用作肾外髓钾通道的抑制剂的螺稠合的哌啶衍生物

摘要

本发明提供了式I的化合物和其可药用盐，其是ROMK(Kir1.1)通道的抑制剂。该化合物可以用作利尿剂和/或利钠剂，用于治疗和预防医学病症，包括心血管疾病，例如，高血压、心力衰竭以及与过量的盐和水潴留相关的病症。

说明书

发明背景

肾外髓钾(ROMK)通道(Kir1.1)(参见，例如，Ho, K.等人，Cloning and expression of an inwardly rectifying ATP-regulated potassium channel, Nature, 1993, 362(6415): p. 31-8.1, 2; 以及Shuck, M.E.等人，Cloning and characterization of multiple forms of the human kidney ROM-K potassium channel, J Biol Chem, 1994, 269(39): p. 24261-70)是在肾的两个区域(髓袢升支粗段(TALH)和皮质集合管(CCD))表达的钾通道的内向整流家族的成员(参见Hebert, S.C.等人，Molecular diversity and regulation of renal potassium channels, Physiol Rev, 2005, 85(1): p. 319-713)。在TALH中，ROMK参与钾在整个管腔膜中的再循环，这是Na⁺/K⁺/2Cl ^– 共同转运体功能的关键，是在这一部分肾单位中盐再摄取的定速步骤。在CCD中，ROMK提供钾分泌的途径，这种钾分泌体与通过对阿米洛利敏感的钠通道吸收的钠紧密地结合(参见Reinalter, S.C.等人，Pharmacotyping of hypokalaemic salt-1osing tubular disorders, Acta Physiol Scand, 2004, 181(4): p. 513-21; 以及Wang, W., Renal potassium channels: recent developments, Curr Opin Nephrol Hypertens, 2004, 13(5): p. 549-55)。相比于目前使用的临床药剂，人们预计，ROMK通道的选择性的抑制剂(本文还称为ROMK的抑制剂或ROMK抑制剂)代表新的利尿剂，这种利尿剂用于治疗高血压以及在用利尿剂治疗过程中的益处可能是潜在地降低易发性的其它病症(即，低或高钾血、糖尿病的新发作、血脂异常)(参见Lifton, R.P., A.G. Gharavi，以及D.S. Geller, Molecular mechanisms of human hypertension, Cell, 2001, 104(4): p. 545-56)。人类遗传学(Ji, W.等人，Rare independent mutations in renal salt handling genes contribute to blood pressure variation, Nat Genet, 2008, 40(5): p. 592-9; 以及Tobin, M.D.等人，Common variants in genes underlying monogenic hypertension and hypotension and blood pressure in the general population, Hypertension, 2008, 51(6): p. 1658-64)以及遗传性切除啮齿类的ROMK(参见Lorenz, J.N.等人，Impaired renal NaCl absorption in mice lacking the ROMK potassium channel, a model for type II Bartter's syndrome, J Biol Chem, 2002, 277(40): p. 37871-80以及Lu, M.等人，Absence of small conductance K⁺ channel(SK)activity in apical membranes of thick ascending limb and cortical collecting duct in ROMK(Bartter's)knockout mice, J Biol Chem, 2002, 277(40): p. 37881-7)均支持这些预期。据我们所知，Vanderbilt University所进行的工作报道了第一个公开的ROMK的小分子选择性抑制剂，包括VU590(如Lewis, L.M.等人，High-Throughput Screening Reveals a Small-Molecule Inhibitor of the Renal Outer Medullary Potassium Channel and Kir 7.1, Mol Pharmacol, 2009, 76(5)∶p. 1094-1103所述)。Bhave, G.等人，(Development of a Selective Small-Molecule Inhibitor of Kir1.1, the Renal Outer Medullary Potassium Channel, Mol Pharmacol, 2011, 79(1), p.42-50)随后报道了化合物VU591，该文章说明了“ROMK(Kir1.1)是能够降低血压同时不会引起低钾血的新类别的髓袢利尿剂的假定药物靶向”。

专利申请公开WO2010/129379(2010年11月11日公开，具有共同代表人Merck Sharp & Dohme Corp., 还在同日公开为US2O10/0286123)描述了具有下列通式的ROMK抑制剂∶

，其中

R⁵和R⁶独立地是-H、-C_1-6烷基、-C_3-6环烷基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F或-CH₂OH；X是-H、-OH、-OC_1-3烷基、-F、氧基(oxo)、NH₂或-CH₃；X¹是-H或-CH₃。

专利申请公开WO2012/058134(2012年 5月3日公开，具有共同代表人，Merck Sharp & Dohme Corp.,)描述了具有下列通式的ROMK抑制剂∶

其中A和B是单和/或双环芳基；R²是-H、-C_1-6烷基、-C_3-6环烷基、CF₃、-CH₂OH或-CO₂R，或R²可以与R¹或R^10a连接，形成环；R³是-H、-C_1-6烷基、-C_3-6环烷基、-OH、-F、-OC_1-3烷基或-CH₂OH，或R³可以与R^10b连接形成环。

专利申请公开WO2012/058116(2012年 5月3日公开，具有共同代表人，Merck Sharp & Dohme Corp.,)描述了具有下列通式的ROMK抑制剂∶

其中R⁵和R⁶独立地是-H、-C_1-6烷基或-C(O)OC_1-3烷基；X、X¹、Y和Y¹独立地是-H或-C_1-6烷基；或Y¹可以与Z²连接形成稠环系统。

然而，为了发现高血压、心力衰竭、水肿状态和相关病症的新的治疗方法，还需要继续研发ROMK的选择性的小分子抑制剂。本发明的式I的化合物和其盐是ROMK通道的选择性的抑制剂，并且可以用于治疗高血压、心力衰竭以及用利尿剂或利钠剂治疗有益处的其它病症。

本发明概述

本发明提供了式I的化合物

及其可药用盐。式I的化合物是ROMK(Kir1.1)通道的抑制剂。因此，可以在治疗、抑制或改善一或多种能够受益于抑制ROMK的疾病状态的方法中使用式I的化合物。可以在治疗方法中使用本发明的化合物，所述治疗方法包括：给予需要利尿剂和/或利钠剂的患者治疗或预防有效量的式I的化合物。因此，式I的化合物是有价值的药学活性化合物，用于治疗、预防或治疗和预防医学病症，包括但不限于：心血管疾病，例如高血压和心力衰竭，和慢性肾病，以及与过度的盐和水潴留相关的病症。本发明的化合物可以进一步与其它治疗有效药剂联用，其它治疗有效药剂包括但不局限于：可用于治疗高血压、心力衰竭以及与过度的盐和水潴留相关的病症的其它药物。此外，本发明涉及制备式I化合物的方法以及包含式I化合物的药物组合物。基于本文所包括的说明书，可以清楚了解本发明的这些及其它方面。

本发明的详细说明

本发明涉及结构式I的化合物∶

或其可药用盐，其中∶

R¹是-H、卤素，尤其是-F，-OH或-OC_1-3烷基，尤其是-OCH₃；

m是选自0(R^3b不存在)和1(R^3b存在)的整数；

n是选自1或2的整数；

R²在每次出现时独立地选自-H、=O(氧代)、-OH、-C_1-3烷基或-OC_1-3烷基，条件是，当n是2时，至少一个R²是-H；

R^3a是-H、=O、-C_3-4环烷基或任选被-OCH₃或1至3个-F取代的-C_1-3烷基，条件是，只有一个R²或R^3a可以是=O，

R^3b是-H或-C_1-3烷基，或当R^3a是=O时，或当虚线键是双键或芳香键时，R^3b不存在；

或R^3a和R^3b与它们两个所连接的碳连接在一起，形成环丙基或环丁基；

或当n是1时，R²和R^3a可以与它们各自连接的碳连接在一起，形成：(1)与吡咯烷环稠合的苯基环，并且m是0，或(2)与吡咯烷环稠合的环丙基环，并且m是1；

R⁴是-H或=O；

R⁵是：(a)-H，(b)卤素，尤其是-Cl或-F，(c)任选被-O-C_1-3烷基取代的-C_1-3烷基，(d)-C_3-6环烷基，或(e)任选被-C_1-3烷基或卤素取代的杂环，所述卤素尤其是-F或-Cl；

R⁶是-H或-C_1-3烷基；

R⁷是-H或任选被-OH、-OCH₃或1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

R⁷是-H或-C_1-3烷基；

或R^7a和R^7b与它们两个所连接的碳连接在一起，形成-C_3-4环烷基；

R⁸是-H、卤素，尤其是-F，或-C_1-3烷基；

R⁹是-H、-F、-OH、-OC_1-3烷基、-CH₂OH、-NH-R¹³或 ;

R¹⁰是-H、卤素、-CN、-C_3-4环烷基或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

或R⁹是-O-，并且与R¹⁰连在一起，代表-CH₂-CH₂-O-；

R¹¹是-H、-CH₂OH、-CH₂OCH₃或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

R¹²是-H、-CH₂OH、-CH₂OCH₃或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

或R¹¹和R¹²连在一起，代表-CH₂-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-CH₂-或-CH₂OCH₂-；

R¹³是-H、-(CH₂)_0-2-C_3-6环烷基、-(CH₂)_1-2-OC_3-6环烷基、-(CH₂)_1-2-OC_1-3烷基、-(CH₂)_1-2-CN、-C(O)OC_1-3烷基、-SO₂CH₃或任选被一个至三个-F取代的-C_1-3烷基；和

虚线键(“---”)代表单、双或芳香键，条件是

(A)当n是2时，则虚线键是单键，并且m是1；和

(B)当n是1时，并且

(i)m是1(包括但不局限于下列化合物：其中，R²和R^3a连接在一起，代表与吡咯烷环稠合的环丙基)，或

(ii)R^3a是=O，并且m是0，

则虚线键是单键；和

(C)当n是1、m是0、R²不是=O、R^3a不是=O时，则虚线键是

(i)双键，或

(ii)当R²和R^3a连在一起形成与吡咯烷环稠合的苯基环时，是芳香键。

在本发明的一个实施方案中，是具有结构式II的式I化合物和其可药用盐∶

其中n是1，m是1，每个变量R¹、R²、R^3a、R^3b、R⁴、R⁵、R⁶、R^7a、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³和其中所有的其它变量如式I所定义。

在本发明的一个实施方案中，是具有结构式III的式I化合物和其可药用盐∶

其中n是1，m是0，每个变量R¹、R²、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^7a、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³和其中所有的其它变量如式I所定义，且其中，在R²和R^3a之间的双键代表非芳香双键，或当R²和R^3a与它们各自连接的碳连在一起形成苯基环时，该双键代表芳香键。

在本发明的一个实施方案中，是具有结构式IV的式I化合物和其可药用盐∶

其中n是2，m是1，每个变量R¹、R²、R^3a、R^3b、R⁴、R⁵、R⁶、R^7a、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³和其中所有的其它变量如式I所定义。

在本发明的另一个实施方案中，是具有结构式V的式I化合物∶

或其可药用盐，其中∶

R¹是-H、-F、-OH或-OCH₃；

m是选自0(R^3b不存在)和1(R^3b存在)的整数；

n是选自1或2的整数；

R²在每次出现时独立地选自-H、=O(氧基)、-OH、-C_1-3烷基或-OC_1-3烷基，条件是，当n是2时，至少一个R²是-H；

R^3a是-H、=O、-C_3-4环烷基或任选被-OCH₃或1至3个-F取代的-C_1-3烷基，条件是，只有一个R²或R^3a可以是=O，

R^3b是-H或-C_1-3烷基，或当R^3a是=O时，或当虚线键是双键或芳香键时，R^3b不存在；

或R^3a和R^3b与它们两个所连接的碳连接在一起，形成环丙基或环丁基；

或当n是1时，R²和R^3a可以与它们各自连接的碳连接在一起，形成：(1)与吡咯烷环稠合的苯基环，并且m是0，或(2)与吡咯烷环稠合的环丙基环，并且m是1；

R⁴是-H或=O；

R⁵是-H、-Cl、-F、-C_1-3烷基、-C_3-6环烷基或任选被-F、-Cl或-C_1-3烷基取代的杂环；

R⁶是-H或-C_1-3烷基；

R^7a是-H或任选被-OH、-OCH₃或1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

R⁸是-H、-F或-C_1-3烷基；

R⁹是-H、-F、-OH、-OC_1-3烷基、-CH₂OH、-NH-R¹³或 ；

R¹⁰是-H、卤素、-CN、-C_3-4环烷基或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

或R⁹是-O-，并且与R¹⁰连在一起，代表-CH₂-CH₂-O-；

R¹¹是-H、-CH₂OH、-CH₂OCH₃或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

R¹²是-H、-CH₂OH、-CH₂OCH₃或任选被1至3个-F取代的-C_1-3烷基；

或R¹¹和R¹²连在一起，代表-CH₂-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-CH₂-或-CH₂OCH₂-；

R¹³是-H、-(CH₂)_0-2-C_3-6环烷基、-(CH₂)_1-2-OC_3-6环烷基、-(CH₂)_1-2-OC_1-3烷基、-(CH₂)_1-2-CN、-C(O)OC_1-3烷基、-SO₂CH₃或任选被一个至三个-F取代的-C_1-3烷基；和

虚线键(“---”)代表单、双或芳香键，

条件是，当n是2时，则虚线键是单键，并且m是1，和

当n是1并且m是1时，虚线键是单键，和

当n是1并且m是0时，则虚线键是

(a)双键，或

(b)当R²和R^3a连在一起形成苯基环时，是芳香键。

在本发明的另一个实施方案中，是式I的化合物，其中∶

n是2，且虚线键是单键和m是1，或n是1，且虚线键是单键和m是2，或虚线键是双键，并且m是1；

R¹是-H、-F、-OH或-C_1-3烷基；

R⁴是=O；

R⁵是-H或-C_1-3烷基；

R⁸是-H或-C_1-3烷基；

R⁹是-OH、-OC_1-3烷基或-NHR¹³；

R¹⁰如所定义；

R¹¹和R¹²是-H；

所有的其它变量如式I所定义。

在本发明的一个实施方案中，是式I的化合物，其中，虚线键代表双键或芳香键。式II和IV描述了其中虚线键是单键的实施方案的例子。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R¹是H或F，且更尤其是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R²在每次出现时是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R^3a是-H、-C_1-3烷基、环丙基，且更尤其是-H或-CH₃。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、IV或V的化合物，其中R^3b是-H、-C_1-3烷基，且更尤其是-H，或当虚线键是双键或芳香键时，R^3b不存在。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R⁴是=O。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中，R⁵是：(a)-H，(b)卤素，尤其是-Cl或-F，(c)-C_1-3烷基，(d)-C_3-6环烷基，且更尤其是-H或-CH₃。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R⁶是-H或-CH₃，且更尤其是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III或IV的化合物，其中R^7a是-H或任选被-OH、-OCH₃或1至3个-F取代的-C_1-3烷基，且更尤其是-H或-CH₃。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III或IV的化合物，其中R^7b是-H或-C_1-3烷基，且更尤其是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R⁸是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R⁹是-H、-OH、-OCH₃或-NH₂，且更尤其是-OH。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中R¹⁰是-H、-C_1-3烷基、-C_3-4环烷基、-F，尤其是-CH₃。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中，R¹¹是-H或-C_1-3烷基，且更尤其是-H。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中，R¹²是-H或-C_1-3烷基，且更尤其是-H；或R¹¹和R¹²连在一起，代表-CH₂-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-CH₂-或-CH₂OCH₂-。

在本发明的一个实施方案中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中，R¹³是-H或-C_1-3烷基，且更尤其是-H。

在本发明的实施方案A中，是式I、II、III、IV或V的化合物，其中∶R^3a是-H或-CH₃；R⁴是=O；R⁵是-H或-CH₃；R^7a是-H或CH₃；R⁹是-H、-OH、-OCH₃或-NH₂，尤其是-OH；R¹⁰是-H或-CH₃，尤其是-CH₃。

在其一个类别中，是实施方案A的化合物，称为实施方案B，其中，R¹是-H；R²在每次出现时是-H；R^3b是-H(对于式I、II或IV的化合物)；R⁶是-H；R⁸是-H；R¹¹是-H；R¹²是-H。

本文描述的所有结构式和其实施方案包括其中所定义的化合物的药用盐。

本文使用的“烷基”包括具有具体数目碳原子的支链和直链饱和脂肪烃基团，除非另外注释。在整个说明书中，使用通常使用的烷基的缩写。例如，术语“C_1-6烷基”(或“C₁-C₆烷基”)是指具有具体数目的碳原子的直链或支链烷基，包括所有的异构体，并且包括所有的己基和戊基异构体以及正、异仲和叔丁基(丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基；Bu=丁基)、正和异丙基(Pr=丙基)、乙基(Et)和甲基(Me)。“环烷基”是具有指定碳原子数目的环烷基环。环烷基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基和环己基。

“卤素”是指-F、-Cl、-Br或-I。

“杂环”包括吡啶基(所有的异构体)、吡嗪基、哒嗪基或嘧啶基。

正如本领域众所周知的那样，术语“双键”是指两个原子共用两个电子对的共价键。芳香性的概念在本领域同样是众所周知的，例如苯和苯基，通常将它们画为具有3个交替双键的图形，但还可以认为具有单键和双键混合的碳-碳键。本文使用的“芳香键”是指，当R²和R^3a连在一起形成与式I、III和V所定义的吡咯烷基环稠合的苯基环时，在-C(R²)-和-C(R^3a)之间的双键具有芳香性。

除非另外明确地描述，否则，在结构式中用“漂浮”键描述的变量，例如R⁸，可以在变量所连接的环中的任何合适的碳原子上。

式I的化合物可以具有一个或多个手性(不对称)中心。本发明包括式I化合物的所有立体异构形式。存在于式I化合物中的不对称中心可以彼此独立地具有(R)或(S)构型。当手性碳上的键在本发明的结构式中被描绘为直线形式时，或当列举的化合物名称没有手性碳的(R)或(S)手性符号时，应当理解，每个这样的手性碳的(R)和(S)构型，以及每个对映体或非对映体和其混合物，包括在化学式或名称范围之内。在获得这种立体异构体或混合物的实施例中，可以对形成的具体立体异构体或其混合物加以鉴定，但这决不限制在本发明的范围之内包括所有的立体异构体和其混合物。

本发明包括所有合适的对映体和非对映体和两种或多种立体异构体的混合物，例如，所有比例的对映体和/或非对映体的混合物。由此，本发明的目标是左旋和右旋对映体形式的对映体纯形式、外消旋体形式和两种对映体全部比例的混合物形式的对映异构体。在顺式/反式异构的情况下，本发明包括顺式和反式以及这些形式的所有比例的混合物。通过利用合成所使用的立体化学均匀的起始原料或立体选择性合成，如果需要的话，可以利用常规方法(例如，色谱或结晶)分离混合物，制备单一立体异构体。可以任选进行衍生化，而后分离立体异构体。可以在式I化合物的合成期间的中间体的阶段，进行立体异构体的混合物的分离，或可以对最终外消旋的产物进行分离。绝对的立体化学可以由晶体产品或晶体中间体的X-射线晶体衍射来测定，如果需要的话，使用含有已知构型的立构中心的试剂。或者，可以利用振动圆二色性(VCD)光谱分析来测定绝对立体化学。如果本发明的化合物能够互变，则所有的单一互变体及其混合物包括在本发明范围内。本发明包括所有这种异构体，以及这种外消旋体、对映体、非对映体和互变体的盐、溶剂化物(包括水合物)和溶剂化的盐及其混合物。

本文中，式I化合物的参考化合物包括式I、II、III、IV和V的化合物以及其所有的实施方案。将本发明化合物称为具体化学式或实施方案的化合物，例如，式I、II、III、IV或V或其实施方案，或本文所描述或主张的任何其它通用结构式或具体化合物，意为包括在化学式或实施方案范围内的具体化合物，包括其盐，尤其是药用盐，这种化合物的溶剂化物(包括水合物)和其溶剂化的盐形式(在这种形式合适的情况下)，除非另外具体说明。

在式I的化合物中，原子可以显示它们的天然同位素丰度，或可以将一个或多个原子人工富集在具有相同原子序数但原子量或质量数不同于自然界中主要存在的原子量或质量数的具体同位素中。本发明包括式I化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(H)的各种同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是在自然界中存在的主要的氢同位素。氘的富集可以得到某些治疗益处，例如，提高体内半衰期或降低剂量要求，或可以提供用作生物样品特征的标准的化合物。不用进行过度实验，通过本领域技术人员熟知的传统方法或通过与本文反应路线和实施例所描述方法类似的方法，使用合适的同位素富集的试剂和/或中间体，可以制备同位素富集的式I范围内的化合物。

当式I的化合物含有一个或多个酸性或碱性基团时，本发明还包括相应的药用盐。由此，按照本发明，可以使用含有酸性基团的式I化合物，例如但不局限于：作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐。这种盐的例子包括但不局限于：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺形成的盐，所述胺例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸。按照本发明，可以使用含有一个或多个碱性原子团(即，可以质子化的基团)的式I的化合物，使用它们与无机或有机酸形成的酸加成盐形式，例如但不局限于：与下列酸形成的盐：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、硝酸、苯磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗环血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸，等等。如果式I的化合物在分子中同时包含酸性和碱性原子团，则本发明除了包括所提及的盐形式之外，还包括内盐或内铵盐(两性离子)。可以利用本领域技术人员已知的常规方法，由式I的化合物获得盐，例如，在溶剂或分散剂中与有机或无机酸或碱混合，或与其它盐进行阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括式I化合物的所有盐，所述盐由于生理相容性低，它们不适合直接用于药物，但可以用作化学反应或药用盐制备中的中间体。

此外，本发明的化合物可以以无定形和/或一或多种结晶形式存在，并且因此式I化合物的这种所有的无定形和结晶形式及其混合物包括在本发明范围内。另外，本发明的一些化合物可以与水形成溶剂化物(即，水合物)或与常规有机溶剂形成溶剂化物。与未溶剂化和无水形式一起，本发明化合物的这种溶剂化物和水合物，尤其是药用溶剂化物和水合物，也包括在本发明范围内。

能够体内转化为本发明范围内化合物的本发明化合物的任何药用前体药物变体，也在本发明范围内。例如，将合适的羧基酯化，或在化合物的合适羟基上形成酯，可以任选制备酯。类似地，可以制备易发生变化的酰胺。为了起到可以水解返回为酸(或-COO-，根据转化进行所处的液体或组织的pH值)或羟基形式(尤其是在体内)的前体药物的作用，可以制备本发明化合物的药用酯或酰胺，并且因此它们包括在本发明范围内。药用前体药物变体的例子包括但不局限于：-C_1-6烷基酯和被苯取代的-C_1-6烷基酯。

相应地，本文所描述和主张的通用结构式、实施方案和具体化合物范围之内的化合物，包括其盐、所有合适的立体异构体和互变体、物理形式(例如，无定形和结晶形式)、溶剂化物和水合物形式以及这些形式的任何组合形式，及其盐、前体药物形式和其前体药物形式的盐(在这种形式合适的情况下)，除非另外具体说明。

按照本发明的式I化合物是ROMK的抑制剂，因此，可以用作利尿剂和/或利钠剂。ROMK抑制剂可以有助于增加排尿和增加尿量，以及防止或降低钠在肾中的再吸收，使得钠和水的排出量增加。因此，可以使用该化合物来治疗或预防或治疗并且预防受益于水和钠从身体排出增加的那些病症。相应地，本发明的化合物可以在抑制ROMK的方法中使用，该方法包括：给予需要其的患者ROMK抑制有效量的式I的化合物。还包括该化合物抑制患者的ROMK的用途，包括：给予需要利尿、利钠作用或两者的患者治疗有效量的权利要求1的化合物。可以检验式I化合物对ROMK的抑制，例如，利用如下所述的铊通量试验和/或电生理学试验。此外，本发明还涉及式I化合物或其盐验证体外试验的用途，例如但不局限于：本文所描述的铊通量和电生理学试验。

本发明的化合物可以在引起利尿、利钠作用或两者的方法中使用，包括给予需要其的患者治疗有效量的式I化合物。因此，本发明的式I化合物可以在治疗、预防或降低出现医学病症的危险的方法中使用，所述医学病症受益于水和钠的排量增加，例如但不局限于：一或多种高血压，例如，原发性高血压(亦称原发性或自发性高血压，其是高血压的一种形式，还没有发现病因)，心力衰竭(包括急性心力衰竭和慢性心力衰竭，后者亦称充血性心力衰竭)和/或与过量的盐和水潴留相关的其它病症。该化合物还可以用于治疗与一些原发性疾病的任一疾病有关的高血压，例如，肾、肺、内分泌和血管疾病，包括治疗患有医学病症的患者，例如心力衰竭和/或慢性肾病。此外，式I的化合物可以在治疗、预防或降低出现一或多种病症的危险的方法中使用，例如，肺高血压，尤其是肺高动脉压(PAH)，心血管疾病、水肿状态、糖尿病、尿崩症、手术后的容量过度负荷、内皮功能障碍、舒张期功能障碍、收缩期功能障碍、稳定和不稳定型心绞痛、血栓、再狭窄、心肌梗塞、中风、心功能不全、肺高张力、动脉粥样硬化、肝硬化、腹水、子痫前期、脑水肿、肾病、肾小球肾炎、肾病综合征、急性肾机能不全、慢性肾机能不全(还称为慢性肾病，或更通常称为肾损害)、急性肾小管坏死、高钙血症、特发性水肿、Dent's疾病、美尼尔症、青光眼、假性脑瘤及利尿剂或利钠剂或两者具有治疗或预防性益处的其它病症。可以给予患有一或多种病症或处于一或多种病症危险之中的患者本发明的化合物，其中利尿剂或利钠剂或两者对所述病症具有治疗或预防性益处，例如，本文所描述的那些。

与目前使用的临床药剂相比，式I的化合物潜在地具有降低倾向(例如，低或高钾血、糖尿病的新发作、血脂异常，等等)。该化合物还可以降低利尿剂耐受性的危险，利尿剂耐受性是长期使用髓袢利尿剂所出现的问题。

通常，可以将作为ROMK抑制剂的化合物确定为下列那些化合物：当在至少一个下列试验中检测时，IC50值是5μΜ或更低，优选1μΜ或更低，且更优选0.25μΜ或更低：1)铊通量试验，2)电生理学试验。下面更详细地描述这些试验。

所给予的化合物的剂量取决于各个病例，按照常例，适合于达到最佳效果的各种状况。由此，取决于所治疗病症的性质和严重程度，还取决于所治疗的人或动物的性别、年龄、体重和个体响应，所使用的化合物的作用效果和持续时间，是否是急性或慢性治疗或预防性治疗，或除了式I的化合物之外是否还给予其它活性化合物。为了确定预防、抵御或抑制病症进展所需要的治疗有效或预防有效剂量，普通临床医师可以在他们的领域之内考虑这些因素。可以预期，以每天为基础，可以长期给予该化合物，给药时间的长度应该适合于治疗或预防与患者有关的医学病症，包括持续治疗患者几天、几个月、几年或患者的一生的疗程。

为了获得目标效果，通常，大约0.001至100 mg/kg的日剂量适于给予体重大约75 kg的成年人，优选0.001至30 mg/kg，尤其是0.001至10 mg/kg(在每种情况下都是mg/kg体重)。以每天为基础，优选，日剂量可以是单剂量，或可以分成几份给予，例如，二、三或四个单剂量，例如可以是、但不局限于：0.1 mg、0.25 mg、0.5 mg、0.75 mg、1 mg、1.25 mg、2 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg、20 mg、40 mg、50 mg、75 mg、100 mg、125 mg、150 mg、175 mg、200 mg等等。在某些情况下，根据化合物的效能或个体响应，可能需要向上或向下偏离给定的日剂量。此外，可以配制该化合物，成为立即或改进释放形式，例如，延长或控制释放形式。

术语“患者”包括使用本发明活性剂来预防或治疗医学病症的动物，优选哺乳动物，尤其是人。给予患者药物包括自我给药和他人给予患者药物。患者可以是需要治疗所存在的疾病或医学病症的患者，或可以是为了预防所述疾病或医学病症、或降低出现所述疾病或医学病症的危险或出现疾病或医学病症的长期并发症的危险而进行预防性治疗的患者。

术语“治疗有效量”是指能够引起研究人员、兽医、医生或其它临床医师所调查的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂的数量。预防有效量是指能够预防或降低研究人员、兽医、医生或其它临床医师所设法预防的组织、系统、动物或人出现生物或医学状况的危险的药物数量。本文使用的术语“预防”和这些术语的衍生品指的是在患者还没有出现病症的临床症状之前给予患者化合物。应当理解，具体日剂量可以同时是治疗有效量，例如，治疗高血压，以及预防有效量，例如，预防心肌梗塞或降低心肌梗塞的危险，或预防或降低与高血压有关的并发症的危险。

在本发明的治疗方法中，可以通过任何合适的给药途径给予ROMK抑制剂，例如，利用含有常规无毒的药用载体、助剂和赋形剂的剂量单位制剂形式，通过口服、胃肠外或直肠给药。本文使用的术语“肠胃外”包括皮下注射、静脉内(IV)、肌内、胸骨内注射或输液技术。对于治疗慢性适应症，例如高血压或慢性心力衰竭，优选口服制剂，尤其是固体口服剂量单位，例如丸剂、片剂或胶囊，且更尤其是片剂。对于急性治疗，例如，治疗急性心力衰竭，优选IV给药。

本发明还提供了由式I的化合物和药用载体组成的药物组合物，所述药用载体由一或多种赋形剂或添加剂组成。赋形剂或添加剂是用于配制活性药物组分的惰性物质。对于口服使用，例如，含有活性成分的本发明的药物组合物形式上可以是丸剂、片剂、锭剂、糖锭、水或油混悬剂、可分散性粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊或糖浆剂或酏剂。可以按照本领域已知的制备药物组合物的任何方法，制备口服使用的组合物。片剂含有活性组分与适合于制备片剂的无毒药用赋形剂的混合物。赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、甘露醇、磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶，以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。

药物组合物还可以包含其它常规添加剂，例如但不局限于：润湿剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调味剂、芳香剂、增稠剂、缓冲物质、溶剂、增溶剂、达到长效效果的药剂、改变渗透压力的盐、涂布剂或抗氧化剂。可以使用口服立即释放和定时控制释放剂型，以及肠包衣口服剂型。片剂可以无包衣，或为了美观的目的、屏蔽味道或其它理由，可以用已知的技术将它们包衣。包衣还可以用于延迟在胃肠道中的崩解和吸收，由此提供较长周期的持续作用。例如，可以使用延时原料，例如，单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

还可以以硬明胶胶囊形式提供口服使用的制剂，在其中，活性组分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或以软明胶胶囊形式提供，在其中，活性组分与水或可互溶的溶剂(例如，丙二醇、PEG和乙醇)或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

水悬剂含有活性物质与适合于制备水悬剂的赋形剂的混合物。通过将活性组分悬浮在植物油(例如，花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中，可以配制油性混悬剂。油性混悬剂可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。为了提供适口的口服制剂，可以加入甜味剂和调味剂。通过加入抗氧化剂例如抗环血酸，可以保存这些组合物。糖浆剂和酏剂可以与甜味剂例如丙三醇、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖一起配制。

本发明还包括制备药物组合物的方法，包括：将式I的化合物与药用载体混合。本发明还包括药物组合物，所述药物组合物是通过式I的化合物与药用载体混合来制备的。此外，为了制备抑制ROMK的药物、引起多尿和/或尿钠排泄和/或为了治疗、预防本文所描述的任何医学病症或降低本文所描述的任何医学病症的危险，在本文所描述的剂量中，可以使用治疗有效量的本发明的化合物。

式I的活性化合物和/或它的药用盐在药物组合物中的数量可以是，例如但不局限于：基于游离酸/游离碱的重量，每个剂量含有大约0.1 mg至1 g，尤其是0.1 mg至大约200 mg，更尤其是大约0.1 mg至大约100 mg，甚至更尤其是大约0.1至大约50 mg，但取决于药物组合物的类型、活性成分的效能和/或所治疗的医学病症，还可以更低或更高。基于游离酸/游离碱的重量，药物组合物通常包含大约0.5至大约90重量百分数的活性化合物。

式I的化合物抑制ROMK。由于这种性能，除了用作人用药物和兽用药物的药学活性化合物以外，它们还可以用作科学工具，或以这种对ROMK的效果为目标的生物化学研究的辅助手段，以及用于诊断目的，例如，体外诊断细胞样品或组织样品。式I的化合物还可以用作制备其它药学活性化合物的中间体。

一或多种其它的药理学活性剂可以与式I的化合物联合给予。其它活性剂(或药剂)是指不同于式I化合物的药用化合物，并且它是在身体内具有活性的药学活性剂(或药剂)，包括前体药物，例如，酯化形式，它在给药之后能够转变成药学活性形式，还包括所述其它活性剂的游离酸、游离碱和药用盐，当这种形式是商业销售形式，或另一方面是化学上合适的形式时。通常，任何合适的其它活性剂或药剂，包括但不局限于抗高血压药剂、其它利尿剂、抗动脉粥样硬化药剂，例如，脂质调节化合物、抗糖尿病药剂和/或抗肥胖药剂，可以在与式I的化合物任何联用形式中使用，它们可以是单一剂量制剂(固定剂量的药物联用形式)，或可以是能够同时或顺序给予患者活性剂(共同给予单独的活性剂)的一个或多个单独剂量制剂形式。可以使用的一或多种其它活性剂的例子包括但不局限于：噻嗪类利尿剂，例如，双氢氯噻嗪(HCTZ或HCT)；血管紧张肽转化酶抑制剂(例如，阿拉普利、贝那普利、卡托普利、西罗普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪达普利、赖诺普利、莫维普利(moveltipril)、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利或群多普利)；血管紧张肽转化酶(ACE)和中性内肽酶(NEP)的双重抑制剂，例如，奥帕曲拉(omapatrilat)、山帕曲拉(sampatrilat)和法西多曲；血管紧张素II受体拮抗剂，亦称血管紧张素受体阻断剂或ARB，它们可以是游离碱、游离酸、盐或前体药物形式，例如阿齐沙坦(azilsartan)，例如，阿齐沙坦酯(azilsartan medoxomil)钾(EDARBI?)、坎地沙坦，例如，坎地沙坦西酯(ATACAND?)、依普罗沙坦，例如，甲磺酸依普罗沙坦(TEVETAN?)、伊贝沙坦(AVAPRO?)、氯沙坦，例如，氯沙坦钾(COZAAR?)、奥美沙坦，例如，奥美沙坦酯(olmesartan medoximil)(BENICAR?)、替米沙坦(MICARDIS?)、丙戊沙坦(DIOVAN?)以及与噻嗪类利尿剂例如双氢氯噻嗪联用的任何药物(例如，HYZAAR?、DIOVAN HCT?、ATACAND HCT?)等等)；钾贫乏利尿剂，例如，阿米洛利HCl、螺内酯、依普利酮(epleranone)、三氨蝶啶，各自含有或不含有HCTZ；碳酸酐酶抑制剂，例如乙酰唑胺；中性内肽酶抑制剂(例如，塞奥芬(thiorphan)和磷酰胺素)；醛甾酮拮抗剂；醛甾酮合酶抑制剂；肾素抑制剂(例如，二和三肽的脲衍生物(参见美国专利5,116,835)、氨基酸和衍生物(美国专利5,095,119和5,104,869)、通过非肽键连接的氨基酸链(美国专利5,114,937)、二和三肽衍生物(美国专利5,106,835)、肽基氨基二醇(美国专利5,063,208和4,845,079)和肽基β-氨酰基氨基二醇氨基甲酸酯(美国专利5,089,471)；还有下列美国专利5,071,837、5,064,965、5,063,207、5,036,054、5,036,053、5,034,512和4,894,437公开的各种其它肽类似物，以及小分子肾素抑制剂(包括二醇磺酰胺和亚磺酰(美国专利5,098,924)、N-吗啉代衍生物(美国专利5,055,466)，N-杂环醇(美国专利4,885,292)和pyrolimidazolones(美国专利5,075,451)；还有抑胃肽衍生物(美国专利4,980,283)以及含有statone的肽的氟和氯衍生物(美国专利5,066,643)；依那吉仑(enalkrein)；RO 42-5892；A 65317；CP 80794；ES 1005；ES 8891；SQ 34017；阿利吉仑(aliskiren)(2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-氨甲酰基-2-甲基丙基)-5-氨基-4-羟基-2,7-二异丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半富马酸盐)、SPP600、SPP630和SPP635)；内皮肽受体拮抗剂；血管扩张剂(例如硝普盐)；钙通道阻断剂(例如，氨氯地平、硝苯地平、维拉帕米、地尔硫卓、非洛地平、加洛帕米、尼鲁地平(niludipine)、尼莫地平、尼卡地平、苄普地尔、尼索地平)；钾通道活化剂(例如、尼可地尔、吡那地尔、色满卡林、米诺地尔、aprilkalim、氯普唑仑(loprazolam))；sympatholitics；β-肾上腺素能阻断药(例如，醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、卡维地洛、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、萘羟心安、普奈洛尔、梭达罗、噻吗心安)；α肾上腺素能阻断药(例如，doxazocin、prazocin或α甲基多巴)；中枢α肾上腺素能的激动剂；周围血管扩张药(例如，肼苯哒嗪)；硝化或一氧化氮给予化合物，例如，单硝酸异山梨醇；脂质降低药剂，例如，HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，西伐他汀和洛伐他汀，销售形式为ZOCOR?和MEVACOR?，是内酯前体药物形式，并且给药之后起到抑制剂的作用，和二羟基开环酸HMG-CoA还原酶抑制剂的可药用盐，例如阿托伐他汀(尤其是以LIPITOR?销售的钙盐)，罗苏伐他汀(尤其是以CRESTOR?销售的钙盐)，普伐他汀(尤其是以PRAVACHOL?销售的钠盐)和氟伐他汀(尤其是以LESCOL?销售的钠盐)；胆固醇吸收抑制剂，例如，依泽替米贝(ZETIA?)，以及依泽替米贝与任何其它脂质降低药剂(例如，上面提到的HMG-CoA还原酶抑制剂)的联用药，尤其是与西伐他汀(VYTORLN?)或与阿托伐他汀钙的联用药；立即释放或控制释放形式的烟碱酸，尤其是烟碱酸与DP拮抗剂(例如，laropiprant(TREDAPTIVE?))和/或与HMG-CoA还原酶抑制剂的联用药；烟碱酸受体激动剂，例如阿昔莫司和阿昔呋喃，以及烟碱酸受体部分激动剂；改变代谢的药剂，包括治疗糖尿病的胰岛素敏化剂和相关的化合物，例如，双缩胍(例如，二甲双胍)、氯茴苯酸类(例如，瑞格列奈、那格列萘)、磺酰脲(例如，氯磺丙脲、格列美脲、格列甲嗪、优降糖、甲磺吖庚脲、甲苯磺丁脲)、噻唑烷二酮，还称为格列酮(例如，吡格列酮、罗格列酮)、α-葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖、米格列醇)、二肽基肽酶抑制剂(例如，西他列汀(JANUVIA?)、阿洛利停(alogliptin)、维格列汀(vildagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、度格列汀(dutogliptin)、吉格列汀(gemigliptin))、麦角生物碱(例如，溴隐亭)、联用药，例如JANUMET?(西他列汀与二甲双胍)和可注射的糖尿病药物，例如，依泽那太和乙酸普兰林肽；磷酸二酯酶-5(PDE5)抑制剂，例如西地那非(Revatio、Viagra)、他达拉非(tadalafil)(Cialis、Adcirca)、伐地那非HCl(levitra)；或与有益于预防或治疗上述疾病的其它药物，包括但不局限于：二氮嗪；在化学上合适的情况下，包括游离酸、游离碱和药用盐形式、前体药物形式(包括但不局限于：酯)以及上述药剂的前体药物的盐。上面提到的药物的商标名称提供了活性剂的销售形式的范例；可以使用单独剂型的这种药物，与式I的化合物同时或顺序给予，或可以在包括式I化合物的固定剂量药物联用药中使用这种活性剂。

在下面的反应路线和实施例中，描述了制备本发明化合物的一些方法。购买起始原料和中间体，或用已知的方法制备，或另外说明。下列反应路线还描述了制备式I化合物的一些经常使用的途径。在某些情况下，为了促进反应或避免不希望的反应产物，可以改变进行反应路线步骤的顺序。在反应路线中，“R”取代基相当于式I所定义的结构上同一位置的取代基。

化合物IA，苄基位置被OH基团取代，可以按照反应路线1详述的顺序来制备。在高温下，环氧化物1与螺环胺2偶合，形成醇IA(Nomura, Y.等人，Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 1995, 43(2), 241-6)。在常规加热下，或使用微波装置加热，可以进行该反应。在该反应中，可以使用许多溶剂，例如，乙醇和2-丙醇。螺环胺可以是游离碱，或它们可以是盐，在这样的情况下，可以加入碱，例如，三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。注意，当使用对映体纯的手性环氧化物(例如，反应路线1中的(R)-1)时，环氧化物打开，同时保持苄基位置的立体化学，并且可以获得单一异构体(R)-IA(如果使用(S)-环氧化物，产生的醇的立体化学与所示立体化学相反)。

或者，可以进行IA的对映体或非对映体的手性HPLC分离，提供单一对映体或非对映体。

反应路线1

通过反应路线2详述的顺序，可以制备式IB的化合物。使用各种还原胺化条件(例如，使用氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或四异丙醇化钛，而后使用硼氢化钠或氰基硼氢化钠)，可以在螺环胺2的还原烷基化反应中使用醛或酮3，得到式IB的ROMK抑制剂。

反应路线2

可以按照反应路线3详述的方法，制备环氧化物1(以及单一对映体(R)-1和(S)-1)。在钯催化偶合条件下、具有合适的膦配体，用商购的乙烯基三氟硼酸钾处理4(其中，X是氯、溴、碘或三氟甲磺酸基)(Molander, G.; Luciana, A. Journal of Organic Chemistry, 2005, 70(10), 3950-3956)，得到苯乙烯5(Molander, G.; Brown, A. Journal of Organic Chemistry, 2006, 71(26), 9681-9686)。或者，可以使用其它方法，例如，使用乙烯基锡烷试剂和钯催化剂。在各种环氧化反应条件下，例如，使用mCPBA，所得到的苯乙烯5可以转变为相应的环氧化物1(Fringuelli, F.等人，Organic Preparations and Procedures International, 1989, 21(6), 757-761)。在手性HPLC色谱条件下，可以将外消旋的环氧化物1拆分，得到它的对映体，按照反应路线1，可以使用它来代替1。

反应路线3

或者，如反应路线4所示，可以制备对映体纯的环氧化物(R)-1或(S)-1。在钯催化条件下、具有合适的配体(例如Pd(OAc)₂，DPPP)，用商购的乙烯基丁基醚6处理4(其中X是溴、碘或三氟甲磺酸基)，可以提供烯醇醚7。可以使用化学工作者已知的其它方法，制备烯醇醚。用NBS或其它类似的试剂处理所得到的烯醇醚7，得到相应的溴甲基酮8。可以使这些经受各种不对称的酮还原条件，例如，使用可以影响这种高对映选择性转化的酶。用碱(例如三乙胺)顺序处理，引起环化，得到对映体富集的环氧化物(R)-1或(S)-1(取决于不对称的还原剂)。

反应路线4

利用反应路线5描述的两个方法，可以用许多途径制备醛3A。在合适的钯催化剂和配体(例如，醋酸钯(II)和三叔丁基膦-BF₄复合物)的存在下，用溴(1,3-二氧戊环-2-基甲基)锌处理4(其中X是溴、碘或三氟甲磺酸基)，提供相应的芳基1,3-二氧戊环-2-基甲基衍生物9。然后，在水和有机溶剂的存在下，用HCl处理，可以获得醛3A。或者，在钯催化剂的存在下，4(其中X是溴、碘或三氟甲磺酸基)与烯丙基三丁基锡烷反应，得到烯丙基产物10。氧化，例如，使用臭氧，而后使用二甲硫醚，提供醛3A。

反应路线5

如反应路线6所述，可以制备螺环氨基呋喃酮2。使用钯催化剂和配体，例如，乙酸钯和4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽，螺环二胺或氨基内酰胺(其中R¹¹和R¹²一起代表羰基)11(视情况进行保护)(Greene, T.; Wuts, P. G. M. protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Inc., New York, NY 1991)可以与呋喃酮三氟甲磺酸酯或溴化物12偶合。本文描述的一些螺环二胺或氨基内酰胺11是商购的；其它的可以如下面实验部分所述来制备。4-溴呋喃-2(5H)-酮是商购的；其它呋喃酮12可以如下面实施例所述来制备。除去保护基，例如，可以用TFA或HCl除去叔丁氧羰基，中间体13转变为螺环氨基呋喃酮2。

反应路线6

可以用许多方法，包括反应路线7描述的那些方法，制备螺环氨基内酰胺11A。使用碱，例如，二异丙基胺化锂，可以用溴乙腈15将商购的氨基酯14烷基化，得到腈中间体16。还原，例如，使用氧化铂和氢气，或兰尼镍，得到内酰胺11A。或者，使用碱，例如，二异丙基胺化锂，可以用烯丙基卤17将氨基酯烷基化，提供烯丙基中间体18。氧化裂解，例如，使用四氧化锇和高碘酸钠，提供酮和醛19。可以用几个方法进行还原胺化与随后的（tandem）内酰胺环化，得到11A，包括：在溶剂(例如甲醇)中用乙酸铵和氰基硼氢化钠处理，如下所示。

反应路线7

实现这些非对映体和对映体的独立合成或它们的色谱分离在本领域是已知的，可以通过本文所公开方法的合适变体来实现。它们的绝对立体化学可以由晶体产物或晶体中间体的X-射线晶体衍射来测定，如果需要的话，将其用含有已知绝对立体化学的不对称中心的试剂来衍生化，或使用振动圆二色性(VCD)光谱。

通过改变实施例公开的方法(视情况而定)，可以制备目标化合物。可以商购起始原料，或通过已知的方法或说明的方法来制备。仅为了进一步举例说明的目的，提供下列实施例，但不是用来限制所公开的发明。

对水分或空气敏感的反应在氮气或氩气氛围中进行，使用无水溶剂和试剂。利用分析薄层色谱(TLC)(通常用E.Merck预先涂渍的TLC板进行，硅胶60F-254，层厚度0.25 mm)或液相色谱-质谱(LC-MS)来确定反应的进展。

通常，使用的分析LC-MS系统由具有电喷射离子化作用的Waters ZQ平台组成，正离子检测方式，使用带有自动进样器的Agilent 1100系列HPLC。柱通常是Water Xterra MS C18，3.0 x 50 mm，5μm。流速是1 mL/min，注射体积是10 μL。UV检测在210-400nm的范围。

移动相包括：溶剂A(水加上0.06% TFA)和溶剂B(乙腈加上0.05% TFA)，梯度为：100%溶剂A，0.7 min，改变为100%溶剂B，用3.75 min，保持1.1 min，然后恢复至100%溶剂A，用0.2 min。

通常使用质谱指引系统进行制备HPLC纯化。通常在Waters色谱工作站上进行，配置有LC-MS系统，包括∶具有电喷射离子化作用的Waters ZQ单四极杆MS系统，Waters 2525梯度泵，Waters 2767注射器/采集器，Waters 996 PDA检测器，MS条件∶150-750 amu，正相电喷雾，MS启动的收集，以及Waters Sunfire C-18 5微米，30 mm(id)x 100 mm柱。移动相由乙腈(10-100%)/水(含有0.1% TFA)的混合物组成。流量维持在50 mL/min，注射体积是1800μL，UV检测范围是210-400 nm。用于单一化合物，使移动相梯度最佳化。

使用微波辐射进行的反应通常使用Emrys Optimizer(Personal Chemistry制造)或Initiator(Biotage制造)进行。

溶液的浓缩在旋转蒸发器上减压进行。通常使用Biotage快速色谱装置(Dyax Corp.)、在硅胶(32-63 mM，60 ?孔径)(在预先填充的指定大小的柱体中)上进行快速色谱。在500 MHz光谱仪上、在CDCl₃溶液中获得¹H NMR光谱，除非另作说明。用百万分之一(ppm)记录化学位移。四甲基硅烷(TMS)用作内标(在CD₃Cl溶液中)，残留的CH₃OH峰或TMS用作内标(在CD₃OD溶液中)。用赫兹(Hz)记录偶合常数（J）。

通常在Chiralpak AS、Chiralpak AD、Chiralcel OD、Chiralcel IA或Chiralcel OJ柱(250 x 4.6 mm)(Daicel Chemical Industries, Ltd.)中的一个柱上进行手性分析色谱，记录的乙醇/己烷(%Et/Hex)或异丙醇/庚烷(%IPA/Hep)的百分比作为等度溶剂系统。有时在Chiralpak AS、Chiralpak AD、Chiralcel OD、Ciralcel IA或Chiralcel OJ柱(20 x 250 mm)(Daicel Chemical Industries, Ltd.)中的一个柱上进行手性制备色谱，具有在手性分析色谱上或利用超临界流体(SFC)条件所确定的目标等度溶剂系统。或者，利用超临界流体(SFC)条件进行手性制备色谱，使用Chiralpak AS、Chiralpak AD-H、Chiralcel OD-H、Chiralpak IC或Chiralcel OJ-H柱(250 x 21.2 mm)(Daicel Chemical Industries, Ltd.)中的一个柱。在实施例和表中提供保留时间的情况下，它们不是具体化合物的确定特征，这是由于，正如本领域技术人员已知的那样，根据色谱条件，例如，使用的柱、柱的条件以及使用的溶剂系统和仪器，保留时间可以改变，峰洗脱的时间和/或顺序也可以改变。

溶液的浓缩通常在旋转蒸发器上减压进行。在硅胶(230-400目)上进行快速色谱。在CDCl₃溶液中获得NMR光谱，除非另作说明。用赫兹(Hz)记录偶合常数（J）。

本文使用的缩写和简称包括∶-C(O)CH₃(Ac)；-OC(O)CH₃(OAc)；乙酸(AcOH；HOAc)；1-氯乙基氯甲酸酯(ACE-Cl)；2,2'-二(二苯基膦基)-1,1'-联萘(BLNAP)；叔丁氧羰基(Boc或BOC)；二碳酸二叔丁基酯((BOC)₂O，Boc₂O)；苄氧羰基(Cbz)；环戊基甲醚(CPME)；羰二咪唑(CDI)；三氟化二乙基氨基硫(DAST)；二亚苄基丙酮(dba)；1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)；1,2-二氯乙烷(DCE)；二氯甲烷(DCM)；二甲氧基乙烷(DME)；二异丁基氢化铝(DIBAL-H)；N,N-二异丙基乙胺(DIEA，DIPEA，Hunig's碱)；二异丙胺(DIPA)；1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁(dppf，DPPF)；戴斯-马丁氧化剂(DMP；1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氢-1,2-苯并碘氧杂环戊烯-3(1H)-酮)；甲硫醚(DMS)；二甲亚砜(DMSO)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；4-二甲基氨基吡啶(DMAP)；二甲基乙酰胺(DMA；DMAC)；1,3-二(二苯基膦基)丙烷(DPPP)；乙酸乙酯(EtOAc)；二乙醚(醚或Et₂O)；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC、EDAC或EDCl)；2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,l,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)；己烷(Hex)；六甲基磷酰胺(HMPA)；1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)；异丙醇(IPA)；乙酸异丙酯(IPAc)；二(三甲基甲硅烷基)胺化钾(KHMDS)；氢化铝锂(LAH)；二异丙基胺化锂(LDA)；3-氯过苯甲酸(mCPBA)；甲醇(MeOH)；CH₃SO₂-(甲磺酰基或Ms)；甲磺酰基氯或甲磺酰氯(MsCl)；甲磺酸(MsOH)；甲基叔丁基醚(MTBE)；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)；N-溴琥珀酰亚胺(NBS)；N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)；N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)；N-甲基吗啉-N-氧化物(NMO)；N-甲基吗啉(NMP)；六甲基二硅胺化钠(NaHMDS)；三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)₃)；氯铬酸吡啶(PCC)；苯基(Ph)；石油醚(PE或石油醚)；四(三苯基膦)钯(Pd(PPh₃)₄)；三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃)；Pd(dppf)Cl₂或PdCl₂(dppf)是1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)，其可以是与CH₂Cl₂的复合物；四正丁基氟化铵(TBAF)；叔丁基二甲基甲硅烷基氯(TBS-Cl)；三乙胺(TEA)；三氟乙酸(TFA)；-SO₂CF₃(Tf)；三氟甲磺酸(三氟甲磺酸，TfOH)；三氟甲磺酸酐(三氟甲磺酸酐，(Tf)₂O)；2-四氢呋喃(THF)；N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TMEDA)；对甲苯磺酸(TsOH)；二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(X-Phos)；二乙基氨基二氟代四氟硼酸锍（sulfinium）盐(XtalFluor-E?)；4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)。其它缩写和简称是∶起始原料(SM)；圆底烧瓶(RB或RBF)；水溶液(aq)；饱和水溶液(sat'd)；氯化钠饱和水溶液(盐水)；中压液相层析(MPLC)；高压液相色谱(HPLC)；制备HPLC(prep-HPLC)；快速色谱(FC)；液相色谱(LC)；超临界流体色谱(SFC)；薄层色谱(TLC)；制备TLC(prep-TLC)；质谱(ms或MS)；液相色谱-质谱(LC-MS，LCMS或LC/MS)；柱体积(CV)；室温(rt、r.t.或RT)；小时(h或hr)；分钟(min)；保留时间(Rt)；克(g)；毫克(mg)；毫升(mL)；微升(μL)；毫摩尔(mmol)；体积∶体积(V/V)。CELITE?是硅藻土的商标名称，SOLKAFLOC?是粉末纤维素的商标名称。X或x可以用于表达动作重复次数(例如，用2 x 200 mL 1N HCl洗涤)，或表达尺寸(例如，柱的尺寸是30 x 250mm)。

下列方法是制备中间体的代表性方法，所述中间体用于制备后面的实施例所描述的最终产品。仅为了进一步举例说明的目的，提供这些实施例，但不是用来限制所公开的发明。

应当理解，在化合物中，手性中心可以以“S”或“R”立体构型存在，或以两者的混合物形式存在。在许多实施例中，将具有手性中心的化合物分离为单一立体异构体(例如，称为异构体A和异构体B，或快/慢洗脱的异构体)，或各自由单一异构体中间体合成衍生。除了母体混合物所定义的手性中心之外，不测定每个单独异构体的绝对立体化学(R或S)，除非另外具体指明。

本文中，可以在数字前面加上“I-”来指明如下所述的中间体。例如，中间体4A简写为I-4A。

中间体1

(1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛

步骤A∶5-(1,3-二氧戊环-2-基甲基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向配备有搅拌棒、凡士通（firestone）阀、热电偶、冷凝器和加热套的三颈5升圆底烧瓶中加入三叔丁基膦四氟硼酸盐(500 mg，1.72 mmol)、醋酸钯(II)(250 mg，1.1 mmol)和5-溴-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(100 g，470 mmol)。将DMF(1.88升)加入到该烧瓶中，并交替进行真空和氮气吹扫，将该混合物脱气三次。通过小管加入商购的溴(1,3-二氧戊环-2-基甲基)锌溶液(1.03升，516 mmol)，并将该混合物再次脱气三次。然后，将该混合物在85℃加热5小时。利用HPLC-MS进行分析，表明反应没有完成。将该混合物在85℃再搅拌5小时。然后，将该混合物恢复至室温过夜。加入2-甲基THF(2升)和盐水，并将该混合物搅拌5分钟。分离各层，并将水层用2-甲基THF再次提取。合并有机层，用盐水(每次4升)洗涤三次，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。用快速色谱纯化粗品(1.5 kg硅胶柱)，用0-20%乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，得到5-(1,3-二氧戊环-2-基甲基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。LC-MS(IE, m/z): 221[M+1]⁺。

步骤B∶(1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛∶

在配备有Claisen接头、热电偶、搅拌棒和氮气鼓泡器的5升圆底烧瓶中，将5-(1,3-二氧戊环-2-基甲基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(61 g，280 mmol)与水(2.2升)混合。加入HCl水溶液(2M，1.14升，2.29 mol)，并将得到的混合物在40℃加热8小时。然后，将该混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物用2升乙酸乙酯提取三次。将合并的有机层浓缩，得到(1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛。LC-MS(IE, m/z): 177(M+1)⁺。

中间体2

5-溴-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶(3-溴-2-甲基苯基)甲醇∶

向3-溴-2-甲基苯甲酸(35 g，163 mmol)的THF(200 mL)溶液中加入硼烷THF复合物(1.0M，212 mL，212 mmol)。将该混合物搅拌24小时。TLC显示一个单一产物斑点。用水淬灭该反应。减压除去溶剂THF。将所得到的固体溶于乙酸乙酯(500 mL)中，用1N HCl、碳酸钠和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，浓缩，得到(3-溴-2-甲基苯基)甲醇。¹H NMR(500 MHz, CDCl₃)δ 7.76(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.63(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.30(s, 2H), 2.42(s, 3H)。

步骤B∶5-溴-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向装有(3-溴-2-甲基苯基)甲醇(6.0 g，30 mmol)的烧瓶中加入1M的三氟乙酸铊(16.2 g，29.8 mmol)的TFA溶液。将该混合物在室温下搅拌过夜。TLC分析显示，没有剩余起始原料。真空除去溶剂，并将残余物在高真空下用泵抽30分钟，确保完全除去TFA。然后，向残余物中加入氯化钯(II)(529 mg，2.98 mmol)、氯化锂(2.53 g，59.7 mmol)、氧化镁(2.41 g，59.7 mmol)和MeOH(150 mL)。将该反应用CO吹扫两次，并在CO氛围中、在室温下保持。LC分析显示，在2小时之内出现大的产物斑点。向此溶液中加入乙酸乙酯，使盐沉淀。通过CELITE?垫过滤该黑色溶液，用EtOAc洗涤，吸附到硅胶上，用硅胶色谱纯化，得到标题化合物。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.71(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.58(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.25(s, 2H), 2.37(s, 3H)。

中间体3

(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛

步骤A∶4-甲基-5-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向装有5-溴-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(320 mg，1.409 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入烯丙基三正丁基锡(0.655 mL，2.11 mmol)、Pd(PPh₃)₄(244 mg，0.21 1 mmol)、氯化锂(179 mg，4.23 mmol)和甲苯(15 mL)。将该反应用氮气吹扫2次，然后回流加热4小时。用硅胶色谱分离产物，得到4-甲基-5-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤B∶(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛∶

将上述烯烃(220 mg，1.2 mmol)的MeOH(20 mL)溶液冷却至-78℃。向此溶液中鼓入臭氧，直到反应转变为蓝色为止。向反应中鼓入氮气，除去过量臭氧，而后加入DMS(0.870 mL，1 1.7 mmol)。将该反应加热至室温。利用快速色谱纯化粗品，得到标题化合物。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃)δ ppm 9.78(s, 1H), 7.75(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.34(d, J=7.5 Hz, 1H), 5.27(s, 2H), 3.90(s, 2H), 2.23(s, 3H)。

中间体4

4-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶5-乙烯基-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

将5-溴-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(598 mg，4.47 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(507 mg，2.23 mmmol)、PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(182 mg，0.223 mmmol)和TEA(0.622 mL，4.47 mmol)加入到在20 mL微波管中的10 mL乙醇中。将该管密封，并脱气，然后加热到140℃，保持20分钟。LC-MS分析显现产物峰。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤两次，干燥，并蒸干。用MPLC色谱纯化粗品，使用120g Redi-sep柱和0-80% EtOAc/己烷溶剂系统，得到5-乙烯基-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 7.76(d, J=8Hz, 1H), 7.03(dd, J=1 1 , 17 Hz, 1H), 5.84(d, J=17 Hz, 1H), 5.55(d, J=1 1 Hz, 1H), 5.29(s, 2H), 2.34(s, 3H); LC-MS: M+1=175。

步骤B∶4-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，将5-乙烯基-4-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.46 g，8.38 mmol)加入到DCM(25 mL)，然后加入mCPBA(2.89 g，16.8 mmol)，并将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用饱和Na₂S₂O₃水溶液、NaHCO₃和盐水各自洗涤一次。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，蒸干。用MPLC色谱纯化粗品，通过120g Redi-sep柱，用0-80% EtOAc/己烷溶剂系统洗脱，得到目标4-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 7.77(d, J=8 Hz, 1H), 7.43(d, J=8 Hz, 1H), 5.30(s, 2 H), 4.12(s, 1 H), 3.27(t, J=4Hz, 1 H), 2.735(dd, J=2.2, 5.5 Hz, 1H), 2.43(s, 3H)。LC-MS: M+1=191。

中间体4A和4B(方法1)

4A∶4-甲基-5-[(2S)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

4B∶4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

在超临界流体色谱(SFC)条件下，利用Berger MGIII制备SFC仪器，将外消旋的4-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮在ChiralPak? AD-H柱(5x25cm)上拆分。在1:1 DCM:MeOH中，将外消旋体稀释至50 mg/mL。使用10% EtOH/CO₂完成分离，流速200 mL/min，100 bar，25℃。每2.12分钟注射500ul。首先快速洗脱的是环氧化物(4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮，4B)，第二个缓慢洗脱的是环氧化物(4-甲基-5-[(2S)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮，4A)。

或者，还可以使用8%MeOH/98% CO₂的移动相进行拆分，流速100 mL/min。在这种情况下，通过溶于甲醇中来制备样品，20mg/mL，每次注射1 mL体积。分离之后，在浴温40℃，通过旋转蒸发器干燥馏分。

基于用4B制备的最终化合物的晶体X射线结构测定数据，以及从4B起始制备的酯的Mosher酯和Trost酯HNMR分析，推断每个对映体的绝对立体化学。发现两种环氧化物异构体在本发明中都具有应用性。

中间体4B(方法2)

4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶3-羟甲基-2-甲基酚∶

向配备有顶部搅拌器的5升3颈RB中加入NaBH₄(87.0 g，2.30 mol)和THF(3.0升)，并将所得到的浆液冷却至10℃。然后，用20分钟向该浆液中分批加入3-羟基-2-甲基苯甲酸(175 g，1.15 mol)(Tmax：17℃)。形成可搅拌的浆液，并在10-15℃再老化45分钟，而后用1.5小时慢慢地加入BF₃-OEt₂(321 mL，2.53 mol)。将该浆液在10℃-15℃下老化2小时，然后检测反应完成(转化98.5%)。将该浆液冷却至10℃以下，并用931 mL MeOH、用1.5小时慢慢地停止反应(气体逸出)。将所得到的浆液在室温下老化过夜。将该批料冷却至10℃以下，然后用1N HC1(1.5升)淬灭，得到均相溶液(溶液的pH值～1)，将其老化30分钟，而后通过旋转蒸发除去有机溶剂，达到大约1.8 L的全部反应体积(浴温设置在50℃；旋转蒸发之后的浓缩物的内部温度是～40℃)。将该浆液在45℃保持30分钟，然后慢慢地冷却至15℃。滤出固体，用冷(15℃)水(2 x 300 mL)洗涤，提供3-羟甲基-2-甲基酚。¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 9.11(s, 1H), 6.95(t, J=7.8 Hz, 1H), 6.82(d, J=7.4 Hz, 1H), 6.71(d, J=7.8 Hz, 1H), 4.93(t, J=5.5 Hz, 1H), 4.44(d, J=5.5 Hz, 2H), 2.06(s, 3H)。

步骤B∶4-溴-3-羟甲基-2-甲基酚∶

在3颈5升烧瓶中，在氮气氛围中，将3-羟甲基-2-甲基酚(113.9 g，824.0 mmol)溶于乙腈(850 mL)和三氟乙酸(750.0 mL，9,735 mmol)的混合物中。将该反应混合物冷却至-33℃。用15分钟加入N-溴代琥珀酰亚胺(141 g，791 mmol)，在加入期间，温度在-35至-33℃范围内。将该反应混合物再搅拌15分钟，在此期间，温度下降至-40℃。除去冷却浴，加入用水稀释至总共1.0升的碳酸钾(741.0 g，5,358 mmol)。观察到气体放出，并将温度升至25℃。加入MTBE(1.5升)，并将该反应混合物转入到分液漏斗中。分离各层。将水层用水稀释(500 mL)，并用MTBE(1升)+ EtOAc(500 mL)提取，而后用MTBE(500 mL)+ EtOAc(250 mL)提取。用水(240 mL)洗涤合并的有机层，并用硫酸钠干燥。过滤除去硫酸钠，用MTBE再次洗涤，并减压浓缩。加入MTBE(684 mL，2体积)，并将该悬浮液加热至40℃，得到均相溶液。将溶液冷却至室温。加入六个体积的庚烷，并将该悬浮液搅拌过夜。过滤该悬浮液，并将晶体用4∶1庚烷∶MTBE(500 mL)洗涤，而后用庚烷(500 mL)洗涤。将固体真空干燥，提供4-溴-3-羟甲基-2-甲基酚。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 9.52(s, 1H), 7.21(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.71(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.88(t, J=5.1 Hz, 1H), 4.59(d, J=5.1 Hz, 2H), 2.23(s, 3H)。

步骤C∶5-羟基-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮∶

向配备有顶部搅拌器、氮气入口和冷凝器的2升3颈烧瓶中加入4-溴-3-羟甲基-2-甲基酚(100 g，461 mmol)、CuCN(83.0 g，921 mmol)和DMF(500 mL)。将该溶液用氮气吹扫15分钟，然后加热到145℃，获得均相溶液。将该溶液在145℃老化2小时，然后，将该反应混合物冷却至95℃。加入41.5 mL水(用氮气吹扫)，并将该反应老化20小时。将该反应冷却至室温，然后通过SOLKA FLOC?过滤固体，并将滤饼用50 mL DMF洗涤。向含有1升EtOAc的3升烧瓶中加入DMF滤液。在烧瓶底上形成沉淀涂层。通过SOLKA FLOC?过滤DMF/EtOAc悬浮液，并将滤饼用250 mL EtOAc洗涤。将所得到的滤液用5%盐水溶液(3x500 mL)洗涤。用500 mL EtOAc提取水层，并将合并的有机物用MgSO₄干燥，过滤，蒸发。在室温下，使固体在250 mL MTBE中形成浆液，然后过滤，并用100 mL MTBE洗涤。将固体在室温下真空干燥，提供5-羟基-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.52(s, 1H), 7.51(d, J=8.3 Hz, 1H), 6.99(d, J=8.3 Hz, 1H), 5.28(s, 2H), 2.07(s, 3H)。

步骤D∶4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基三氟甲磺酸酯

在配备有顶部搅拌器的2升圆底烧瓶中，在氮气氛围中，将5-羟基-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮(46.8 g，285 mmol)悬浮在二氯甲烷(935 mL)中。加入三乙胺(59.5 mL，427 mmol)，并将该反应混合物在冰浴中冷却至3.8℃。用50分钟通过加入漏斗加入三氟甲磺酸酐(67.4 mL，399 mmol)，保持温度<10℃。将该反应混合物再搅拌15分钟之后，用水(200 mL)淬灭该反应混合物，然后与DARCO KB?(活性炭，25 g)一起搅拌15分钟。用SOLKA FLOC?过滤该双相混合物，用另外的二氯甲烷洗涤，并转入分液漏斗中，用额外的水(300 mL)稀释。分离各层，并将有机层用水(500 mL)和10%盐水(200 mL)洗涤。用硫酸钠干燥二氯甲烷溶液，过滤，蒸发。将固体吸附到硅胶(27.5 g)上，通过硅胶垫(271 g)，用25%乙酸乙酯/己烷洗脱。将得到的溶液真空浓缩，在浓缩期间产物结晶。过滤该悬浮液，用庚烷洗涤固体，在真空和氮气氛围中干燥，提供三氟甲磺酸4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-异苯并呋喃-5-基酯。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.87(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.47(d, J=8.4 Hz, 1H), 5.32(s, 2H), 2.41(s, 3H)。

步骤E∶5-(1-丁氧基-乙烯基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮∶

向1升3颈(烧瓶)中加入三氟甲磺酸4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-异苯并呋喃-5-基酯(63.0 g，213 mmol)、DMF(315 mL)、丁基乙烯基醚(138 mL，1063 mmol)，然后加入Et₃N(35.6 mL，255 mmol)。将该溶液用氮气吹扫20分钟。向该溶液中加入Pd(OAc)₂(1.19 g，5.32 mmol)和DPPP(2.41 g，5.85 mmol)，并再吹扫10分钟，然后加热到80℃。老化1小时之后，将该溶液冷却至10℃以下，然后用630 mL EtOAc淬灭，用5% NH₄Cl(2 x 315 mL)、10%盐水(2 x 315 mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，旋转蒸发浓缩，用EtOAc(3 x 100 mL)冲洗，除去过量丁基乙烯基醚，提供粗品5-(1-丁氧基-乙烯基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 7.67(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.48(d, J=7.7 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 4.54(d, J=2.3 Hz, 1H), 4.27(d, J=2.3 Hz, 1H), 3.85(t, J=6.4 Hz, 2H), 2.27(s, 3H), 1.71-1.64(m, 2H), 1.46-1.37(m, 2H), 0.92(t, J=7.4 Hz, 3H)。

步骤F∶5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮∶

向配备有顶部搅拌器的1升3颈烧瓶中加入粗品5-(1-丁氧基-乙烯基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮(55.8 g)和THF(315 mL)。将该溶液冷却至5℃以下，而后加入水(79 mL)，并将该溶液保持在5℃以下。然后逐份加入NBS(41.6 g)，同时保持Tmax=19℃。然后，将该溶液升温至室温，保持30分钟。加入HBr(48%，0.241 mL)，并将该反应在室温下老化大约1小时，而后将236 mL水加入到该批料中。水浴用于保持温度在20℃。再加入315 mL水(溶剂组合物，1∶2，THF∶水)，并将该浆液冷却至15℃。过滤出所得到的固体，并用冷的1∶2的THF∶水(15℃)∶150 mL置换洗涤，而后100 mL浆液洗涤。将固体在室温下真空干燥，提供5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 7.99(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.82(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 4.92(s, 2H), 2.33(s, 3H)。

步骤G∶4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

将5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮(48.8 g，181 mmol)加入到配备有顶部搅拌器、热电偶和加热套的5升3颈圆底烧瓶中。加入2-丙醇(1.22升)，而后加入610 mL 0.1M磷酸钾缓冲液(pH7)。将缓冲溶液(610 mL)加入到1.0升锥形烧瓶(erlenmeyer)中，并将2.44 g NADP加入到锥形烧瓶(erlenmeyer)中，旋动，溶解。将还原酶KRED MIF-20(2.44 g)(得自于Codexis, Inc., 200 Penobscot Drive, Redwood City, CA 94063, www.codexis.com, tel. 1-650-421-8100)加入到锥形烧瓶中，并旋动该混合物，使固体溶解。将得到的溶液加入到5升圆底烧瓶中，然后加热到28℃，老化6小时，此时，将该反应冷却至室温，并加入三乙胺(50.2 mL，360 mmol)。将得到的溶液在40℃老化1小时。将浅色浆液冷却至室温，而后加入122 g NaCl。将该溶液在室温下老化，然后用1.22升乙酸异丙酯(IPAc)提取。将水层用400 mL IPAc再提取，并将合并的有机物用400 mL 20%盐水溶液洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，旋转蒸发浓缩。将所得到的固体接纳在100 mL IPAc中(稠浆液)。加入己烷(400 mL)，并将该悬浮液在室温下老化，然后过滤，用w/w 5:1己烷/IPAc溶液(150 mL)洗涤。将结晶固体在室温下真空干燥，提供4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.75(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.42(d, J=8.1 Hz, 1H), 5.28(s, 2H), 4.10(dd, J=4.0, 2.8, 1H), 3.26(dd, J=5.6, 4.0, 1H), 2.72(dd, J=5.6, 2.8, 1H), 2.42(s, 3H)。

中间体5

(R)-2-甲氧基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙醛

步骤A∶(R)-5-(2-羟基-1-甲氧基乙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向(S)-4-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(2.00 g，10.5 mmol)的MeOH(20 mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(0.100 g，0.526 mmol)。在80℃加热48小时后，将该反应混合物冷却至室温，而后浓缩。用柱色谱纯化粗品，用0-45% EtOAc/己烷洗脱。LC-MS(IE, m/z): 223.2(M+1)⁺。

步骤B∶(R)-2-甲氧基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙醛∶

将(R)-5-(2-羟基-1-甲氧基乙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(500 mg，2.25 mmol)溶于DCM(10 mL)中，并用戴斯-马丁氧化剂(954 mg，2.25 mmol)处理。将该反应混合物在室温下、在氮气氛围中搅拌过夜。该粗品可直接使用。LC-MS(IE, m/z): 239.2(M+H₂O+1)⁺。

中间体6

5-(1,2-二羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向在THF(22 mL)中的Pd(dppf)Cl₂(0.220 g，0.338 mmol)、K₃PO₄(6.75 mL，1M，在水中，6.75 mmol)中加入(E)-三氟(丙-1-烯-1-基)硼酸钾(0.749 g，5.06 mmol)和4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基三氟甲磺酸酯(I-4B，方法2，步骤D，1.0 g，3.38 mmol)。将该反应混合物脱气10分钟，并将得到的混合物在70℃搅拌过夜。将该反应混合物冷却至室温，并用EtOAc和水稀释。分离各层之后，用EtOAc提取水层，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，过滤，浓缩，用硅胶柱色谱纯化，使用(0-50%)丙酮-己烷作为移动相，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=189。

步骤B∶5-(1,2-二羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向在乙腈/水(10/1，18 mL)中的(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(300 mg，1.59 mmol)中加入NMO(243 mg，2.07 mmol)和锇酸钾(VI)二水合物(29.4 mg，0.080 mmol)。将该反应混合物加热至室温，并在室温下搅拌2小时。TLC显示反应完成。通过硅胶垫过滤该反应混合物，用10% MeOH/DCM冲洗。用柱色谱纯化粗品(0-10%，MeOH/DCM)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=223。

中间体7

6-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶5-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

将5-溴-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(15.0 g，70.4 mmol)、烯丙基-三丁基-锡烷(25.6 g，77.5 mmol)、LiCl(1 1.8 g，282 mmol)和Pd(PPh₃)₄(1.2 g，1.0 mmol)的混合物在100 mL甲苯中、在氮气氛围中、在90-100℃加热过夜。冷却至室温后，将该混合物用250 mL EtOAc稀释，过滤。用水和盐水洗涤滤液，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩至干。通过柱纯化残余物(DCM/石油醚=1:5)，得到标题化合物。

步骤B∶5-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在-78℃下，向5-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(13.5 g，45.2 mmol)的200 mL DCM/MeOH(V/V=1:1)中鼓入O₃ 30分钟，并在-78℃另外鼓入氮气15分钟。然后加入20 mL Me₂S，并将该混合物在室温下搅拌过夜，而后浓缩至干。将残余物溶于MeOH(100 mL)中，而后冷却至0℃。逐份加入NaBH₄(5.90 g，155 mmol)。将得到的混合物在0℃下搅拌1小时，然后用柠檬酸(水溶液)淬灭，并用EtOAc提取三次。将合并的有机层用NaHCO₃(水溶液)和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，并浓缩至干。通过柱色谱纯化残余物(EtOAc/石油醚=1:5)，得到标题化合物。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.86(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.41(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.38(s, 1H), 5.29(s, 2H), 3.92-3.98(m, 2H), 3.01(t, J=6.4 Hz, 2H)。

步骤C∶5-(2-羟乙基)-6-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向冷却(0℃)的5-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(9.00 g，50.6 mmol)的100 mL TfOH溶液中加入NIS(12.5 g，55.6 mmol)，然后将该混合物在0℃下搅拌2小时，而后倒入冰-水(500 mL)中。将该溶液用500 mL EtOAc提取三次，并将合并的有机层用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用柱色谱纯化残余物(EtOAc/石油醚=1:5)，得到目标5-(2-羟乙基)-6-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮和区域异构体副产物5-(2-羟乙基)-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.84(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.46(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.09(s, 2H), 3.93(q, J=6.3 Hz, 2H), 3.16(t, J=6.3 Hz, 2H), 1.45(t, J=5.5 Hz, 1H)。

步骤D∶5-(2-羟乙基)-6-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向装有5-(2-羟乙基)-6-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(6.00 g，19.7 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入Pd₂(dba)₃(452 mg,0.493 mmol)、PPh₃(1 g，4 mmol)和NMP(50 mL)。将该混合物用氮气吹扫，并加热到50℃，保持10分钟，而后加入CuI(375 mg，1.97 mmol)。将该混合物另外加热10分钟之后，将Sn(CH₃)₄(5.30 g，29.6 mmol)加入到该反应中，并加热至120℃，保持2小时。冷却至室温后，将该混合物用饱和NH₄Cl(200 mL)稀释，并用EtOAc(3次，200 mL)提取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。用制备HPLC纯化残余物，得到标题化合物。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.72(s, 1H), 7.33(s, 1H), 5.27(s, 2H), 3.93(t, J=6.3 Hz, 2H), 3.01(t, J=6.3 Hz, 2H), 2.44(s, 3H)。

步骤E∶2-(6-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基甲磺酸酯∶

在0℃，向5-(2-羟乙基)-6-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.20 g，6.25 mmol)和TEA(2.5 g，25 mmol)的DCM(100 mL)溶液中加入MsCl(1.40 g，12.5 mmol)。将该混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用水和盐水洗涤。干燥有机层，并浓缩至干。收集的标题化合物不用任何纯化就用于下一步。

步骤F∶5-乙烯基-6-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向2-(6-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基甲磺酸酯(2.00 g，7.41 mmol)和TEA(5 mL)的DCM(50 mL)混合物中慢慢地加入DBU(5 mL)。将该混合物在室温下搅拌过夜，而后用50 mL DCM稀释，用2N HCl洗涤三次，用盐水洗涤。干燥有机层，并浓缩至干。用制备TLC纯化残余物，得到5-乙烯基-6-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤G∶6-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向5-乙烯基-6-甲基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.00 g，5.75 mmol)的50 mL DCM溶液中慢慢地加入mCPBA(3.50 g，17.4 mmol)(在50 mL DCM中)。将该混合物升温至室温，并搅拌2天。用Na₂SO₃水溶液洗涤该混合物，直到KI试纸不变色为止。用盐水洗涤有机层，而后浓缩。通过硅胶柱纯化残余物，得到标题化合物。LC-MS M+1(计算值：191，实测值：191)。

中间体7A和7B

(R)-6-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮和(S)-6-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

如下获得标题化合物：用手性SFC分离外消旋的6-甲基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1-7)，使用chiralpak AD柱(250mmX50mm，10um)；移动相∶A∶超临界CO₂，B∶MeOH，A:B=85:15，250ml/min。洗脱的第一个峰(异构体7A)∶HNMR 400 MHz CDCl₃, δ 7.68(s, IH), 7.36(s, IH), 5.24(d, J=3.6 Hz,2H), 4.05(dd, J=2.8 Hz, 3.6 Hz, IH), 3.24(dd, J=4.0 Hz, 6.4 Hz, IH), 2.63(dd, J=2.8 Hz, 6.4 Hz, IH), 2.50(s, 3H); 洗脱的第二个峰(异构体7B)∶400 MHz CDCl₃, δ 7.68(s, IH), 7.35(s, IH), 5.24(d, J=3.6 Hz,2H), 4.05(dd, J=2.8 Hz, 3.6 Hz, IH), 3.24(dd, J=4.0 Hz, 6.4 Hz, IH), 2.63(dd, J=2.8 Hz, 6.4 Hz, IH), 2.50(s, 3H)。

中间体8

(3-氧代-3,6,8,9-四氢-1H-呋喃并[3,4-f]异苯并吡喃-6-基)甲基4-甲基苯磺酸酯

步骤A∶5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向5-溴-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(5.00 g，23.5 mmol)的TfOH(100 mL)溶液中加入NIS(5.55 g，24.6 mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜；该反应混合物的LC分析表明反应完成。然后，在搅拌下，将该反应混合物慢慢地倾倒在冰-水(1升)中。然后，向该溶液中加入EtOAc(500 mL)，随后搅拌10分钟。过滤该混合物，并分离有机层。用EtOAc(2 X 200 mL)提取水层。将合并的有机层用水(500 mL)、盐水(500 mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩至干；将所得到的物质吸收到硅胶上，用(己烷/EtOAc=1/1)的溶剂系统分离，得到5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤B∶5-溴-4-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在90-100℃，在氮气氛围中，将5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(2.42 g，7.13 mmol)、烯丙基三丁基锡(2.36 g，7.13 mmol)、LiCl(1.50 g，35.7 mmol)和Pd(PPh₃)₄(200 g，0.173 mmol)在甲苯(50 mL)中的混合物加热过夜；LC表明反应完成，向该溶液中倒入EtOAc(100 mL)，并用盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，浓缩至干，吸收到硅胶上，然后用硅胶柱分离，得到标题化合物。

步骤C∶5-溴-4-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在-78℃，向5-溴-4-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.27 g，5.02 mmol)的MeOH(50 mL)和DCM(50 mL)溶液中鼓入O₃，直到溶液变成蓝色为止；高真空除去过量臭氧。该溶液变为无色之后，将NaBH₄(0.8 g，20 mmol)加入到该反应混合物中，随后将其在室温下搅拌30分钟。LC和TLC表明反应已经完成。高真空除去溶剂；然后将残余物再溶于EtOAc中，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩至干。将有机残余物吸收到硅胶上，在硅胶柱上分离，得到标题化合物。

步骤D∶5-乙烯基-4-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在100-110℃，在氮气氛围中，将5-溴-4-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(0.460 g，1.78 mmol)、三丁基(乙烯基)锡(0.676 g，2.13 mmol)、LiCl(0.224 g，5.33 mmol)和Pd(PPh₃)₄(0.10 g，0.087 mmol)在甲苯(50 mL)中的混合物加热过夜，而后，TLC表明该反应已经完成。接下来，将EtOAc(100 mL)倒入该溶液中，将其用盐水洗涤，然后用水洗涤，然后用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩至干。然后，将残余物吸收到硅胶上，用硅胶柱分离，得到标题化合物。

步骤E∶4-(2-羟乙基)-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

将5-乙烯基-4-(2-羟乙基)-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.2 g，5.9 mmol)加入到含有搅拌棒的烧瓶中。向该烧瓶中加入加入二氯甲烷(20 mL)。将烧瓶放置在0℃的冷浴中；向烧瓶中倒入mCPBA(1.5 g，8.8 mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌过夜；LC以及TLC(己烷/EtOAc=1/1)表明，反应已经完成。用二氯甲烷处理该溶液，用NaHCO₃、Na₂S₂O₃和水洗涤，用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，浓缩至干，然后用AcOH(20 mL)处理，搅拌过夜；LC表明形成环化产物。除去溶剂，并将所得到的残余物吸收到硅胶上，用己烷/EtOAc(1/1)的溶剂系统分离标题化合物。

步骤F∶(3-氧代-3,6,8,9-四氢-1H-呋喃并[3,4-f]异苯并吡喃-6-基)甲基-4-甲基苯磺酸酯∶

将在DCM(10 mL)中的6-(羟甲基)-8,9-二氢-1H-呋喃并[3,4-f]异苯并吡喃-3(6H)-酮用对甲苯磺酰氯(0.40 g，2.3 mmol)处理；向该混合物中加入吡啶(2 mL)，并将得到的混合物在室温下搅拌12小时。TLC(己烷/EtOAc=1/0.5)和LC表明，起始原料耗尽，并且形成目标产物。将二氯甲烷加入到该反应混合物中，用NaCl、水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩至干，吸收到硅胶上，然后用硅胶纯化；用己烷/EtOAc(1/0.5)的溶剂系统分离标题化合物。¹H-NMR(400 MFJ CDCl₃)δ ppm 7.781(d, J=8Hz, 1H), 7.727(d, J=8Hz, 1H), 7.367(d, J=8Hz, 1H), 7.257(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.206(d, J=8 Hz, 1H), 5.253(s, 2H), 5.110(s, 1H), 4.481-4.452(m, 2H), 4.419-4.385(m, 2H), 4.196-4.153(m, 2H), 2.495(s, 3H)。

中间体9

4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯

步骤A∶4-溴-2-甲基-3-氧代丁酸乙酯∶

用2小时向0℃的2-甲基-3-氧代丁酸乙酯(5.05 g，35.0 mmol)的水(10 mL)溶液中逐滴加入溴(1.81 mL，35.0 mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯提取，用硫酸钠干燥有机相，浓缩，得到4-溴-2-甲基-3-氧代丁酸乙酯。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.322-4.274(m, 2H), 2.455(s, 2H), 1.991(s, 3H), 1.337-1.309(t, 3H)。

步骤B∶4-羟基-3-甲基呋喃-2(5H)-酮∶

将4-溴-2-甲基-3-氧代丁酸乙酯(7.81 g，35 mmol)用溴化氢(0.040 mL，48%，0.35 mmol)处理，并将该混合物在100℃下加热6小时。过滤收集沉淀，而后用乙酸乙酯洗涤，得到4-羟基-3-甲基呋喃-2(5H)-酮。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.595(s, 2H), 3.314(s, 1H), 1.668(s, 3H)。

步骤C∶4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

在-78℃，向4-羟基-3-甲基呋喃-2(5H)-酮(400 mg，3.51 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(0.612 mL，5.26 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.711 mL，4.21 mmol)。将反应温度保持在-78℃下，保持0.5小时，而后升温至室温，保持1小时。将该混合物用DCM(100 mL)稀释，用1N盐酸(3次，100 mL)洗涤，然后用稀的碳酸氢钠溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 247.0。

中间体10

3,8-二氮杂螺[5,5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯

步骤A∶4-(羟甲基)哌啶甲酸叔丁基酯∶

将70 g LiAlH₄和1500 mL THF的混合物冷却至0℃，然后逐滴加入180 g的哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(在THF中)。当反应完成时，加入200 mL乙酸乙酯和固体无水Na₂SO₄。加入水，直到溶液变得清澈为止。过滤该混合物，并将滤液蒸发，得到标题化合物。

步骤B∶4-甲酰基哌啶甲酸叔丁基酯∶

将200 mL DMSO的CH₂Cl₂溶液冷却至-78℃，滴加入118 mL(COCl)₂。然后，滴加入255 g4-(羟甲基)哌啶甲酸叔丁基酯。将该混合物搅拌4小时。反应完成之后，在-78℃，加入638 mL的Et₃N。用盐水洗涤有机层，干燥，用柱色谱纯化，得到标题化合物。

步骤C∶4-甲酰基-4-丙基哌啶甲酸叔丁基酯∶

将4-甲酰基哌啶甲酸叔丁基酯溶于66 mL丙烯腈中，加入5 g 50%氢氧化钠水溶液，然后将该混合物加热至50℃，直到TLC判断反应完成为止。然后，将该混合物倒入700 mL醚中，然后用盐水洗涤，用柱色谱纯化，得到标题化合物。

步骤D∶3,8-二氮杂螺[5,5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯∶

将4-甲酰基-4-丙基哌啶甲酸叔丁基酯(30 g)溶于氨的甲醇饱和溶液中，并加入15 g兰尼镍。在2升高压釜中，将该反应混合物在80大气压下加热至110℃。过滤该混合物，除去催化剂，并将滤液浓缩，得到残余物，用柱色谱纯化，得到3,8-二氮杂螺[5,5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯。

中间体11

1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

可从许多供应商处商购标题化合物，例如，Shanghai AQ BioPharma Co., Ltd,商品目录#ABP1882。或者，可以用多种方式制备，包括如下所述的方法。

步骤A∶4-(氰基甲基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯∶

在-65℃，在氮气氛围中，向商购的哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(200 g，0.82 mol)的无水THF(2升)溶液中滴加入LDA(2M，在THF中，575 mL，1.15 mol)。将该混合物在-65℃下搅拌1.5小时。在-65℃，向该混合物中加入溴乙腈(148 g，1.23 mol)(在无水THF(500 mL)中)。将该混合物在-65℃下搅拌1小时，然后升温至室温，并搅拌过夜。在0℃，用水(800 mL)淬灭该反应，并将合并的反应混合物真空浓缩，得到粗品，用乙酸乙酯(1升，三次)提取。将合并的有机相用盐水(1升)洗涤，并用Na₂SO₄干燥。过滤有机层，真空浓缩滤液，得到粗品，用硅胶柱色谱纯化，用石油醚/乙酸乙酯(从石油醚，到2/1)洗脱，得到标题化合物。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ 3.900-3.750(m, 5H), 3.120-3.000(m, 2H), 2.612-2.562(m, 2H), 2.190-2.111(m, 2H), 1.590-1.502(m, 2H), 1.402(s, 9H)。

步骤B∶1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将4-(氰基甲基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(70.0 g，247.9 mmol)和兰尼镍(60 g)的MeOH(1500 mL)和NH₃.H₂O(80 mL)悬浮液在2 MPa氢气压力下、在50℃下搅拌18小时。通过CELITE?垫过滤该反应混合物，真空浓缩滤液，得到粗品，用乙酸乙酯(200 mL)洗涤，得到标题化合物。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ 6.05(s, 1H), 4.0(s, 2H), 3.37-3.34(m, 2H), 3.02-2.96(m, 2H), 2.08-2.05(m, 2H), 1.88-1.87(m, 2H), 1.51-1.41(m, 11H)。

中间体12

3-氧代-2,8-二氮杂-螺[4,5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯

步骤A∶4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，向10升4颈圆底烧瓶(用氮气吹扫并保持氮气的惰性气氛)中加入NaH(74.0 g，2.16 mol 1.05当量，70%)的四氢呋喃(2000 mL)悬浮液，然后在搅拌下，在0℃，逐滴加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(514 g，2.06 mol，1.05当量，98%)。而后，在搅拌下，在0℃，逐滴加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁基酯(400 g，1.97 mol，1.00当量，98%)的四氢呋喃(1200 mL)溶液。将得到的溶液在室温下搅拌60分钟，然后，加入2000 mL水进行淬灭。将得到的溶液用2x1000 mL乙酸乙酯提取。合并有机层，用无水硫酸镁干燥，真空浓缩。将残余物用1x1000 mL己烷洗涤，干燥，得到4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯。

步骤B∶4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(硝基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯∶

向3000 mL 4颈圆底烧瓶中加入碳酸钾(93.2 g，662 mmol，0.50当量)和DMSO(2000 mL)。将得到的溶液加热至80℃。而后慢慢地加入4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(368 g，1.30 mol，1.00当量，95%)和CH₃NO₂(417 g，6.70 mol，5.00当量，98%)。将得到的溶液在90℃搅拌120分钟。冷却至室温之后，将该反应混合物用HCl(0.5 mol/L)调节至pH5，并用2000 mL水稀释。将得到的溶液用3x1500 mL醚提取。合并有机层，用1x2000 mL水和1x2000 mL饱和盐水洗涤，干燥，真空浓缩。将残余物施加到硅胶柱上，并用乙酸乙酯/石油醚(1:20～1:15～1:10)洗脱，得到标题化合物。

步骤C∶3-氧代-2,8-二氮杂-螺[4,5]癸烷-8-甲酸叔丁酯∶

在氢气氛围中，在室温下，将4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(硝基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(330 g，990 mmol，1.00当量，99%)和镍(40 g，0.15当量)在乙醇(1200 mL)中的混合物搅拌24小时。滤出固体。真空浓缩滤液。用醚重结晶，纯化粗品，得到标题化合物。LC-MS(ES, m/z): 199[M+H]⁺; H-NMR(400MHz, CDCl₃, ppm): 1.447-1.476(9H, s), 1.597-1.673(4H, m, J=30.4Hz), 2.235(2H, s), 3.226(2H, s), 3.284-3.348(2H, m, J=25.6 Hz), 3.507-3.567(2H, m, J=24 Hz), 6.048(1H, s)。

中间体13

3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯

步骤A∶4-(2-甲基烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯∶

将N-Boc-哌啶-4-甲酸甲酯(2.00 g，8.22 mmol)的THF(40 mL)溶液冷却至-78℃。在氮气氛围中，逐滴加入2.0M LDA的THF溶液(6.17 mL，12.3 mmol)。将该反应混合物在-78℃下搅拌30分钟，而后加入3-溴-异丁烯(1.60 g，11.9 mmol)的THF(2 mL)溶液。将该反应在此温度下搅拌1小时之后，对样品进行LC-MS分析，表明反应完成。加入饱和氯化铵溶液(5 mL)，停止该反应，并将该混合物加热至室温。然后，用EtOAc(50mL，两次)提取该混合物。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤。浓缩滤液，用柱色谱纯化粗品，用0-30%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 242.21[M-56+l]⁺。

步骤B∶4-(2-氧代丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯∶

在氮气氛围中，向4-(2-甲基烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(2.2 g，7.4 mmol)的二噁烷/水(60 mL，1/1)溶液中加入四氧化锇(0.038g，0.15 mmol)和高碘酸钠(2.88 g，13.5 mmol)。将该混合物在室温下搅拌3小时。然后，用二氯甲烷(50 mL)稀释该混合物，并用20% Na₂S₂O₃(20 mL)洗涤。将有机层合并，用盐水(20 mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤。浓缩滤液，用柱色谱纯化残余物，用0-60%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到4-(2-氧代丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯。LC-MS(IE, m/z): 322.26(M+23)⁺。

步骤C∶3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将4-(2-氧代丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(1.15 g，3.84 mmol)在甲醇(25 mL)中用乙酸铵(3.85 g，49.9 mmol)、氰基硼氢化钠(0.681 g，10.83 mmol)和硫酸镁(2.54 g，21.1 mmol)处理。在密封管中，将该混合物在80℃加热12小时。通过CELITE?垫过滤该反应混合物，并将滤饼用甲醇洗涤。然后，浓缩滤液，用柱色谱纯化残余物，用0-10%甲醇/乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 291.27(M+23)⁺。

中间体13A和13B

(S)-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯；和(R)-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯

对3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯进行SFC纯化。用Chiralcel IA柱拆分两个对映体，用30% MeOH:MeCN(2:1)/CO₂(100巴，35℃)洗脱。基于振动圆二色性(VCD)光谱分析，更快洗脱的异构体是(S)-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯，较慢洗脱的异构体是(R)-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯。LC-MS(IE, m/z): 291(M+23)⁺。

中间体14

4-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-基)呋喃-2(5H)-酮∶

在密封管中，在110℃，将商购的呋喃-2,4(3H,5H)-二酮(0.433 g，4.33 mmol)和2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(可从多个供应商处采购，乙酸盐，0.65 g，2.2 mmol)在20 mL i-PrOH中加热过夜。滤出固体，并将滤液真空浓缩。将残余物溶于30 mL DCM和5 mL TFA中，并在室温下搅拌1小时。浓缩该混合物，并将残余物用制备TLC纯化(10% 2N NH₃/甲醇-DCM)。LC/MS:[(M+1)]⁺=223。

中间体15

4-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一-2-基)呋喃-2(5H)-酮

步骤A∶2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯

向商购的4-溴呋喃-2(5H)-酮(128 mg，0.786 mmol)(在THF(4 mL)中)加入Hunig's碱(275μl，1.57 mmol)和3,8-二氮杂螺[5,5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯(200 mg，0.786 mmol)。将该反应混合物在76℃搅拌过夜，浓缩，用柱色谱(0-10% MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=337。

步骤B∶4-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一-2-基)呋喃-2(5H)-酮∶

在0℃，向2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5,5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯(266 mg，0.792 mmol)(在DCM(2 mL)中)中加入TFA(2 mL，26.0 mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩，然后保持在高真空下。将残余物溶于MeOH中，填充到2 g Bond Elut SCX柱(用MeOH预冲洗)上。将其用MeOH冲洗，通过2M NH₃/MeOH洗脱产物，得到4-(2,9-二氮杂螺[5.5]十一-2-基)呋喃-2(5H)-酮。LC/MS:[(M+1)]⁺=237。

中间体16

2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(1.83 g，7.20 mmol)、商购的4-溴呋喃-2(5H)-酮(1.41 g，8.63 mmol)、Xantphos(0.416 g，0.720 mmol)、水(0.389 mL，21.6 mmol)和碳酸钾(1.989 g，14.39 mmol)在甲苯(50 mL)中的混合物用氮气脱气，而后加入乙酸钯(0.081 g，0.36 mmol)。将得到的混合物在65℃下加热16小时。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 337.18。

步骤B∶2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(5.70 g，16.9 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中加入三氟乙酸(26.1 mL，339 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。浓缩之后，在离子交换柱上碱化残余物，而后用1N氨/甲醇溶液洗涤，得到2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 237.06。

中间体17

2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在氮气氛围中，向1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-11，80.0 g，315 mmol)和4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(1-9，85.2 g，346 mmol)、Xantphos(13.6 g，23.6 mmol)、Cs₂CO₃(153.7 g，471.8 mmol)的甲苯(1200 mL)混合物中加入Pd₂(dba)₃(7.20 g，7.86 mmol)。将所得到的反应混合物加热至90℃，并在氮气氛围中搅拌18小时。通过CELITE?垫过滤该混合物，并将滤液浓缩。通过沉淀来纯化残余物，得到2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)δ 5.23(s, 2H), 4.02-3.99(m, 4H), 3.06-3.05(m, 2H), 2.15-2.11(m, 2H), 2.02(s, 3H), 1.87-1.81(m, 2H), 1.51-1.41(m, 11H)。

步骤B∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在0℃，向2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(57.0 g，163 mmol)的EtOAc(180 mL)混合物中加入饱和HCl(g)/EtOAc(712 mL)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌3小时。过滤该混合物，并将滤液浓缩，得到HCl盐。在0℃，向HCl盐(54.2 g，189 mmol)的MeOH(550 mL)混合物中加入NaHCO₃(31.8 g，378 mmol)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌3小时，直到pH=8为止。过滤该混合物，并将滤液浓缩。将残余物再溶于MeOH中，浓缩，直到出现沉淀为止。过滤该混合物，浓缩滤液，得到2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮的游离胺。¹H NMR(400 MHz, CD30D)δ 5.24(s, 2H), 4.10-4.07(m, 2H), 3.22-3.16(m, 2H), 2.93-2.87(m, 2H), 2.22-2.19(m, 2H), 2.0(s, 3H), 1.94-1.87(m, 2H), 1.67-1.61(m, 2H)。

中间体18

2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮

步骤A∶1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯∶

向微波管中加入商购的1-氧代-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯(Shanghai AQ BioPharma Co., Ltd,商品目录#ABP3640，100 mg，0.373 mmol)、4-溴呋喃-2(5H)-酮(72.9 mg，0.447 mmol)、Pd₂(dba)₃(17.06 mg，0.019 mmol)、Xantphos(32.3 mg，0.056 mmol)和碳酸铯(182 mg，0.559 mmol)。密封该管，脱气，并填充甲苯(1.5 mL)。将该反应混合物在90℃加热过夜，并通过CELITE?过滤。蒸发滤液，得到粗品，将其用柱色谱(0-10%，MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1-56)]⁺=295。

步骤B∶2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮∶

在0℃，将1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯(100 mg，0.285 mmol)在DCM(2 mL)中用TFA(660μl，8.56 mmol)处理，得到TFA盐。然后，首先用MeOH冲洗2 g Bond Elut SCX柱，用MeOH将样品填充到该柱上，滴加MeOH洗涤该柱，除去TFA，最终用2N NH₃/MeOH冲洗，提供标题化合物的游离胺。LC/MS:[(M+1)]⁺=251。

中间体19

2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮

步骤A∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯∶

向微波管中加入商购的1-氧代-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯(Shanghai AQ BioPharma Co., Ltd,商品目录#ABP3640，100 mg，0.373 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(110 mg，0.447 mmol)、Pd₂(dba)₃(17.06 mg，0.019 mmol)、Xantphos(32 mg，0.056 mmol)和碳酸铯(182 mg，0.559 mmol)。密封该管，脱气，并填充甲苯(1.5 mL)。将该反应混合物在90℃加热过夜，并通过CELITE?过滤。蒸发滤液，得到粗品，将其用柱色谱(0-10%，MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1-56)]⁺=309。

步骤B∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮∶

在0℃，将2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁基酯(130 mg，0.357 mmol)在DCM(2 mL)中用TFA(824μl，10.7 mmol)处理，得到TFA盐。然后，首先用MeOH冲洗2 g Bond Elut SCX(离子交换柱)，用MeOH将样品填充到该柱上，用MeOH逐滴洗涤该柱，除去TFA，最终用2N NH₃/MeOH冲洗，提供标题化合物的游离胺。LC/MS:[(M+1)]⁺=265。

中间体20

2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-酮∶

利用与上面对2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮(I-18)所描述的方式类似的方式，用两步由3-氧代-2,8-二氮杂-螺[4,5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯和4-溴呋喃-2(5H)-酮制备标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=237。

中间体21

2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-酮∶

利用与上面对2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮(I-19)所描述的方式类似的方式，分两步由3-氧代-2,8-二氮杂-螺[4,5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯和4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯制备标题化合物。

中间体22

3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶3-甲基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-13)(505 mg，1.88 mmol)、4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(109 mg，0.188 mmol)、醋酸钯(II)(21 mg，0.094 mmol)、碳酸钾(520 mg，3.76 mmol)、水(102μl，5.65 mmol)和商购的4-溴呋喃-2-酮(368 mg，2.26 mmol)在甲苯(13 mL)中的混合物脱气，而后在60℃下加热16小时。通过CELITE?垫过滤该混合物，并将滤饼用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液，用柱色谱纯化残余物，用10-100%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 373.3(M+23)⁺。

步骤B∶3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

将3-甲基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(90 mg，0.257 mmol)溶于二氯甲烷(2 mL)中，并用TFA(1 mL)处理。在室温下搅拌1.5小时之后，浓缩该反应混合物，除去过量的试剂，并与二氯甲烷共同蒸发三次，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 251(M+1)⁺。

中间体22A

(S)-3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

利用与刚刚上面制备外消旋体3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-22)所描述的方式类似的方式，分为两步由(S)-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 251(M+1)⁺。

中间体23

2-(4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-溴-2-乙基-3-氧代丁酸乙酯∶

在0℃，用2小时向2-乙基-3-氧代丁酸乙酯(5.17 g，32.7 mmol)的水(10 mL)溶液中逐滴加入溴(1.684 mL，32.7 mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌16小时。将该混合物用乙酸乙酯(100 mL)提取，用硫酸钠干燥有机相，浓缩，得到4-溴-2-乙基-3-氧代丁酸乙酯。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.327-4.284(m, 2H), 2.412(s, 2H), 2.320-2.212(q, 2H), 1.338-10309(m, 3H), 1.042-1.013(t, J=7.3 Hz, 3H)。

步骤B∶3-乙基-4-羟基呋喃-2(5H)-酮∶

将4-溴-2-乙基-3-氧代丁酸乙酯和溴化氢(48%，0.037 mL，0.327 mmol)的混合物在100℃下加热20小时。冷却至室温后，过滤收集固体，而后用二乙醚洗涤，得到3-乙基-4-羟基呋喃-2(5H)-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 129.05。

步骤C∶4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

在-78℃，向3-乙基-4-羟基呋喃-2(5H)-酮(400 mg，3.12 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(0.545 mL，4.68 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.633 mL，3.75 mmol)。将该反应溶液在-78℃下搅拌1小时，而后升温至室温，保持2小时。将该混合物稀释在二氯甲烷(100 mL)中，并用1N盐酸(3x100 mL)、碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯。LC/MS:(M+1)⁺: 261.01。

步骤D∶2-(4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(200 mg，0.786 mmol)、4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(246 mg，0.944 mmol)、Xantphos(45.5，0.079 mmol)、醋酸钯(II)(8.8 mg，0.039 mmol)、水(0.043 mL，2.4 mmol)和碳酸钾(217 mg，1.57 mmol)在甲苯(20 mL)中的混合物、在60℃下加热16小时。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶纯化，使用乙酸乙酯/己烷，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 365.19。

步骤E∶2-(4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向2-(4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(0.34 g，0.93 mmol)的二氯甲烷(1 mL)溶液中加入三氟乙酸(2.16 mL，28 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于二氯甲烷(2 mL)中，用盐酸(2 mL，4N，在二噁烷中)处理，并将该混合物浓缩，得到2-(4-乙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 265.16。

中间体24

2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-溴-2-异丙基-3-氧代丁酸乙酯∶

在0℃，用2小时向2-乙酰基-3-甲基丁酸乙酯(5.10 g，29.6 mmol)的水(10 mL)溶液中逐滴加入溴(1.53 mL，29.6 mmol)。加入氯仿(30 mL)，并将得到的溶液在室温下搅拌16小时。将乙酸乙酯(300 mL)加入到该反应溶液中，并用硫酸钠干燥有机相，浓缩，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.300-4.282(m, 2H), 2.601-2.575(m, 1H), 2.406(s, 2H), 1.331-1.303(t, J=7.1Hz, 3H), 1.085-1.072(d, J=6.5Hz, 3H), 1.048-1.035(d, J=6.7Hz, 3H)。

步骤B∶4-羟基-3-异丙基呋喃-2(5H)-酮∶

将4-溴-2-异丙基-3-氧代丁酸乙酯(7.1 g，28 mmol)和溴化氢(48%，0.032 mL，0.28 mmol)的混合物在100℃下加热8小时。冷却至室温后，过滤收集固体，而后用二乙醚洗涤，得到4-羟基-3-异丙基呋喃-2(5H)-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 143.09。

步骤C∶4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

在-78℃，向4-羟基-3-异丙基呋喃-2(5H)-酮(400 mg，2.81 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(0.492 mL，4.22 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.570 mL，3.38 mmol)，并将反应温度是维持在-78℃下1小时，而后升温至室温，保持2小时。将该混合物在二氯甲烷和1N盐酸之间分配。用1N盐酸洗涤有机相，然后用稀释的碳酸氢钠洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 275.07。

步骤D∶2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-11)(200 mg，0.786 mmol)、4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(259 mg，0.944 mmol)、Xantphos(46 mg，0.079 mmol)、醋酸钯(II)(8.8 mg，0.039 mmol)、水(0.043 mL，2.4 mmol)和碳酸钾(217 mg，1.57 mmol)在甲苯(20 mL)中的混合物、在66℃下加热16小时。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，得到标题化合物。LC/MS:(M+1):379.21。

步骤E∶2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在室温下，向2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(195 mg，0.515 mmol)的二氯甲烷溶液中加入三氟乙酸，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于二氯甲烷中，并用盐酸(2 mL，4N，在二噁烷中)处理，再次浓缩，得到2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮的盐酸盐。LC/MS:(M+1): 279.16。

中间体25

2-(4-环丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶2-(4-溴-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-16，步骤A)(784 mg，2.33 mmol)溶于DCM(20 mL)中，并在25℃下，用NBS(498 mg，2.80 mmol)处理12小时。将该反应混合物用DCM(20 mL)稀释，用水(20 mL)和盐水(20 mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤。浓缩滤液，用柱色谱纯化粗品(ISCO 40 g硅胶柱)，用50-100%乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到标题化合物。

步骤B∶2-(4-环丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在微波管中，将2-(4-溴-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(90 mg，0.22 mmol)溶于甲苯(2 mL)和水(0.2 mL)中。加入磷酸钾(138 mg，0.650 mmol)、三环己基膦(18 mg，0.065 mmol)、环丙基硼酸(74.5 mg，0.867 mmol)和乙酸钯(4.87 mg，0.022 mmol)。将该反应混合物脱气，并在100℃下加热12小时。冷却至室温后，浓缩该反应混合物，并将所得到的残余物溶于EtOAc(50 mL)中，用水(30 mL)和盐水(30 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤。除去溶剂，得到粗品，用柱色谱纯化，用0-100% EtOAc/己烷梯度洗脱，得到标题化合物。¹H NMR(500 MHz, CDCl₃)δ 5.20(s, 2H), 4.22(m, 2H), 3.99(m, 2H), 3.05(m, 2H), 2.09(m, 2H), 1.92(m, 2H), 1.60(m, 2H), 1.56(m, 10H), 1.02(m, 2H), 0.82(m, 2H)。

步骤C∶2-(4-环丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

可以利用与上面对2-(4-异丙基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-24)所描述的方式类似的方式，使用TFA，制备标题化合物。

中间体26

2-(2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-溴-3-氧代戊酸乙酯∶

在0℃，向3-氧代戊酸乙酯(5.00 g，34.7 mmol)的氯仿(27 mL)溶液中滴加入溴(1.79 mL，34.7 mmol)(在氯仿(10 mL)中)。将得到的溶液在室温下搅拌16小时。用水洗涤该溶液，用硫酸钠干燥，浓缩，得到4-溴-3-氧代戊酸乙酯。

¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.670-4.630(dd, J=6.7Hz, 1H), 4.251-4.208(dd, J=7.2Hz, 2H), 3.883-3.851(d, J=16Hz, 1H), 3.687-3.655(d, J=16Hz, 1H), 1.804-1.791(d, J=6.8Hz, 3H), 1.323-1.295(m, J=7.2Hz, 3H)。

步骤B∶4-羟基-5-甲基呋喃-2(5H)-酮∶

在0℃，将4-溴-3-氧基戊酸乙酯(7.49 g，33.6 mmol)用氢氧化钾(5.03 g，90 mmol)(在水(36 mL)中)处理。将得到的混合物在0℃下强力搅拌4小时。将该反应混合物用二氯甲烷提取(两次，100 mL)。用6N盐酸将碱性相酸化至pH<1。用二氯甲烷(3x100 mL)提取酸性相。将后面合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 5.064(s, 1H), 4.949-4.878(m, 1H), 3.251-3.239(m, 1H), 1.566-1.547(m, 3H)。

步骤C∶2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

在-78℃，向4-羟基-5-甲基呋喃-2(5H)-酮的二氯甲烷(10 mL)溶液中滴加入2,6-二甲基吡啶(0.612 mL，5.26 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.711 mL，4.21 mmol)。将反应温度保持在-78℃下，保持0.5小时，而后升温至室温，保持1小时。用盐酸(1N，三次，100 mL)洗涤该混合物，然后用稀释的碳酸氢钠洗涤，用硫酸钠干燥，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 247.00。

步骤D∶2-(2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(200 mg，0.786 mmol)、2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(232 mg，0.944 mmol)、Xantphos(45.5 mg，0.079 mmol)、醋酸钯(II)(8.83 mg，0.039 mmol)、水(0.043 mL，2.359 mmol)和碳酸钾(217 mg，1.573 mmol)在甲苯(20 mL)中的混合物用氮气脱气，并在65℃下加热16小时。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 351.15。

步骤E∶2-(2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向2-(2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(127 mg，0.362 mmol)的二氯甲烷(1 mL)溶液中加入三氟乙酸(1.396 mL，18.12 mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌1小时。浓缩之后，将残余物用二氯甲烷(1 mL)和盐酸(1 mL，4N，在二噁烷中)处理。将得到的混合物浓缩，得到标题化合物的盐酸盐。LC/MS:(M+1)⁺: 251.19。

中间体27

2-(2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-溴-2-甲基-3-氧代戊酸乙酯∶

在0℃，向2-甲基-3-氧代戊酸乙酯(5.0 g，34.7 mmol)的氯仿溶液中滴加入溴(1.79 mL，34.7 mmol)(在氯仿(10 mL)中)。将得到的溶液在室温下搅拌16小时。用水洗涤该溶液，用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.781-4.740(dd, J=6.6Hz, 1H), 4.140-4.098(dd, J=7.0Hz,1H), 3.770(s, 3H), 1.797-1.783(d, J=6.6Hz, 3H), 1.455-1.442(d, J=7.0Hz, 3H)。

步骤B∶4-羟基-3,5-二甲基呋喃-2(5H)-酮∶

在0℃，向4-溴-2-甲基-3-氧代戊酸乙酯(7.49 g，31.6 mmol)中加入冷的氢氧化钾(4.7 g，84 mmol)(在水(36 mL)中)，将得到的混合物在0℃下强力搅拌4小时。用二氯甲烷(2x100 mL)提取该反应混合物，用6N盐酸将碱性相酸化至pH1，而后用二氯甲烷(3次，100 mL)提取。将后面合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到4-羟基-3,5-二甲基呋喃-2(5H)-酮。LC/MS:(M+23)⁺: 151.10, ¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.882-4.842(dd, J=6.8Hz, 1H), 3.744(s, 1H), 1.759(s, 3H). .1.526-1.513(d, J=6.8Hz, 3H)。

步骤C∶2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

在-78℃，向4-羟基-3,5-二甲基呋喃-2(5H)-酮(400 mg，3.12 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(0.545 mL，4.68 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.633 mL，3.75 mmol)。将反应温度维持在-78℃下1小时，而后升温至室温，保持2小时。将该混合物在二氯甲烷(100 mL)中稀释，用1N盐酸(3x100 mL)和稀释的碳酸氢钠洗涤，然后用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:261.00。

步骤D∶2-(2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(200 mg，0.786 mmol)、2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯、Xantphos(45.5 mg，0.079 mmol)、水(0.043 mL，2.4 mmol)和碳酸钾(217 mg，1.57 mmol)在甲苯(20 mL)中的混合物用氮气脱气20分钟，而后加入乙酸钯(8.8 mg，0.039 mmol)。将得到的混合物在65℃下加热16小时。过滤后浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，用EtOAc/己烷洗脱，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:365.20。

步骤E∶2-(2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向2-(2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(195 mg，0.535 mmol)的二氯甲烷(1 mL)溶液中加入三氟乙酸(2.06 mL，26.8 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于二氯甲烷(1 mL)中，并用盐酸(4 mL，1N，在二乙醚中)处理，浓缩，得到2-(2,4-二甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 265.19。

中间体28

2-(4-氯-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶2-(4-氯-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在室温下，向1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-16，步骤A)(2.1 g，6.2 mmol)的氯仿(50 mL)溶液中加入NCS(1.00 g，7.49 mmol)，并将得到的溶液在60℃加热过夜。除去挥发物之后，将残余物用硅胶柱纯化，使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 371.11, 372.99。

步骤B∶2-(4-氯-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向2-(4-氯-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(2.26 g，6.09 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中加入三氟乙酸(9.39 mL，122 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物在二氯甲烷(100 mL)和1N氢氧化钠(100 mL)之间分配。用二氯甲烷(2x100 mL)提取碱性相。将合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到2-(4-氯-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS:(M+1)⁺:271.07, 272.96。

中间体29

2-(4-氟-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶3-溴-4-乙氧基-3-氟-4-羟基二氢呋喃-2(3H)-酮∶

向4-羟基呋喃-2(5H)-酮(2.25 g，22.5 mmol)的乙醇(20 mL)溶液中加入NBS(4.00 g，22.5 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌40分钟。然后，加入1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸盐)(7.97 g，22.5 mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌过夜。过滤并浓缩之后，将残余物用硅胶柱纯化，使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.322-4.303(m, J=7.0Hz, 2H), 3.879-3.788(m, 2H), 1.356-1.328(t, J=7.0Hz, 3H)。

步骤B∶3-氟-4-羟基呋喃-2(5H)-酮∶

在0℃，在氮气氛围中，向3-溴-4-乙氧基-3-氟-4-羟基二氢呋喃-2(3H)-酮(4.39 g，18.1 mmol)的四氢呋喃(20 mL)溶液中加入三正丁基氢化锡(9.39 mL，35.0 mmol)，将得到的溶液在室温下搅拌过夜。除去挥发物之后，在室温下，将残余物在30 mL 50%乙酸和30 mL己烷中搅拌30分钟。用己烷(3x30 mL)洗涤酸性相，而后浓缩。将残余物溶于碳酸钠(50 mL，2N)中，用40% EtOAc/己烷(4x50 mL)提取，用1N盐酸将碱性相酸化至pH<1。然后，用乙酸乙酯(8次，60 mL)提取酸性相。用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，得到3-氟-4-羟基呋喃-2(5H)-酮。¹HNMR(500 MHz, DMSO-d6), δ 4.694-4.687(d, J=3.9Hz, 2H)。

步骤C∶4-氟-2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯∶

向在-78℃的3-氟-4-羟基呋喃-2(5H)-酮(400 mg，3.39 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中滴加入2,6-二甲基吡啶(0.592 mL，5.08 mmol)和三氟甲磺酸酐(0.687 mL，4.07 mmol)，将反应温度维持在-78℃下1小时，而后加热至室温，保持2小时。将该混合物用1N盐酸(3次，100 mL)和稀释的碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 4.986-4.974(d, J=6.0Hz, 2H)。

步骤D∶2-(4-氟-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(150 mg，0.590 mmol)、4-氟-2-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(148 mg，0.590 mmol)、Xantphos(34.1 mg，0.059 mmol)、水(0.032 mL，1.77 mmol)在甲苯(20 mL)中的混合物用氮气脱气，而后加入乙酸钯(6.6 mg，0.029 mmol)。将得到的混合物在65℃下加热过夜。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 355.15。

步骤E∶2-(4-氟-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向2-(4-氟-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(109 mg，0.308 mmol)的二氯甲烷(1 mL)溶液中加入三氟乙酸(1.896 mL，24.61 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于甲醇中，并填充到离子交换柱上。用甲醇洗涤之后，用2N氨/甲醇溶液洗脱产物，将其浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 255.09。

中间体30

(1R,3r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮

步骤A∶(1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

向在无水MeOH(60 mL)和DCM(60.0 mL)的混合溶剂中的(1R,3s,5S)-8-(叔丁氧羰基)-8-氮杂双环[3.2. 1]辛烷-3-甲酸(5.00 g，19.6 mmol)溶液中加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(19.6 mL，39.2 mmol)。将该混合物搅拌0.5小时。加入AcOH(5 mL)。减压除去挥发物。将残余物溶于EtOAc中，并将该溶液用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，用MgSO₄干燥。除去溶剂，得到固体，所述固体不用进一步纯化就在下一步中使用。LC-MS: 214.10(M+1-56)。

步骤B∶(1R,3r,5S)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

在-78℃，向(1R,3r,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(5.00 g，18.6 mmol)的THF(100 mL)溶液中加入LDA(13.9 mL，27.8 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后注射加入溴乙腈(1.94 mL，27.8 mmol)(在THF(15 mL)中)。将该混合物在-78℃下搅拌15分钟，在-78℃用饱和KHSO₄淬灭，升温至室温，并用醚(100 mL)稀释。分离有机层，并用醚(50 mL)提取水溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩。用柱纯化残余物(硅胶120 g，EtOAc-己烷-0-50%梯度，然后50% EtOAc)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 4.18(1 H, m), 4.27(1 H, m), 3.83(3 H, s), 2.58(2 H, m), 2.43(2 H, m), 1.55-1.95(6 H, m), 1.50(9 H, s)。LC-MS 209.23(M+1-100)。

步骤C∶(1R,3r,5S)-3-(2-氨乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

向(1R,3r,5S)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(4.0 g，12.97 mmol)的乙醇(20 mL)和AcOH(20 mL)溶液中加入氧化铂(IV)(0.295 g，1.30 mmol)。将该混合物在振荡器上氢化(45 psi氢气)24小时。通过CELITE?垫滤出催化剂，并将滤液浓缩。粗品不用进一步纯化就用于下一步。LC-MS: 313.20(M+1), 257.18(M+1-56)。

步骤D∶(1R,3r,5S)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,3r,5S)-3-(2-氨乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(4.2 g，13.4 mmol)和碳酸钾(9.29 g，67.2 mmol)在MeOH(50 mL)中的混合物、在60℃下加热1小时。浓缩该混合物，并加入DCM(50 mL)。通过硅胶垫过滤该悬浮液。浓缩滤液，得到固体，其直接用于下一步。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 5.95(1 H, bs), 4.30(1 H, m), 4.20(1 H, m), 3.26(2 H, t, J=7.0 Hz), 1.75-2.15(6 H, m), 1.47(9 H, s)。LCMS: 281.15(+1), 225.14(M+1-56)。

步骤E∶(1R,3r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯∶

将4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(1.861 g，7.56 mmol)、(1R,3r,5S)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯(1.63 g，5.81 mmol)、醋酸钯(II)(0.065 g，0.291 mmol)、4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.336 g，0.581 mmol)、碳酸钾(2.411 g，17.44 mmol)和水(0.314 mL，17.4 mmol)在甲苯(150 mL)中的混合物、在60℃、在氮气氛围中加热过夜。将该混合物用EtOAc稀释。通过CELITE?垫滤出固体，并将滤液浓缩。用柱纯化残余物(80 g硅胶，0-100%，EtOAc/己烷，然后100% EtOAc)。LCMS: 377.12(M+1)。

步骤F∶(1R,3r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮∶

将(1R,3r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯的DCM(50 mL)和TFA(10 mL)溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物。将残余物溶于甲醇中，用20 mL甲醇洗涤柱之后，填充在Bond Elut SCX柱上。用甲醇洗脱含有目标化合物的柱，除去TFA(～20 mL)，并用2N NH₃/甲醇(～20 mL)洗脱出目标化合物的游离碱。浓缩该溶液，得到游离碱(固体)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 5.25(2 H, s), 3.95(2 H, t, J=6.9 Hz), 3.73(2 H, m), 2.15(4 H, m), 2.07(3 H, s), 2.05(4 H, m), 1.85(2 H, m)。LC/MS 277.10(M+1)。

中间体31

(1R,3r,5S)-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮∶

利用与对(1R,3r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮所描述方式类似的方式，制备标题化合物，只不过在步骤E中，用4-溴呋喃-2-酮来代替4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯。LCMS: 263(M+1)。

中间体32

(1R,3s,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮

步骤A∶(1R,5S,Z)-3-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代亚乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将2-氰基乙酸甲酯(3.63 g，36.6 mmol)、商购的(1R,5S)-3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯(5.5 g，24.41 mmol)、乙酸铵(2.51 mL，36.6 mmol)、乙酸(5.59 mL，98 mmol)和甲苯(100 mL)放在500 mL圆底烧瓶中，圆底烧瓶连接Dean-Stark恒定分水器，分水器连接回流冷凝器。将烧瓶在油浴中、在150℃加热，每隔一段时间，从分离器中除去从混合物当中蒸馏出的水(含有回流甲苯)(过夜)。减压除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(150 mL)中。将该溶液用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩。用硅胶柱色谱纯化残余物(己烷/EtOAc，0-60%梯度)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 4.40(2 H, m), 3.86(3 H, m), 2.75(2 H, m), 2.55(2 H, m), 2.06(2 H, m), 1.57(2 H, m), 1.50(9 H, s)。LC-MS-250.99.12(M+1-56)。

步骤B∶(1R,3r,5S)-3-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代乙基)-3-乙烯基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在-10℃，向(1R,5S,Z)-3-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代亚乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯(7.17 g，23.4 mmol)和碘化铜(I)(2.229 g，11.70 mmol)的THF(150 mL)悬浮液中注射加入乙烯基溴化镁(35.1 mL，35.1 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌1小时。用饱和乙酸铵水溶液淬灭该反应，并将该混合物用EtOAc(100 mL)稀释。分离有机层，并用EtOAc(100 mL)提取水层。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO₄干燥，浓缩。用硅胶柱色谱纯化粗品(用0-50% EtOAc，然后50% EtOAc/己烷洗脱)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 5.82(1 H, dd , J/=17.3 Hz, J₂=10.7 Hz), 5.15(1 H, d, J=10.7 Hz), 5.10(1 H, d, J=17.3 Hz), 4.20-4.50(2 H, m), 3.85(1 H, s), 3.81(3 H, s), 2.17-2.35(2 H, m), 1.90-2.15(4 H, m), 1.58-1.72(2 H, m)m 1.47(9 H, s)。LC-MS: 278.92(M+1-56)。

步骤C∶(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-3-乙烯基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,3r,5S)-3-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代乙基)-3-乙烯基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯(7.2 g，21.53 mmol)和氯化钠(1.258 g，21.53 mmol)的DMSO(40 mL)和水(4 mL)悬浮液在160℃油浴中加热2小时，然后冷却至室温。加入水(50 mL)，并将该混合物用乙醚(两次，50 mL)提取。用盐水洗涤合并的醚层，用MgSO₄干燥，减压浓缩。用柱色谱纯化粗品(0-70%，乙酸乙酯/己烷)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 5.73(1 H, dd, Jl=17.7 Hz, J2=11.0 Hz), 5.10(1 H, d, J=11 HZ), 5.08(1 H, d, J=17.7 Hz), 5.30(2 H, m), 2.70(2 H, s), 1.95-2.12(4 H, m), 1.70(4 H, m), 1.45(9 H, s)。LC-MS: 221.11(M+1-56)。

步骤D∶(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-3-甲酰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-3-乙烯基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯(4.00 g，14.5 mmol)、水(15 mL)和高碘酸钠(12.4 g，57.9 mmol)的二噁烷(45 mL)悬浮液中加入四氧化锇(0.184 g，0.724 mmol)。将该悬浮液在室温搅拌17小时。将该混合物用1N盐酸酸化，用EtOAc(50 mL)稀释。分离有机层，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，减压浓缩。残余物不用进一步纯化就使用。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 9.14(1 H, s), 4.17(2 H, m), 3.80(3 H, s), 2.32(2 H, m), 2.15(2 H, m), 1.73(2 H, m), 1.55(2 H, m)。LC-MS-223.16(M+1-56)。

步骤E∶(1R,3s,5S)-8-(叔丁氧羰基)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸∶

向(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-3-甲酰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯(5.10 g，18.3 mmol)的t-BuOH/H₂O(2∶1)溶液中加入磷酸二氢钠水合物(7.59 g，55.0 mmol)和2-甲基丁-2-烯(9.7 mL，92 mmol)。将该悬浮液冷却至0℃，并逐份加入亚氯酸钠(4.97 g，55.0 mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌1小时，用1M HCl酸化，用CHCl₃∶2-丙醇(3∶1)提取，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。在回流下，在甲苯中，将粗品用Dean-Stark装置加热至干。将热甲苯溶液与固体分离，并将该溶液浓缩，获得标题化合物。LCMS 239.23(M+1-56), 295.23(+1)。

步骤F∶(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

在室温下，向(1R,3s,5S)-8-(叔丁氧羰基)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸(5.20 g，17.7 mmol)溶液(在MeOH(30 mL)和DCM(30 mL)的混合物中)中慢慢地加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(13.3 mL，26.5 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌0.5小时。加入乙酸(～5 mL)，以除去过量的(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷。将该溶液浓缩，残余物在下一步中直接使用。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 4.32(2 H, m), 3.74(3 H, s), 2.85(2 H, s), 2.65(2 H, m), 2.08(2 H, m), 1.65(4 H, m), 1.42(9 H, s)。LCMS: 253(M+1-56)。

步骤G∶(1R,3s,5S)-3-(2-氨乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

将(1R,3s,5S)-3-(氰基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(3.5 g，11.4 mmol)和氧化铂(IV)(0.258 g，1.14 mmol)在乙醇(20 mL)和AcOH(20 mL)中的混合物、在振荡器(45 psi氢气)上、在室温下氢化48小时。通过CELITE?垫滤出催化剂。将滤液浓缩，残余物在下一步中直接使用。LCMS 313.25(+1), 257.25(+1-56)。

步骤H∶(1R,3s,5S)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,3s,5S)-3-(2-氨乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(3.50 g，11.2 mmol)和碳酸钾(7.74 g，56.0 mmol)在MeOH(50 mL)中的混合物、在60℃下加热1小时。浓缩该混合物，并加入DCM(50 mL)。通过硅胶垫过滤该悬浮液，并将滤液浓缩，得到固体，该固体直接在下一步使用。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 6.43(1 H, bs), 4.25(1 H, m), 4.37(1 H, m), 3.32(2 H, t, J=7.0 Hz), 2.24(2 H, m), 2.35(2 H, m), 1.97(2 H, m), 1.82(2 H, m), 1.45(9 H, s), 1.46(2 H, m)。LCMS: 281(M+1), 225(M+1-56)。

步骤I∶(1R,3s,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2.5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,3s,5S)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯(2.00 g，7.13 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(1.93 g，7.85 mmol)、二乙酰氧基钯(0.080 g，0.36 mmol)、(9,9-二甲基-9H-氧杂蒽-4,5-二基)二(二苯基膦)(0.413 g，0.713 mmol)、碳酸钾(2.96 g，21.4 mmol)和水(0.386 g，21.40 mmol)在甲苯(100 mL)中的混合物、在60℃、在氮气氛围中加热4小时。用EtOAc(50 mL)稀释该混合物。通过CELITE?垫滤出固体，并将滤液浓缩。用柱色谱纯化残余物(0-100%，EtOAc/己烷，然后100% EtOAc)，提供标题化合物。LC-MS 321.03(+1-56), 377.03(+1)。

步骤J∶(1R,3s,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮∶

将(1R,3s,5S)-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯与TFA(5 mL)一起在DCM(30 mL)中、在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物。将残余物溶于甲醇中，用20 mL甲醇洗涤柱之后，填充在Bontod Elut SCX柱(离子交换)上。用甲醇洗脱含有目标化合物的柱，除去TFA(～20 mL)，并用2N NH₃/甲醇(～20 mL)洗脱出目标化合物的游离碱。浓缩该溶液，得到标题化合物的游离碱(固体)。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 5.25(1 H, s), 4.00(2 H, t, J=6.9 Hz), 3.67(2 H, m), 2.42(2 H, t, J=6.9 Hz), 2.06(3 H, s), 2.04(2 H, m), 1.97(2 H, m), 1.82(2 H, m)。LCMS 277.03(M+1), 321.03(M+1-56)。

中间体33A和33B

(1R,3r,5S)-5'-甲基-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮(异构体A和B)

步骤A∶(1R,3r,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

向商购的(1R,3r,5S)-8-(叔丁氧羰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸(10.0 g，39.2 mmol)和甲醇(4.75 mL，118 mmol)的二氯甲烷(200 mL)溶液中加入EDC(11.3 g，58.8 mmol)、二异丙基乙胺(13.7 mL，78 mmol)和DMAP(0.479 g，3.92 mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌16小时。用硫酸氢钾(1N，200 mL)、水(200 mL)、饱和碳酸氢钠洗涤该反应溶液，用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 270.1。

步骤B∶(1R,3r,5S)-3-(2-甲基烯丙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

在0℃，向二异丙胺(5.94 mL，41.7 mmol)的四氢呋喃(5 mL)溶液中滴加入正丁基锂(16.7 mL，41.7 mmol)，并将得到的溶液在0℃下搅拌0.5小时。在-78℃，将此溶液逐滴加入到步骤A的化合物(7.48 g，27.8 mmol)的四氢呋喃(90ml)溶液中。将得到的溶液在-78℃下搅拌1小时，而后逐滴加入3-溴-异丁烯(4.03 mL，40.0 mmol)。在-78℃下搅拌1.5小时之后，加入饱和乙酸铵，停止该反应。用乙酸乙酯稀释该混合物，用饱和乙酸铵洗涤两次，用硫酸钠干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上纯化，使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:324.3。

步骤C∶(1R,3r,5S)-3-(2-氧代丙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯∶

向(1R,3r,5S)-3-(2-甲基烯丙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(7.99 g，24.7 mmol)的二噁烷(100 mL)和水(50 mL)溶液中加入高碘酸钠(10.6 g，49.4 mmol)和四氧化锇(0.126 g，0.494 mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌18小时，而后加入硫代硫酸钠(1 g)。在室温下搅拌0.5小时之后，过滤该混合物，并浓缩滤液。将残余物溶于乙酸乙酯(300 mL)中，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。在硅胶上纯化残余物，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:326.2。

步骤D∶(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯∶

向(1R,3r,5S)-3-(2-氧代丙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二甲酸8-叔丁基3-甲基酯(7.90 g，24.3 mmol)的甲醇(50 mL)溶液中加入硫酸镁(5.84 g，48.6 mmol)、乙酸铵(3.74 g，48.6 mmol)和氰基硼氢化钠(3.05 g，48.6 mmol)。在密封管中，将得到的混合物在80℃加热18小时。冷却至室温后，过滤该混合物，浓缩滤液，并将残余物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠之间分配。用二氯甲烷提取水相，用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，并将残余物在硅胶柱上纯化，使用乙酸乙酯作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:295.3。

步骤E∶(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯异构体(A)和异构体(B)∶

向(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯(2.41 g，8.19 mmol)的甲苯(30 mL)溶液中加入3-溴-呋喃酮(1.60 g，9.82 mmol)、Xantphos(0.474 g，0.819 mmol)、碳酸钾(2.263 g，16.37 mmol)、水(0.442 g，24.6 mmol)和乙酸钯(0.092 g，0.409 mmol)。将得到的混合物用氮气吹扫30分钟，而后在65℃下加热16小时。冷却至室温后，过滤该混合物，浓缩滤液，并将残余物在硅胶上纯化，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到外消旋体(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3 '-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯(LC/MS:(M+1)⁺: 377.05)。在手性AS柱(30x250 mm)上分离该外消旋体，使用甲醇/乙腈/二氧化碳，得到∶异构体(A)，快速洗脱的对映体；LC/MS:(M+1)⁺: 377.04，以及异构体(B)，较慢洗脱的对映体；LC/MS:(M+1)⁺: 377.03。

步骤F∶(1R,3r,5S)-5'-甲基-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-2'-酮异构体A和异构体B∶

将TFA(3.27 mL，42.5 mmol)加入到(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯异构体(A)(0.80 g，2.1 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液中，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于甲醇(5mL)中，在离子交换柱上碱化得到游离碱，首先用甲醇洗涤，而后用1N氨/甲醇洗涤，得到标题化合物的异构体(A)∶ LC/MS:(M+1)⁺: 277.07。将TFA(3.27 mL，42.5 mmol)加入到(1R,3r,5S)-5'-甲基-2'-氧代-1'-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,3'-吡咯烷]-8-甲酸叔丁基酯异构体(B)(0.8 g，2.13 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液中，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物溶于甲醇(5mL)中，在离子交换柱上碱化得到游离碱，首先用甲醇洗涤，而后用1N氨/甲醇洗涤，得到标题化合物的异构体B。LC/MS:(M+1)⁺: 377.07。

中间体34

(1R,3'S,5S)-3-甲基-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-3,9-二氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-2'-酮

步骤A∶(1R,5S)-3-甲基-7-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-9-甲酸叔丁基酯∶

在-78℃，向商购的(1R,5S)-3-甲基-7-氧代-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(10.0 g，39.3 mmol)的四氢呋喃(100 mL)溶液中滴加入LDA溶液(23.6 mL，47.2 mmol)。将得到的溶液在-78℃下搅拌0.5小时，而后加入到2-[N,N-二(三氟甲磺酰基)氨基]-5-氯吡啶(18.5 g，47.2 mmol)的四氢呋喃(25 mL)溶液中。将得到的溶液在-78℃下搅拌2小时，然后加热至室温，保持20分钟，而后加入饱和氯化铵和乙酸乙酯，停止反应。用饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并将残余物在硅胶柱上纯化，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 386.94。

步骤B∶(1R,5S)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3,3,1]壬-6-烯-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

向(1R,5S)-3-甲基-7-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-9-甲酸叔丁基酯(14 g，36 mmol)和二异丙基乙胺(9.47 mL，54.3 mmol)的甲醇(100 mL)和DMF(100 mL)溶液中加入三苯基膦(0.95 g，3.62 mmol)和醋酸钯(II)(0.407 g，1.81 mmol)。将该混合物在一氧化碳氛围中搅拌24小时。浓缩该混合物，而后在乙酸乙酯和水之间分配。用盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上纯化，使用乙酸乙酯和己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 297.2。

步骤C∶(1R,5S)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

向(1R,5S)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(4.69 g，15.8 mmol)的甲醇(50 mL)溶液中加入钯/炭(10%，1.684 g，1.583 mmol)，并在40 psi下，将所得到的混合物氢化三天。在氮气氛围中，通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 299.1。

步骤D∶(1R,5S,7s)-7-(氰基甲基)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

在0℃，向二异丙基胺(3.28 mL，23.02 mmol)的四氢呋喃(5 mL)溶液中逐滴加入正丁基锂(11.51 mL，23.02)，并将得到的溶液在0℃下搅拌0.5小时。在-78℃，向(1R,5S)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(4.58 g，15.35 mmol)的四氢呋喃(50 mL)溶液中滴加入上述LDA溶液。在-78℃下搅拌1小时之后，滴加入溴乙腈(1.54 mL，22.1 mmol)，并将得到的溶液在-78℃下搅拌1小时，而后加入饱和氯化铵停止反应。将该混合物用乙酸乙酯提取。用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，并将残余物在硅胶上纯化，使用甲醇和二氯甲烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 338.2。

步骤E∶(1R,5S,7s)-7-(2-氨乙基)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

向(1R,5S,7s)-7-(氰基甲基)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(4.39 g，13.0 mmol)的甲醇(30 mL)溶液中加入氧化铂(IV)(0.207 g，0.911 mmol)，并将得到的混合物在40 psi下氢化16小时。在氮气氛围中，通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 342.2。

步骤F∶(1R,3's,5S)-3-甲基-2'-氧代-3,9-二氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯∶

向(1R,5S,7s)-7-(2-氨乙基)-3-甲基-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(4.44 g，13.0 mmol)的甲醇(100 mL)溶液中加入碳酸钾(10.8 g，78 mmol)，并将得到的溶液回流加热8小时。冷却至室温后，过滤该混合物，浓缩滤液，并将残余物溶于二氯甲烷(200mL)中，用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 310.26。

步骤G∶(1R,3's,5S)-3-甲基-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-3,9-二氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,3's,5S)-3-甲基-2'-氧代-3,9-二氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯(4.0 g，12.9 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(3.82 g，15.5 mmol)、Xantphos(0.748 g，1.29 mmol)和碳酸钾(3.57 g，25.9 mmol)在甲苯(100 mL)中的混合物用氮气脱气20分钟，而后加入醋酸钯(II)(0.145 g，0.646 mmol)。将得到的混合物在65℃下加热16小时。将该反应混合物冷却至室温，通过CELITE?过滤，浓缩滤液，并将残余物在硅胶柱上纯化，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 406.21。

步骤H∶(1R,3's,5S)-3-甲基-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-3,9-二氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-2'-酮∶

向步骤G的化合物(2.63 g，6.49 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液中加入三氟乙酸(10 mL，130 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。除去挥发物之后，将残余物在离子交换柱碱化，用甲醇洗涤，而后用1N氨/甲醇洗涤，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 306.09。

中间体35

6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶1-苄基-4-(氰基甲基)-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯∶

向装有1-苄基-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯(1.0 g，3.8 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入K₂CO₃(1.06 g，7.6 mmol)、溴乙腈(0.92 g，7.6 mmol)和丙酮(15 mL)。将该反应在室温下搅拌2小时。LC显示反应缓慢。然后加热到45℃，保持3小时。LC显示，此时反应完成。用NH₄Cl淬灭该反应，用EtOAc提取，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。利用MPLC纯化粗品，得到标题化合物。LCMS: m/z 301(M+H)⁺。

步骤B∶8-苄基-6-羟基-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向装有1-苄基-4-(氰基甲基)-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯(900 mg，3.0 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入氧化铂(100 mg，0.44 mmol)、MeOH(20 mL)和乙酸(20 mL)。将该混合物在氢气氛围中强力搅拌24小时。LC表明，此时反应完成。通过CELITE?垫过滤除去催化剂，并将滤液减压浓缩。将残余物溶于EtOH(100 mL)中，并加入K₂CO₃(2.1 g，15 mmol)。将该混合物加热至90℃，保持4小时。将该反应冷却，并加入DCM(200 mL)，使固体沉淀。然后，过滤除去固体，并将粗品反应物吸附到硅胶上，用DCM和10% MeOH(与10% NH₄OH混合)吹洗，得到标题化合物。LCMS: m/z 261(M+H)⁺。

步骤C∶8-苄基-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向装有8-苄基-6-羟基-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(520 mg，2.0 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入乙酸钯(22 mg，0.10 mmol)、K₂CO₃(550 mg，4.00 mmol)、Xantphos(120 mg，0.20 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(640 mg，2.6 mmol)和水(110 mg，6.0 mmol)。将该混合物加热至60℃，保持2小时。LC显示，此时反应完成。用EtOAc稀释该反应，用水洗涤，并分离各相。用Na₂SO₄干燥粗品溶液，过滤，浓缩，得到油。将油填充到硅胶柱上，用MPLC纯化，用己烷和EtOAc洗脱。分离出两个斑点，目标分子量的比例大约为1至7。较大的极性斑点是主要产物。LCMS: m/z 357(M+H)⁺。

步骤D∶6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

向8-苄基-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(150 mg，0.42 mmol)的MeOH(2 mL)溶液中加入钯/炭(45 mg，0.42 mmol)和几滴HOAc。将该混合物在氢气氛围中搅拌16小时。LC显示反应完成。滤出催化剂，粗品不用进一步纯化就使用。LCMS: m/z 267(M+H)⁺。

中间体36A和36B(两个异构体)

6-氟-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，异构体A和B

步骤A∶8-苄基-6-氟-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(异构体A和B)∶

在-78℃，向装有DCM(5 mL)和搅拌棒的烧瓶中加入DAST(0.092 mL，0.69 mmol)，而后加入8-苄基-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(1-35，步骤C)(165 mg，0.46 mmol)/DCM。将该混合物在-78℃下搅拌15分钟，而后慢慢地加热至室温。用NaHCO₃水溶液淬灭该反应，在室温下3小时之后，将其用DCM提取，用硫酸钠干燥，用MPLC纯化，用己烷和EtOAc洗脱。收集两个斑点，目标分子量的比例大约为1:4。低极性化合物(次要异构体)指定为异构体A，极性大的主要异构体指定为异构体B。LCMS: m/z 359(M+H)⁺。

步骤B-1∶6-氟-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(异构体B，I-36B)∶

向步骤A的异构体B(100 mg，0.28 mmol)的DCE(2 mL)溶液中加入ACE-Cl(0.15 mL，1.4 mmol)。将该混合物加热至80℃，保持3小时。然后，除去溶剂，并将残余物在高真空下用泵抽15分钟。然后，将残余物溶于MeOH(5 mL)中，并加热回流30分钟。LC显示，形成目标产物。浓缩该反应，用MPLC纯化粗品，用DCM和MeOH系统洗脱，获得标题化合物的异构体B(其是I-36B)。LCMS: m/z 269(M+H)⁺。

步骤B-2∶6-氟-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(异构体A，I-36A)∶

按照与步骤B-1所述方法相同的方法，但从步骤A的异构体A起始，制备标题中间体(其是I-36A)。LCMS: m/z 269(M+H)⁺。

中间体37A和37B

4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，异构体A和异构体B

步骤A∶4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟乙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯∶

在-78℃下，用10分钟通过注射泵向LDA溶液(如下制备：在0℃，将正丁基锂(20.0 mL，49.3 mmol)加入到二异丙胺(5.16 mg，51.0 mmol)/THF(40 mL)中，搅拌30分钟)中滴加入哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(4.00 g，16.4 mmol)/TMEDA(15 mL，99 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后用注射泵慢慢地加入(2-氧代乙基)氨基甲酸酯(8.11 g，51.0 mmol)/THF(20 mL)(15分钟)。将该混合物在-78℃下搅拌30分钟，在-78℃用饱和NH₄Cl淬灭，升温至室温，并用EtOAc(200 mL)稀释。分离有机层，并用EtOAc(100 mL)提取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩。用柱色谱纯化残余物(80 g，硅胶，MeOH/DCM，梯度0-10%，监测：210 nm)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=403。

步骤B∶4-羟基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，向4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟乙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(4000 mg，9.94 mmol)的DCM(100 mL)溶液中加入TFA(23 mL，298 mmol)，并将得到的溶液搅拌2小时。除去挥发物之后，短暂放入高真空除去过量TFA，并将残余物溶于MeOH(100 mL)中，加入碳酸钾(13.7 g，99 mmol)。将该反应混合物在60℃下加热2小时。冷却至室温后，将NaHCO₃水溶液(50 mL)加入到该反应混合物中。加入(BOC)₂O(6.51 g，29.8 mmol)，并将该反应混合物搅拌过夜。用DCM提取该反应混合物，用MgSO₄干燥，浓缩，得到粗品，用柱色谱纯化(0-20%，MeOH/DCM，监测：210 nm)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=271。

步骤C∶4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯，异构体A和异构体B∶

向圆底烧瓶中加入4-羟基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(400 mg，1.48 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(546 mg，2.22 mmol)、Pd₂(dba)₃(33.9 mg，0.037 mmol)、Xantphos(64.2 mg，0.111 mmol)和碳酸铯(964 mg，2.96 mmol)。为烧瓶安装冷凝器，抽真空，用氮气反填充，并填充二噁烷(6 mL)。将该反应混合物在90℃加热过夜，并通过CELITE?过滤。蒸发滤液，得到粗品，用柱色谱(0-10%，MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物的外消旋体。LC/MS:[(M+1)]⁺=367。用SFC-HPLC分离外消旋混合物，使用下列条件∶chiralcel OJ，21x250mm，10% MeOH+0.2 DEA，50mL/min，得到异构体A(快速洗脱的对映体)LC/MS:[(M+1)]⁺=367，以及异构体B(较慢洗脱的对映体)LC/MS:[(M+1)]⁺=367。

步骤D∶4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，异构体A和异构体B∶

按照与先前对I-19所描述方式类似的方式，使用TFA，由4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯的异构体A和B分别制备标题化合物。

异构体A∶LC/MS:[(M+1)]⁺=267；异构体B∶LC/MS:[(M+1)]⁺=267。

中间体38

2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,4-二酮

步骤A∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,4-二氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-37，步骤C)(200 mg，0.546 mmol)（在DCM(2.8 mL)中）加入碳酸氢钠(68.8 mg，0.819 mmol)和戴斯-马丁氧化剂(347 mg，0.819 mmol)。将该反应混合物强力搅拌1.5小时，然后用10% Na₂S₂O₃、NaHCO₃淬灭，并搅拌20分钟。用DCM提取水层，并将有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=365。

步骤B∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,4-二酮∶

按照与对I-19所述方式类似的方式，由2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1 ,4-二氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=265。

中间体39A和39B

4-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，异构体A和异构体B

步骤A∶4-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(对映体A和对映体B)∶

向4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(100 mg，0.273 mmol)的乙腈(1 mL)溶液中加入碘甲烷(171μl，2.73 mmol)和氧化银(69.6 mg，0.300 mmol)。密封该瓶，用铝箔包裹，在58℃下搅拌15小时。通过CELITE?过滤该反应混合物，浓缩，得到粗品，用柱色谱纯化(0-10%，MeOH/DCM)，得到标题化合物的对映体的混合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=381。使用下列条件，用SFC-HPLC分离外消旋混合物∶

chiralcel AD-H，2x25 cm，15% MeOH，60mL/min，得到快速洗脱的对映体A∶

LC/MS:[(M+1)]⁺=381；以及较慢洗脱的对映体B∶LC/MS:[(M+1)]⁺=381。

步骤B∶4-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，异构体A和异构体B∶

按照与对I-19的步骤B所描述方式类似的方式，使用TFA，由前述步骤的每个单一对映体制备标题化合物的单一异构体。

异构体A(衍生自对映体A，步骤A): LC/MS:[(M+1)]⁺=281。

异构体B(衍生自对映体B，步骤A): LC/MS:[(M+1)]⁺=281。

中间体40

2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮

步骤A∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，向4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(300 mg，0.819 mmol)的DCM(8.2 mL)溶液中加入DBU(370μl，2.46 mmol)和XtalFluor-E?(562 mg，2.46 mmol)。将该混合物搅拌过夜，同时加热至室温，并用NaHCO₃水溶液淬灭。分离有机层，并将水层用DCM(30 mL)提取。干燥(MgSO₄)合并的有机层，用柱色谱纯化(0-100%，EtOAc/己烷)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=349。

步骤B∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮∶

按照与对I-19步骤B所描述方式类似的方式，使用TFA，由2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=249。

中间体41

2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮

步骤A∶4-羟基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向圆底烧瓶中加入4-羟基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(300 mg，1.11 mmol)、4-溴呋喃-2(5H)-酮(271 mg，1.66 mmol)、Pd(OAc)₂(24.9 mg，0.111 mmol)、Xantphos(96 mg，0.166 mmol)和K₂CO₃(307 mg，2.22 mmol)。密封烧瓶，抽真空，用氮气反填充，并填充二噁烷(4.5 mL)和水(60.0μl，3.33 mmol)。将该反应混合物在90℃加热过夜，然后通过CELITE?过滤，蒸发，得到粗品，将其用柱色谱纯化(0-10%，MeOH/DCM)，得到标题化合物。LC/MS :[(M+ 1)]⁺=353。

步骤B∶1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，向4-羟基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(210 mg，0.596 mmol)的DCM(6 mL)溶液中加入DBU(269μl，1.79 mmol)和XtalFluor-E?(409 mg，1.79 mmol)。将该反应混合物搅拌过夜，同时加热至室温，然后用NaHCO₃水溶液停止反应。分离有机层，并将水层用DCM(30 mL)提取。干燥(MgSO₄)合并的有机层，用柱色谱纯化(0-100%，EtOAc/己烷)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=335。

步骤C∶2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮∶

按照与对I-19步骤B所描述方式类似的方式，使用TFA，由1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=235。

中间体42

3-甲基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

利用与对3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-22)所描述的方式类似的方式，制备标题化合物，只不过从4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(I-9)起始。LC-MS(IE, m/z): 265(M+1)⁺。

中间体43

3-乙基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-(2-溴烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯∶

在-78℃，将二异丙基胺化锂(29.1 mL，58.3 mmol)逐滴加入到哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯(9.56 mL，38.9 mmol)的THF(200 mL)溶液中，并在此温度下搅拌50分钟。将2,3-二溴丙-1-烯(5.47 mL，56.0 mmol)/THF(10 mL)慢慢地加入到该反应混合物中，并将得到的混合物在-78℃搅拌1.5小时。将该反应混合物用NH₄Cl溶液(15 mL)停止反应，升温至室温，用EtOAc(30 mL X 3)提取水层。将合并的有机物用盐水(30 mL)洗涤，用MgSO₄干燥，浓缩，得到粗品，将其用硅胶柱色谱纯化(RediSep 220g Gold柱)，使用(0-30)% EtOAc/己烷作为移动相，得到标题化合物。

步骤B∶4-(2-亚甲基丁基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯∶

在密封管中，向4-(2-溴烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯(5.0 g，13.3 mmol)的THF(80 mL)溶液中加入BINAP(3.31 g，5.32 mmol)、二乙基锌(15.95 mL，15.95 mmol)和Pd(OAc)₂(0.597 g，2.66 mmol)，将得到的混合物脱气，并在100℃下加热16小时。蒸发该反应混合物，减压除去溶剂，用硅胶柱色谱纯化粗品(RediSep 220g Gold柱)，使用(0-30)% EtOAc/己烷作为移动相，并分离标题化合物。

步骤C∶4-(2-氧代丁基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯∶

将四羟基合二氧化锇（dioxidosmium）钾(0.041 g，0.111 mmol)加入到4-(2-亚甲基丁基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯(1.0 g，3.07 mmol)的丙酮(20 mL)和水(20 mL)溶液中，并搅拌10分钟。在1小时内，分四份加入固体高碘酸钠(2.62 g，12.26 mmol)，并使用冰浴，将反应温度保持在40℃以下。将得到的混合物在室温下搅拌1小时。此时，LCMS显示不完全反应。再加入0.036 eq的四羟基合二氧化锇钾（potassium tetrahydroxydioxidoosmium）(0.041 g，0.111 mmol)，然后将该混合物在室温下搅拌2小时。2小时之后，LCMS显示反应完成。过滤该悬浮液，浓缩滤液，除去丙酮，并将水层用DCM(15 mL X 3)提取。将合并的有机层用10% Na₂S₂O₃溶液(20 mL X 2)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后浓缩，得到粗品，将其用硅胶柱色谱纯化(80g RediSep Gold柱)，使用(0-35)% EtOAc/己烷作为移动相，并分离标题化合物。

步骤D∶3-乙基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在密封管中，向4-(2-氧代丁基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯(0.78 g，2.38 mmol)的乙醇(24 mL)搅拌溶液中加入乙酸铵(2.39 g，31.0 mmol)、氰基硼氢化钠(0.422 g，6.72 mmol)和硫酸镁(1.577 g，13.10 mmol)，并将得到的混合物在80℃加热16小时。用CELITE?过滤该反应混合物，除去MgSO₄，并将滤液浓缩。将残余物再溶于DCM(20 mL)中，用饱和NaHCO₃(10 mL)、水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤。用无水MgSO₄干燥有机层，过滤，浓缩，然后用硅胶柱色谱纯化(40g RediSep Gold柱)，使用(0-10)% MeOH/EtOAc，得到标题化合物。

步骤E和F∶3-乙基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

利用与对3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-22)所描述方式类似的方式，分两步由3-乙基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。

中间体44

3-环丙基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶4-(2-环丙基烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯∶

在微波管中，将4-(2-溴烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯(1.0 g，2.66 mmol)、环丙基三氟硼酸钾(0.413 g，2.79 mmol)、碳酸铯(2.60 g，7.97 mmol)和[1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.058 g，0.080 mmol)吸收在甲苯(14 mL)和水(1.39 mL)中，脱气，并在80℃加热过夜。冷却该反应混合物，进行LC/MS显示，反应几乎完成。将该反应混合物用EtOAc和水稀释。用EtOAc(2X)提取水层，用无水MgSO₄干燥合并的有机层，过滤，浓缩，用硅胶柱色谱纯化(RediSep Gold，80g)，使用(0-30)% EtOAc/己烷作为移动相，得到标题化合物。

3-环丙基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

利用与对3-乙基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-43)所描述方式类似的方式，分为四个步骤，由4-(2-环丙基烯丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-乙基酯制备标题化合物。

中间体45

3-环丙基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

利用与对I-44类似的方式，但使用4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯，制备标题化合物。

中间体46

2-(4-(甲氧基甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶2-(4-溴-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-16，步骤A)(2.73 g，8.12 mmol)溶于DCM(70 mL)中，在25℃，用N-溴代琥珀酰亚胺(1.73 g，9.74 mmol)处理，并将得到的混合物在室温下搅拌过夜。第二天，将该反应混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，然后用Na₂SO₄干燥。除去溶剂，得到粗品，将其用硅胶柱色谱纯化(80g RediSep Gold柱)，使用(25-80)% EtOAc/己烷作为移动相，得到标题化合物。

步骤B∶1-氧代-2-(5-氧代-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在密封管中，将2-(4-溴-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(2.2 g，5.30 mmol)、三氟(乙烯基)硼酸钾(1.06 g，7.95 mmol)、[1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.345 g，0.530 mmol)和磷酸三钾(10.60 mL，10.60 mmol)吸收在THF(44.1 mL)中，脱气，并将得到的混合物在70℃加热过夜。将该反应混合物冷却至室温，而后用EtOAc和水稀释。分离各层之后，用EtOAc(2X)提取水层。用无水MgSO₄干燥合并的有机层，过滤，浓缩，用硅胶柱色谱纯化，使用(30-100)% EtOAc/己烷作为移动相，提供标题化合物。

步骤C∶2-(4-甲酰基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将1-氧代-2-(5-氧代-4-乙烯基-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(1.6 g，4.4 mmol)溶于丙酮(36 mL)和水(36 mL)中，然后加入K₂O_sO₄.2H₂O，并将该混合物搅拌～5分钟。在1小时内，分四份加入固体高碘酸钠(3.77 g，17.6 mmol)，并使用冰浴，将反应温度保持在40℃以下。将得到的混合物在室温下搅拌1小时。2小时之后，LCMS显示起始原料完全耗尽。过滤该悬浮液，并将滤液浓缩，除去丙酮。用DCM(3X)提取水层。用10% Na₂S₂O₃溶液(2X)洗涤合并的有机层，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，获得标题化合物，其不用进一步纯化就用于下一步。

步骤D∶2-(4-(羟甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将2-(4-甲酰基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(1.18 g，3.24 mmol)溶于THF(13 mL)和MeOH(13 mL)中，并将该混合物冷却至-78℃，搅拌15分钟。加入硼氢化钠(0.147 g，3.89 mmol)(分为两个等份)，并在-78℃，将得到的混合物搅拌～15分钟。在-78℃搅拌15分钟之后，LC-MS显示，起始原料完全耗尽。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，在-78℃，用氯化铵水溶液淬灭。用EtOAc(2X)提取水层，用水、盐水洗涤合并的有机层，然后干燥(MgSO₄)，过滤，并减压蒸发溶剂，获得产物，其不用纯化就用于下一步。

步骤E∶2-(4-(甲氧基甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

将2-(4-(羟甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(0.42 g，1.15 mmol)、氧化银(0.292 g，1.26 mmol)和甲基碘(0.358 mL，5.73 mmol)吸收在DCM(5 mL)中，并在室温下、在氮气氛围中搅拌过夜。用DCE(8 mL)将额外的氧化银(0.292 g，1.26 mmol)和甲基碘(0.358 mL，5.73 mmol)加入到该混合物中，并将得到的混合物在54℃加热过夜。通过CELITE?过滤该反应混合物，除去氧化银，浓缩，用硅胶柱色谱纯化(40g RediSep Gold柱)，使用(20-80)%EtOAc/DCM作为移动相，得到标题化合物。

步骤F∶2-(4-(甲氧基甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

利用与对3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-22，最后一步)所描述的方式类似的方式，由2-(4-(甲氧基甲基)-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯制备标题化合物。

中间体47

3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮

步骤A∶4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯∶

在-78℃下，通过注射器泵向LDA溶液(如下制备：在0℃，将正丁基锂(27.7 mL，55.5 mmol)加入到二异丙胺(8.04 mL，57.3 mmol)/THF(40 mL)中，搅拌30分钟)中逐滴(用20分钟)加入哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(4500 mg，18.5 mmol)/TMEDA(16.6 mL，111 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌30分钟，并慢慢地(20分钟)用注射泵加入(S)-(1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(9931 mg，57.3 mmol)/THF(20 mL)。将该混合物在-78℃下搅拌30分钟，在-78℃用饱和NH₄Cl淬灭，升温至室温，用EtOAc(200 mL)稀释。分离有机层，并用EtOAc(100 mL)提取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩。用柱色谱纯化残余物(MeOH/DCM，梯度0-10%)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=417。

步骤B∶4-羟基-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，向4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-1-羟基丙基)哌啶-1,4-二甲酸1-叔丁基4-甲基酯(8000 mg，19.2 mmol)的DCM(190 mL)溶液中加入TFA(44.4 mL，576 mmol)，并将得到的溶液搅拌2小时。除去挥发物之后，短时使用高真空，除去过量TFA，并将残余物溶于MeOH(190 mL)中，加入K₂CO₃(26.5 g，192 mmol)。将该反应混合物在60℃下加热小时。冷却至室温后，加入饱和NaHCO₃溶液(60 mL)，而后加入(BOC)₂O(12.6 g，57.6 mmol)。将该反应混合物搅拌过夜，并用DCM提取。用MgSO₄干燥有机层，浓缩，得到粗品，将其用柱色谱纯化(0-20%MeOH/DCM，监测：210 nm)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=285。

步骤C∶4-羟基-3-甲基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向圆底烧瓶中加入4-羟基-3-甲基-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(1000 mg，3.52 mmol)、4-溴呋喃-2(5H)-酮(860 mg，5.28 mmol)、Pd(OAc)₂(79 mg，0.352 mmol)、Xantphos(305 mg，0.528 mmol)和K₂CO₃(972 mg，7.03 mmol)。密封烧瓶，抽真空，用氮气反填充，并填充二噁烷(14 mL)和水(190μl，10.6 mmol)。将该反应混合物在90℃加热过夜，并通过CELITE?过滤。蒸发滤液，得到粗品，用柱色谱纯化(0-10%MeOH/DCM，达到6% MeOH/DCM时出现，而后使用另一个柱，用0-100% EtOAc/己烷)，得到标题化合物的外消旋体。LC/MS:[(M+1)]⁺=367。

步骤D∶4-碘代-3-甲基-1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

在室温下，向步骤C的化合物(370 mg，1.01 mmol)的甲苯(20 mL)溶液中加入PPh₃(397 mg，1.515 mmol)、咪唑(137 mg，2.02 mmol)和I₂(384 mg，1.515 mmol)。将该混合物在100℃搅拌10小时，并用NaHCO₃水溶液淬灭。用DCM稀释有机层，分离，并用DCM提取水层。干燥(MgSO₄)合并的有机层，用柱色谱纯化(0-100%EtOAc/己烷)，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1-56)]⁺=421。

步骤E∶4-碘代-3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在0℃，将步骤D的化合物(100 mg，0.210 mmol)/DCM(1.1 mL)用TFA(485μl，6.30 mmol)处理，除去Boc基团，蒸发溶剂之后，提供TFA盐。然后，首先用MeOH冲洗2 g Bond Elut SCX柱，用MeOH装载样品，用MeOH逐滴洗涤，除去TFA，最终用2N NH₃/MeOH冲洗，得到标题化合物的游离碱。LC/MS:[(M+1)]⁺=377。

步骤F∶3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮∶

在室温下，向步骤E的化合物(180 mg，0.478 mmol)的THF(4.8 mL)溶液中加入10-乙基-2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂?(聚合物结合，1.15 mmol/g，2.5 g树脂)。在振荡器上，将该反应混合物在60℃下加热5小时，然后滤出树脂，用MeOH冲洗，并将得到的混合物蒸发，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=249。

中间体48

4-甲基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮

步骤A∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,4-二氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向4-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(参见实施例I-37A和I-37B，步骤C，在手性HPLC分离之前的外消旋体)(200 mg，0.546 mmol)/DCM(2.8 mL)中加入碳酸氢钠(68.8 mg，0.819 mmol)和戴斯-马丁氧化剂(347 mg，0.819 mmol)。将该反应混合物强力搅拌1.5小时，然后用10% Na₂S₂O₃和NaHCO₃水溶液淬灭，并搅拌20分钟。用DCM提取水层，并将有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,4-二氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯。LC/MS:[(M+1)]⁺=365。

步骤B∶2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯∶

在-78℃，用5分钟向含有2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,4-二氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(200 mg，0.549 mmol)/THF(3 mL)的烧瓶中逐滴加入NaHMDS(1.10 mL，1M，在THF中，1.10 mmol)。将该溶液搅拌2小时，然后用5分钟逐滴加入N-苯基二(三氟甲磺酰亚胺)(314 mg，0.878 mmol)/THF(2 mL)。将该反应混合物在-78℃下搅拌2小时，然后升温至室温，并搅拌过夜。加入饱和NH₄Cl水溶液，淬灭该反应溶液，并用EtOAc提取。干燥(MgSO₄)合并的有机层，浓缩。用柱色谱(0-10% MeOH/DCM)纯化粗品，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=497。

步骤C∶4-甲基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯∶

将2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯(180 mg，0.363 mmol)溶于THF(3.6 mL)中，在0℃，加入Pd(Ph₃P)₄(209 mg，0.181 mmol)，而后加入三甲基铝(3.6 mL，7.25 mmol)。将该反应在室温下搅拌2小时，而后在0℃用饱和NaHCO₃水溶液淬灭(高度放热)。用EtOAc稀释该混合物，用Mg₂SO₄干燥，减压浓缩。用柱色谱(0-10% MeOH/DCM)纯化粗品，得到标题化合物。LC/MS:[(M+1)]⁺=363。

步骤D∶4-甲基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-1-酮

在0℃，将4-甲基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-8-甲酸叔丁基酯(130 mg，0.359 mmol)在DCM(1.8 mL)中用TFA(0.8 mL，10.7 mmol)处理，除去Boc基团，提供TFA盐。用MeOH将TFA盐填充到2 g Bond Elut SCX离子交换柱上，然后进一步用MeOH逐滴洗涤，除去TFA，最终用2N NH₃/MeOH冲洗，得到标题化合物的游离胺。LC/MS:[(M+1)]⁺=263。

中间体49

4-乙基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶5-溴-4-乙基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

将5-溴-4-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(2.0 g，8.37 mmol)和Pd/C(400 mg)在50 mL MeOH中的混合物、在室温下、在H₂氛围中(1 atm)搅拌过夜，而后过滤。浓缩滤液。将所得到的油用柱色谱纯化，得到5-溴-4-乙基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤B∶4-乙基-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在氮气氛围中，将5-溴-4-乙基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.81 g，7.51 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(1.21 g，9.01 mmol)和Pd(dppf)Cl₂(200 mg)在20 mL TEA和20 mL EtOH中的混合物回流加热过夜，而后浓缩。将所得到的物质用柱色谱纯化，得到4-乙基-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤C∶4-乙基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向4-乙基-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.1 g，5.85 mmol)的50 mL DCM溶液中慢慢地加入mCPBA(3.60 g，85%纯度，17.6 mmol)/50 mL DCM。将该混合物加热至室温，而后搅拌3天。用Na₂SO₃水溶液洗涤该混合物，直到KI试纸不变色为止。合并有机层，用盐水洗涤，浓缩。用柱色谱纯化残余物，得到4-乙基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.75(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.41(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.30(s, 2H), 4.11-4.13(m, 1H), 3.23-3.25(m, 1H), 2.75-2.82(m, 2H), 2.70-2.72(m, 1H), 1.27(t, J=7.4 Hz, 3H)。

中间体50

4-环丙基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向冷却(0℃)的5-溴-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(50 g，0.235 mol)的三氟甲磺酸(400 mL)溶液中加入N-碘代琥珀酰亚胺(55.5 g，0.247 mol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜，然后慢慢地倾倒在冰水(2升)中，过滤，用EtOAc提取滤液。将合并的有机层用水和盐水洗涤，干燥，浓缩，得到5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤B∶5-溴-4-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在氮气氛围中，将5-溴-4-碘代-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1 g，2.95 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(474 mg，3.54 mmol)和Pd(dppf)Cl₂(200 mg)在20 mL TEA和20 mL EtOH中的混合物回流加热2小时。TLC显示反应完成。除去大部分溶剂，并将残余物溶于EtOAc(100 mL)中。将该溶液用0.1N HCl、碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，提供5-溴-4-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。

步骤C∶5-溴-4-环丙基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向冷却(0℃)的5-溴-4-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(2.2 g，9.21 mol)和Pd(OAc)₂(100 mg)的EtOAc(50 mL)混合物中慢慢地加入CH₂N₂的醚(100 mL)溶液。将得到的混合物在室温下搅拌过夜，然后用乙酸淬灭，过滤，用水和盐水洗涤滤液，干燥，浓缩，提供标题化合物。

步骤D∶4-环丙基-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在氮气氛围中，将5-溴-4-环丙基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(760 mg，3.004 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(805 mg，6.01 mmol)和Pd(dppf)Cl₂(100 mg)在20 mL TEA和20 mL EtOH中的混合物回流加热8小时。TLC显示反应完成之后，除去大部分溶剂，并将残余物溶于EtOAc(100 mL)中。用0.1N HCl、碳酸氢钠和盐水洗涤该溶液，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将所得到的油用柱色谱纯化，得到标题化合物。

步骤E∶4-环丙基-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向4-环丙基-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(440 mg，2.2 mmol)的50 mL DCM溶液中慢慢地加入mCPBA(1.14 g，6.6 mmol)/50 mL DCM。加热至室温后，将该混合物搅拌12小时。用Na₂SO₃水溶液洗涤该混合物，直到KI试纸不变色为止。合并有机层，用盐水洗涤，而后浓缩。通过制备TLC纯化残余物，得到标题化合物。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.77(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.39(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.39(s, 2H), 4.43-4.45(m, 1H), 3.26-3.28(m, 1H), 2.68-2.70(m, 1H), 1.94-2.01(m, 1H), 1.08-1.12(m, 2H), 0.65-0.75(m, 2H)。

中间体51

4-氯-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶2-氯-3-(羟甲基)苯酚∶

在0℃，向2-氯-3-羟基苯甲醛(8.10 g，51.7 mmol)的MeOH溶液中加入NaBH₄(1.96 g，51.7 mmol)。将该反应搅拌30分钟。然后用EtOAc(400 mL)稀释该反应，用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。粗品不用进一步纯化就用于步骤B。

步骤B∶4-溴-2-氯-3-(羟甲基)苯酚∶

向装有2-氯-3-(羟甲基)苯酚和搅拌棒的烧瓶中加入NBS(10.8 g，60.5 mmol)和TFA(50 mL)。将该反应在室温下搅拌16小时，然后真空除去溶剂。将残余物再溶于EtOAc中，用水洗涤，用硅胶快速色谱纯化。分离收集一对区域异构体。按照NMR分析，较少极性的斑点是符合要求的4-溴-2-氯-3-(羟甲基)苯酚。

步骤C∶4-氯-5-羟基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向装有4-溴-2-氯-3-(羟甲基)苯酚(2.44 g，10.3 mmol)和搅拌棒的烧瓶中加入CuCN(2.76 g，30.8 mmol)和DMF(25 mL)。将烧瓶配备冷凝器，并用氮气吹扫三次。然后，将该溶液加热到145℃下2小时。此时，通过注射器将水(0.555 mL，30.8 mmol)加入到该反应中，并将该反应保持在100℃下另外24小时。将该反应冷却至室温，用DCM(100 mL)稀释，通过CELITE?垫过滤，除去固体。用饱和NH₄OAc洗涤滤液，用硫酸钠干燥，浓缩，用硅胶快速色谱纯化，得到标题化合物。

步骤D∶4-氯-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向冷的4-氯-5-羟基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.39 g，7.53 mmol)的DCM(25 mL)溶液中加入Hunig's碱(3.29 mL，18.8 mmol)和三氟甲磺酸酐(2.54 mL，15.1 mmol)。将该混合物搅拌16小时。TLC分析显示，所有的SM完全耗尽。用己烷稀释该反应，并用水洗涤。用硫酸钠干燥该溶液，浓缩，用硅胶柱快速色谱纯化。减压除去溶剂，得到中间体三氟甲磺酸酯。LC-MS(M+1=317)。向三氟甲磺酸酯中加入搅拌棒、乙烯基三氟硼酸钾(1.33 g，9.90 mmol)、PdCl₂(dppf)(0.243 g，0.332 mmol)、三乙胺(1.89 mL，13.3 mmol)和异丙醇(50 mL)。将该混合物用氮气吹扫三次，并加热到60℃下2小时。TLC显示，此时反应完成。真空除去大部分溶剂。用EtOAc(200 mL)稀释粗品残余物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，吸附到硅胶上，用快速色谱纯化，得到标题化合物。

步骤E∶4-氯-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向4-氯-5-乙烯基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(1.1 g，5.7 mmol)的DCM(40 mL)溶液中加入mCPBA(1.9 g，8.5 mmol)。将该溶液在室温下搅拌16小时。TLC和LC分析显示，形成目标产物。用DCM(200 mL)稀释该反应，用Na₂S₂O₃和Na₂CO₃水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，用硅胶快速色谱纯化，得到标题化合物。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.86(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.48(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.34(s, 2H), 4.33(m, 1H), 3.33(m, 1H), 2.75(m, 1H)。

中间体52

4-氟-5-氧杂环丙烷-2-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮

步骤A∶5-溴-4-氟-2-苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在-70℃，将正丁基锂溶液(40 mL，100 mmol)逐滴加入到二异丙基胺(10.6 g，105 mmol)的150 mL THF溶液中。将该混合物在0℃下搅拌15分钟，而后再次冷却至-70℃。逐滴加入4-溴-3-氟苯甲酸溶液(10 g，45.7 mmol，在50 mL THF中)。将得到的混合物在-70℃下搅拌1小时，然后向该混合物中鼓入CH₂O气体(如下产生CH₂O气体：将5.1 g的多聚甲醛加热至200℃)。将得到的混合物在-70℃下搅拌1小时，然后升温至室温，并再搅拌2小时。将HCl气体鼓入到该悬浮液中，鼓入15分钟，得到溶液。用1升EtOAc稀释该混合物，随后用水、饱和Na₂CO₃和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩，得到5-溴-4-氟-2-苯并呋喃-1(3H)-酮。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.72-7.75(m, 1 H), 7.58(d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.36(s, 2 H)。

步骤B∶4-氟-5-乙烯基-3H-异苯并呋喃-1-酮∶

在氮气氛围中，将5-溴-4-氟-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(5.0 g，21.6 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(4.4 g，32.5 mmol)和Pd(dppf)Cl₂(500 mg)在100 mL TEA和100 mL EtOH中的混合物回流加热4小时，而后浓缩。将所得到的油用柱色谱纯化，得到4-氟-5-乙烯基-3H-异苯并呋喃-1-酮。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.67-7.68(m, 2H), 6.90-6.97(m, 1H), 6.00(d, J=17.2 Hz, 1H), 5.60(d, J=11.0 Hz, 1H), 5.35(s, 2H)。

步骤C∶4-氟-5-氧杂环丙烷基-3H-异苯并呋喃-1-酮∶

在0℃，向4-氟-5-乙烯基-3H-异苯并呋喃-1-酮(4.0 g，17.3 mmol)的100 mL DCM溶液中慢慢地加入mCPBA(6.0 g，85%纯度，34.6 mmol)/50 mL DCM。加热至室温后，将该混合物搅拌过夜。用Na₂SO₃水溶液洗涤该混合物，直到KI试纸不变色为止。用盐水洗涤有机层，而后浓缩。用柱色谱纯化残余物，得到4-氟-5-氧杂环丙烷基-3H-异苯并呋喃-1-酮。¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 7.71(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.37-7.40(m, 1H), 5.37(s, 2H), 4.21-4.22(m, 1H), 3.25-3.27(m, 1H), 2.80-2.82(m, 1H)。

中间体53

(1R,3'r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-2'-酮

步骤A∶(1R,5S,E)-7-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代亚乙基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯∶

将2-氰基乙酸甲酯(4.39 mL，49.7 mmol)、(1R,5S)-7-氧代-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(8 g，33.2 mmol)、乙酸铵(3.83 g，49.7 mmol)和乙酸(7.59 mL，133 mmol)的甲苯(100 mL)溶液在150℃加热过夜，并用Dean-Stark分水器分离所产生的水。蒸发溶剂之后，将残余物溶于乙酸乙酯(200 mL)中，用饱和碳酸氢钠洗涤该溶液，用硫酸钠干燥，浓缩，用硅胶柱纯化残余物，使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1-100)⁺: 223.01。

步骤B∶(1R,5S,7s)-7-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代乙基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯∶

在0℃，用2小时向(1R,5S,E)-7-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代亚乙基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(10.82 g，33.6 mmol)和碘化铜(I)(6.39 g，33.6 mmol)的四氢呋喃悬浮液中慢慢地加入乙烯基溴化镁(50.3 mL，50.3 mmol)。将得到的混合物从0℃至室温搅拌2小时。用饱和氯化铵(300 mL)停止该反应，用乙酸乙酯提取该混合物三次，用硫酸钠干燥合并的有机相，然后浓缩，并将残余物在硅胶上纯化，使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+23)⁺: 372.94。

步骤C∶2-((1R,5S,7s)-9-(叔丁氧羰基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)-2-氰基乙酸∶

向(1R,5S,7s)-7-(1-氰基-2-甲氧基-2-氧代乙基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(1.3 g，3.7 mmol)的溶液(在四氢呋喃(10 mL)、甲醇(3 mL)和水(3 mL)的混合物中)中加入氢氧化锂(18.55 mL，18.55 mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌2小时。除去挥发物之后，在0℃，将碱性相用1N HC1酸化至pH4。然后，用30%异丙醇/二氯甲烷(3x100 mL)提取该混合物，并将合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M-100+1): 237.04。

步骤D∶(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯∶

将2-((1R,5S,7s)-9-(叔丁氧羰基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)-2-氰基乙酸(1.10 g，3.27 mmol)的DMF(10 mL)溶液在130℃下加热20分钟。冷却至室温后，在乙酸乙酯(200 mL)和盐水之间分配该反应混合物，用盐水洗涤有机相三次，用硫酸钠干燥，然后浓缩，用硅胶柱纯化残余物，使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M-100+l)⁺: 193.08。

步骤E∶(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-7-甲酰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯∶

向(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-7-乙烯基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(0.66 g，2.257 mmol)的二噁烷(10 mL)和水(3 mL)溶液中加入高碘酸钠(1.931 g，9.03 mmol)和四氧化锇(0.035 mL，0.113 mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜。接下来，加入硫代硫酸酯(2 g)，并将该混合物在室温下搅拌0.5小时。过滤该反应混合物，并将滤液在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠之间分配，用二氯甲烷(3x100 mL)提取碱性相。将合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M-100+1): 195.09。

步骤F∶(1R,5S,7r)-9-(叔丁氧羰基)-7-(氰基甲基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸∶

向(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-7-甲酰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁基酯(613 mg，2.083 mmol)的tert-BuOH(10 mL)和水(5 mL)溶液中加入磷酸二氢钠(750 mg，6.25 mmol)和2-甲基-2-丁烯(1.098 mL，10.41 mmol)。将该溶液冷却至0℃，并逐份加入亚氯酸钠(565 mg，6.25 mmol)。将该反应溶液在0℃下搅拌1小时。加入额外的磷酸二氢钠(750 mg，6.25 mmol)、2-甲基-2丁烯(1.098 mL，10.41 mmol)和亚氯酸钠(565 mg，6.25 mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌2小时，而后加入1N HCl至pH4，停止该反应。接下来，将该混合物在水(100 mL)中稀释，并用二氯甲烷(3x100ml)提取，同时用1N HCl保持pH4。将合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+23)⁺: 333.03。

步骤G∶(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

向(1R,5S,7r)-9-(叔丁氧羰基)-7-(氰基甲基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸(646 mg，2.082 mmol)的甲醇(10 mL)溶液中逐滴加入TMS-重氮甲烷(5.20 mL，10.41 mmol)，直到没有气泡为止，而后加入乙酸(几滴)，停止该反应。浓缩该混合物，得到标题化合物。LC/MS:(M+23)⁺: 346.98。

步骤H∶(1R,5S,7r)-7-(2-氨乙基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.l]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯∶

将(1R,5S,7r)-7-(氰基甲基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(0.58 g，1.788 mmol)和氧化铂(IV)(0.082 g，0.358 mmol)在甲醇(10 mL)和乙酸(10 mL)中的混合物、在45 Psi下氢化度过周末。在氮气氛围中，通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 329.04。

步骤I∶(1R,3'r,5S)-2'-氧代-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯∶

将(1R,5S,7r)-7-(2-氨乙基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸9-叔丁基7-甲基酯(0.59 g，1.797 mmol)和碳酸钾(1.490 g，10.78 mmol)在甲醇(50 mL)中的混合物回流加热4小时。蒸发溶剂之后，将残余物在二氯甲烷和水之间分配，并将水相用亚甲基（氯化物）提取五次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M+23)⁺: 319.03。

步骤J∶(1R,3'r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯∶

向(1R,3'r,5S)-2'-氧代-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯(0.42 g，1.417 mmol)和4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(0.454 g，1.842 mmol)的甲苯(15 mL)混合物中加入碳酸钾(0.588 g，4.25 mmol)、Xantphos(0.328 g，0.567 mmol)和水(0.077 mL，4.25 mmol)。将该混合物用氮气吹扫20分钟，而后加入醋酸钯(II)(0.064 g，0.283 mmol)。将得到的混合物在70℃下加热过夜。过滤后，将残余物用硅胶柱纯化，使用乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 393.24。

步骤K∶(1R,3'r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-2'-酮∶

向(1R,3'r,5S)-1'-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2'-氧代-3-氧杂-9-氮杂螺[二环[3.3.1]壬烷-7,3'-吡咯烷]-9-甲酸叔丁基酯(0.22 g，0.561 mmol)的二氯甲烷(4 mL)溶液中加入三氟乙酸(4 mL，51.9 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌2小时。除去挥发物之后，将残余物在离子交换柱上碱化，用甲醇洗涤，而后用1N氨/甲醇洗脱，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 293.21。

中间体54

6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(顺式，快速)

步骤A∶1-苄基-4-(氰基甲基)-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯∶

向250 mL 3颈圆底烧瓶中加入1-苄基-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯(10 g，38.27 mmol，1.00当量)的四氢呋喃(80 mL)溶液。而后，在搅拌下，在0℃，逐滴加入KHMDS的四氢呋喃溶液(42 mL，1M)，30分钟后，在搅拌下，在0℃，逐滴加入2-溴乙腈(6.89 g，57.44 mmol，1.50当量)。将得到的溶液在室温下搅拌4小时。真空浓缩得到的混合物。将残余物施加到硅胶柱上，并用乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到标题化合物。

步骤B∶4-(2-氨乙基)-1-苄基-3-羟基哌啶-4-甲酸乙酯∶

向10000 mL 4颈颈圆底烧瓶中加入1-苄基-4-(氰基甲基)-3-氧代哌啶-4-甲酸乙酯(180 g，599.30 mmol)的乙酸/甲醇(1:1，5.4升)溶液和氧化铂(27 g，118.90 mmol)。然后，将烧瓶用氢气吹扫，并装入氢气，在室温下搅拌过夜。在氮气氛围中，通过CELITE?过滤后，真空浓缩滤液，得到标题化合物。

步骤C∶8-苄基-6-羟基-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向10000 mL 3颈颈圆底烧瓶中加入4-(2-氨乙基)-1-苄基-3-羟基哌啶-4-甲酸乙酯(220 g，718.02 mmol，1.00当量)的甲醇(2000 mL)溶液和氨(2000 mL)。将得到的溶液在45℃搅拌过夜。真空浓缩得到的混合物。将残余物施加到硅胶柱上，并用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到标题化合物。

步骤D∶顺式-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯∶

向用氮气吹扫并保持氮气的惰性气氛的2000 mL 3颈圆底烧瓶中加入8-苄基-6-羟基-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(46.3 g，177.85 mmol，1.00当量)、Cs₂CO₃(115.9 g，354.62 mmol，1.99当量)、Xantphos(6.17 g，10.66 mmol，0.06当量)、Pd₂(dba)₃(5.52 g，6.03 mmol，0.03当量)和4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(56.92 g，231.23 mmol，1.30当量)的二噁烷(900 mL)溶液。将得到的溶液在80℃搅拌过夜。将得到的混合物冷却，并真空浓缩。用1000mL水稀释残余物，然后用乙酸乙酯提取。合并有机层，用1000 mL水和1000 mL盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物施加到硅胶柱上，用乙酸乙酯洗脱，得到反式-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯，LC/MS:(M+1)⁺: 357；H-NMR(300MHz, CDCl₃, ppm): δ 7.33-7.26(5H, m), 5.27-5.25(2H, m), 4.04-3.96(2H, m), 3.75-3.72(1H, m), 3.58(2H, d, J=2.4Hz), 2.88-2.75(3H, m), 2.55-2.50(1H, m), 2.40-2.12(3H, m), 2.09-2.00(4H, m), 1.57-1.55(1H, m)以及顺式-6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯。LC/MS:(M+1)⁺: 357；H-NMR(300MHz, CDCl₃, ppm): δ 7.33-7.26(5H, m), 5.27-5.25(2H, m), 4.06-3.94(3H, m), 3.61-3.50(2H, m), 2.93-2.81(1H, m), 2.79-2.74(1H, m), 2.57-2.48(1H, m), 2.19-2.12(2H, m), 2.03-2.02(3H, m), 1.97-1.85(2H, m), 1.68-1.58(2H, m)。

步骤D∶6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式)∶

向8-苄基-6-羟基-2-(2-甲基-3-氧代环戊-1-烯-1-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(ClS)(10 g，28.2 mmol)和碳酸二叔丁基酯(7.21 mL，31.0 mmol)的甲醇(50 mL)溶液中加入钯/炭(1.501 g，1.411 mmol)，并在45 Psi下，在室温下，对得到的混合物进行氢化度过周末。在氮气氛围中，通过CELITE?过滤该悬浮液，浓缩滤液，并将残余物用硅胶纯化，使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS :(M+ 1)⁺ : 367.17。

步骤E∶6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式，快速)和6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式，较慢)。

向6-羟基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式)(2 g，5.46 mmol)和氧化银(1.391 g，6.00 mmol)的乙腈(50 mL)混合物中加入甲基碘(3.41 mL，54.6 mmol)。在密封管中，将该混合物在60℃加热过夜。冷却至室温之后，过滤该混合物，浓缩滤液，用硅胶色谱纯化残余物，使用乙酸乙酯/己烷，得到6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式，外消旋体)。LC/MS:(M+1)⁺: 380.99。将该外消旋体在AD手性柱上进一步分离，得到6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(快速洗脱，顺式)，LC/MS:(M+1)⁺: 381.05，以及6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(较慢洗脱，顺式)。LC/MS:(M+1)⁺: 381.01。

步骤F∶6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(顺式，快速)∶

向6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(顺式，快速)(2.17 g，5.70 mmol)的二氯甲烷(7 mL)溶液中加入三氟乙酸(7 mL，91 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌2小时。浓缩之后，将残余物在离子交换柱上碱化，首先用甲醇洗涤，然后用1N氨/甲醇洗脱，得到6-甲氧基-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(顺式，快速)。LC/MS:(M+1)⁺: 281.11。

在下面实施例和上述中间体中，异构体“A”和异构体“B”(例如，异构体6A和6B，等等)，当从它的异构体混合物中分离时，基于所观察到的单一非对映体的洗脱顺序，分别指的是快速洗脱和较慢洗脱的非对映体。除了在母体异构体混合物中所定义的手性中心之外，没有测定每个分离的异构体的绝对立体化学，除非另有说明。

在没有测定每个分离的异构体的绝对立体化学的实施例中，可以在表明未指定的手性中心的位置的相关化学结构图中使用星号(*)。

实施例1

8-(2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

将(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙醛(I-3)(100 mg，粗品)和2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-16)(145 mg，0.58 mmol)在THF(5 mL)中的混合物、在室温下搅拌2小时，而后，将NaBH(OAc)₃(167 mg，0.79 mmol)加入到该混合物中，并在50℃下进一步搅拌3小时。用饱和NH₄Cl水溶液淬灭之后，用EtOAc提取该混合物，用Na₂SO₄干燥有机层。减压除去溶剂，用制备-TLC(EtOAc/MeOH∶1/1)和制备-HPLC纯化残余物，得到标题产物。MS(ESI)m/z: 425(M+H⁺); ¹H NMR(400 MHz, MeOD): δ 7.69(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.50(d, J=7.6 Hz, 1H), 5.38(s, 2H), 5.27-5.25(m, 2H), 4.20-4.14(m, 2H), 3.83-3.80(m, 1H), 3.68-3.66(m, 1H), 3.42-3.38(m, 2H), 3.33-3.23(m, 4H), 2.41(s, 3H), 2.39-2.30(m, 2H), 2.24-2.17(m, 2H), 2.10-2.03(m, 5H)。

利用与实施例1类似的方式，从上述制备的哌啶和醛中间体起始，制备下列表1中的化合物。

实施例5

8-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

将2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-16，200 mg，0.846 mmol)与4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4b)(177 mg，0.931 mmol)在乙醇(5 mL)中混合，并在微波装置中、在145℃下加热3小时。除去溶剂，并将残余物用制备TLC纯化，用25%甲醇/EtOAc洗脱，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 427(M+1)⁺。

实施例6

8-((R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

将3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-22，0.257 mmol)溶于乙醇(3 mL)中，并用二异丙基乙胺(135μl，0.771 mmol)处理，而后用(R)-4-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4B，73.3 mg，0.385 mmol)处理。在密封管中，将该混合物在80℃加热12小时。然后，将该反应混合物冷却至室温，并浓缩。将所得到的粗品用柱色谱纯化，用0-20% MeOH/EtOAc梯度洗脱，得到标题产物的非对映体的混合物。LC-MS(IE, m/z): 441.3(M+1)⁺。

实施例6A和6B(分离的单一异构体)

(R)-8-((R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮；和(S)-8-((R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-3-甲基-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(分离的异构体A和B)∶

使用SFC，在Chiralcel OD柱上，用30% MeOH(0.2% DEA)/CO₂洗脱，将实施例6的产物拆分，得到异构体6A(快速洗脱)∶LC-MS(IE, m/z): 441.3；以及异构体6B(较慢洗脱)LC-MS(IE, m/z): 441.3(M+1)⁺。

实施例7

8-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在密封管中，将2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-17，6.00 g，24.0 mmol)和4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4B，5.93 g，31.2 mmol)的乙醇(20 mL)溶液在95℃加热过夜。浓缩之后，用硅胶柱纯化残余物，使用甲醇/二氯甲烷，然后从甲醇中沉淀出来，得到标题化合物。LC/MS,(M+1)⁺: 440.93. .¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 7.845-7.809(m, 2H), 5.290-5.278(m, 4H), 5.139-5.1 12(m, 1H), 4.072-4.044(t, J=7.1Hz, 2H), 3.190-3.167(m, 1H), 2.876-2.859(m, 1H), 2.636-2.604(m, 2H), 2.468-2.42 l(m, 1H), 2.31 1(s, 3H),2.350-2.328(m, 1H), 2.193-2.165(t, J=7.1Hz, 2H), 2.101-2.039(m, 5H), 1.668-1.618(m, 2H)。

实施例8

8-[(2S)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在微波管中，向2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-17，10 mg，0.040 mmol)的乙醇(2 mL)溶液中加入(S)-4-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4A，9.9 mg，0.052 mmol))，并将得到的溶液在140℃下、在微波中加热3小时。浓缩之后，用制备TLC纯化残余物，使用30%甲醇/乙酸乙酯，得到标题化合物。LC/MS,(M+1)⁺: 441.00, ¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 7.840-7.804(m, 2H), 5.304-5.240(m, 4H), 5.134-5.107(m, 1H), 4.066-4.038(t, J=7.1Hz, 2H), 3.185-3.161(m, 1H), 2.8885-2.862(m, 1H), 2.629-2.568(m, 2H), 2.462-2.416(m, 1H), 2.305(s, 3H),2.344-2.323(m, 1H), 2.197-2.158(t, J=7.1Hz, 2H), 2.108-2.033(m, 5H), 1.661-1.604(m, 2H)。

实施例9

9-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-13-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2-氮杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷

在微波管中，向2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一-1-酮(I-19，50 mg，0.19 mmol)的乙醇(2 mL)溶液中加入(S)-4-甲基-5-(氧杂环丙烷-2-基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4B，43.2 mg，0.227 mmol))，并将得到的溶液在145℃下、在微波中加热35分钟。浓缩之后，用制备TLC纯化残余物(2000 Mm，8% MeOH/EtOAc)，得到标题化合物的游离碱。加入1M HCl/醚(189 mL，0.189 mmol)，使该游离碱转变为HCl盐，并浓缩至干。LC/MS,(M+1)⁺: 455。

利用与实施例5-9类似的方式，从指定的上述制备的哌啶和环氧化物中间体起始，制备下列表2中的化合物。

实施例47

8-[(2R)-2-氟-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶8-[(2S)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向4-甲基-5-[(2S)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4A)(200 mg，1.05 mmol)和2-(4-甲基-5-氧代-2，5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(300 mg，1.05 mmol)的10 mL EtOH悬浮液中加入DIPEA(271 mg，2.10 mmol)。将得到的混合物在80℃搅拌过夜，而后冷却至室温；真空除去溶剂。利用快速色谱(乙酸乙酯∶MeOH=20∶1)纯化残余物，得到标题化合物。MS-ESI(m/z): 441(M+1)⁺。

步骤B∶8-[(2R)-2-氟-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在-78℃，向步骤A的产物(170 mg，0.39 mmol)的5 mL DCM溶液中加入Et₃N.3HF(10滴)和DAST(5滴)。将该混合物搅拌过夜，并用NaHCO₃水溶液淬灭。分离有机层，并将水溶液用DCM提取。将该合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂，用制备TLC纯化残余物(EtOAc:MeOH=1:1)，得到标题化合物。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.81(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.61(d, J=7.8 Hz, 1H), 6.02-5.88(m, 1H), 5.28-5.22(m, 4H), 4.01(t, J=7.0 Hz, 2H), 3.06-2.85(m, 3H), 2.73-2.61(m, 1H), 2.46-2.38(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.11(t, J=7.0 Hz, 2H), 2.05-1.96(m, 5H), 1.55-1.50(m, 2H)。MS-ESI(m/z): 443(M+1)⁺。

实施例48

8-[(2S)-2-氟-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

利用与刚刚上面实施例47的合成中所描述的方式类似的方式，制备标题化合物，只不过从4-甲基-5-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4B)起始。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.81(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.61(d, J=7.8 Hz, 1H), 6.02-5.88(m, 1H), 5.28-5.23(m, 4H), 4.01(t, J=7.0 Hz, 2H), 3.05-2.86(m, 3H), 2.73-2.61(m, 1H), 2.46-2.38(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.13(t, J=7.0 Hz, 2H), 2.05-1.96(m, 5H), 1.55-1.50(m, 2H)。MS-ESI(m/z): 443(M+1)⁺。

实施例49

8-[(2R)-2-甲氧基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2-氮杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷

步骤A∶(S)-8-(2-氯-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在-10至-15℃(冰-NaCl)，向8-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例7)(1.1 g，2.5 mmol)和甲磺酰氯(0.584 mL，7.49 mmol)的DCM(30 mL)溶液中加入三乙胺(1.22 mL，8.74 mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.031 g，0.250 mmol)。将该混合物在相同温度下搅拌20分钟，用NH₄Cl水溶液淬灭。分离有机层，并将水溶液用DCM(30 mL)提取。干燥(MgSO₄)合并的有机层，减压浓缩，得到产物，其不用进一步纯化就在下一步使用。LCMS: 459.05(M+1)。

步骤B∶8-[(2R)-2-甲氧基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2-氮杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷∶

将一小块金属钠在甲醇(20 mL)中搅拌，直到钠消失为止。将步骤A的产物(45 mg，0.098 mmol)加入到该溶液中。将该混合物在室温下搅拌20分钟。加入3 mL 1N HCl，并将该混合物浓缩。将残余物溶于DMSO中，用Gilson反相HPLC纯化(3%-45%的0.1% TFA-水/0.1% TFA-AcCN)，得到标题化合物。¹HNMR(500 MHz), δ 7.82(1 H, d, J=7.6 Hz), 7.70(1 H, d, J=7.8 Hz), 5.42(2 H, s), 5.28(2 H, s), 5.20(1 H, m), 4.15(3 H, s), 3.50-3.90(4 H, m), 3.12-3.50(4 H, m), 2.45(3 H, s), 2.15-2.37(4 H, m), 2.07(3 H, s), 1.95-2.05(2 H, m)。LC-MS 455.1(M+1), 477.09(M+23)。

实施例50

8-[(2R)-2-乙氧基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

使用基本上与实施例49相同的方法，制备标题化合物，只不过在步骤B中使用乙醇代替甲醇作为反应溶剂。LC-MS: 469.13(M+1)。

实施例51

8-[(2R)-2-甲氧基-2-(4-甲基-1-氧代-13-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

使用基本上与实施例49相同的方法，制备标题化合物，只不过从8-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮起始。LC-MS: 441(M+1)。

实施例52

1-氧代-2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-8-[(3-氧代-3,6,8,9-四氢-1H-呋喃并[3,4-f]异苯并吡喃-6-基)甲基]-2-氮杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷∶

在微波管中，将(3-氧代-3,6,8,9-四氢-1H-呋喃并[3,4-f]异苯并吡喃-6-基)甲基-4-甲基苯磺酸酯(I-8)(80 mg，0.21 mmol)与2-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-16)(50.5 mg，0.214 mmol)和三乙胺(30μl，0.21 mmol)在乙腈(2 mL)中混合，并在140℃加热。除去溶剂，用MPLC纯化残余物，用5%甲醇/DCM洗脱，得到标题化合物的两个对映体的混合物。LC-MS: 439(M+1)。

实施例53A、53B、53C、53D(四个单一异构体)

8-((1S,2R)-1-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮；

8-((1R,2R)-1-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮；

8-((1R,2S)-1-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮；和

8-((1S,2S)-1-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。

(分离为四个单一异构体)

向在叔戊醇(2.7 mL)中的5-(1,2-二羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(I-6)(300 mg，1.35 mmol)和2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-17)(405 mg，1.62 mmol)中加入2-(二环己基膦基)-1-苯基-1H-吡咯(82 mg，0.243 mmol)和羰合钌(51.8 mg，0.081 mmol)。将该反应混合物脱气，并在140℃下加热两天。浓缩该反应混合物，用柱色谱(0-10% MeOH/DCM)纯化，分离顺式和反式异构体。然后，将所得到的顺式和反式异构体分别用SFC-HPLC纯化，使用下列条件∶chiralpak AD，30x250mm，65% MeOH+0.2% DEA，70mL/min，得到标题化合物的四个单一异构体。没有给出绝对立体化学，此时，可以确定每个异构体。它们被指定为下列形式∶异构体53A∶从MeOH柱色谱中快速洗脱，从SFC-HPLC中快速洗脱；LC/MS:[(M+1)]⁺=455。异构体53B∶从MeOH柱色谱中快速洗脱，从SFC-HPLC中较慢洗脱；LC/MS:[(M+1)]⁺=455。异构体53C∶从MeOH柱色谱中慢速洗脱，从SFC-HPLC中快速洗脱；LC/MS:[(M+1)]⁺=455。异构体53D∶从MeOH柱色谱中较慢洗脱，从SFC-HPLC中较慢洗脱；LC/MS:[(M+1)]⁺=455。

实施例54

8-(2-(环丙基氨基)-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶8-(2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-氧代乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

在室温下，将2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-17)(2 g，7.99 mmol)、5-(2-溴-乙酰基)-4-甲基-3H-异苯并呋喃-1-酮(I-4B，方法2，步骤F)(2.150 g，7.99 mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3.48 mL，19.98 mmol)在DCM(50 mL)中搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液和盐水洗涤该混合物，用MgSO₄干燥，减压浓缩。粗品不用进一步纯化就用于下一步。¹H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ ppm 7.83(1 H, d, J=7.8 Hz), 7.79(1 H. .d, J=7.8 Hz), 5.34(2 H, s), 5.32(2 H, s), 5.26(2 H, s), 4.03(2 H, t, J=7.0 Hz), 3.71(1 H, m), 3.15(1 H, m), 2.94(2 H, m), 2.47(2 H, t, J=7.0 Hz), 2.42(3 H, s), 2.17(2 H, m), 2.07(3 H, s), 2.02(2 H, m), 1.58(2 H, m)。LCMS 438.9(M+1)。

步骤B∶8-(2-(环丙基氨基)-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向8-(2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-氧代乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(25 mg，0.057 mmol)和环丙胺(6.5 mg，0.114mmol)的无水5% HOAc/THF(1ml)混合物中加入NaCNBH₃(18 mg，0.28 mmol)。

密封该反应，并在环境温度下摇动16小时。LCMS表明产物形成。将该反应用水(0.5 mL)淬灭，并减压蒸发溶剂。将残余物溶于DMSO(1.5 mL)中，并过滤。用反相HPLC纯化粗品(乙腈(含有0.1% TFA)∶水(含有0.1% TFA)，10%至60%)，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 480[M+1]⁺。

利用与上面8-(2-(环丙基氨基)-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例54，步骤B)类似的方式，从8-(2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-氧代乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例54，步骤B)和指定的胺起始，制备下面表3中的实施例。

实施例60

8-[2-(甲基氨基)-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

向8-(2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-氧代乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(25 mg，0.057 mmol)和甲胺(4 mg，0.114 mmol)的无水THF混合物中加入Ti(O-iPr)₄(35μl，0.114mmol)。密封该反应，并在环境温度下摇动16小时。向该反应中加入EtOH(200 proof(标准酒精度)，0.5 mL)，而后在30分钟之内逐份加入NaBH₄(11 mg，0.171 mmol)。将该反应摇动3小时，并用水(0.5 mL)淬灭。将该反应在EtOAc(4 mL X 2)和铵(2N，1.5 mL)之间分配。合并有机相，并减压蒸发。将残余物溶于DMSO(1.5 mL)中，并过滤。用反相HPLC纯化粗品(乙腈(含有0.1% TFA)∶水(含有0.1% TFA)，10%至60%)，得到标题化合物。LC-MS(IE, m/z): 454[M+1]⁺。

实施例61

(S)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶(S)-8-(2-叠氮基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向8-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例7，300 mg，0.68 mmol)和叠氮磷酸二苯酯(578 mg，1.36 mmol)的悬浮液(甲苯和二氯甲烷(v : v，10∶1，11 mL)的混合溶剂中)中加入DBU(310 mg，1.36 mmol)。将该反应混合物在35℃下搅拌20小时。蒸发除去溶剂，并将残余物用快速柱色谱纯化(0-100%乙酸乙酯/石油醚梯度)，得到标题化合物。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.32(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.50(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.20(s, 2H), 5.18(s, 2H), 4.94(dd, J=4.0 Hz, 9.2 Hz, 1H), 3.94(t, J=6.8 Hz, 2H), 2.88-2.85(m, 2H), 2.72-2.67(m, 1H), 2.54-2.50(m, 1H), 2.42-2.39(m, 1H), 2.33-2.27(m, 4H), 2.04(t, J=6.8 Hz, 2H), 1.95(s, 3H), 1.94-1.87(m, 2H), 1.51-1.47(m, 2H); MS-ESI(m/z): 466(M+1)⁺。

步骤B∶(S)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在氮气氛中，向(S)-8-(2-叠氮基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(200 mg，0.43 mmol)的溶液(在四氢呋喃和水(v:v，12:1，20 mL)的混合溶剂中)中加入三苯基膦(225 mg，0.86 mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。蒸发除去溶剂，用制备TLC纯化残余物(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)，得到标题化合物固体。

¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.86(d, J=7.6 Hz, 1H), δ 7.53(d, J=7.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 5.22(s, 2H), 4.50(dd, J=4.0 Hz, 8.8 Hz, 1H), 3.98(t, J=6.8 Hz, 2H), 3.04-3.01(m, 1H), 2.81-2.78(m, 1H), 2.40-2.34(m, 2 H), 2.30(s, 3H), 2.18-2.08(m, 4H), 2.01(s, 3H), 2.00-1.95(m, 2H), 1.51-1.47(m, 2H); MS-ESI(m/z): 440(M+1)⁺。

实施例62

(R)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶(R)-8-(2-叠氮基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向8-[(2S)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例8，500 mg，1.13 mmol)和叠氮磷酸二苯酯(643 mg，1.36 mmol)的悬浮液(在甲苯和二氯甲烷(v:v，10:1，11 mL)的混合溶剂中)中加入DBU(343 mg，2.26 mmol)。将该反应混合物在35℃下搅拌20小时。蒸发除去溶剂，并将残余物用快速柱色谱纯化(0-100%，乙酸乙酯/石油醚)，得到标题化合物。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ 7.78(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.55(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.26(s, 2H), 5.23(s, 2H), 4.99(dd, J=4.0 Hz, 9.2 Hz, 1H), 4.00(t, J=6.8 Hz, 2H), 2.95-2.87(m, 2H), 2.78-2.73(m, 1H), 2.60-2.57(m, 1H), 2.48-2.43(m, 1H), 2.33(s, 3H), 2.10(t, J=6.8 Hz, 2H), 2.03-1.86(m, 6H), 1.51-1.48(m, 2H); MS-ESI(m/z): 466(M+1)⁺。

步骤C∶(R)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在氮气氛中，向(R)-8-(2-叠氮基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(250 mg，0.54 mmol)的溶液(在四氢呋喃和水(v : v，12∶1，20 mL)的混合溶剂中)中加入三苯基膦(283 mg，1.08 mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。蒸发除去溶剂，用制备TLC纯化残余物(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)，得到标题化合物。¹H NMR(400 MHz, 甲醇-d4): δ 7.80(d, J=8.0 Hz, 1H), δ 7.66(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.40(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.73(dd, J=4.0 Hz, 8.8 Hz, 1H), 4.09(t, J=6.8 Hz, 2H), 3.30-3.21(m, 1H), 2.98-2.91(m, 1H), 2.87-2.81(m, 1H), 2.70-2.66(m, 1H), 2.55-2.47(m, 2H), 2.40(s, 3H), 2.18-2.07(m, 4H), 2.00(s, 3H), 1.74-1.68(m, 2H)。MS-ESI(m/z): 440(M+1)⁺。

实施例63

{(1R)-1-(4-甲基-1-氧代-1,3--二氢-2-苯并呋喃-5-基)-2-[2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基]乙基}氨基甲酸甲酯

在0℃，在氮气氛中，向(R)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(实施例62)(35 mg，0.08 mmol)和三乙胺(17μl，0.12 mmol)的二氯甲烷(2 mL)溶液中加入氯甲酸甲酯(11 mg，0.12 mmol)。将该反应混合物升温至室温，并搅拌2小时。TLC表明，起始原料剩余一半。将该反应混合物再冷却至0℃，并向其中加入三乙胺(17μl，0.12 mmol)，而后加入氯甲酸甲酯(11 mg，0.12 mmol)。将该反应混合物升温至室温，并再搅拌2小时。TLC显示反应完成。将得到的混合物真空浓缩。将残余物吸收在少量的DCM中，用制备TLC纯化(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)，得到标题化合物。MS-ESI(m/z): 498(M+1)⁺。

实施例64

(R)-N-(1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-(2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)乙基)甲磺酰胺

在0℃，在氮气氛中，向(R)-8-(2-氨基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(30 mg，0.068 mmol)和三乙胺(29μl，0.20 mmol)的DCM(2 mL)溶液中加入甲磺酰氯(5.3μl，0.068 mmol)。将该反应混合物升温至室温，并搅拌3小时。TLC显示反应完成。蒸发溶剂，得到残余物，将其吸收在少量的DCM中，并用制备TLC纯化(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)，得到标题化合物。¹H NMR(400 MHz, CDCls): δ 7.63(dd, J=8.0 Hz, J=8.8 Hz, 2H), 5.30(s, 2H), 5.15(s, 2H), 4.95-4.92(m, 1H), 4.00(t, J=7.2 Hz, 2H), 2.94-2.91(m, 1H), 2.82-2.78(m, 1H), 2.72(s, 3H), 2.65-2.59(m, 1H), 2.42-2.39(m, 1H), 2.38-2.24(m, 4H), 2.21-2.18(m, 1H), 2.07(t, J=7.2 Hz, 2H), 1.92(s, 3H), 1.86-1.72(m, 2H), 1.52-1.47(m, 2H)。MS-ESI(m/z): 518(M+1)⁺。

实施例65

1'-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-氧代-1-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,2-二氢螺[吲哚-3,4'-哌啶鎓]

步骤A∶(R)-1'-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)螺[二氢吲哚-3,4'-哌啶]-2-酮∶

将商购的螺[二氢吲哚-3,4'-哌啶]-2-酮盐酸盐(500 mg，2.10 mmol)与4-甲基-5-[(2S)-氧杂环丙烷-2-基]-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(I-4A)(398 mg，2.10 mmol)和DIEA(439μL，2.51 mmol)在乙醇(7 mL)中混合，并在80℃下加热3小时。浓缩该反应混合物，用MPLC纯化，首先用30%的乙酸乙酯/己烷洗脱，而后用10%甲醇/DCM洗脱，得到标题化合物的区域异构体的混合物。MS-ESI(m/z): 393(M+1)⁺。

步骤B∶1'-[(2R)-2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基)乙基]-2-氧代-1-(5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-1,2-二氢螺[吲哚-3,4'-哌啶鎓]∶

在微波管中，将(R)-1'-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)螺[二氢吲哚-3,4'-哌啶]-2-酮(502 mg，1.28 mmol)、4-溴呋喃-2-酮(250 mg，1.53 mmol)、碳酸铯(625 mg，1.92 mmol)、Pd(dba)₂(37 mg，0.064 mmol)、Xantphos(111 mg，0.192 mmol)在5 mL甲苯中混合。用氮气吹扫该悬浮液，并在90℃加热过夜。通过CELITE?过滤该反应混合物，并用乙酸乙酯洗涤，浓缩滤液。用MPLC纯化粗品，首先使用乙酸乙酯/己烷梯度，然后使用10%甲醇/DCM洗脱产物。为了将目标产物与杂质和区域异构体分离，用制备TLC进一步纯化残余物(10%甲醇/DCM)，并用SFC HPLC纯化，使用chiralcel OD柱。MS-ESI(m/z): 475(M+1)⁺。

利用与实施例5-9类似的方式，从指定的上述制备的哌啶和环氧化物中间体起始，制备下列表4中的化合物。在得到异构体的混合物的情况下，使用SFC手性HPLC，分离异构体，使用指定的HPLC柱。

实施例84A和84B（分离的单一异构体）

(S)-8-(1-羟基-3-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，和

(R)-8-(1-羟基-3-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶5-(2,3-二羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向4-甲基-5-丙-2-烯-1-基-2-苯并呋喃-1(3H)-酮(参见I-3的步骤A)(2.00 g，10.6 mmol)的丙酮(30 mL)和水(10 mL)溶液中加入OsO₄(0.27 g，1.06 mmol)和NMO(6.70 g，1 1.7 mmol)，并将该溶液在25℃下搅拌18小时。将该反应混合物用水(30 mL)稀释，并将水层用CH₂Cl₂(3 X 40 mL)提取。合并有机层，用盐水(2 X 40 mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。用快速柱色谱纯化残余物(0-10%甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物。

步骤B∶5-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向5-(2,3-二羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(2.00 g，9.0 mmol)的无水DMF(20 mL)溶液中加入咪唑(1.20 g，18.0 mmol)和TBSCl(1.50 g，9.9 mmol)。在25℃下搅拌2.5小时之后，将该反应混合物用CH₂Cl₂(50 mL)稀释，用水(3 X 20 mL)和饱和NaHCO₃(3 X 20 mL)洗涤。将合并的水层用CH₂Cl₂(20 mL)提取五次。将合并的有机层用盐水(3 X 30 mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。用快速柱色谱纯化残余物(0-60%，乙酸乙酯/石油醚)，得到标题化合物。

步骤C∶5-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-氧代丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

向5-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(1.00 g，3.0 mmol)的CH₂Cl₂(30 mL)溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(6.30 g，15.0 mmol)。在25℃下搅拌12小时之后，通过SiO₂的薄垫过滤该反应混合物，用CH₂Cl₂(100 mL)作为洗脱溶剂。浓缩之后，用快速柱色谱纯化残余物(0-60%，乙酸乙酯/石油醚)，得到标题化合物。

步骤D∶8-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向5-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-氧代丙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(0.50 g，1.5 mmol)的甲醇(20 mL)溶液中加入2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(I-17)(0.45 g，1.8 mmol)和异丙醇化钛(IV)(2.10 g，7.5 mmol)。在室温下搅拌48小时之后，加入氰基硼氢化钠(190 mg，3.0 mmol)，并将该反应混合物在室温下搅拌20小时。用水(10 mL)淬灭该反应混合物，并滤出所得到的无机沉淀，用甲醇(50 mL)洗涤。然后浓缩滤液，并将粗品溶于乙酸乙酯中，过滤，除去残留的无机固体，浓缩。用快速柱色谱纯化残余物(0-10%甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物。LC-MS(ESI, m/z): 569[M+1]⁺。

步骤E∶8-(1-羟基-3-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在0℃，向8-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(0.10 g，0.18 mmol)的DCM(3 mL)溶液中加入三氟乙酸(3 mL)。在室温下搅拌24小时之后，减压除去溶剂，用制备HPLC纯化残余物，得到标题化合物，用SFC手性色谱分离，得到两个单一对映体异构体A(快速洗脱)和异构体B(较慢洗脱)。柱∶CHIRALPAK AD 250x30 mm I.D., 20μm； 移动相∶超临界CO₂/EtOH(0.2% ΝΗ₃.H₂O)=45/55；流速∶80 ml/min。对两个异构体∶LC-MS(ESI, m/z): 455[M+1]⁺。

实施例85A和85B(分离的单一异构体)

(S)-8-(1-羟基-2-甲基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮，和

(R)-8-(1-羟基-2-甲基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮

步骤A∶2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁基酯(I-11)(5.0 g，19.7 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中加入三氟乙酸(15.2 mL，197 mmol)，并将得到的溶液在室温下搅拌1小时。蒸发挥发物之后，在离子交换柱上碱化残余物，用甲醇洗涤，而后用1N氨/甲醇洗涤，得到2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 155.11。

步骤B∶2-甲基-2-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)丙酸乙酯∶

将2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(3.03 g，19.65 mmol)、三乙胺(5.48 mL，39.3 mmol)和2-溴-2-甲基丙酸乙酯(5.77 mL，39.3 mmol)的混合物在80℃加热过夜。将该反应混合物在二氯甲烷(200 mL)和饱和碳酸氢钠之间分配，用二氯甲烷(3x100 mL)提取碱性相。用硫酸镁干燥合并的有机相，浓缩，并将残余物在硅胶上纯化，使用甲醇/二氯甲烷，得到标题化合物。LC/MS(M+1)⁺: 269.4。

步骤C∶2-甲基-2-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)丙醛∶

在-78℃，向2-甲基-2-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)丙酸乙酯(3.77 g，14.1 mmol)的甲苯(100 mL)溶液中逐滴加入DIBAL-H(45.0 mL，45.0 mmol)。2小时之后，逐滴加入甲醇(10 mL)，猝灭该反应，加热至室温之后，加入30 mL饱和硫酸钠溶液，并将该混合物在室温下强力搅拌1小时。过滤后，将滤液和滤饼在DCM和饱和碳酸氢钠之间分配，用DCM提取碱性相三次，用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，得到标题化合物。LC/MS(M+1+18)⁺: 243.3;(M+1+32)⁺: 257.4。

步骤D∶4-甲基-5-(三甲基甲锡烷基)异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在密封管中，将4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基三氟甲磺酸酯(5.0 g，16.9 mmol)、氯化锂(4.29 g，101 mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(1.951 g，1.688 mmol)的二噁烷(30 mL)溶液用氮气脱气0.5小时，而后加入六甲二锡烷(5.25 mL，25.3 mmol)，将该管密封，并在100℃加热过夜。通过CELITE?过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，使用乙酸乙酯/己烷，得到4-甲基-5-(三甲基甲锡烷基)异苯并呋喃-1(3H)-酮。LC/MS:(M+1)⁺: 308.99; 310.87; 312.78。

步骤E∶5-溴-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮∶

在0℃，向4-甲基-5-(三甲基甲锡烷基)异苯并呋喃-1(3H)-酮(4.37 g，14.05 mmol)的DCM(20 mL)溶液中加入溴(0.796 mL，15.46 mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。加入饱和硫代硫酸盐溶液，并将该混合物用二氯甲烷(2x100 mL)提取，用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，得到5-溴-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮。LC/MS:(M+1)⁺:226.89; 228.89。

步骤F∶5-溴-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-1-醇∶

在-78℃，向5-溴-4-甲基异苯并呋喃-1(3H)-酮(3.45 g，15.19 mmol)的甲苯(100 mL)溶液中逐滴加入DIBAL-H(21.27 mL，21.27 mmol)。在-78℃下搅拌2小时之后，在-78℃，用甲醇停止该反应，然后加热至室温，然后加入20 mL饱和硫酸钠，并将该混合物在室温下强力搅拌30分钟。然后，过滤该混合物，并用乙酸乙酯洗涤。用饱和碳酸氢钠洗涤滤液，用硫酸钠干燥，然后浓缩，得到标题化合物。LC/MS:(M-17)⁺: 210.92; 212.91。

步骤G∶((5-溴-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-1-基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷

在0℃，将TBS-Cl(3.63 g，24.10 mmol)的二氯甲烷(15 mL)溶液加入到5-溴-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-1-醇(2.76 g，12.1 mmol)和咪唑(1.72 g，25.3 mmol)的二氯甲烷(80 mL)溶液中，并将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将该混合物在DCM和水之间分配，用二氯甲烷提取水相，用硫酸钠干燥合并的有机相，然后浓缩，用硅胶柱纯化残余物，使用乙酸乙酯/己烷，得到标题化合物。LC/MS:(M-131)⁺: 210.91 ; 212.91。

步骤H∶8-(1-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在-78℃，向((5-溴-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-1-基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(3.9 g，11.36 mmol)的四氢呋喃(50 mL)溶液中加入正丁基锂(5.00 mL，12.50 mmol)。15分钟之后，以一份形式加入2-甲基-2-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)丙醛(0.892 g，3.98 mmol)。将得到的溶液在-78℃下搅拌3.5小时，而后加入甲醇(6 mL)和饱和碳酸氢钠(100 mL)进行淬灭。将该混合物用30%异丙醇/二氯甲烷(3x100mL)提取。用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，并将残余物在硅胶上纯化，使用甲醇/二氯甲烷，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺: 489.15。

步骤I∶8-(1-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

向8-(1-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(1.35 g，2.76 mmol)、4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基三氟甲磺酸酯(I-9)(0.884 g，3.59 mmol)的甲苯(40 mL)混合物中加入碳酸钾(0.764 g，5.52 mmol)、Xantphos(0.320 g，0.552 mmol)和水(0.149 mL，8.29 mmol)。将该混合物用氮气吹扫20分钟，而后加入醋酸钯(II)(0.062 g，0.276 mmol)。将得到的混合物在70℃下加热过夜。过滤后，浓缩滤液，并将残余物用硅胶柱纯化，使用甲醇/二氯甲烷作为洗脱溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1-114)⁺:471.22。

步骤J∶8-(1-羟基-1-(1-羟基-4-甲基-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-甲基丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在0℃，向步骤I的产物(1.282 g，2.192 mmol)的四氢呋喃(50 mL)溶液中加入TBAF(2.63 mL，2.63 mmol)，并将得到的溶液在0℃下搅拌2小时。浓缩之后，用TLC纯化残余物，使用10% MeOH/DCM洗脱，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:471.20。

步骤K∶8-(1-羟基-2-甲基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮∶

在0℃，向步骤J的产物(340 mg，0.723 mmol)的二氯甲烷(30 mL)溶液中加入PCC(311 mg，1.45 mmol)，并将得到的溶液在0℃下搅拌2小时。将该反应混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢盐之间分配，用二氯甲烷(3x50 mL)提取碱性相。用硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩，并将残余物在TLC上纯化，使用10%甲醇/二氯甲烷作为展开溶剂，得到标题化合物。LC/MS:(M+1)⁺:469.20。

步骤L∶8-(1-羟基-2-甲基-1-(4-甲基-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)丙-2-基)-2-(4-甲基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(分离的单一异构体)∶

利用SFC，在OJ柱上分离标题化合物(异构体混合物)(100 mg，0.213 mmol)，得到两个异构体。异构体A(快速洗脱)∶LC/MS:(M+1)⁺:469.25; ¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ 7.766-7.289(m, 2H), 5.287(s, 2H), 5.261(s, 2H), 5.139(s, 1H), 4.072-4.044(t, J=7.1Hz, 2H), 3.190-3.088(m, 2H), 2.545-2.506(m, 2H), 2.341(s, 3H), 2.191-2.162(m, 2H), 2.066-2.037(m, 2H), 1.695-1.670(m, 2H), 0.985(s, 3H), 0.956(s, 3H)。异构体B(较慢洗脱)：LC/MS:(M+1)⁺:469.25。¹HNMR(500 MHz, CDCl₃), δ7.825-7.768(m, 2H), 5.289(s, 2H), 5.262(s, 2H), 5.138(s, 1H), 4.073-4.044(t, J=6.9Hz, 2H), 3.191-3.086(m,2H), 2.592-2.502(m, 2H), 2.34 l(s, 3H), 2.191-2.162(m, 2H), 2.066-2.037(m, 2H), 1.695-1.670(m, 2H), 0.985(s, 3H), 0.956(s, 3H)。

对于实施例中的每个最终产品化合物，进行下列铊通量试验和/或电生理学试验，除非在实施例中另作说明。

铊通量试验

细胞培养条件

将稳定表达hROMK(hKir1.1)的HEK293细胞在37℃、在10% CO₂加湿的培养箱中、在完全生长培养基中培养，其中完全生长培养基是补充有非必要的氨基酸、青霉素/链霉素/谷氨酰胺、G418和FBS的Dulbecco改进的Eagle培养基。融合大于80%时，从烧瓶中吸出培养基，并用10 mL不含钙/镁的PBS冲洗。将5 mL IX胰蛋白酶(在不含Ca/Mg的PBS中制备)加入到T-225烧瓶中，将烧瓶放回到37℃/CO₂培养箱中2-3分钟。为了取出细胞，用你的手轻轻地拍打烧瓶的侧面。将细胞彻底研磨，而后将细胞转移到25 mL完全培养基中。在1,500 rpm下离心6分钟，而后再悬浮在完全生长培养基中，并测定细胞浓度。为了典型地再播种，在4天内，使4E6细胞/T-225烧瓶达到80%以上的融合度。在理想生长条件和适当的组织培养实践下，40-45次传代的这种细胞株是稳定的细胞株。

FluxOR试剂盒组分(Invitrogen F10017)

· FluxOR?试剂(组分A)

· FluxOR?试验缓冲液(组分B)-10X浓缩

· PowerLoad?浓缩物(组分C)-100X浓缩

· 丙磺舒(组分D)-将冷冻干燥的样品保持在-20℃下。水溶性的，在1 mL水中溶解之后，100X。在4℃保存。

· FluxOR?不含氯化物的缓冲液(组分E)-5X浓缩

· 硫酸钾(K₂SO₄)浓缩物(组分F)-125 mM，在水中。在4℃保存。

· 硫酸铊(Tl₂SO₄)浓缩物(组分G)-50 mM，在水中。在4℃保存。

·DMSO(二甲亚砜，组分H)-1 mL(100%)。

试剂制备∶FluxOR工作溶液

· 1000X FluxOR?试剂∶将一小瓶组分A在100μl DMSO中重组；充分混合；在-20℃下保存10μl等分样品

· IX FluxOR?试验缓冲液∶用水将组分B稀释10倍；用Hepes/NaOH将pH值调节到7.4；过滤，并在4℃下保存。

· 丙磺舒/试验缓冲液∶100 mL IX FluxOR?试验缓冲液；1 mL重组组分D；在4℃下保存

· 荷载缓冲液(每个微板)∶10μl 1000X FluxOR?试剂；100μl组分C；10 mL丙磺舒/试验缓冲液

· 化合物缓冲液(每个微板)∶20 mL丙磺舒/试验缓冲液；0.3 mM乌本苷(可以在室温下将10 mM乌本苷(在水中)保存在琥珀色瓶/铝箔中)；试验化合物

· 1X FluxOR? 不含氯化物的缓冲液∶在水中制备IX工作溶液。可以在室温下保存。

· 刺激缓冲液(5X最终浓度，在1X FluxOR?不含氯化物的缓冲液中制备)∶7.5 mM硫酸铊和0.75 mM硫酸钾(得到3 mM铊/0.3 mM钾的最终试验浓度)。当不使用时，在4℃保存。如果保持无菌，此溶液在几个月内都有效。

试验方案

使用FLIPR-Tetra装置，在384孔(板)中，进行ROMK通道功能性的铊通量试验。将HEK-hKir1.1细胞播种在Poly-D-赖氨酸微板中，并且在37℃-10% CO₂培养箱中保持过夜。实验当天，用FluxOR?试剂荷载缓冲液替换生长培养基，在环境温度(23-25℃)下避光培养90分钟。用试验缓冲液±试验化合物替换荷载缓冲液，而后在环境温度下培养30分钟，将铊/钾刺激剂加入到微板中。

步骤方案

1. 将HEK-hKir1.1细胞(50μl，20,000个细胞/孔)播种在384孔PDL涂渍的微板中

2. 在加湿的37℃/10% CO₂培养箱中，使细胞粘附过夜

3. 从微板中彻底地除去细胞生长培养基，并用25μl荷载缓冲液替换

4. 将微板在室温下避光培养90分钟

5. 除去荷载缓冲液，并用25μl 1x试验缓冲液±试验化合物替换。

6. 将微板在室温下避光培养30分钟

7. FLIPR-Tetra 384∶将刺激剂(铊/钾)溶液加入到微板中，并检测荧光。激发=400 nm，发射=460 & 580 nm。收集～10分钟的数据。

数据计算

含有3μΜ本发明的标准对照物ROMK抑制剂的孔的荧光强度用于定义铊流量的ROMK敏感性组分。相对于对照物值，将试验化合物存在下的荧光归一化，提供%荧光变化。IC₅₀值代表抑制50%的ROMK铊流量信号的化合物的浓度。

试验标准

通常包括对照化合物，相比于先前的测定，证明试验得出一致的结果，尽管不要求对照物获得试验化合物的结果。对照物可以是本发明的任何式I的化合物，优选，在该试验中IC₅₀效能低于1μΜ的化合物。或者，对照物可以是在该试验中IC₅₀效能低于1μΜ的另一化合物(超出式I范围)。

电生理学试验

使用Ion Works Quattro自动化电生理学平台(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)，用完整的细胞电压钳检验Kir1.1(ROMK1)电流的抑制状况(Hamill等人Pfluegers Archives 391:85-100(1981))。在湿润的10% CO₂培养箱中，在37℃，将稳定地表达Kir1.1通道的中国仓鼠卵巢细胞保持在T-75烧瓶中的细胞培养基中。在实验之前，通过用1 mM丁酸钠过夜培养，引起Kir1.1表达。实验的当天，在37℃，用2.5 mL维尔烯(Versene)(Invitrogen 15040-066)将细胞溶解大约6分钟，并悬浮在10 mL含有150mM NaCl、10 mM KCl、2.7 mM CaCl₂、0.5 mM MgCl₂、5 mM HEPES的浴溶液(pH7.4)中。离心之后，将细胞团再悬浮在大约4.0 mL浴溶液中，并放入Ion Works仪器中。胞内溶液由下列物质组成(按mM)∶80葡糖酸Ｋ、40 KCl、20 KF、3.2 MgCl₂、3 EGTA、5 Hepes，pH7.4。通过在0.13 mg/mL两性霉素B中穿孔4分钟，电进入细胞质。将两性霉素B(Sigma A-4888)在DMSO中制备为40 mg/mL的溶液。

使用Ion Works HT软件/硬件系统，进行电压方案和电流记录。采集1 kHz下的电流样品。使用没有校正的液体接界电位。在6分钟化合物培养期的前后，施加试验脉冲，试验脉冲的组成如下：100 ms，从-70 mV的钳制电压变到0 mV，而后100 ms，电压从-70 mV斜线上升至+70 mV。如下制备试验化合物：将DMSO储备溶液稀释到电解液中，3x最终浓度，放入仪器中的96孔聚丙烯板中。使用Ion Works软件，测定电流振幅。为了评价化合物效能，利用Microsoft Excel(Microsoft, Redmond, CA)计算电压阶跃至0 mV期间的分级抑制，并且将剂量－响应曲线与Igor Pro 4.0 (WaveMetrics, Lake Oswego, OR)拟合。通常包括对照化合物，相比于先前的测定，证明试验得出一致的结果，尽管不要求对照物获得试验化合物的结果。对照物可以是本发明的式I-V的任何化合物，优选，IC₅₀效能在该试验中低于1μΜ的化合物。或者，对照物可以是在该试验中IC₅₀效能低于1μΜ的另一化合物(超出式I-V的范围)。

使用铊通量试验和电生理学试验所收集的本发明实施例的化合物的数据示于下面表5中。在铊通量试验和电生理学试验中的一个或两个试验中，所有试验的实施例的最终产物化合物(非对映体的混合物和单一非对映体)的IC₅₀效能低于1μΜ。

自发性高血压大白鼠(SHR)试验

自发性高血压大白鼠(SHR)显示出年龄依赖性高血压，既不需要给予升高血压的外原性药剂，也不需要升高血压的高盐饮食。由此，它类似于人类的原发性高血压，并且提供评价新药剂的剂量依赖性降低血压的能力的机会。

在自发性高血压大鼠(SHR)中，评价本发明化合物的血压降低效能的实验方案∶

在异氟烷或氯胺酮/美托咪啶(metomidine)麻醉下，为自发性高血压大鼠(SHR，雄性，6个月，Charles River)植入DSI TA11PA-C40遥测装置(Data Sciences, Inc., St. Paul, MN)。通过股动脉，将遥测装置导管插入降主动脉中，并将遥测装置皮下植入左肋部。使动物从手术中恢复14天，而后开始任何研究。记录有意识的、自由活动大鼠的血压、心率和活动信号，每10分钟连续记录30秒钟。HCTZ(25 mg/kg/天，PO)作为参比利尿剂，剂量为在SHR中产生大约最大效能时的剂量。在每天单一口服填喂之后(典型地持续三至十四天)，相比于赋形剂对照物，评价本发明化合物的血压降低效能。以小时均值形式收集数据，并通过减去赋形剂对照物基线数据，以小时为基准，计算血压的变化。在0.3至10 mg/kg范围内的一个或多个剂量(PO、QD剂量)下，评价实施例编号5、7、9和43，到研究的最后一天，在所使用的剂量下，平均收缩压每天(24小时)典型地降低6 mmHg至24 mmHg。

自发性高血压大白鼠试验为大家所熟知，并且在本领域经常作为模拟人类高血压的实验模型(参见，例如，Lerman, L.O.等人，, J Lab Clin Med, 2005;146:160-173)。

尽管参考某些具体实施方案描述了本发明，但利用本文所描述的方案，许多替代实施方案对本领域技术人员是显而易见的。权利要求的范围不应该受到实施例列出的优选实施方案的限制，而是应该按照整个说明书给予最宽泛的解释。权利要求讲述或描述的没有具体立体构型指定、或这种指定少于全部手性中心的具体化合物(即，物种)，由于存在一个或多个不对称中心，在可能的情况下，还包括外消旋体、外消旋混合物、每个单一对映体、非对映异构体的混合物和化合物的每个单一非对映体。本文所引用的所有专利、专利申请和出版物以引证的方式整体结合到本文中。