微波回流萃取栗毛壳废渣中总黄酮的方法

摘要

本发明公开了一种微波回流萃取栗毛壳中总黄酮的方法。该方法的具体步骤如下：1.将自然晾干的栗毛壳去除杂质后粉碎，过40～60目筛，然后置于恒温干燥箱烘干处理好的栗毛壳粉末，备用；2.将步骤1中处理好的粉末与30～60％乙醇按重量体积比1∶25～1∶50进行混匀，于微波功率下回流浸提10～25min，抽滤，得到总黄酮提取液，经旋转蒸发去除乙醇，然后真空干燥得到总黄酮固体。采用氯化铝比色法测定浓缩液中总黄酮的含量，经测定，总黄酮的提取率为95％，产率为0.20％。该方法不但快捷、提取率高，且以乙醇水为溶媒，无污染、无毒害，而且设备操作简单、溶剂用量少且易于回收，适于工厂的扩大生产。在医药和食品中具有广泛的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物体内活性物质的提取方法，更确切的说，是栗毛壳中 总黄酮的微波回流萃取方法。

背景技术

栗毛壳为壳斗科植物栗的总苞，又名栗刺壳、风栗壳、栗毛球、板栗壳斗、 板栗总苞。据《中医大辞典》记载板栗毛壳性甘、平，味涩，无毒，具有健脾 益气、补肾强筋、散结解毒之功效，并且可以治疗丹毒、肿毒、瘰疬等疾病， 在民间作抗菌、抗炎植物药。有药理研究表明，板栗总苞的水煎液、醇溶物、 乙酸乙酯提取物均具有抗菌活性。栗毛壳废渣中含有丰富的黄酮类物质，而黄 酮类化合物在医药和食品中具有广泛的应用前景，对这些废弃的栗毛壳资源采 用新技术进行再加工，在提高利用率和创造经济效益上具有重要意义。

传统的提取总黄酮的方法有乙醇回流提取法、索氏提取法、水煎煮法、渗 漉法，这些方法均存在提取效率低、提取时间长、溶剂用量大、杂质溶出率高 等问题。近几年又有一些新方法，例如超声波辅助提取、酶解法提取和超临界 萃取。超声波提取方法具有节能、环保、提取效率高、缩短提取时间等优点， 但是其提取效果极易受仪器等外界因素影响，如提取瓶壁的薄厚、放置位置等。 酶解法反应比较温和，可以较大幅度的提高收率，但提取时间比较长，提取效 率相应的降低。超临界萃取的提取效率高、有效成分损失少，但设备投资大、 成本高。板栗总苞中总黄酮的提取目前仅见叶君等人采用乙醇回流法，最佳提 取工艺为：提取溶剂为乙醇，浓度为75％，料液比为1∶8，加热回流提取温度 95℃，提取时间为3h，总黄酮含量为2.7mg/g。(参见叶君，孙博航，黄健等.板栗 总苞中总黄酮的提取工艺及含量测定[J].现代中医药.2010，30(6)：102-104)该方 法工艺简单，但是提取时间长，提取效率低。

微波辅助提取法是利用微波能短时间的使物质内部温度升高，从而使得被 提取物从基体中分离出来，从而达到分离提取的目的。微波提取具有穿透力强、 选择性高、能耗小、提取率高、设备简单、溶剂用量少等优点，可以加快反应 速度、缩短反应时间、提高产物收率。目前，利用微波提取和纯化药物、食品 等天然产品正得到广泛关注，但是，经检索，利用微波回流法萃取栗毛壳废渣 中总黄酮的方法还未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种低能、高效的提取栗毛壳总黄酮的方法，特别是 微波回流萃取栗毛壳中的总黄酮的方法，该方法以栗毛壳废渣为原料，通过微 波回流技术，利用乙醇为溶媒将黄酮从栗毛壳废渣组织的细胞中萃取出。该方 法不仅可以大大的缩短反应时间、有效的提高提取效率，而且设备操作简单、 能耗低，溶剂用量少且易于回收，适于工厂的扩大生产。

为了实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

栗毛壳中黄酮类化合物的提取过程为：剥取栗毛壳-去杂-干燥-粉碎-微波回 流提取-分离-总黄酮

具体地，本发明的提取栗毛壳废渣中总黄酮的方法，包括以下步骤：

1、粉碎：将自然晾干的栗毛壳去除杂质后粉碎，过40～60目筛，然后置于 恒温干燥箱烘干至含水率为10％±2的栗毛壳粉末，备用；

2、微波浸提：取备用的粉碎好的栗毛壳，用30～60％的乙醇调整料液重量体 积比为1∶25～1∶50，浸泡40～60min后，置入微波炉回流装置中，微波功率 150W～450W下浸提10min～25min，取下抽滤，得总黄酮浸取液；

3、浓缩：将滤渣再提取一次，合并两次浸提液，经减压旋转蒸发浓缩得产 品黄酮浓缩液。

4、测定：以山奈酚为标准品，采用氯化铝比色法测定浓缩液中总黄酮的含 量。吸取供试液0.5ml，加1％ AlCl₃甲醇溶1ml，定容至10ml，摇匀6min后比色。 用722型分光光度计，以1cm比色皿在427nm波长，以试剂为空白测定吸光度， 代入标准曲线中得到黄酮含量。经测定，总黄酮的提取率在85-95％之间。将提 取得到的黄酮类物质经分离纯化后所得小样进行扫描IR光谱。

上述数值范围可以任意组合，没有必然的对应关系。

本发明的显著优点在于，①以黄酮的含量较高且取材比较方便的栗毛壳废 渣为原料，提高了资源的利用率。②采用微波回流提取，提取时间短、提取率 高，产物的提取效率较传统方法有所提高。③以乙醇水为溶媒，无污染、无毒 害。④该方法步骤简单，设备操作方便、低耗能，溶剂用量少且易于回收，适 合于工厂的扩大生产。在医药和食品中具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为山奈酚标准品的IR光谱图。

图2为提取产品的IR光谱图

具体实施方式

下面结合具体附图及实施例对本发明做进一步的描述。

本发明使用的主要仪器包括：自主改造家用微波炉添加回馏装置WP700(天 津乐金电子电器有限公司)；FE80万能粉碎机(齐家务科学仪器厂)；722S型可 见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；FA-1004B型电子分析天平(上 海越平科学仪器有限公司)；RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-III 循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；AVATAR360型傅立叶变换 红外光谱仪(美国)。

本发明使用的主要药品：山奈酚标准品(含量大于98％，购于上海融禾医 药科技公司)、甲醇；乙醇；三氯化铝，以上均为分析纯。

原料：栗毛壳又名板栗总苞(产地河北省迁西县)

实施例1

将去杂质的栗毛壳用破碎机破碎成40目的粉末料。取其物料用45％的乙醇 调整物料比为1∶25，浸泡40min后，置入微波炉回流装置中，微波功率级数450W 下浸提10min，取下抽滤，得总黄酮的浸取液。将滤渣再提取一次，经减压旋转 蒸发浓缩得黄酮粗品，乙醇循环使用。用氯化铝比色法测定浓缩液中总黄酮的 含量，经测定，总黄酮的提取率为85％，纯度为40％，产率为0.19％。

将提取得到的黄酮类物质经分离纯化后所得小样进行扫描IR光谱。得到图 谱(见附图1，2)，进行分析比对，确定产品含有黄酮类化合物。

图谱分析如下：

图1中山奈酚标准品与图2产品红外光谱在3425cm^-1、2928cm^-1、1650cm^-1、、 1447cm^-1、1377cm^-1、1186cm^-1位置处有相同的波峰。

该化合物的不饱和度比较高，故可能含有两个苯环及双键。在3429cm^-1处 有一较强而宽的吸收峰，是分子间生成氢键而缔合，为苯环上O-H的伸缩振动 峰，另一个原因是由于可能是样品未干燥完全而存在一些自由水。在1628cm^-1和1448cm^-1处的吸收判断有苯环骨架存在；在1580cm^-1处的吸收表明苯环与其 它基团有p-π共轭或π-π共轭。1186cm^-1处O-H面弯曲振动出现一个狭窄的尖 峰，可能存在-OH；O-H伸缩振动出现在2843cm^-1，证明O-H基发生缔合形成 分子内氢键，说明苯环上为a-OH。强1716cm^-1吸收为黄酮分子中C＝O伸缩振 动峰。1380cm^-1处为-CH₂弯曲振动吸收。1071cm^-1、1186cm^-1为芳香醚C-O-C 的对称伸缩振动峰。2910cm^-1处的吸收为饱和碳的C-H伸缩振动，产品峰远远 高于标样峰，说明可能含有其它未知物。结合分子式及不饱和度值，标准品中 主要的峰位在样品峰中均有出现，证明产品中含有黄酮类化合物。

产品外部特征：黄色固体。

实施例2

将去杂质的栗毛壳用破碎机破碎成60目的粉末料。取其物料用50％的乙醇 调整物料比为1∶40，浸泡60min后，置入微波炉回流装置中，微波功率级数180w 下浸提18min，取下抽滤，得总黄酮浸取液。将滤渣再提取一次，合并两次浸 提液，经减压旋转蒸发浓缩得产品总黄酮，乙醇循环使用。用氯化铝比色法测 定浓缩液中总黄酮的含量。得到总黄酮的提取率为93％，纯度为45％，产率为 0.20％。

实施例3

将去杂质的栗毛壳用破碎机破碎成50目的粉末料。取其物料用55％的乙醇 调整比为1∶50，浸泡50min后，置入微波炉回流装置中，微波功率级数150W 下浸提25min，取下抽滤，得总黄酮浸取液。将滤渣再提取一次，收集所有溶液， 经减压旋转蒸发浓缩得产品总黄酮，乙醇循环使用。用氯化铝比色法测定浓缩 液中总黄酮的含量。得到总黄酮的提取率为88％，纯度为42％，产率为0.19％。

尽管上文对本发明的具体实施方式给予了详细描述和说明，但是应该指明 的是，我们可以依据本发明的构想对上述实施方式进行各种等效改变和修改， 其所产生的功能作用仍未超出说明书及附图所涵盖的精神时，均应在本发明的 保护范围之内。