整合系统的简化贮存

摘要

本发明涉及用于包含酶和稳定辅酶的诊断测试元件的贮存容器。酶和辅酶的组合是不易受湿气影响的，并且贮存容器因此不需要干燥剂或密封。

说明书

本发明涉及用于贮存包含酶和稳定辅酶的至少一种诊断测试元件的贮存容器、包含此种诊断测试元件的诊断产品、以及包含此种贮存容器或诊断产品的分析测量设备。

诊断测试元件是临床上相关的分析方法的重要组分。在这方面，焦点在于分析物例如代谢物或底物的测量，所述分析物例如可以借助于对于分析物特异性的酶直接或间接测定。在这种情况下，分析物借助于酶-辅酶复合物进行转化且随后进行定量。这使得待测定的分析物接触合适的酶、辅酶和任选的介质，由此辅酶通过酶促反应得到物理化学改变，例如被氧化或还原。如果另外使用介质，那么它通常将在分析物的转化过程中释放的电子从还原型辅酶转移到光学指示物或电极的传导组分上，从而使得该过程可以例如光度或电化学检测。校准提供在测量的值和待测定分析物的浓度之间的直接关系。

当提供诊断测试元件时的重要标准是其长期稳定性。例如在血糖测定中使用的由现有技术已知的测试元件对湿气和热一般是非常敏感的，在所述湿气和热中通常辅酶和介质的功能是受损的。在某些形式的应用中，例如在通过最终用户自己执行的测试的情况下，错误结果因此可以由于测量系统的不正确、未被注意到的错误贮存而出现，这很难由用户检测到且可能导致各种疾病的不正确治疗。

因此，需要专门的保护措施用于常规诊断测试元件的生产和贮存，这阻止诊断测试元件的测试化学特别是与湿气的接触。这可以例如通过将干燥剂，例如硅胶或分子筛，或密封元件引入含有测试元件的贮存容器内来完成。

因而，此种测试元件具有它们必须在从贮存容器中取出后几分钟内使用以便确保无错误的功能性的缺点。如果预期在测试元件已从贮存容器或最初包装中取出后，将它插入分析测量设备内，那么测试元件必须另外保持干燥直至它已完全用完，这要求精心制做的装置且相当大地限制了测试元件以及分析测量设备的设计。

因此，本发明的目的是提供其中现有技术的缺点至少部分被消除的用于诊断测试元件的贮存容器。特别地，应当可能在湿气或/和热的存在下将诊断测试元件在长时间段内贮存于贮存容器中而无需精心制做的装置，从而无需遭受酶活性的显著丧失。

这个目的根据本发明借助于含有至少一种诊断测试元件的贮存容器来达到，所述诊断测试元件包含酶和稳定辅酶，其中所述贮存容器基本上不含干燥剂或/和不包含基本上阻止湿气从环境渗透到贮存容器内的密封元件。

在第二个实施方案中，上述目的借助于含有至少一种诊断测试元件的贮存容器来达到，所述诊断测试元件包含酶和稳定辅酶，其中所述贮存容器使得湿气能够在一种或多种测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域之间交换。

在本发明的范围内令人惊讶地发现，即使在升高的相对空气湿度或/和在升高的温度在几周或几月内，在其化学涂层中包含酶和稳定辅酶的诊断测试元件也未遭受酶活性的显著降低，这因此允许阻止湿气渗透到含有测试元件的贮存容器内所需的装置复杂性中的减少。这同时使得诊断测试元件通过用户的更简单和更可靠处理成为可能。

这个发现是令人惊讶的，这是因为已知尽管在天然辅酶的存在下酶具有几小时的短期稳定性增加（Bertoldi等人，Biochem J.（2005），389，885；Van den Heuvel等人，J. Biol. Chem.（2005），280，32115；和Pan等人，J. Chin. Biochem. Soc.（1974），3，1），但它们在较长时间段内具有较低稳定性（Nutrition Reviews（1978），36，251）。目前已观察到的包含酶和稳定辅酶的诊断测试元件针对湿气或/和热的长期稳定性是更令人惊讶的，这是因为稳定辅酶具有比相应天然辅酶与酶更低的结合常数。

如在本申请的范围内使用的术语“贮存容器”指这样的容器，其可以插入分析测量设备内并且这样设计，从而使得贮存于可以包含单个测试区域或几个测试区域的容器中的至少一种诊断测试元件的一个个别测试区域可以在任何一个时刻与分析测量设备相互作用。在诊断测试元件的测试区域和分析测量设备之间的相互作用原则上可以以任何方式特别是光学方式发生，例如通过用合适波长的光照射由分析物样品湿润的测试区域，且随后借助于分析测量设备检测由测试区域发出的辐射。

为了使得分析物使用分析测量设备的定性或/和定量测定成为可能，根据本发明的贮存容器优选包含其中贮存于贮存容器中的诊断测试元件的测试区域可以与分析物样品接触的样品应用位置，其中分析物可以通过诊断测试元件的测试区域和分析测量设备的相互作用进行测定的测量位置，以及其中诊断测试元件的测试区域可以在与样品接触和分析物的后续测定前或/和后进行贮存的至少一个贮存位置。

本文描述的贮存容器基本上包含本领域技术人员熟悉且看起来适合于本发明目的的任何物理形式，只要它们允许至少一种诊断测试元件特别是带盒（tape magazine）或测试条盒的容纳。贮存容器可以例如具有圆的、圆形的或有角的构型，其中特别高的紧密度可以通过使用圆的或圆形的贮存容器来达到。因为根据本发明使用的诊断测试元件具有非常稳定的测试化学，然而，极高的紧密度不是绝对必需的，并且因此容易允许贮存容器的有角设计的实现。

在本发明的意义上贮存容器的具体例子尤其包含囊、盒、罐、简单分配器以及袋，其优选含有多个个别诊断测试元件，例如多个诊断测试元件，其连接在一起但可以个别分开，且可以依次连同根据本发明的进一步贮存容器一起容纳在用于转运目的的合适外部包装中。如本申请中使用的术语“多个”指＞1的任何数目。

为了阻止可以损害分析物的测定的尘粒或其他微粒材料从外部环境到其内部内的进入，根据本发明的贮存容器仅具有直径≤100 μm，在优选变体中特别是≤20 μm的进入开口。如本申请中使用的术语“进入开口”包含通过其无机或/和有机材料的颗粒可以从贮存容器的外部环境渗透到其内部内的任何开口，例如用于生产贮存容器的材料的孔。

根据本发明的贮存容器可以由任何材料组成，所述材料对于本领域技术人员看起来适合于贮存诊断测试元件的目的。然而，贮存容器至少部分即部分或完全由对于水蒸气可渗透的至少一种材料组成，其可以任选另外包含添加剂例如染料、光滑剂、老化抑制剂或/和UV抑制剂。根据本发明，可食用纸、涂层箔、木头、塑料、纸、卡纸板、羊皮纸、压板或胶合板可以用作对于水蒸气可渗透的材料，其中塑料是优选的。贮存容器特别优选在本发明的范围内使用，其包含选自聚酰胺、聚碳酸酯、聚酯、聚乙烯和聚丙烯的塑料作为对于水蒸气可渗透的材料。

如果带盒用作贮存容器，那么它优选包含单个诊断测试元件，其中所述诊断测试元件通常又包含超过一个测试区域，优选至少10个、更优选至少25个且最优选至少50个个别测试区域。如果测试条盒用作贮存容器，那么它优选包含至少3个、更优选至少5个且最优选至少7个诊断测试元件，其中在这种情况下所述诊断测试元件通常仅具有单个测试区域，但如果需要的话可以具有超过一个测试区域。

可以用于本发明的目的的贮存容器可以包含一个或多个空间上分开的区域用于贮存至少一种诊断测试元件。如果诊断测试元件包含可以与包含分析物的样品接触的超过一个测试区域，那么根据本发明的贮存容器优选包含在空间上彼此分开的一个或两个区域，例如其中可以贮存诊断测试元件的测试区域的一个或两个室。

如果贮存容器包含在空间上彼此分开的两个区域用于贮存诊断测试元件，那么一个区域可以例如用于贮存诊断测试元件的未使用的测试区域，而第二个区域被提供为贮存诊断测试元件的使用的测试区域。这确保诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域不会在贮存容器内彼此直接接触。对于每个诊断测试元件在使用前或后贮存于其自身区域中例如其自身室中也是可能的。

在仅包含一个区域例如单个室用于贮存具有超过一个测试区域的诊断测试元件的贮存容器的情况下，诊断测试元件的未使用的测试区域以及使用的测试区域贮存于一个区域中。通过舍去阻止在贮存容器内未使用的测试区域和使用的测试区域之间的接触的第二个室或物理工具例如分割壁(dividing wall)，可能相当大地简化贮存容器的生产以及测试元件的贮存，这使得该过程更经济。如本申请中使用的术语“未使用的测试区域”指在测试区域与待测定的分析物样品接触前在本申请中描述的诊断测试元件的测试区域；相比之下，“使用的测试区域”用于指在测试区域与待测定的分析物样品接触后的测试区域。

在优选实施方案中，根据本发明的贮存容器是带盒或测试条盒，其中测试条盒是优选的。具有用于分开贮存以测试带形式存在的诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域的两个室的带盒例如在DE 10 2005 013 685 A1、EP 1739432 A1 和 WO 2004/047642 A1中描述。在本发明的意义上的测试条盒是本领域技术人员一般已知的，并且特别包含泡罩盒、折叠（leporello）盒、盘式盒、堆叠盒、鼓式盒和转向盒(turning magazine)，其例如在EP 0 951 939 A2、EP 1 022 565 A2、EP 1736772 A1、WO 2005 / 104948 A1 和 PCT/EP2010/000865中描述。在此特别参考上述文件的公开内容尤其是就贮存容器的几何学而言的公开内容。

在第一个实施方案中，根据本发明的贮存容器在一个变体中基本上不含干燥剂。在这方面，术语“基本上不含干燥剂”意指贮存容器含有基于贮存容器的空重量按重量计＜5％的量，优选按重量计＜1％的量，更优选按重量计＜0.1％的量，更加优选按重量计＜0.01％的量，且最优选按重量计＜0.001％的量的干燥剂。在生产且贮存本文描述的诊断测试元件的范围内显著减少干燥剂的量或完全省略干燥剂的可能性，具有测试元件的生产以及贮存可以得到简化且因此变得更经济的优点。

如果根据本发明的贮存容器并非完全不含干燥剂，即它含有上述量之一的干燥剂，那么干燥剂可以被分别引入贮存容器内或/和分别整合到贮存容器的外壳内。如果贮存容器含有整合到其外壳内的干燥剂，那么这意指将干燥剂掺入贮存容器的固体外壳内，并且致使贮存容器的至少一个内表面能够吸收来自贮存容器的内部的湿气。此种贮存容器可以例如通过将干燥剂注射到用于生产外壳且随后冷却/硬化塑性组合物的模具内来生产。

在第一个实施方案的第二个变体中，根据本发明的贮存容器不含有密封元件，其基本上阻止湿气从环境渗透到贮存容器内。术语“基本上阻止湿气从环境渗透到贮存容器内的密封元件”意指密封元件完全阻止湿气从环境渗透到贮存容器内，或仅允许不导致诊断测试元件的测试化学损害的湿气量的渗透，例如由于辅酶和适用时的介质在至少4周、优选至少8周且特别优选至少12周的时间段内的失活。

在本申请的意义上密封元件的例子特别包含密封装置和紧密封口，但不限于这些。允许湿气从环境渗透到本文描述的贮存容内器内并且可以在本发明的优选实施方案中使用的密封元件，因此主要用于保护贮存容器中贮存的诊断测试元件不受尘粒或机械损害，并且可以例如由纸、羊皮纸或本领域技术人员熟悉的其他材料制成。通常用于密封具有其中含有诊断测试元件的贮存容器的稳定金属箔因此可以以有效和节省成本的方式被避免。

基本上阻止湿气从环境渗透到贮存容器内的密封元件的省略可以相当大地简化且节约本文描述的测试元件的生产和贮存。因此，一方面机械部件的省略导致与常规贮存容器相比较构造体积的相当大减少。另一方面，密封元件的省略也相当大地减少拉力，这是例如由于通过密封元件引起的机械阻力在具有密封元件的带盒的情况下所需的，以将以测试带形式存在的诊断测试元件的未使用的测试区域从带盒的贮存位置转运到带盒外的样品应用位置或测量位置。

在这方面，根据本发明的贮存容器的优选实施方案提供了，与具有密封元件的相应贮存容器相比较，将诊断测试元件的未使用的测试区域从贮存容器内的贮存位置转运到贮存容器外的样品应用位置或/和测量位置，或/和将诊断测试元件的使用的测试区域从贮存容器外的样品应用位置或/和测量位置转运到贮存容器内的贮存位置所需的最低限度或/和最大限度拉力是减少的。在这种情况下，基于在具有密封元件的相应贮存容器中需要的最低限度或/和最大限度拉力，最低限度或/和最大限度拉力的减少通常是至少10％、优选至少25％且最优选至少50％。

进一步转运本发明的贮存容器中诊断测试元件的测试区域所需的最低限度或/和最大限度拉力的减少可以例如减少在带盒的情况下关于测试带的进一步转运所需的能量，这导致包含贮存容器的分析测量设备的能量需求中的总体减少，并且从而例如允许较小电池或较少数目电池的使用。这又导致更小构造的大小，从而使得总体上可以显著减少贮存容器的大小，并且因此可以减少生产贮存容器所需的材料。

在第二个实施方案中，根据本发明的贮存容器允许在个别诊断测试元件或几个诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域之间的湿气交换。诊断测试元件优选在此种贮存容器中使用，所述贮存容器包含超过仅一个用于测定分析物的测试区域例如测试带。

根据第二个实施方案，在本申请中所述诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域的贮存可以以任何方式发生，只要湿气的交换在未使用的测试区域和使用的测试区域之间是可能的。因此，未使用的测试区域和使用的测试区域可以例如贮存于贮存容器中，所述贮存容器包含一个或多个贮存区域且特别是一个、两个或超过两个室。

在第二个实施方案的贮存容器中，诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域优选贮存于单个室或通过湿气可渗透的分割壁彼此分开的两个室中。如果未使用的测试区域和使用的测试区域容纳在单个室中，那么未使用的测试区域和使用的测试区域优选以这样的方式排列在一个室内，从而使得湿气可以在未使用的测试区域和使用的测试区域之间交换，但没有在诊断测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域之间的直接接触，以避免未使用的测试区域的污染。由于贮存容器的简化设计，它又可以小型化，以更简单的方式生产且更节约成本地提供。

根据本发明，本文描述的贮存容器还可以包含上文描述的第一个和第二个实施方案的组合。因此，本发明的进一步变体针对含有至少一种诊断测试元件的贮存容器，所述诊断测试元件包含酶和稳定辅酶，其中所述贮存容器（a）基本上不含干燥剂，（b）不包含基本上阻止湿气从环境渗透到贮存容器内的密封元件或/和（c）使得湿气能够在一个或多个测试元件的未使用的测试区域和使用的测试区域之间交换。

然而，此外，本文描述的贮存容器还可以包含这样的物理工具，其阻止微粒物质从环境渗透到贮存容器内，但相比之下允许湿气的渗透。在这方面，在具有超过一个测试区域例如测试带的诊断测试元件的情况下，例如如上文描述的，与不含相应物理工具的贮存容器相比较，在贮存容器中的测试区域的进一步转运优选不受贮存容器中测试区域的进一步转运所需的最低限度或/和最大限度拉力中的增加损害。

本文描述的贮存容器包含至少一种诊断测试元件是必须的。可以在本发明的范围内使用的诊断测试元件基本上包含本领域技术人员已知的任何测试元件，其适合于测定分析物且可以贮存于根据本发明的贮存容器中。在这方面，术语“贮存”意指诊断测试元件容纳在贮存容器中达优选至少2周的时间段，更优选至少3个月的时间段，甚至更加优选至少6个月的时间段且最优选至少12个月的时间段，其中贮存优选在大气压、室温（25℃）和至少50％的相对空气湿度下发生。

诊断测试元件优选在本发明的范围内使用，在其上可以应用水溶液或非水溶液形式的分析物。在本发明的优选实施方案中，测试元件在这种情况下是测试带、测试盘、测试垫、测试条或WO 2005/084530 A2中提及的诊断元件，所述文献在此特别做出参考。如果本申请中描述的贮存容器设计为测试条盒，那么它们在特别优选的变体中包含条形或/和辊形排列的多个互连和可个别分开的测试条。如果需要的话，诊断测试元件可以另外包含标记例如条形码，这如果需要则致使在每种情况下使用的测试元件的后续鉴定成为可能。

如本文使用的术语“测试带”指带样测试元件，其通常包含超过一个单个测试区域，优选至少10个个别测试区域、更优选至少25个个别测试区域且最优选至少50个个别测试区域。在一个实施方案中，个别测试区域各自以彼此几毫米到几厘米的距离例如以<2.5 cm的距离排列，其中所述测试带可以任选包含在连续测试区域之间的标记区域，以检测在带转运过程中行进的距离或/和用于校准且通常不由测试化学包被。具有检测在连续测试区域之间在带转运过程中行进的距离的标记区域的测试带例如在EP 1739432 A1中描述，所述文献的公开内容在此特别做出参考。

上文描述的测试带优选是在其上至少2个测试区域直接紧靠彼此排列的连续测试带，即在2个测试区域之间没有间隙。测试区域的此种排列具有更大数目的测试区域可以放置在测试带上且此外致使湿气能够在个别测试区域之间交换的优点。这允许测试带的生产更加简化且变得更节省成本。

在本发明的意义上的连续测试带的情况下，例如可能以这样的方式排列除第一个和最后一个测试区域外的所有测试区域，从而使得个别测试区域的两侧直接毗连另一个测试区域。可替代地，在连续测试带的情况下，还可能直接紧靠彼此排列几个测试区域例如5个测试区域或更多个，其中测试区域的连续组又以彼此几毫米直到几厘米的距离例如以<2.5 cm的距离排列。在这种情况下，测试带还可以任选在测试区域的连续组之间具有标记区域，以检测在带转运过程中行进的距离或/和用于校准。

如本文使用的术语“测试盘”指盘形测试元件，其可以包含一个或多个个别测试区域，例如至少10个个别测试区域。在一个实施方案中，测试盘由测试化学的薄层例如由具有厚度约20 μm的层包被，在其上可以应用分析物的样品，由此取决于样品的体积，更大或更少大小的测试盘区域由样品湿润，且可以用于测定分析物。由于湿气通过测试化学层的经过，可以部分或完全润湿的测试盘的未湿润区域随后可用于分析物的进一步测定。

在诊断测试元件中使用的酶可以是对于本领域技术人员看起来适合于各自应用目的的任何酶例如脱氢酶。酶优选是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD/NADH）依赖性或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP/NADPH）依赖性脱氢酶，这特别选自醇脱氢酶（EC 1.1.1.1；EC 1.1.1.2）、L-氨基酸脱氢酶（EC 1.4.1.5）、葡糖脱氢酶（EC 1.1.1.47）、葡糖-6-磷酸脱氢酶（EC 1.1.1.49）、甘油脱氢酶（EC1.1.1.6）、3-羟丁酸脱氢酶（EC 1.1.1.30）、乳酸脱氢酶（EC 1.1.1.27；1.1.1.28）、苹果酸脱氢酶（EC 1.1.1.37）和山梨糖醇脱氢酶。在最优选的实施方案中，酶是葡糖脱氢酶（EC 1.1.1.47）或葡糖-6-磷酸脱氢酶（EC 1.1.1.49）。

在本发明的意义上的稳定辅酶是这样的辅酶，其与天然辅酶相比较，已被化学修饰，并且与天然辅酶相比较，在大气压下具有针对湿气、尤其是在0℃ - 50℃范围中的温度、特别是在pH 4 – pH 10范围中的酸和碱或/和亲核体例如醇或胺的更高稳定性，并且因此可以在等同环境条件下在比天然辅酶更长的时间段内展示出其作用。与天然辅酶相比较，稳定辅酶优选具有更高的水解稳定性，其中在测试条件下对于水解的完全抗性是特别优选的。与天然辅酶相比较，稳定辅酶可以具有关于酶减少的结合常数，例如减少1/2或更多的结合常数。

在本发明的意义上稳定辅酶的优选例子是稳定的NAD（P）/NAD（P）H化合物，即天然烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD/NADH）或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP/NADPH）的化学衍生物。稳定的NAD（P）/NAD（P）H化合物优选包含3-吡啶羰基或3-吡啶硫代羰基残基，其经由线型或环状有机残基，特别是经由环状有机残基与含磷残基例如磷酸盐残基无需糖苷键连接。

稳定的NAD（P）/NAD（P）H化合物特别优选选自通式（I）的化合物、或盐或任选地其还原形式：

其中

A = 腺嘌呤或其类似物，

T = 在每种情况下独立地O、S，

U = 在每种情况下独立地OH、SH、BH₃^-、BCNH₂^-，

V = 在每种情况下独立地OH或磷酸基，或形成环状磷酸基的2个基团，

W = COOR、CON（R）₂、COR、CSN（R）₂，其中R = 在每种情况下独立地H或C₁-C₂烷基，

X¹、X² = 在每种情况下独立地O、CH₂、CHCH₃、C（CH3）₂、NH、NCH₃

Y = NH、S、O、CH₂，

Z = 线型或环状有机残基，条件是Z和吡啶残基不通过糖苷键连接。

在式（I）的化合物中的Z优选是具有4-6个C原子、优选具有4个C原子的线型残基，其中1或2个C原子任选由下述替换：选自O、S和N的一个或多个杂原子，或包含具有5或6个C原子的环状基团的残基，所述环状基团任选含有选自O、S和N的杂原子以及任选地一个或多个取代基，和残基CR⁴₂，其中CR⁴₂与环状基团和X²结合，其中R⁴在每种情况下独立地是H、F、Cl、CH₃。

Z特别优选是饱和或不被饱和的碳环或杂环5元环，特别是通式（II）的化合物

其中单或双键可以存在于R^5'和R^5''之间，其中

R⁴ = 在每种情况下独立地H、F、Cl、CH₃，

R⁵ = CR⁴₂，

R^5' = O、S、NH、NC₁-C₂-烷基、CR⁴₂、CHOH、CHOCH₃，和如果在R^5'和R^5''之间存在单键，则R^5'' = CR⁴₂、CHOH、CHOCH₃，

如果在R^5'和R^5''之间存在双键，则R^5' = R^5'' = CR⁴，和

R⁶，R^6' = 在每种情况下独立地CH或CCH₃。

在优选实施方案中，根据本发明的化合物含有腺嘌呤或腺嘌呤类似物例如C₈-取代和N₆-取代的腺嘌呤，脱氮变体例如7-脱氮，氮杂变体例如8-氮杂或组合例如7-脱氮或8-氮杂或碳环类似物例如间型霉素，其中7-脱氮变体可以在7位上由卤素、C_1-6炔基（alkinyl）、C_1-6链烯基、C_1-6烷基取代。

在进一步优选的实施方案中，化合物含有腺苷类似物，其含有例如2-甲氧基脱氧核糖、2'-氟脱氧核糖、己糖醇、阿卓糖醇或多环类似物例如二环、LNA和三环糖代替核糖。

特别地，（二）磷酸盐氧还可以在式（I）的化合物中被各向同性地（isotronically）替换，例如O^-由S^-或BH₃^-替换，O由NH、NCH₃或CH₂替换，和=O由=S替换。在根据本发明的式（I）的化合物中的W优选是CONH₂或COCH₃。

式（II）的基团中的R⁵优选是CH₂。此外，R^5'选自CH₂、CHOH和NH是优选的。在特别优选的实施方案中，R^5'和R^5''各自是CHOH。在再进一步优选的实施方案中，R^5'是NH并且R^5''是CH₂。其中R⁴ = H，R⁵ = CH₂，R^5' = R^5''= CHOH，并且R⁶ = R^6' = CH的式（II）的化合物是最优选的。

在最优选的实施方案中，稳定辅酶是文献中已知的化合物carbaNAD（J.T. Slama，Biochemistry（1988），27，183和Biochemistry（1989），28，7688）。根据本发明可以使用的其他稳定辅酶在WO 98/33936、WO 01/49247、WO 2007/012494、US 5,801,006、US 11/460,366和出版物Blackburn等人（Chem. Comm.（1996），2765）中描述，所述参考文献的公开内容在此特别做出参考。

在本发明的范围内描述的诊断测试元件可以是任何测试元件，其包含含有酶和稳定辅酶的干燥试剂层，并且可以通过含有分析物的样品湿润。除酶和稳定辅酶外，试剂层可以任选含有进一步试剂，其促进分析物的定性检测或定量测定，例如介质、光学指示剂以及合适的辅助物质或/和添加剂。

如在本申请的范围内使用的术语“介质”意指氧化通过与分析物反应获得的还原型辅酶且因此增加辅酶的反应性的化合物。根据本发明可以使用的介质尤其包括亚硝基苯胺例如[（4-亚硝基苯基）亚氨基]二甲醇盐酸盐，醌例如菲醌、菲咯啉醌或苯并[h]-喹啉醌，吩嗪例如1-（3-羧基丙氧基）-5-乙基吩嗪三氟甲烷磺酸盐或/和心肌黄酶（EC 1.6.99.2）。

醌和特别地1,10-菲咯啉醌、1,7-菲咯啉醌、4,7-菲咯啉醌或其N-烷基化或N,N'-二烷基化盐优选用作介质。在这方面，N-甲基-1,10-菲咯啉(phenanthrolinium)-5,6-醌、N,N'-二甲基-1,10-菲咯啉-5,6-醌、N-甲基-1,7-菲咯啉-5,6-醌、N,N'-二甲基-1,7-菲咯啉-5,6-醌、N-甲基-4,7-菲咯啉-5,6-醌和N,N'-二甲基-4,7-菲咯啉-5,6-醌已证明是特别有利的，其中在N-烷基化或N,N'-二烷基化盐的情况下，任何阴离子都可以充当介质的抗衡离子。在优选实施方案中，卤化物或三氟甲烷磺酸盐用作抗衡离子。

可还原且经历光学性质中的可检测变化的任何物质都可以用作光学指示剂，所述光学性质例如颜色、荧光、减退、传播、偏振或/和折射率。使用肉眼或/和借助于检测设备使用对于本领域技术人员看起来合适的光学特别是光度或荧光或电化学方法，可以发生样品中分析物存在或/和量的测定。杂多酸和特别地2,18-磷钼酸可以优选用作还原为相应杂多蓝的光学指示剂。

在本发明的优选实施方案中，除贮存容器外，诊断测试元件也基本上不含干燥剂。就诊断测试元件而言，术语“基本上不含干燥剂”意指诊断测试元件含有基于诊断测试元件的测试化学的总重量按重量计＜5％的量，优选按重量计＜1％的量，更优选按重量计＜0.1％的量，甚至更加优选按重量计＜0.01％的量，且最优选按重量计＜0.001％的量的干燥剂。在生产且贮存本文描述的测试元件的范围内减少干燥剂的量或完全不用干燥剂的可能性，具有测试元件的生产以及贮存可以得到简化且因此更成本有效地执行的优点。

在进一步优选的实施方案中，除酶和稳定辅酶外，根据本发明使用的诊断测试元件另外包含针元件用于在皮肤中做出小切口，所述针元件可以由任何材料但特别是金属或塑料制成，且优选整合到诊断测试元件内。在本发明的意义上的整合针元件应理解为针元件，其与诊断测试元件在物理上连接。相比之下，分开的针元件定义为与诊断测试元件分开存在并且与诊断测试元件没有物理连接的针元件。

根据本发明，针元件用于在皮肤中做出小切口，以释放可以使用本文描述的诊断测试元件就分析物进行检查的体液例如血液。在这种情况下，释放的体液可以例如通过使用取样元件直接或间接转移到诊断测试元件上。在这方面，能够接纳足够量的体液以测定分析物且致使已接纳的至少一些体液到诊断测试元件上的后续转移成为可能的任何元件都可以用作取样元件，其中毛细管已证明是特别有利的。因此，在本发明的一个变体中，用于在皮肤中做出小切口的针元件另外包含毛细管通道，借助于其释放的体液可以利用毛细力被接纳且转移到诊断测试元件上。

根据本发明的贮存容器致使上文描述的诊断测试元件能够在需要时在至少50％的相对空气湿度或/和在至少20℃的温度贮存相对长的时间段，而不显著丧失酶活性。这意指例如在至少20℃、优选至少25℃且特别优选至少30℃的温度贮存至少4周、优选至少8周且特别优选至少12周的时间段后，基于酶活性的起始值，诊断测试元件具有小于50％、优选小于30％、且特别优选小于20％的酶活性减少。

用于测定酶活性的方法和测试是现有技术中众所周知的，并且若需要则可以通过本领域技术人员适应各种需求，其中相同测试条件在每种情况下用于比较在贮存前和后的酶活性。

借助于根据本发明的贮存容器贮存的诊断测试元件可以用于测定任何生物学或化学物质，其可以光化学或电化学检测。分析物优选选自苹果酸、醇、铵、抗坏血酸、胆固醇、半胱氨酸、葡萄糖、谷胱甘肽、甘油、尿素、3-羟基丁酸、乳酸、5’-核苷酸酶、肽、丙酮酸、水杨酸和甘油三酯，其中葡萄糖是特别优选的。在这方面，分析物可以衍生自任何来源但优选在体液中，包括但不限于全血、血浆、血清、淋巴液、胆汁、脑脊液、细胞外组织液、尿以及腺分泌物例如唾液或汗。在全血、血浆、血清或细胞外组织液的样品中分析物的存在和/或量优选借助于本文描述的诊断测试元件进行测定。

分析物的定性或/和定量测定可以以任何方式发生。为了这个目的，基本上可以使用由现有技术已知用于检测酶促反应的所有方法，其生成可以手动或使用合适工具评价或读出的可测量信号。在本发明的范围内，优选使用光学检测方法以及电化学技术，所述光学检测方法例如包含吸光度、荧光、圆二色性（CD）、旋光色散（ORD）、折射法等的测量。分析物特别优选光度或荧光例如借助于辅酶的荧光可检测变化间接地检测。

本发明的进一步方面涉及这样的诊断产品，其包含条形或/和辊形排列的多个互连、可个别分开的测试条，其中所述测试条各自包含酶和稳定辅酶。在优选变体中，诊断产品由以条形或/和辊形排列的多个互连、可个别分开的测试条组成，其中所述测试条如上文定义的。就测试条的优选实施方案而言，对于关于本申请中所述的诊断测试元件的评论做出参考，所述诊断测试元件贮存于根据本发明的贮存容器中。在测试条的条形或/和辊形排列的情况下，可能不用干燥剂或/和密封元件的存在。

在进一步方面，本发明涉及这样的分析测量设备，其包含根据本发明的贮存容器或根据本发明的诊断产品，且用于分析物的定性或/和定量测定。此种分析测量设备的例子尤其包含商购可得的产品Accu-Chek^? Active、Accu-Chek^? Compact和Accu-Chek^? Mobile（全部来自Roche Company），但不限于这些。

预期通过下述附图和实施例进一步阐述本发明：

附图描述

图1：稳定辅酶carbaNAD（cNAD）的描述。

图2：在贮存前和后在NAD的存在下葡糖脱氢酶和在cNAD的存在下葡糖脱氢酶的酶动力学结果的图解。

2A：在1天后在NAD的存在下GlucDH的动力学。

2B：在1天后在cNAD的存在下GlucDH的动力学。

2C：在32℃和85％相对空气湿度的5周贮存后，在NAD的存在下GlucDH的动力学。

2D：在32℃和85％相对空气湿度的5周贮存后，在cNAD的存在下GlucDH的动力学。

图3：对于在32℃和85％空气湿度最高达5周的时间段，在NAD的存在下葡糖脱氢酶或在cNAD的存在下GlucDH的空白值比较。

图4：在32℃和85％空气湿度在NAD的存在下的葡糖脱氢酶贮存后，葡糖脱氢酶的各个功能曲线的图解。贮存时间段在1天和5周之间变化。

图5：在32℃和85％空气湿度在cNAD的存在下的葡糖脱氢酶贮存后，葡糖脱氢酶的各个功能曲线的图解。贮存时间段在1天和5周之间（图5A）或在1天和24周之间（图5B）变化。

图6：在32℃和85％空气湿度共24周在NAD或cNAD的存在下的葡糖脱氢酶贮存后，NAD和cNAD的残留含量的图解。

图7：在32℃和85％空气湿度共5周（图7A）或24周（图7B），在NAD或cNAD的存在下的葡糖脱氢酶贮存后，GlucDH活性的图解。

图8：在50℃在4天（图8A）或14天（图8B）的时间段内在液相中，在NAD或cNAD的存在下的葡糖脱氢酶稳定性的图解。测试条件：GlucDH 10 mg/ml；NAD或cNAD 12 mg/ml，缓冲液：0.1 M Tris、1.2 M NaCl，pH 8.5；温度50℃。

图9：在35℃在65小时的时间段内在液相中，在NAD或cNAD的存在下来自酵母的醇脱氢酶稳定性的图解。测试条件：ADH 5 mg/ml；NAD或cNAD 50 mg/ml；缓冲液：75 mM Na₄P₂O₇、甘氨酸，pH 9.0；温度35℃。

图10：具有两个室的带盒形式的根据本发明的贮存容器和含有贮存容器的分析测量设备（图10B）的图解，其中测试带用作诊断测试元件（图10a）。

图11：盘形转向盒形式的根据本发明的贮存容器的图解，所述贮存容器容纳多个诊断测试元件。

图12：TicTac^?分配器形式的根据本发明的贮存容器的图解，所述贮存容器含有多个个别测试条作为诊断测试元件且容纳在充满干燥剂的外部包装中。

图13：切割辅助器形式的根据本发明的贮存容器的图解，所述贮存容器含有个别测试条作为诊断测试元件。

图14：含有干燥剂的塑料盒（图14A）、铝罐（图14B）和塑料袋（图14C）形式的根据本发明的贮存容器的图解，所述贮存容器各自含有条形排列的多个互连、可个别分开的测试条。

图15：铝罐（图15A）、TicTac^?分配器（图15B）和塑料袋（图15C）形式的根据本发明的贮存容器的图解，所述贮存容器各自含有辊形排列的多个互连、可个别分开的测试条。

图16：具有整合的贮存容器的根据本发明的分析测量设备的图解，所述贮存容器含有条形排列的多个互连、可个别分开的测试条。

实施例1

将carbaNAD（图1）或NAD添加到葡萄糖特异性GlucDH中。将这些制剂各自应用于Pokalon箔（Lonza），并且在干燥后贮存于温暖和潮湿的条件下（32℃，85％相对空气湿度）。随后，定期测定反应动力学和功能曲线。对于各自的测量日期同时执行cNAD/NAD分析和酶的残留活性测定。

在第一天时测定的关于NAD（图2A）和cNAD（图2B）的动力学曲线是可比较的，并且还显示出在其葡萄糖依赖性中的相似幅度。然而，在5周后可见在动力学曲线中的明确差异。尽管关于NAD（图2C）的动力学在其动力学中强烈减少，但由cNAD稳定的酶的动力学保持几乎不变（图2D）。

如图3中所示的，在空白值（在血样应用前的干燥空白值）中还存在明显差异。关于NAD的干燥空白值的增加可归因于荧光颗粒的形成（N.J. Oppenheimer，in the Pyridine Nucleotide Coenzymes，Academic Press New York，London 1982，编辑J. Everese，B. Anderson，K. You，第3章，第56-65页）。令人惊讶的是，这在cNAD的情况下不出现。

根据图4和5的比较，在NAD和cNAD的存在下葡糖脱氢酶的不同稳定性也是显而易见的。在5周后，关于由cNAD稳定的酶的功能曲线仍在先前测量串中（图5A），而关于由NAD处理的酶的曲线（图4）显示在更高浓度的逐渐下降，这是关于酶/辅酶的不足够量的一般征兆。图5B显示在24周的时间段内关于由cNAD稳定的葡糖脱氢酶的各个功能曲线。在这方面清楚的是酶的功能整个时间段自始至终仅在高葡萄糖浓度时轻微改变，并且在24周后大致对应于在5周后获得的值。

根据图6，在辅酶的结构及其在预定时间段内的稳定性之间的关系是显而易见的。根据这点，在共24周的贮存（在32℃和85％相对空气湿度）后，在葡萄糖检测试剂中cNAD的残留含量仍是起始值的约80％，而在由NAD稳定的葡萄糖检测试剂中NAD的含量在5周后已减退至起始值的约35％，并且通过外推在约17周后减少至零。

在32℃和85％相对空气湿度5周后（图7A）活性GlucDH酶的残留活性的测定结果是完全令人惊讶的。由NAD稳定的酶目前仅具有极低酶活性（0.5％），而由cNAD稳定的酶仍具有70％的残留活性（在每种情况下通过与连同干燥剂（TM）一起贮存于冰箱（KS）的样品比较）。在32℃和85％相对空气湿度24周后（图7B），当由cNAD稳定时，酶的残留活性仍是约25％。

葡糖脱氢酶在液相中的贮存也明确显示在NAD和cNAD之间的差异（图8A和8B）。在天然辅酶NAD的存在下葡糖脱氢酶的残留活性在50℃95小时后是>>5％，而在人工辅酶cNAD的存在下GlucDH的残留活性是75％（图8A）。在50℃的336小时贮存后，由NAD稳定的酶的残留活性目前仅是约1％；对于在cNAD的存在下贮存的酶观察到仍约70％的残留活性。相应SDS凝胶也显示在天然辅酶NAD的存在下在GlucDH带中的变化：新带在更高更高分子量下可见并且存在30 kDa带的移动。

总之，非常令人惊讶的结果是辅因子的稳定同时稳定酶 – 并且不能仅仅是由于酶的更佳凝集的协同作用。辅因子NAD的分解对酶GlucDH的稳定性具有负面作用且甚至加速其失活。天然NAD由人工类似物的替换允许GlucDH贮存于应激条件（例如升高的温度）下，甚至在辅因子的存在下。

用此种系统生产具有相当大改善的稳定性质的血糖测试条是可能的，其中不含干燥剂的表现形式是可能的。

实施例2

将cNAD或NAD添加到含有醇脱氢酶的检测溶液中。将这些混合物贮存于35℃。随后，定期检查酶的稳定性，并且测定酶的残留活性。

在液相中的贮存再一次显示在NAD或cNAD的存在下的贮存之间的差异（图9）。在35℃65小时后，醇脱氢酶的残留活性在天然辅酶NAD的存在下是约6％，而在人工辅酶cNAD的存在下酶的残留活性仍是约60％。

实施例3

图10A以横截面显示带盒形式的本发明的贮存容器的示例性实施方案，所述贮存容器可以插入分析测量设备内。贮存容器（90）具有供应线轴（100）和拉紧线轴（101）定位于其中的外壳（91）。贮存容器另外包含测试带（30）从其外部末端上绕过的偏转尖端（20）。带盒具有在偏转尖端的内部末端上的第一个开口（93），以容纳光学工具。

在显示的实施方案中，带盒另外具有指导测试带通过带盒的辊或轴（92）以及用于容纳线轴驱动装置的第二个开口（94）。具有旋转轴（95）的拉紧线轴具有在其中间用于这个目的的开口以及用于容纳线轴驱动装置的衔接元件。

图10B以横截面显示图10A中所述的带盒（90）插入其内的分析测量设备（10）。分析测量设备具有线轴驱动装置（102），其衔接带盒的拉紧线轴（101）并且可以例如由发动机驱动。在这方面，线轴驱动装置致使测试带（30）转运到在带盒的偏转尖端（20）上的样品应用位置或测量位置的控制和协调成为可能，其中如果需要的话，由分析物样品湿润的测试带的测量还可以在不同位置例如在带盒的内部执行。

分析测量设备另外包含光学工具（99），一将带盒插入分析测量设备内，其就在第一个开口（93）中被容纳。如果预期执行分析物的光学测量，那么分析测量设备的光学系统必须与偏转尖端（20）偶联，这例如可以通过使用光学上透明的偏转尖端或通过将光导纤维引入否则不透光的偏转尖端内来达到。分析测量设备的光学系统可以例如设想使用光源和检测器与之偶联的光导纤维。

图10B另外显示在带盒内的通道（96），其定位于偏转尖端和供应线轴之间，并且测试带在其中从带盒的贮存区域（97）导向偏转尖端（20），然后在偏转尖端处与分析物样品接触后，返回到带盒的拉紧区域（98）内。在这种情况下，在测试带的个别测试区域之间的距离可以例如这样进行选择，从而使得第二个测试区域（30''）仍定位于带盒内，而第一个测试区域（30'）位于在偏转尖端（20）处的样品应用位置或测量位置，以便若需要则确保针对湿气或其他外部影响的保护。

实施例4

图11显示盘形转向盒形式的以横截面显示的本发明的贮存容器的示例性实施方案，所述贮存容器可以插入分析测量设备（114）内。在这种情况下，分析测量设备（114）具有含指形开口（116）的外壳（112），通过所述指形开口（116）可以发生取样运动。

贮存容器（110）具有半盒（172，174）形式的2个亚盒(submagazine)，其设计为彼此基本上对称。特别地，贮存容器（110）包含具有圆的中间开口（124）以及2个设备平面（118，120）的外壳（122），所述设备平面各自平行相互上下排列且平行延伸至贮存容器的平面。多个室（126）容纳在外壳（122）中的2个设备平面（118，120）的每一个中，其中第二个设备平面（120）的室（126）各自在第一个设备平面（118）的室（126）下通过半个单位旋转。因此，贮存容器（110）可以由2个等同半平面组成，其针对彼此固定且各自通过半个单位针对彼此旋转，即通过室（126）的一半角间距。

分析设备（128）容纳在室（126）的每一个中，其又由几个部分设备（130）组成。第一个部分设备（130）包含放射状固定在室（126）中的微量取样器（132），其又包含柳叶刀（134）和从柳叶刀（134）放射状向内延伸的毛细管元件（136）。微量取样器（132）各自在其朝向中间开口（124）的终点具有偶联元件（138），其可以以针孔(eye)的形式进行设计，在所述偶联元件内分析测量设备（114）的传动装置（图11中未显示）可以借助于传动杆的钩形推进杆衔接在中间开口（124）。分析设备（128）具有作为第二个部分设备（130）的诊断测试元件（140），其包含测试区域（144）形式的测试化学（142）并且可以整合到外壳（122）内。

贮存容器（110）这样进行设计，从而使得分析设备（128）可以在2个设备平面（118，120）中彼此偏移排列。因此，在每种情况下，2个设备平面（118，120）之一的一个测试元件窗（168）位于各自另一个设备平面（118，120）的2个室（126）之间。这确保借助于未受到各自另一个设备平面（118，120）的邻近室（126）干扰的分析测量设备，测试区域（144）的后侧可以在其应用位置中观察到。室（126）的偏移排列从而允许各自的活性诊断测试元件（140）在其应用位置中从两侧接近。在贮存容器（110）中的剩余分析设备（128）在这个过程中一般不暴露且由于其合适的密封保持无菌直至使用时。