一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法

摘要

本发明提供了一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法，所述野生食用菌人工栽培菌种为侧耳（Pleurotussp.）P26297，保藏号为CGMCC No.4908。栽培方法为以侧耳（Pleurotussp.）P26297为母种进行培育，发菌、出菇管理、最后到摘菇。本发明的野生食用菌人工栽培菌种，采集自野生腐生菌，通过人工驯化而成，保护了该物种的种质资源，开发了食用菌新品种，调整了食用菌品种结构，丰富了食用菌市场品种供应，有较高的经济和社会效益。

说明书

技术领域

    本发明涉及一种野生食用菌人工栽培菌种及其栽培方法。                                                                   

背景技术

野生食用菌是生长在天然树林中、在自然界完全处于野生状态的野生菌，主要分为两类，腐生菌和菌根菌，菌根菌目前为止还无法进行人工培养，而腐生菌是可以经过人工驯化，人工栽培的，也可工厂化栽培。本申请人自天然林场采集到一株野生菌，在经过多次驯化后，现可以进行人工栽培。栽培菌种根据形态学特征，初步断定为侧耳属。因其菌柄中生，又属于侧耳属的大型真菌，所以本发明中将其命名为中柄侧耳，自发现中柄侧耳后，经过多年寻找，未见有该菌的发现报道，且人工栽培方法亦未见同类研究的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以野生腐生菌为标本，经人工培育、驯化而成的野生食用菌人工栽培菌种及栽培方法。

本发明的侧耳（Pleurotus sp.）P26297，已经于2011年6月1日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No. 4908。

 该菌种的子实体成熟后有明显的海鲜味，经检索食用菌图鉴及中科院微生物研究所的DNA检测，确认该菌株为国内外首次发现的侧耳属的一个新物种。

所述的野生食用菌人工栽培菌种的栽培方法，以侧耳（Pleurotus sp.）P26297为母种进行培育，发菌、出菇管理、最后到摘菇。

当采用试管培养进行培育时，将母种接种到试管培养基：4g K₂HPO₄，2g MgSO₄，20g琼脂，10g蛋白胨，加水至1000mL，pH自然。

采用液体培养时，将母种培育出原种或栽培种，再将原种或栽培种播种到配制好的栽培料上，原种或栽培种使用的培养基为液体培养基：玉米粉40g，蔗糖20g，4g K₂PO₄，2g MgSO₄，琼脂2g，加水至1000mL，pH自然；栽培料碳氮比为20-35。

采用袋料培养时，将母种培育出原种和栽培种，再将栽培种播种到配制好的栽培料上，所述栽培料为袋料培养基：棉子壳48%、麦麸18%、木屑30%、轻质碳酸钙2%、石灰2%；上述培养基含水量65-68%；原种和栽培种所使用的培养基为常规培养基。

本发明的侧耳（Pleurotus sp.）P26297具有以下特性：

1、毒理测定：

毒理测定采用生、熟中柄侧耳喂食鸡、鸭，狗等小动物，初步判断出中柄侧耳为无毒的可使用的食用菌。

2、风味

中柄侧耳鲜菇清香，煮熟有一股海鲜味，菇盖口感爽滑，与香菇相比更有韧劲，菇柄外表皮可食用，纤维较多，菇柄海绵状，口感比菇盖淡，比较有韧劲，干菇有一股浓重的海鲜味，用于炖汤口感甜美。

3、产品

中柄侧耳直接烘干可用于上市销售，菇品金黄色，菇体较大，卖相较好，口感上乘；该菌含有八中人体必需氨基酸，其中苯丙氨酸和酪氨酸含量超过香菇2倍多，可作为工业原料来源；该菌还可以作为与其他侧耳类杂交的一种优质的种质资源。

本发明的有益效果：

本发明的野生食用菌人工栽培菌种，采集自野生腐生菌，通过人工驯化而成，保护了该物种的种质资源，开发了食用菌新品种，调整了食用菌品种结构，丰富了食用菌市场品种供应，有较高的经济和社会效益。

附图说明

图1为菌丝及试管中现蕾；

图2为瓶栽出菇及菇体形态；

图3为孢子电镜扫描；

图4为覆土出菇及不同时期的菇体特点。

具体实施方式

本发明的侧耳（Pleurotus sp.）P26297是采集天然林场的野生腐生菌作标本，采用组织分离法经驯化而成。

在驯化过程中，将分离的菌种放在各种不同的环境下（不同C/N比、温度、pH、光照等）发菌培养、出菇，从而筛选出菌丝生长浓密、后期呈线条状，遗传性能较稳定的菌株作母种。具体筛选过程如下：

将组织分离得到的稀疏菌丝，在不同的温度下进行多代培养，发现在22℃条件下，菌丝生长速度最快，菌丝粗壮。通过多种碳源、氮源的筛选，以蛋白胨1%加入基础培养基。供试碳源为：麦芽糖、淀粉、乳糖、果糖、蔗糖、葡萄糖。它们在1000mL培养基中的添加量相当于20g葡萄糖的全碳量。以葡萄糖2%加入基础培养基。供试氮源为：酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、NH₄NO₃、NH₄Cl、KNO₃。它们在1000mL培养基中的添加量相当于10g蛋白胨的全氮量。将供试的6种碳源和氮源分别与基础培养基组合各制成6种培养基，置于22℃恒温培养箱中连续培养10d，测菌落直径，发现该菌在以葡萄糖为碳源，以蛋白胨为氮源的培养基中生长最为理想；以葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源加入基础培养基，将C/N调节为10/1、15/1、20/1、25/1、30/1、35/1、40/1、45/1、50/1、60、1共13种配方，置于22℃恒温培养箱中连续培养10d，测菌落直径、观察菌丝长势。C/N为30时，菌丝量达到最大值。通过对青霉、绿霉、木霉等常见的杂菌进行抗逆性试验，筛选出其中抗性强的菌株。对筛选出来的菌株与香菇、平菇、猪肚菇进行拮抗试验，发现该菌与试验的侧耳类食用菌均产生拮抗现象。在不同的光照强度和光照时间下，诱导菌丝扭结形成菇蕾，如图1所示，菇蕾随着生长，形成细条状的菇体。在150mL三角瓶中加入30mL培养基（为上述筛选出来的培养基）制成平板，用无菌打孔器取直径5mm的菌落1块接入，置于22℃恒温黑暗培养25d。当菌丝完全长满平板后，分别置于完全黑暗、12h光（3000lx）暗交替、连续光照（3000lx）条件下连续培养15d，观察记载现蕾数目，发现12h以上的光照下，试管出现小菇蕾。对小菇蕾进行组织分离，获得新的菌株。采用传统的分类方法与DNA分子标记技术相结合的方法，根据形态学特征为依据，包括子实体的形态学特征、菌丝的类型和结构、孢子的显微结构，子实体的显微结构等，初步断定为侧耳属。再通过DNA分子标记，确定为侧耳属。中柄侧耳命名的依据是根据菌柄中生，又属于侧耳属的大型真菌，所以命名为中柄侧耳，并对其进行菌种保藏。

用上述菌种作母种，培育出原种和栽培种，再将栽培种播种到配制好的栽培料上，经过发菌、出菇管理、最后到摘菇。在用母种培育原种和栽培种时所使用的采用棉籽壳、牛粪粉、木屑等原料，通过不同的比例配比，筛选中柄侧耳菌丝生长好的原种、栽培种及优质高产栽培的栽培料配方。发现中柄侧耳配套培养基配方，试管培养基为：4g K₂PO₄，2g MgSO₄，琼脂20g，1%蛋白胨，水1000mL，pH自然；液体培养基：玉米粉,40g，蔗糖20g，4g K₂PO₄，2g MgSO₄，琼脂2g，水1000mL，pH自然；袋料栽培培养基：棉子壳48%、麦麸18%、木屑30%、轻质碳酸钙2%、石灰2%；含水量68%。根据中柄侧耳菌丝生产发育对温度的要求及本地区的气候特点，选择中柄侧耳合理的栽培季节，春季播种时间安排在2月15日、2月28日、3月15日、3月31日；夏季播种时间安排在7月15日、7月31日、8月15日、8月31日。菇体不同生长时期的表现如图4所示，中柄侧耳干品经国家加工食品质量监督检验中心检测，结果如下：总糖43.1%，总脂肪酸1.2%，天门冬氨酸17.0g/kg，丝氨酸8.1 g/kg，谷氨酸23.7%，甘氨酸7.1 g/kg，组氨酸2.8 g/kg，精氨酸6.4 g/kg，苏氨酸7.4 g/kg，丙氨酸9.5 g/kg，脯氨酸5.8 g/kg，胱氨酸0.9 g/kg，酪氨酸4.3 g/kg，缬氨酸7.2 g/kg，蛋氨酸1.7 g/kg，赖氨酸7.8 g/kg，异亮氨酸5.7 g/kg，亮氨酸9.3 g/kg，苯丙氨酸6.0 g/kg，并与香菇等常见优质食用菌比较。发现中柄侧耳的的人体必需氨基酸中的苯丙氨酸、酪氨酸超过香菇2倍多。并通过对该食用菌对四种主要重金属吸附能力进行检测，发现该食用菌对四种重金属残留量都都达到无公害水平。

侧耳（Pleurotus sp.）P26297菌丝在培养基上的形态、生物学特性：

菌丝形态如图1所示，与平菇相似，在琼脂培养基上呈洁白、浓密、气生菌丝。中柄侧耳子实体粗壮，散生，菌盖直径5～18厘米，初为伞形，逐渐成边缘波浪形最后为平展，如图4所示。

中柄侧耳的人工驯化培育可采用如下培养基：以4g K2PO4，2g MgSO4，20g琼脂，1000mL水，pH自然作为基础培养基，每升培养基中含有：20g麦芽糖、淀粉、乳糖、果糖、蔗糖、葡萄糖作为碳源，每升培养基中含有：10g酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、NH4NO3、NH4Cl、KNO3作为氮源，优选采用如下培养基：20g葡萄糖、10g牛肉膏、4g K2PO4，2g MgSO4，20g琼脂，1000mL水，pH自然。中柄侧耳的碳氮比可在10-60之间正常生产，优选25-40，最适宜的碳氮比为30。中柄侧耳菌丝可在5-35℃温度下培养，致死温度为45℃ 20min，优选22℃，在22℃培养10d，菌丝量达到最大。中柄侧耳菌丝可在pH4-10条件下培养，优选pH5-6，最适宜值为6.0。中柄侧耳孢子可在10-30℃萌发，优选15-25℃，最适宜的萌发温度为25℃。中柄侧耳可在8-24h光照下现蕾，完全黑暗无法现蕾，最适宜为连续光照12h。中柄侧耳的栽培可以木屑、稻草、五节芒等秸秆或木质加工厂下脚料作为碳源，以牛粪、棉籽壳、麦麸、花生饼等作为碳源，碳氮比为20-35，优选30，加入少量的石灰、轻质碳酸钙等。最适宜的培养基培养为：棉子壳48%、麦麸18%、木屑30%、轻质碳酸钙2%、石灰2%；含水量68%。中柄侧耳栽培出菇可以在16-35℃正常出菇，优选20-28℃，最适宜的出菇温度为25℃。