整合O型口蹄疫病毒shRNA转基因克隆猪的制备方法

摘要

本发明涉及一种整合O型口蹄疫病毒shRNA转基因克隆猪的制备方法，其特征在于：利用RNA干扰和转基因克隆技术制备抗O型口蹄疫病毒复制转基因克隆猪的方法，针对O型口蹄疫病毒VP1和3D基因共设计了16对shRNA,构建干扰载体16个；将干扰载体转染BHK-21细胞并对转染细胞攻毒，提取攻毒后细胞的RNA，反转录为cDNA，通过Real-timePCR筛选出两个表达质粒抑制口蹄疫病毒复制的效率最好；用组织块法分离了猪胎儿成纤维细胞，筛选出阳性细胞作为核移植的供体细胞；成功培养猪卵母细胞，利用胚胎移植将重构胚胎移入受体母猪子宫，受体母猪自然分娩获得抗口蹄疫转基因克隆仔猪，检测结果表明转基因克隆仔猪具有抑制O型口蹄疫病毒复制的能力。