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2016-05-11
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07H17/075 授权公告日:20140820 终止日期:20150315 申请日:20120315
专利权的终止
2014-08-20
授权
授权
2012-09-26
实质审查的生效 IPC(主分类):C07H17/075 申请日:20120315
实质审查的生效
2012-08-01
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种单体化合物的制备方法,尤其涉及一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法。
背景技术
山莨菪(Scopolia tangutica)多年生茄科草本植物,我国较常用藏药品种之一。东莨菪苷属香豆素类物质,具有抗真菌、抑制树木腐烂的作用,同时还具有抑制单胺氧化酶、抗炎、祛风、止痛、祛痰解痉、抗肿瘤等活性。目前,东莨菪苷已经在医药领域获得了广泛的应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简便、快速、成本低廉的山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法。
为解决上述问题,本发明所述的一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过10~80目筛后,得到山莨菪根粉;
⑵将所述山莨菪根粉用质量浓度为20~95%的乙醇溶液提取,经过滤得到滤液,该滤液经减压浓缩得浸膏;所述山莨菪根粉与所述乙醇溶液的质量体积比为1:10~1:30;
⑶将所述浸膏用其质量的2~10倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液;
⑷所述萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用2~15倍床层体积、质量浓度为10~60%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液;
⑸所述洗脱液经减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的2~5倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用1~5倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液;
⑹将所述纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
所述步骤⑵的提取温度为50~80℃,提取次数1~4次,每次0.5~2.5 h。
所述步骤⑸中氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按1:1~10:1的体积比混合的溶液。
所述步骤⑹中半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为5~25 mL/min;所述甲醇/水中甲醇与水的体积比为15:85~50:50。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明将柱分离技术、制备液相分离技术有效地结合,而半制备液相具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏和应用范围广等特点,当各组分从检测器中流出时,由于检测过程是非破坏性的,经过检测的洗提液可以依次收集起来,除去溶剂制成纯品,因此不但得到了纯度较高的单体化合物,而且缩短了提取分离的时间,从而减少了工艺过程中的能耗,降低了生产成本。
2、本发明快捷简便,易于实施。
具体实施方式
实施例1 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过10目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为20%的乙醇溶液在提取温度为50℃、提取次数1次、时间0.5 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经40℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:10。
⑶将浸膏用其质量的2倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用2倍床层体积、质量浓度为10%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经40℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的2倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用1倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按1:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经40℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为5mL/min,HPLC检测纯度为96%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为15:85。
实施例2 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过80目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为95%的乙醇溶液在提取温度为80℃、提取次数4次、每次2.5 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经80℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:30。
⑶将浸膏用其质量的10倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用15倍床层体积、质量浓度为60%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经80℃减压浓缩(请提供减压浓缩条件)后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的5倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用5倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按10:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经80℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为25 mL/min,HPLC检测纯度为95%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为50:50。
实施例3 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过20目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为70%的乙醇溶液在提取温度为60℃、提取次数2次、每次1 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经50℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:15。
⑶将浸膏用其质量的5倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用4倍床层体积、质量浓度为20%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经50℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的3倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用3倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按2:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经50℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为10 mL/min,HPLC检测纯度为97%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为20:80。
实施例4 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过40目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为40%的乙醇溶液在提取温度为60℃℃、提取次数3次、每次1.5 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经60℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:20。
⑶将浸膏用其质量的6倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用6倍床层体积、质量浓度为30%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经60℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的4倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用4倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按6:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经60℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为15 mL/min,HPLC检测纯度为98%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为25:75。
实施例5 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过60目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为50%的乙醇溶液在提取温度为70℃、提取次数2次、每次2h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经70℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:20。
⑶将浸膏用其质量的8倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用8倍床层体积、质量浓度为40%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经70℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的4倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用2倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按4:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经70℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为5 mL/min,HPLC检测纯度为99%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为20:80。
实施例6 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过10~80目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为60%的乙醇溶液在提取温度为65℃、提取次数2次、每次1.5 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:25。
⑶将浸膏用其质量的6倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用10倍床层体积、质量浓度为50%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经65℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的4倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用3倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按10:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经65℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为10 mL/min,HPLC检测纯度为96%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为30:70。
实施例7 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过80目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为30%的乙醇溶液在提取温度为75℃、提取次数2次、每次2 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经75℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:30。
⑶将浸膏用其质量的9倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用10倍床层体积、质量浓度为40%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经75℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的3倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用4倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按6:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经75℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为10 mL/min,HPLC检测纯度为98%;所述甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为25:75。
实施例8 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法,包括以下步骤:
⑴将山莨菪根经粉碎、过50目筛后,得到山莨菪根粉。
⑵将山莨菪根粉用质量浓度为80%的乙醇溶液在提取温度为70℃、提取次数2次、每次2.5 h的条件下进行提取,经过滤得到滤液,该滤液经70℃减压浓缩至恒重得浸膏。
其中:山莨菪根粉与乙醇溶液的质量体积比(g/ml)为1:20。
⑶将浸膏用其质量的6倍去离子水溶解,并用正丁醇萃取,得到萃取液。
⑷萃取液上非极性大孔树脂,先用去离子水洗脱,然后用10倍床层体积、质量浓度为60%的乙醇溶液洗脱,得到含有东莨菪苷的洗脱液。
⑸洗脱液经70℃减压浓缩后,得到东莨菪苷粗提物,该东莨菪苷粗提物先用其质量的2倍甲醇溶解,然后上硅胶柱,再用2倍床体积的氯仿/甲醇混合溶液进行洗脱,得到纯化的东莨菪苷洗脱液。
其中:氯仿/甲醇混合溶液是指氯仿与甲醇按8:1的体积比(ml/ml)混合的溶液。
⑹将纯化的东莨菪苷洗脱液用半制备液相色谱仪制备,经65℃减压干燥至恒重,即得白色粉末状东莨菪苷单体。
其中:半制备液相色谱仪的制备条件是指流动相为甲醇/水,流速为20 mL/min,HPLC检测纯度为95%;甲醇/水中甲醇与水的体积比(ml/ml)为40:60。
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