肉桂多酚等组成的降血糖中药组合物及其制备方法

摘要

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种由肉桂多酚等组成的降血糖中药组合物及其制备方法，其特征是药物活性成分由肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷组成。药理试验证明本发明的降血糖中药组合物具有协同降糖功效，可用于制备治疗和预防糖尿病的药物和保健品。

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种由肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷组成的 中药组合物和制备方法，及其在制备治疗和预防糖尿病的药物和保健品方面的用途。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种常见、多发的内分泌代谢紊乱疾病，具体病因和发病 机制不明，一般认为是由于体内胰岛素缺乏或其不能正常发挥生理作用引起糖代谢紊乱，继 而导致蛋白质、脂肪、水、电解质等多种物质代谢紊乱的一种综合病症，属于传统中医“消 渴病”范畴。糖尿病，临床以高血糖为主要标志，主要分为1型(胰岛素依赖型，IDDM) 和2型(非胰岛素依赖型，NIDDM)两种，前者乃因胰岛素绝对缺乏，胰岛β细胞分泌极少 胰岛素，以致于不能抑制脂肪分解，有大量酮体产生而导致酮症酸中毒(DKA)，1型糖尿 病患者主要是依赖胰岛素治疗。2型糖尿病患者的胰岛β细胞仍有一定量胰岛素分泌功能，足 以抑制脂肪组织过多游离脂肪酸释放，防止自发性酮症酸中毒的发生，但高血糖长时期存在。 2型糖尿病患者的病症主要表现为代谢异常，最为典型的就是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏，这 些异常导致血糖升高，进而提升了发生心血管方面疾病的可能。针对2型糖尿病，目前常用 口服降糖药以促胰岛素分泌剂和胰岛素增敏剂为主，前者包括磺脲类(格列本脲)、双胍类(二 甲双胍)，后者主要为罗格列酮等。用于2型糖尿病的治疗，还有一种α-葡萄糖苷酶抑制剂， 不同于磺脲类和双胍类的新一代抗高血糖药物，这类药物能提高肌肉、脂肪对葡萄糖的摄取 和利用、抑制肝脏葡萄糖的输出、降低血糖。但是2型糖尿病为一种慢性疾病，需终生服药， 在控制血糖的同时，西药不良反应随之出现。长期服药会给患者带来诸多器官损伤，有些反 应较严重甚至引起死亡。其中不良反应包括低血糖、心血管副反应、消化道副反应、乳酸性 酸中毒以及肝肾毒性等。因此糖尿病患者急切地需要使用方便、作用高效、稳定、持久、毒 性和副作用较小并可以延缓并发症发生发展的降血糖新药。

近年来，国内外把寻找治疗糖尿病药物的目标转向具有降血糖活性的天然产物。天然产 物降血糖成分有以下特点：①作用温和、稳定且持久；②副作用少、毒性反应非常低；③大 多数天然产物降血糖成分性质稳定，可通过口服给药，使用方便；④天然产物中，通常多种 降糖成分并存可同时作用于多靶点；⑤一般兼有调节血脂、护肝和抗氧化等功能；⑥改善糖 耐量，有效缓解并发症发生发展。因此具有降血糖活性的天然产物的发现，为糖尿病的预防 和治疗提供了新途径，可以开发为新的高效、低毒、能口服的降血糖药物。

肉桂(Cinnamomum Zeylanicum)为樟树科植物Cinnamomi cassia(Lauraceae)，主要生长 在热带地区，我国主要分布在两广、云南和福建等地区，其中以两广最多。它的树皮具有药 用价值，是一种传统中药，具有补火助阳，引火归原，散寒止痛，活血通络等功效，在我国 已有数千年的使用历史。近代药学研究表明，从肉桂提取的肉桂多酚具有胰岛素样作用，是 一种胰岛素增敏剂，可改善胰岛素抵抗，并能提高糖尿病大鼠的血清胰岛素分泌，从而有降 糖作用。黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides；APS)是从中药黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.momgholicus(Bge.)Hsiao)中提取分离出的一种多糖，现代药学研究表明黄芪 多糖具有调节血糖、保护心脏、保护肾脏和预防1型糖尿病的作用，还能改善糖尿病患者的 物质代谢和慢性并发症。APS具有双向调节血糖的作用，对正常小鼠的血糖无明显影响，使 葡萄糖负荷后小鼠的血糖水平显著下降，并能明显对抗肾上腺素引起的小鼠血糖升高反应和 苯乙双胍致小鼠实验性低血糖，能改善糖尿病患者的物质代谢和慢性并发症。人参茎叶皂甙 (Ginseng Saponin)是从五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的地上茎叶中提取精制而得， 动物实验及临床报导显示其可促进脂质代谢，使胆固醇及血中脂蛋白的生物合成、分解、转 化、排泄加速，对胆固醇有异化作用和促进排泄作用，对甘油三酯则有促进其转入脂肪组织 中的作用。人参茎叶皂甙在降低糖尿病动物血糖的同时可纠正其脂类代谢异常，人参茎叶皂 甙可提高机体SOD的活性，清除自由基，并抑制脂质过氧化作用。

发明内容

本发明公开了一种具有降低血糖、调节血脂的中药有效部位复方组合物，可用于制备药 物和保健品。

本发明的降血糖中药复方组合物，其药物活性成分由肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂 苷组成。

其中肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷的重量比优选为：100∶50～300∶5～30。

肉桂多酚提取物、黄芪多糖提取物和人参茎叶皂苷提取物的重量比更优选为： ＝100∶50～250∶10～30，更优选为100∶50～200∶10～20，最优选为100∶100～200∶15。

目前，肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷三个有效部位均来自植物提取，也就是说用 的都是提取物，肉桂多酚在其提取物中含量优选大于25％；黄芪多糖在其提取物中含量优选 大于50％；人参茎叶皂苷在其提取物中含量优选大于80％，本发明中的百分比均为重量百分 比。

肉桂多酚和黄芪多糖可以由以下方法制备：

肉桂多酚的制备：肉桂药材粉碎后用CO₂超临界萃取去除挥发油，残渣用水或30％～70％ 乙醇加热煎煮，煎煮液离心分离，滤液真空浓缩后干燥得肉桂多酚粗提物。将肉桂多酚粗提 物用50％～80％的丙酮或50％～80％的乙醇回流萃取，抽滤，滤液浓缩后制备成一定浓度的 水溶液上SP207树脂柱，用40％～55％乙醇洗脱，收集洗脱液，旋蒸至干，得肉桂多酚提取 物，多酚含量大于25％。

肉桂多酚更优选的制备方法：肉桂饮片粉碎成40目粉末，加6～8倍量的蒸馏水，65～70℃ 下提取1h，冷却至18℃，加入果胶酶，搅拌45min。水提液过滤，滤渣继续加5～5倍量的 蒸馏水，重复一次。合并滤液，过滤，向滤液中滴加冰醋酸酸化至pH＜6，65℃旋蒸浓缩。 浓缩至每ml相当于0.4～0.5g干药材，加入等体积的95％乙醇，冰箱中4℃冷藏12h，抽滤， 滤液蒸馏回收乙醇至无醇味上SP-207树脂柱。先用2～3BV的0.1％乙酸水溶液冲洗树脂柱， 然后用2～3BV 40％～50％乙醇水溶液洗脱，收集50％乙醇洗脱部分，60～65℃旋转蒸发至干 即得。

黄芪多糖的制备：黄芪药材切成饮片，用蒸馏水煎煮，抽滤，浓缩后加乙醇，取沉淀， 沉淀经干燥，得黄芪多糖粉粗品，粗品加蒸馏水加热煮沸溶解，冷藏过夜，取上清液，抽滤， 滤液浓缩，浓缩液加乙醇沉淀，滤取沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥即得。

黄芪多糖更优选的制备方法：黄芪药材沿断面切成2～3mm厚度的饮片，蒸馏水煎煮3 次，合并煎煮液，抽滤，70℃旋蒸浓缩至相当于干药材1～3克/ml，加95％乙醇，使乙醇量 达到总体积的75％，4℃冷藏过夜，过滤，滤液提取黄芪甲苷，沉淀经70-80℃真空干燥， 得黄芪多糖粉粗品。粗品加30～60倍量蒸馏水，加热煮沸溶解，4℃冷藏过夜，取上清液，抽 滤，滤液浓缩至相当于粗品的10～30倍量，加乙醇沉淀使溶液中含醇量达总体积的80％，静 置澄清，滤取沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤2次，于70-80℃下真空干燥，得黄芪多糖提取物， 黄芪多糖含量大于50％。

人参茎叶皂苷可以市场购买质量符合《中国药典(2010版)》一部标准的原料药，也可 以参考文献方法制备，也可以优选用以下方法制备：

人参茎叶皂苷的制备：人参茎叶剪段乙醇水溶液回流提取，过滤，旋蒸回收乙醇，浓缩， 浓缩液用活性氧化镁脱色，水溶液上D101大孔吸附树脂，先用蒸馏水洗脱，再用70％乙醇 进行洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，旋蒸至干即得。

人参茎叶皂苷更优选的制备方法：干燥人参茎叶剪段加入6～10倍量50％的乙醇水溶液， 回流提取3次，每次1h提取，过滤，合并滤液，旋蒸回收乙醇，浓缩。浓缩液用活性氧化 镁脱色，水溶液上D101大孔吸附树脂，先用2～3倍体积蒸馏水洗脱，再用用70％乙醇进行 洗脱，收集70％乙醇洗脱部分，旋蒸至干，得人参茎叶皂苷。人参皂苷Re含量大于90％， 质量符合《中国药典(2010版)》一部的标准。

上述三个提取物可以机械混合得组合物，所得组合物为棕色具有特殊香气的粉末。该组 合物属于无毒物。

本发明中的降糖中药组合物的制备方法具有工业化规模，所得产品稳定、生产工艺重复 性好。本发明的组合物具有增加胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、降低血糖的作用，同时具 有调节血脂、改善肝功能的作用。本发明的组合物在治疗和预防糖尿病、糖尿病并发症和调 节血脂药品或保健品中有广泛的应用。

通过四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型评价组合物及其各组成单方提取物的降血糖作用，结果 表明组合物的降血糖作用优于各单方提取物，说明组合物中各单方之间有增效和协同作用。

本发明的组合物在50～400mg/kg/d的范围内能显著降低STZ致糖尿病大鼠血糖、调节血 脂，并具有改善肝功能的作用。

本发明的组合物可以通过常规方法制成任何常规的口服制剂形式。具体说用本发明的组 合物制成的药品或保健品可为颗粒剂、片剂、冻干粉、胶囊、舌下含片或其它合适的形状。 本发明的组合物在制备成药品或保健品时可含有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本 发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激 和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中的中药组合物的降血糖有效剂量范围一般为50～400mg/kg/d(STZ致糖尿病大 鼠)。本文所用的术语“有效剂量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是 表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健 康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合，也可以根据病情的 不同偏离此范围。此外，本发明的活性物质还可与其他治疗剂一起使用。

药理学试验证明本发明的中药组合物，能有效降低血糖，效果明显好于各单方提取物， 且在给药剂量范围内安全、无毒。下面是四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型评价组合物及其各组成 单方提取物的降血糖作用的试验及部分结果：

一、本发明的组合物对四氧嘧啶(Alloxan)致小鼠糖尿病血糖的影响

ICR小鼠，雄性，清洁级，体重20±2g。

饲料：由小麦粉、玉米粉、麦麸、大豆粉、鱼粉、骨粉及多种维生素组成。

1.小鼠糖尿病模型的建立

小鼠饲养条件：室内温度保持在25℃，湿度在50％左右，明暗周期12h，自由饮水和进 食。

每3天称重一次，等小鼠体重长到22g左右开始造模。造模前禁食10～12h(自由饮水)， 一次性尾静脉注射四氧嘧啶(Alloxan)70mg·kg^-1。正常组尾静脉注射等量生理盐水，继续饲 喂72h，禁食8h(自由饮水)后，小鼠眼角静脉丛取血，用血糖试纸测空腹血糖，血糖值高 于11.1mmol·L^-1者视为造模成功。

2.动物分组及给药

将成模的糖尿病小鼠随机分组，每组10只，每日1次灌胃给药，各给药组剂量为：(给药 量计量单位为mg·kg^-1)

(1)、正常对照组：蒸馏水

(2)、模型组：蒸馏水

(3)、二甲双胍组：150

(4)、肉桂多酚高剂量组：400，肉桂多酚低剂量组：10

(5)、黄芪多糖高剂量组：400，黄芪多糖低剂量组：200

(6)、人参茎叶皂苷高剂量组：30，人参茎叶皂苷低剂量组：10

(7)、中药组合物组：肉桂多酚100、黄芪多糖200、人参茎叶皂苷15

上述肉桂多酚、黄芪多糖、人参茎叶皂苷均用实施例2方法制备得到。

每日上午9:00～10:00给药，连续灌胃4周。

3.观察指标及分析方法

第1天给药前，小鼠禁食8h(自由饮水)，从小鼠眼角静脉丛取血，用血糖试纸测定葡 萄糖水平作为初始血糖水平值。第7、14、21、28天给药后禁食8h(自由饮水)，眼角静脉 丛取血，测定血糖值。

实验数据均以表示，组间比较用t检验和方差分析。

实验结果

1.一般状况

正常组小鼠生长良好，体重持续增加，无其他症状。注射四氧嘧啶后，部分动物即表现 出“三多一少”等典型的糖尿病症状，皮毛松散，体重增长缓慢、相比正常组有所下降。随 着给药时间的延长，各给药组小鼠的多尿状况有所改善，体质也有所好转。

2.小鼠体重的变化，见表1

表1.小鼠体重变化(n＝10)

注：与正常组比^#P＜0.05，^##P＜0.01，与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表1实验数据可知，给药4周后，模型组小鼠体重显著低于正常组(P＜0.01)；与模 型组相比，黄芪多糖高、低剂量组和组合物组的小鼠体重显著增加(P＜0.01)，二甲双胍组、 肉桂多酚高剂量组和人参茎叶皂苷高剂量组的小鼠体重增加(P＜0.05)，而肉桂多酚低剂量组 和人参茎叶皂苷低剂量组的小鼠体重和模型组相比无显著性差异(P＞0.05)。本实验结果说明 本发明的组合物及各单方中药提取物可以改善高血糖小鼠体重减轻的症状，呈现剂量依赖性 结果。

3.小鼠空腹血糖(FPG)的变化，见表2

表2.小鼠空腹血糖的变化(n＝10)

注：与正常组比^##P＜0.01，与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

从表2实验数据可见，四氧嘧啶致糖尿病模型，造模后小鼠血糖水平还会逐渐增加，1～2 周达到峰值，随后逐渐稳定，可稳定一个月以上。故本实验选择给药2周后的数据比较各给 药组对小鼠血糖的影响。

从表2可知，给药4周后，各给药组的小鼠血糖水平均有所下降。二甲双胍组降低39.0％， 肉桂多酚高、低剂量组分别降低55.0％和37.3％，黄芪多糖高、低剂量组分别降低59.7％和 40.7％，人参茎叶皂苷高、低剂量组分别降低49.7％和17.3％，各个单方给药组高剂量降糖 效果均优于低剂量组，组合物组血糖降低66.5％，降血糖效果优于各单方高剂量给药组。各 给药组的小鼠血糖降低均呈时间和浓度依赖性。

组合物的给药剂量为：肉桂多酚100mg·kg^-1；黄芪多糖200mg·kg^-1；人参茎叶皂苷15 mg·kg^-1，组合物中各组成剂量低于各单方的高剂量(肉桂多酚200mg·kg^-1；黄芪多糖400 mg·kg^-1；人参茎叶皂苷30mg·kg^-1)，但降血糖效果优于各单方的高剂量组，并且能使小鼠 空腹血糖接近正常值，说明本发明的组合物各组成单方之间对降四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血 糖有增效和协同作用，说明本发明的组合物的组方合理。

综上所述，肉桂多酚、黄芪多糖、人参茎叶皂苷、以及由这3个组分组成的组合物均能 够降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖，改善糖尿病体重降低的症状，组合物效果优于各单方 给药组，可以预防给药或者长期给药以达到更好的效果。

为了进一步地评价本发明的组合物的降糖效果以及调节血脂和对肝脏的保护作用，我们 进行了链脲霉素(STZ)致SD大鼠糖尿病模型实验。

二、本发明的组合物对链脲霉素(STZ)致SD大鼠糖尿病血糖、血脂的影响

1.动物模型建立

大鼠适应性饲养2天，室内温度保持在25℃，湿度在50％左右，明暗周期12h，自由 饮水和进食。除正常对照组给予普通标准饲料外，其余均给予高脂高糖饲料喂养四周后测定 口服葡萄糖耐量实验，然后禁食10～12h。一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)40mg/kg，一周 后，取禁食8h后大鼠眼角静脉丛取血用血糖试纸测空腹血糖，选择血糖值高于11.1mmol/L 者视为造模成功。

2.实验动物分组及给药

本实验使用的组合物是按实施例1所述方法制备的，肉桂多酚的总多酚含量：28％，黄 芪多糖提取物中APS含量：65％，人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量：90％，按质量配比：肉 桂多酚∶黄芪多糖∶人参茎叶皂苷＝10∶20∶0.15，机械混合得组合物。

将成模的2型糖尿病大鼠按空腹血糖值随机分组，每日1次灌胃给药，分别为：

二甲双胍组：100mg/kg；

组合物高剂量组：组合物220mg/kg(肉桂多酚70mg/kg、黄芪多糖140mg/kg、人参茎 叶皂苷10mg/kg)；

组合物2低剂量组：组合物110mg/kg(肉桂多酚35mg/kg、黄芪多糖70mg/kg、人参 茎叶皂苷5mg/kg)。

模型组和空白对照组给予等体积的蒸馏水，每日上午9:00-10:00灌胃，连续灌胃4周。

3.血清的准备和血清生化检查

分别于第1天给药前，第7、11、21、28天给药后禁食8h，眼角静脉丛取血，低温离心 (1500Xg，15min，4℃)，分离血清，分装于1.5mL冻存管中，-20℃冰箱保存，以待测定 各个生化指标。

采用酶标仪按照各试剂盒的说明测定空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT) 和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平。采用放免法测定血清胰岛素(FINS)水平。

4.数据分析：实验数据均以表示，组间比较用t检验。

实验结果

1.体重变化

SD大鼠正常组、模型组和各用药组的体重变化如表3所示。

表3.大鼠体重的变化(n＝8)

  组别   体重/g(第1天)   体重/g(第28天)   正常   249.2±9.1   369.8±11.3   模型   243.8±19.2   203.9±10.5^##  二甲双胍   238.4±30.6   259.8±14.3^*  组合物-高   225.8±33.7   265.0±33.6^*  组合物-低   229.6±26.2   270.5±17.7^*

注：与正常组比^##P＜0.01，与模型组相比^**P＜0.01

结果表明给药前，正常组、模型组和各给药组之间比较直接差异无统计学意义(P＞0.05)。 给药4周后，与正常组相比，模型组的体重明显降低(P＜0.01)。与模型相比，二甲双胍组、 本发明的组合物组高、低剂量组大鼠体重有所增加(P＜0.05)。组合物高低2个剂量组之间 差异无统计意义(P＞0.05)。

2.糖、脂代谢相关作用指标的变化

SD大鼠正常组、模型组和各用药组血清的空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)、总 胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)水平变化如表4所示。

表4.糖代谢和脂代谢作用的相关指标变化(n＝8)

注：与正常组比^#P＜0.05，^##P＜0.01，与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

本实验结果显示，给药4周后，模型组FINS水平低于正常组(P＜0.05)；与模型组相比， 二甲双胍组FINS水平变化不大(P＞0.05)，中药组合物高低剂量组FINS水平均升高(P＜0.05)， 组间差异无统计意义(P＞0.05)。模型组FPG水平显著低于正常组(P＜0.01)；与模型组相 比，各给药组FPG水平均显著下降(P＜0.01)。

与模型组相比，中药组合物高剂量组TC水平显著降低(P＜0.01)，二甲双胍组、中药组 合物低剂量组TC水平降低(P＜0.05)，中药组合物高剂量组效果优于低剂量组。中药组合物 高剂量组和二甲双胍组TG水平显著降低(P＜0.01)，中药组合物低剂量组TG水平降低 (P＜0.05)，中药组合物高剂量组效果优于低剂量组。中药组合物高剂量组和二甲双胍组 HDL-C水平显著升高(P＜0.01)，中药组合物低剂量组HDL-C水平升高(P＜0.05)，中药组 合物高剂量组效果优于低剂量组。各给药组LDL-C水平均降低(P＜0.05)。 3.对丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平的影响

糖尿病大鼠的丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平给药4周后的变化 结果列于表5中。

表5.丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平的变化(n＝8)

注：与正常组比^##P＜0.01，与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

给药4周后，模型组与正常组相比，ALT和AST水平显著升高(P＜0.01)。与模型组相 比，二甲双胍组的ALT、AST略有下降但变化不大，中药组合物高剂量组ALT水平显著降 低(P＜0.01)，中药组合物低剂量组ALT水平降低(P＜0.05)。与模型组相比，中药组合物 高低剂量组AST均水平显著降低(P＜0.01)。结果提示本发明的中药组合物可以改善肝功能。

综上所述，由本发明的组合物可以升高STZ致糖尿病大鼠的FINS水平、降低FPG，改 善糖尿病大鼠体重下降的症状；降低TC、TG和LDL-C水平，升高HDL-C水平从而调节血 脂；还能降低血清ALT、AST水平，改善肝功能。因此，本发明的组合物可以用于预防或治 疗糖尿病，改善其脂代谢紊乱，改善肝功能。

为进一步给临床安全用药提供剂量依据，我们还研究了本发明中药组合物急性毒性。

中药组合物溶液：按本发明实施例1制备的中药组合物用纯净水调配成中药组合物溶液， 浓度为：每ml溶液含肉桂350mg、人参茎叶皂苷50mg、黄芪多糖700mg。

取小鼠10只，雌雄各半，作为空白对照组，禁食12h后，以0.4ml/10g小鼠给予溶剂(乐 百氏纯净水)。中药组合物组10只(雌雄各半)，禁食12h后，以0.4ml/10g小鼠(最大 给药容量)的容量灌胃给药。给药后即刻观察小鼠的行为活动和存活情况，连续观察14天。

实验结果：

空白对照组小鼠行为活动正常，14天内无死亡。给药组给药后观察小鼠活动减少，1小 时内行为活动逐渐恢复正常，之后数天观察动物行为正常，14天内小鼠无一例死亡发生。体 重变化见表6

表6.给药前后小鼠体重的变化(n＝10)

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05

此期间发现小鼠的生命状况良好，无死亡现象，所以预测实验无法测定半数致死量 (LD50)，测定最大耐受量(MTD)为：组合物44g/kg(肉桂多酚14g/kg、黄芪多糖28g/kg、 人参茎叶皂苷2g/kg)。

根据我国食品毒理学中采用的急性毒性分级的六级标准，本发明中药组合物属无毒。

尸检：给药后第14天将动物处死，尸检心、肝、脾、肺、肾、胃肠道等重要脏器，肉眼 未见明显异常变化。各小组小鼠心脏、肾脏、肝脏与体重的比值见表7

表7.各小组小鼠心脏、肾脏、肝脏与体重的比值

  组别   心体比值   肾体比值   肝体比值   对照   0.0049±0.00034   0.0151±0.0014   0.0604±0.0033

  中药组合物   0.0043±0.00033^*  0.0151±0.0011   0.0658±0.0053

注：与空白对照组比较^*P＜0.05

实验数据显示本发明的中药组合物组与空白对照组的各脏器与体重的比值无显著性 差异(P＞0.05)，提示中药组合物对小鼠各脏器无影响。

具体实施方式

实施例1

组合物的制备方法

1.肉桂多酚的制备

(1)肉桂的CO₂超临界提取：本实施例中使用德国伍德公司产CO₂超临界萃取机组，提取 罐1500L×3，每个提取罐中加入40目的广西肉桂(Cinnam om um cassia Presl)450kg，控制 压力33～34MPa，温度51℃，流量5T/h，连续提取3h后出釜。共得肉桂油140kg。其中 含肉桂醛约60％、香豆素约6％、油脂类物质约20％，其它物质14％。可作为香料或食品 添加剂。

(2)肉桂多酚粗提物的制备：上述CO₂超临界萃取后肉桂残渣120kg加入到1500L不锈钢 反应釜中，加入去离子水1200L，加热升温至65℃，机械搅拌1.5h，离心分离，滤液转移 至浓缩釜，在0.05～0.1MPa、65℃浓缩至d＝1.05～1.1，喷雾干燥，得肉桂多酚粗提物。该提 取物为红棕色具有肉桂的特殊香气，量为6.7kg，总多酚含量为5.6％。

(3)肉桂多酚的纯化：称取270g SP207大孔树脂(三菱化学，上海摩速科学器材有限公司)， 放置于大烧杯中，加入1000ml无水乙醇浸泡8h。去除漂浮物及杂质后湿法装柱，树脂床为 φ4.5cm×22cm，柱体积约为350mL。流出乙醇至液面停留在树脂层上方3cm左右，用去离 子水以2BV/H的流速通过树脂层，洗净乙醇。加入4％的HCL溶液，以5BV/H的流速2BV 体积冲洗树脂层并浸泡3h，而后用去离子水以同样流速洗至洗脱液呈中性(pH试纸检测 pH＝7)。加入5％的NaOH溶液，以5BV/H的流速2BV体积冲洗树脂层并浸泡3h，而后用 去离子水以同样流速洗至水洗液呈中性备用。称取按上述方法提取的肉桂粗提物100g，加入 600mL 80％丙酮水溶液，50℃回流2h，无纺布过滤，滤渣再用400mL 80％丙酮水溶液相 同条件提取两次，合并三次提取滤液。50℃旋转蒸发回收丙酮，蒸发至300mL左右加水300 mL，继续旋蒸至有沉淀析出，抽滤，沉淀用少量水在50℃加热荡洗抽滤，合并滤液，得滤 液共850mL，滤液总多酚浓度为：3.89mg/ml。上柱液850mL，以1mL/min流速全部流过 树脂柱。上柱液流经树脂床后，加入1L 0.1％乙酸水溶液，流速为2ml/min冲洗树脂柱。当 酸水溶液液面到达树脂床上方约2～3cm时，加入50％乙醇水溶液洗脱，洗脱液体积为1000 mL(3BV)，流速1d/s，收集洗脱液，60～65℃旋转蒸发至干，称重并检测多酚含量。得肉 桂多酚样品重量为12g，总多酚含量为28.9％。

2.黄芪多糖的制备

取整枝黄芪(Ashgallls)用剪刀剪切成5～10mm厚片，取片状黄芪500g，加5L蒸馏水 90～100℃煎煮2h，滤渣继续分别用4L和3L水煎煮1h，合并三次煎煮液，抽滤，滤液70 ℃旋蒸浓缩至250ml(每1ml相当于原药材2g)，加750ml 95％乙醇，4℃冷藏过夜，过 滤，分取滤液I和沉淀I两部分。

滤液I回收乙醇并浓缩至150ml，加850ml 95％乙醇充分搅匀，4℃冷藏过夜，过滤， 滤液回收乙醇并浓缩至100ml，用水饱和的正丁醇按2∶1体积比萃取3次，合并正丁醇，浓 缩正丁醇至300ml，用1％NaOH溶液按体积比1∶1萃取处理2次，收集并减压回收正丁醇， 浓缩至60ml时，于70-80℃真空干燥，得黄芪甲苷提取物。

沉淀I在70-80℃下真空干燥，然后以1∶50倍的蒸馏水加热煮沸溶解，4℃冷藏过夜， 取上清液，抽滤，滤液浓缩至200ml，加乙醇800ml沉淀，静置澄清，滤取沉淀，沉淀分别 用无水乙醇洗涤2次，于70～80℃下真空干燥，得黄芪多糖提取物59g，测定APS含量为 64.9％。

3.人参茎叶皂苷的制备

300kg干燥人参茎叶(山东莱阳，4年生)剪段，置于3立方米的不锈钢提取釜中，加 入2.2吨80％的乙醇水溶液，回流提取2h，放出提取液，滤渣继续用1.5吨80％回流提取 两次，每次提取1h，合并滤液，过滤，蒸馏回收乙醇，浓缩至1000L，浓缩液用50kg活性 氧化镁脱色，加水调节至3000L待上柱。250kg D101大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)， 常规方法处理，湿法装入0.48m×3.8m不锈钢柱。将上述上柱液上柱，上柱后先用0.8吨蒸 馏水洗脱用于综合利用，再用1吨70％乙醇进行洗脱，然后用80％乙醇洗脱用于综合利用， 收集70％乙醇洗脱部分，真空蒸发成干饼，真空干燥箱105℃干燥3h得人参茎叶皂苷14.5 kg，人参皂苷Re含量为90.5％，质量符合《中国药典(2010版)》一部的标准。

4.以上方法制备的肉桂多酚(总多酚含量28.9％)70g，黄芪多糖(APS含量64.5％)140g， 人参茎叶皂苷(人参皂苷Re含量90.5％)10g机械混合得组合物。

实施例2

组合物的制备

1.肉桂多酚的制备

肉桂饮片(广西肉桂，Cinnam om um cassia Presl，购自江苏省药材公司，安徽协和药业饮片有 限公司生产)粉碎成40目粉末，称取501.7g置于不锈钢锅中，加入3L蒸馏水。电磁炉加热， 同时机械搅拌，提取温度控制在65～70℃。提取1h后冷却至18℃，加入0.5516g果胶酶， 搅拌45min。从锅中倾出水提液，经纱布棉花过滤，滤液淡红色。滤渣继续加入2.5L蒸馏 水，重复上述过程。合并两次滤液，过滤，得约4L淡红色滤液。向滤液中滴加8ml冰醋 酸，65℃旋蒸浓缩。浓缩至1300ml，加入等体积的95％乙醇，冰箱中4℃冷藏12h，抽滤， 滤液为澄清的橙红色，蒸馏回收乙醇至无醇味，浓缩至300ml体积，待上柱。称取23g(湿 重)预处理后的SP-207树脂，装入层析柱中，树脂床φ1.25cm×24.5cm，柱体积约为30mL， 蒸馏水平衡后，以1ml/min的流速连续通过上述肉桂多酚提取液，上柱液流经树脂床后，加 入100ml 0.1％乙酸水溶液，流速为2ml/min冲洗树脂柱。然后，加入100ml 50％乙醇水溶 液洗脱，流速1d/s，收集洗脱液，60～65℃旋转蒸发至干，得肉桂多酚样品重量为2.5g，肉 桂总多酚含量为26％。

2.黄芪多糖的制备

取整枝黄芪(Ashgallls)用剪刀剪切成5～10mm厚片，取片状黄芪200g，加2L蒸馏水 90～100℃煎煮2h，滤渣继续分别用1.5L和1L水煎煮1h，合并三次煎煮液，抽滤，滤液 70℃旋蒸浓缩至100ml(每1ml相当于原药材2g)，加300ml 95％乙醇，4℃冷藏过夜， 过滤，分取滤液I和沉淀I两部分。沉淀I在70-80℃下真空干燥，然后以1∶50倍的蒸馏水 加热煮沸溶解，4℃冷藏过夜，取上清液，抽滤，滤液浓缩至75ml，加乙醇200ml沉淀，静 置沉淀，过滤，沉淀分别用无水乙醇洗涤2次，于70～80℃下真空干燥，得黄芪多糖提取物 35g，测定APS含量为61.2％。

3.人参茎叶皂苷的制备

200g干燥人参茎叶剪刀剪段，加75％乙醇1.5L回流提取1h，过滤，滤渣用1L 75％乙醇 回流提取1h，相同条件重复1次，合并滤液，过滤，减压回收乙醇至无醇味，滤液浓缩至300 ml，加300ml石油醚萃取两次，水层用300ml水饱和的正丁醇萃取3次，合并正丁醇层，减压 回收正丁醇，得浅黄色固体粉末。固体粉末用适量50％甲醇溶解后和50g中性氧化铝搅拌混 合均匀，装柱，用200ml50％甲醇溶液解吸，解吸液浓缩，回收甲醇，真空浓缩至干，真空干 燥箱105℃干燥3小时得淡黄色固体粉末9.8g，人参皂苷Re含量92％。质量符合《中国药典 (2010版)》一部的标准。

4.以上方法制备的肉桂多酚(总多酚含量26％)2g，黄芪多糖(APS含量61.2％)2g， 人参茎叶皂苷(人参皂苷Re含量92％)0.3g玛瑙研钵中研磨混合得组合物。

实施例3

组合物的制备

1.肉桂多酚的制备

称取400g肉桂饮片粉末，用500ml水浸泡过夜。75℃水浴中用搅拌器搅拌加热1h， 在煮的过程中逐渐加水，控制水量总共约五倍量。无纺布滤过，收集滤液，并用500ml水洗 涤滤渣，合并滤液。加乙酸8ml，控制pH＝4-5，65℃浓缩至大约150ml，真空干燥4h，用 300ml水溶解，之后加入400ml的95％乙醇，待沉淀完全后，抽滤。滤液旋转蒸发至200ml， 水温75℃，用500ml石油醚分三次萃取，保留水相，用600ml乙酸乙酯分四次萃取。收集 乙酸乙酯相，旋转蒸发至干，得肉桂多酚3.2g，肉桂总多酚含量39％。

2.黄芪多糖制备方法同例1。

3.人参茎叶皂苷从市场购得，符合《中国药典(2010版)》一部标准，人参皂苷Re含量89％。

4.将肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷按重量比100∶150∶15混合得组合物。

实施例4

组合物片剂的制备

处方：

制备：

按处方比例先将肉桂多酚、黄芪多糖和人参茎叶皂苷混合均匀，再将组合物和辅料混合 均匀。单冲压片机，9号模具，0.65MPa压力下压片，得2900片，称量计算平均每片重299mg/ 片。稳定性和溶出度合格。每片中含：肉桂多酚112.1mg，黄芪多糖112.1mg，人参茎叶皂 苷16.6mg。