一种测定细胞内蛋白质含量标准化的新方法

摘要

本发明公开了一种测定细胞内蛋白质含量标准化的新方法，主要采用经过标准曲线的制备和待测样品的测定而实现，采用DNA荧光染色，DNA是细胞内的遗传物质，对同一个体的不同细胞来说，DNA含量是相对稳定的，用DNA对待测蛋白进行标准化，可以克服蛋白标准化的许多缺点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物细胞数量测定方法，尤其涉及一种测定细胞内蛋白质 含量标准化的新方法。

背景技术

在进行细胞内某种蛋白含量(或酶活性)进行测定时，为了对不同样品进 行对比，需要标准化处理，以便对不同样品进行比较。例如，测定两个样品A 和B中细胞内琥珀酸脱氢酶的活性大小。当我们用某种方法测定了样品A和B 中细胞内琥珀酸脱氢酶的活性，但不能直接得出结论，哪个样品中酶的活性比 较高，因为两个样品中细胞的数量可能是有差异的，因此，需要对不同样品酶 的活性进行标准化处理。

目前对不同样品酶的活性进行标准化处理，常用的方法是对细胞内总蛋白 含量进行测定，把某种待测蛋白含量(或酶活性)与细胞内总蛋白进行相比， 计算出待测蛋白的相对含量(或酶的相对活性)，然后比较。用总蛋白进行标准 化，存在着需要裂解细胞、操作复杂、结果容易受到外界的影响等缺点。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种测定细胞内蛋白质含量 标准化的新方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本发明包括以下步骤：

(1)标准曲线的制备：取已知浓度的细胞溶液，分别稀释2倍、4倍、6 倍、8倍、10倍等，然后取等量的细胞悬液，进行DNA荧光染色，染色后用荧 光分光光度计测定荧光的相对含量，以细胞浓度为横坐标，所测得的荧光值为 纵坐标，汇出标准曲线；

(2)待测样品的测定：取等量的待测样品，进行DNA荧光染色，操作方 法同标准曲线的制备，如果所测得的荧光值较大，可以根据情况进行适当稀释， 然后再进行测定，所测得荧光值可以从标准曲线查出细胞的浓度；

(3)样品蛋白标准含量按照以下公式计算：

具体地，所述步骤(1)中进行DNA荧光染色所使用的染料为Hoechst 33342 等可以对DNA进行染色的荧光染料。

本发明的有益效果在于：

本发明是一种测定细胞内蛋白质含量标准化的新方法，与现有技术相比， 本发明采用DNA荧光染色，DNA是细胞内的遗传物质，对同一个体的不同细 胞来说，DNA含量是相对稳定的，用DNA对待测蛋白进行标准化，可以克服 蛋白标准化的许多缺点。

具体实施方式

下面对本发明作进一步说明：

本发明包括以下步骤：

(1)标准曲线的制备：取已知浓度的细胞溶液，分别稀释2倍、4倍、6 倍、8倍、10倍等，然后取等量的细胞悬液，进行DNA荧光染色，染色后用荧 光分光光度计测定荧光的相对含量，以细胞浓度为横坐标，所测得的荧光值为 纵坐标，汇出标准曲线；

(2)待测样品的测定：取等量的待测样品，进行DNA荧光染色，操作方 法同标准曲线的制备，如果所测得的荧光值较大，可以根据情况进行适当稀释， 然后再进行测定，所测得荧光值可以从标准曲线查出细胞的浓度；

(3)样品蛋白标准含量按照以下公式计算：

具体地，所述步骤(1)中进行DNA荧光染色所使用的染料为Hoechst 33342 等可以对DNA进行染色的荧光染料。

本发明的上述方法还能够用于测定细胞内酶活性标准化。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点。本行业 的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中 描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明 还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本 发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。