口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液及其制备方法

摘要

本发明涉及生物检测领域，本发明的目的在于提供一种专用于口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液及其制备方法，包括以下组分：磷酸氢二钠：17.3-19.2g/L、磷酸二氢钠：2.6-2.9g/L、氯化钠：8.3-9.2g/L、10%土温80：9.5-10.5ml/L、血清：142.5-157.5ml/L、亲和素：28.5-31.5mg/L、生物素：19-21ml/L、EDTA-2Na：19-21g/L、NaN3：2.9-3.2ml/L，余量为纯化水。本发明的样本稀释液可以加快反应的速度，使检测更加顺利。

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液及其制备方法。

背景技术

免疫胶体金技术是上世纪90年代发展起来的一种简便、快速、准确的检测技术，其原理与双夹心ELISA相似，不同的是使用胶体金结合蛋白质合成的复合物作为探针，且所使用的试剂事先都被固定在具有微孔的硝酸纤维素膜上。使用时将一端置于检测液中，硝酸纤维素膜可被液体穿过，若检测液中含有相关的抗原或抗体。在检测区就会出现淡红色线条即为阳性，否则为阴性。该技术问世以来已在临床上不断被采用，该方法不依赖于精密的仪器、不依赖于熟练的技术人员、操作步骤简捷，比起目前常用的酶联免疫法具有更大的优点，整个反应过程约在15—20分钟内就可以完成，需要的样品量少，检测更为敏感和准确。

近年关于艾滋病的研究表明，HIV感染者的口腔黏膜渗出液含有HIV抗体。口腔黏膜渗出液检测与血液检测一样，遵循同样的筛查和确诊步骤，在采血不实用或不安全的情况下，口腔检测有非侵入性采集样本的优点。随着技术的不断完善，以口腔黏膜渗出液为检样检测艾滋病抗体的快速胶体金免疫诊断试剂有着极好的市场前景。

口腔黏膜渗出液暴露在空气中会凝固，造成采样无法进行，从而导致检测失败，故应该尽快将口腔黏膜渗出液用稀释液进行收集。由此可见，样本稀释液的制备对检测的顺利进行至关重要。但是，目前以口腔黏膜渗出液为样本检测艾滋病抗体的方法还属于起步阶段，至今仍未见有专用于检测口腔黏膜渗出液HIV抗体的样本稀释液的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种专用于口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液及其制备方法，可以加快反应的速度，使检测更加顺利。

为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             17.3—19.2g

磷酸二氢钠             2.6—2.9g

氯化钠                   8.3—9.2g

10%土温80              9.5—10.5ml

血清                      142.5—157.5ml

亲和素                   28.5—31.5mg

生物素                   19—21ml

EDTA-2Na               19—21g 

NaN3                     2.9—3.2ml

余量为纯化水。

所述的血清为牛血清或鸡血清。

优选地，所述的牛血清为标准新生牛血清。

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌3—5分钟；

C 分别量取血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌3—5分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 2—8℃冷藏储存。

所述的步骤C中的血清为牛血清或鸡血清。

优选地，所述的牛血清为标准新生牛血清，采用标准新生牛血清检测结果更好。

优选地，所述的步骤E中的过滤器为0.22um的过滤器，可有效达到过滤杂质和除菌的目的。

本发明的有益效果在于：

（1）本发明提供的样本稀释液有助于胶体金的爬行，是渗透压、PH值都和人类口腔粘膜渗出液一样的缓冲溶液，它使红血球可以保持原来的形状，不会产生凝集和溶血现象，并维持反应内环境稳定，屏蔽非特异性结合，从而使检测过程顺利进行。

（2）将口腔黏膜渗出液加入到本发明提供的稀释液中，形成检测液，检测液中的HIV抗体，先与标记在试纸上的胶体金反应，反应的复合物在层析作用下向上移动，这时会产生一个比较大的液体压力，就可以使复合物向上移动的速度增加，减少反应的时间。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的实质性内容作进一步详细的描述。

实施例1

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             17.3g

磷酸二氢钠             2.9g

氯化钠                 8.3g

10%土温80             10.5ml

牛血清                 142.5ml

亲和素                 28.5mg

生物素                 19ml

EDTA-2Na               21g 

NaN3                   2.9ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

C 分别量取牛血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌5分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 2℃冷藏储存。

样本稀释液的使用方法：

1、将装有样本稀释液的试管轻轻倒置三次，使溶液充分混匀并打开试管盖。

2、从袋中取出干净的口腔拭子，手持口腔拭子手柄一端，以中等力度，用拭子的布垫端沿上牙龈线慢慢来回擦拭，从嘴的一角开始，慢慢擦拭到另一角，然后仍沿上牙龈线擦拭至起始处（用时约5~6秒）。

3、翻转口腔拭子，用口腔拭子布垫端的另一面擦拭下牙龈线，从嘴的一角开始，慢慢擦拭到另一角结束，然后仍沿下牙龈线擦拭至起始处（用时约5-6秒）。

4、立即将拭子插入装有稀释液的试管中，捏紧拭子的柄，将拭子浸入试管内样本稀释液中，先后让拭子的两面紧贴试管壁，上下刮擦2—3次，尽量挤出口腔拭子上的液体。

5、从试管中取出拭子并丢入生化污物桶内，取样完成。

所述的样本稀释液在使用时，能够加快反应的速度，使检测更加顺利，但是稀释液切勿加得太多，加0.6—0.8ml即可，稀释液最多不能超过1ml，如果稀释液加得过量，会造成人为降低标本浓度，其检测结果可能无效；加入稀释液的时间宜在口腔黏膜渗出液采集后的几秒到一分钟之内，以确保样本的稳定性。

实施例2

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             19.2g

磷酸二氢钠             2.6g

氯化钠                   9.2g

10%土温80             9.5ml

鸡血清                  157.5ml

亲和素                   31.5mg

生物素                   21ml

EDTA-2Na               19g 

NaN3                      3.2ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌5分钟；

C 分别量取鸡血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 8℃冷藏储存。

实施例3

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             18.5g

磷酸二氢钠             2.8g

氯化钠                 8.5g

10%土温80             10.0ml

鸡血清                145.3ml

亲和素                 30.2mg

生物素                 20ml

EDTA-2Na               20g 

NaN3                   3.0ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

C 分别量取鸡血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌5分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 3℃冷藏储存。

实施例4

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             19.2g

磷酸二氢钠             2.9g

氯化钠                   8.3g

10%土温80             9.5ml

标准新生牛血清         157.5ml

亲和素                   31.5mg

生物素                 20.5ml

EDTA-2Na               19.6g 

NaN3                   3.2ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

C 分别量取标准新生牛血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 5℃冷藏储存。

实施例5

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             18.8g

磷酸二氢钠             2.7g

氯化钠                   9.0g

10%土温80             10.1ml

鸡血清                150.5ml

亲和素                 29.6mg

生物素                 20.3ml

EDTA-2Na               19.8g 

NaN3                   3.1ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

C 分别量取鸡血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 4℃冷藏储存。

实施例6

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，其特征在于：包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             19.0g

磷酸二氢钠             2.8g

氯化钠                   8.4g

10%土温80             9.7ml

标准新生牛血清         144.6ml

亲和素                 29.6mg

生物素                 19.3ml

EDTA-2Na               19.5g 

NaN3                   3.0ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌5分钟；

C 分别量取标准新生牛血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 6℃冷藏储存。

实施例7

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠              18.6g

磷酸二氢钠              2.7g

氯化钠                  8.6g

10%土温80             9.8ml

牛血清                 152.6ml

亲和素                 28.8mg

生物素                 20.6ml

EDTA-2Na               19.7g 

NaN3                   2.9ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

C 分别量取牛血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 7℃冷藏储存。

实施例8

口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液，其特征在于：包括以下组分：

原料名称              标准浓度（/L）

磷酸氢二钠             17.5g

磷酸二氢钠             2.7g

氯化钠                   8.8g

10%土温80             9.9ml

鸡血清                146.5ml

亲和素                 29.7mg

生物素                 20.4ml

EDTA-2Na               19.8g 

NaN3                    3.2ml

余量为纯化水

所述的口腔黏膜渗出液胶体金法检测HIV抗体的样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

A 量取纯化水于搅拌器烧杯中，并开启搅拌，其中，所量取的纯化水体积占稀释液定溶的总体积的0.6倍；

B 分别量取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、10%土温80，加入搅拌器中，搅拌4分钟；

C 分别量取鸡血清、亲和素、生物素、EDTA-2Na，加入搅拌器中，搅拌3分钟；

D 量取NaN3，加入搅拌器中，搅拌至完全溶解；

E 加纯化水至稀释液达到定溶的总体积，然后，溶液用0.22um过滤器过滤； 

F 滤液装瓶，贴上标签， 5℃冷藏储存。