剪碎，按照子实体:丙酮＝1g:3ml的量加入丙酮，浸泡超声提取3次，每次30分钟，将提取液用旋转蒸发仪蒸干获得浸膏，得到提取物GL-5。所述丙酮纯度为分析纯，购自北京化学试剂公司。

将GL-5进行高效液相色谱检测，分析条件同实施例3所述。如图1所示，1-2标示的峰与从GL-1E中分离得到的2个化合物一致，这两个化合物的峰面积占总峰面积的6.31％。

实施例8:用水提取白肉灵芝

将所述白肉灵芝子实体剪碎，按照子实体:水＝1g:3ml的量加入去离子水，浸泡超声提取3次，每次30分钟，将提取液用旋转蒸发仪蒸干获得浸膏，得到提取物GL-6。将GL-6提取物浸膏用适量蒸馏水混悬，然后用等 量乙酸乙酯萃取三次，旋转蒸发仪蒸干溶液获得水提物的乙酸乙酯浸膏GL-6E。所述水为去离子水。

将GL-6E进行高效液相色谱检测，分析条件同实施例3所述。如图2所示，1-2标示的峰与从GL-1E中分离得到的2个化合物一致，这两个化合物的峰面积占总峰面积的12.24％。

实施例9 白肉灵芝提取物对喂食高脂饲料大鼠的血脂影响

材料：被测样品溶液为实施例1和实施例4～8所述的8个提取物(GL-1E、GL-1～GL-6和GL-6E)。准确称取各样品，用0.5％CMC-Na溶液配制100mg/ml溶液，供活性测试。SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，温度20～24摄氏度，恒湿50～60％，光照12小时(8:00～20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应环境一周后进行实验。血清总胆固醇TC试剂盒(批号20131112)，低密度脂蛋白LDL-C试剂盒(批号20140114)，高密度脂蛋白HDL-C试剂盒(批号20140413)，甘油三酯TG试剂盒(批号20131226)，超氧化物歧化酶SOD试剂盒(批号20140213)，谷丙转氨酶ALT试剂盒(批号20131006)均购自南京建成生物工程研究所。

方法：取雄性健康SD大鼠，200±20g，大鼠适应性饲养一周后进行实验，随机分为8组，每组10只。空白对照组给予普通饲料，其他组给予高脂饲料(高脂饲料为普通饲料中加入1％胆固醇、0.2％猪胆盐、10％猪油、10％蛋黄粉)。饲养3周后，各组大鼠分别灌胃给与1ml的100mg/ml提取物溶液(相当于500mg/kg)，连续10天，空白对照组和模型对照组给予等量的0.5％CMC-Na溶液。末次给药后，取血，4摄氏度3000rpm离心，测定血清总胆固醇TC，低密度脂蛋白LDL-C，高密度脂蛋白HDL-C，甘油三酯TG，超氧化物歧化酶SOD和谷丙转氨酶ALT。

结果：与对照组比较，上述提取物可以显著改善大鼠血脂情况，对大鼠血清ALT也有很好的逆转作用，提示可以保护高血脂造成的肝损伤，推测是通过提高机体SOD酶来实现的，结果见表4。

表4

GL-1E 1.72±0.31** 0.26±0.10** 1.20±0.29** 0.23±0.05** 2.37±0.28** 45.6±4.39** GL 1 2.58±0.18* 0.42±0.21 0.97±0.30 0.56±0.15 1.99±0.33 79.8±8.25 GL 2 2.92±0.09* 0.39±0.08* 0.99±0.18 0.49±0.13 2.04±0.52 71.2±9.02* GL 3 2.78±0.16* 0.44±0.15 1.01±0.35 0.51±0.09 1.93±0.60 69.7±8.30* GL 4 2.91±0.48* 0.32±0.13** 0.96±0.28 0.46±0.18* 2.10±0.35* 62.2±10.38* GL 5 3.05±0.25 0.47±0.19 0.94±0.19 0.53±0.21 2.06±0.27* 76.8±6.89 GL-6 2.95±0.36* 0.38±0.12* 1.01±0.28 0.46±0.12* 2.01±0.25* 59.8±4.89* GL-6E 1.91±0.29** 0.28±0.09** 1.07±0.08* 0.24±0.09** 2.29±0.39 49.7±7.20**

*P<0.05，**P<0.01与模型组相比 

#P<0.05，##P<0.01与空白组相比 

实施例10 白肉灵芝提取物降血糖作用

(一)白肉灵芝提取物对正常小鼠血糖的活性研究

材料：被测样品溶液为实施例1和实施例4～8所述的8个提取物(GL-1E、GL-1～GL-6和GL-6E)。准确称取各样品，用0.5％CMC-Na溶液配制100mg/ml溶液，供活性测试。SPF级昆明种小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，温度20～24摄氏度，恒湿50～60％，光照12小时(8:00～20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应环境一周后进行实验。血糖测定试剂盒(批号20140403)购自南京建成生物工程研究所。

方法：取雄性SPF级昆明种小鼠，20±2g，适应性饲养一周后进行实验，随机分为8组，每组12只。各组分别灌胃给与0.1ml的100mg/ml提取物溶液(相当于500mg/kg)，连续10天，空白组给予等量的0.5％CMC-Na溶液。末次给药后禁食10小时，眼眶取血，按血糖测定试剂盒操作说明测定血糖。

结果：与对照组比较，上述提取物的血糖值没有统计学差异，说明白肉灵芝提取物对正常小鼠血糖没有影响，见表5。

表5

分组 血糖mmol/L 分组 血糖mmol/L 空白组 4.98±0.65 GL 4 4.74±0.67 GL-1E 4.56±0.50 GL 5 4.59±0.73 GL 1 4.75±0.42 GL6 4.89±0.57 GL 2 4.85±0.52 GL-6E 5.01±0.42 GL 3 4.88±0.82    

(二)白肉灵芝提取物对四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖的活性研究

材料：被测样品溶液为实施例1和实施例4～8所述的8个提取物(GL-1E、GL-1～GL-6和GL-6E)。准确称取各样品，用0.5％CMC-Na溶液配制100mg/ml溶液，供活性测试。SPF小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，温度20～24℃，恒湿50～60％，光照12小时(8:00～20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应环境一周后进行实验。血糖测定试剂盒(批号20140403)购自南京建成生物工程研究所。

方法：取120只雄性SPF级昆明种小鼠，20±2g，适应性饲养一周后进行实验。随机取出10只作为空白对照组，其他110只按照体重220mg/kg腹腔注射四氧嘧啶造模，72小时后，眼眶取血测定血糖，选择血糖在8.8～20mmol/L的小鼠进行后续试验。本实验中入选的小鼠有72只，按血糖水平随机分为模型组和给药组。各给药组分别灌胃给与0.1ml的100mg/ml提取物溶液(相当于500mg/kg)，连续10天，空白对照组和模型对照组给予等量的0.5％CMC-Na溶液。末次给药后禁食10小时，眼眶取血，按血糖测定试剂盒操作测定血糖。

结果：表6可以看出，给药前除空白对照组外，其他小鼠血糖值大幅上升，提示四氧嘧啶造模成功。给药后，各组均有所降低，特别是GL-1E，说明白肉灵芝提取物能够显著降低高血糖小鼠的血糖值，可用于治疗糖尿病和糖尿病并发症。

表6

*P<0.05，**P<0.01与模型组相比 

#P<0.05，##P<0.01与空白组相比 

实施例11 白肉灵芝提取物对自发性高血压大鼠血压的影响

材料：被测样品溶液为实施例1和实施例4～8所述的8个提取物(GL-1E、GL-1～GL-6和GL-6E)。准确称取各样品，用0.5％CMC-Na溶 液配制100mg/ml溶液，供活性测试。原发性高血压大鼠SHR购自北京维通利华实验动物技术有限公司，温度20～24℃，恒湿50～60％，光照12小时(8:00～20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应环境一周后进行实验。

方法：8周龄原发性高血压大鼠SHR，300±20g，雌雄各半，大鼠适应性饲养一周后进行实验，随机分为8组，每组10只。各组大鼠分别灌胃给与1ml的100mg/ml提取物溶液(相当于500mg/kg)，连续60天，模型组给予等量的0.5％CMC-Na溶液。给药第1天、第10天、第20天、第35天、第60天，分别用BP-2006A智能无创血压计测量大鼠清醒状态下的尾动脉压。

结果：与模型组比较，上述提取物可以显著改善大鼠自发性高血压情况，结果见表7。

表7

*P<0.05，**P<0.01与对照组相比 

实施例12 白肉灵芝提取物对常压缺氧小鼠的影响

材料：被测样品溶液为实施例1和实施例4～8所述的8个提取物(GL-1E、GL-1～GL-6和GL-6E)。准确称取各样品，用0.5％CMC-Na溶液配制100mg/ml溶液，供活性测试。雄性昆明种小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，温度20～24℃，恒湿50～60％，光照12小时(8:00～20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应环境一周后进行实验。丙二醛MDA试剂盒(批号20131103)、一氧化氮NO试剂盒(批号20140907)购自南京建成生物工程研究所。

方法：雄性昆明种小鼠，20±2g，适应性饲养一周后进行实验，随机分为8组，每组10只。各组小鼠分别灌胃给与0.1ml的100mg/ml提取物溶液(相当于500mg/kg)，连续10天，空白对照组给予等量的0.5％CMC-Na溶液。末次给药30分钟后，将小鼠放入125ml广口瓶中，以橡胶塞密封。瓶内装有10g钠石灰，另备内盛有100ml水的量筒，用一段橡胶管将量筒与广口瓶相连。随着时间推移，瓶内小鼠耗氧，因负压量筒内的水进入瓶内，即为小鼠的耗氧量，记录小鼠10分钟、30分钟的耗氧量和存活时间。小鼠缺氧死亡后迅速心脏取血，测定MDA和NO含量。

结果与空白对照组比较，上述提取物对常压缺氧负荷小鼠显示一定的保护作用，提示白肉灵芝提取物对三高导致的脑供血不足、高原缺氧等有一定的治疗作用。结果见表8。

表8

*P<0.05，**P<0.01与模型组相比；

#P<0.05，##P<0.01与空白组相比。