麝香痔疮栓中麝香酮的检测方法

摘要

本发明公开了一种麝香痔疮栓中麝香酮的检测方法，解决了现有含有人工麝香的麝香痔疮栓中麝香酮的检测困难，供试样品制备困难、检测准确性差，无法测定其含量的问题。通过制备对照品及供试品溶液，利用气相色谱仪采用外标法进行气相色谱法测定麝香酮的含量，本发明方法具有操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度高，从而对有效的控制麝香痔疮栓质量具有重要的指导意义。

说明书

技术领域

本发明涉及一种复方中药制剂的检测方法，具体一种麝香痔疮 栓中麝香酮的检测方法。

背景技术

人工麝香是目前天然麝香的一种替代品，已被广泛用于各种药剂 配方，如由马应龙药业集团股份有限公司独家生产的复方中药栓剂- 麝香痔疮栓(专利号02139187)和痔疮膏(专利号02139188)，该类 产品是由牛黄、珍珠、麝香酮、三七、五倍子、冰片、颠茄流浸膏、 炉甘石等多种组份制成的栓剂和膏剂，具有清热解毒，消肿止痛，止 血生肌功能。由于麝香属于贵细药材，用量少但药理作用明显，因此 其成份含量变化会对栓剂的功效带来重要影响，而栓剂中麝香酮含量 的成份在下述情况都可能会发生变化：1、不同批次的产品中麝香酮 含量可能会因制剂工艺可接受的微小变化而发生变化，从而对产品的 质量控制具有指导意义；2、当对产品存放一段时间后，麝香酮的含 量也可能会变化，从而对药品有效期的设定具有重要影响。由此，为 了保证产品功效，对成品栓剂中麝香酮的测定必须进行质量控制环 节。而目前为止，仅有文献报告可以采用气相色谱法对麝香酮进行直 接测定，但是对于含有麝香酮的复方中药制剂如麝香痔疮栓而言，由 于该栓剂麝香酮含量少，而其它的成份多且复杂(主要已知成份就达 8种)，一方面难以有效分离栓剂中的麝香酮，测试时供试样品溶液 制备困难，另一方面，控制色谱柱条件困难，这些都会对分析结果产 生各种干扰，最终影响检测的准确性。

因此，为保证药品质量，有必要建立更先进，更有效，更灵敏专 属的方法既可以鉴别含有人工麝香的麝香痔疮栓中麝香酮含量的有 无、又可以准确反映麝香酮的含量，有效提高麝香痔疮栓的质量。

发明内容

本发明的目的在于解决上述问题，提供了一种麝香痔疮栓中麝香 酮的检测方法，解决了现有含有人工麝香的麝香痔疮栓中麝香酮的检 测困难，供试样品制备困难、检测准确性差，无法测定其含量的问题， 操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度高，从而对有效的控制麝 香痔疮栓质量具有重要的指导意义。

本发明麝香痔疮栓中麝香酮的检测方法包括以下步骤：

a.对照品溶液的制备：

对照品为麝香酮对照品，精密称定，加无水乙醇制成对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：

供试品为含有人工麝香的麝香痔疮栓，先用水摇匀溶解，再用石 油醚萃取分离出麝香酮后再加入无水乙醇制成供试品溶液；

c.分别吸取对照品溶液及样品供试品溶液利用气相色谱仪采用 外标法进行气相色谱法测定麝香酮的含量，控制色谱条件：色谱柱采 用弹性石英毛细管柱，固定相为聚乙二醇6000-20000毛细管柱(型 号：PEG-20M)的强极性毛细管柱，柱长为2-30m。

步骤a中，对照品溶液的制备的具体方法为：使用对照品为麝香 酮对照品，精密称定，加无水乙醇配制的对照品溶液的浓度为 0.01-10mg.mL^-1，作为对照品溶液。

步骤b中，相对于30g麝香痔疮栓加水160-240ml溶解，将上述 溶解液加入石油醚振摇提取1-4次，每次加入石油醚80-120ml进行 萃取，合并萃取液后自然挥干，干燥后得到干燥残留物，将干燥残留 物采用无水乙醇溶解，控制溶液中干燥残留物的浓度为 0.01-30mg.mL^-1即为供试品溶液。

步骤b中，所述石油醚的萃取温度控制在30-60℃。

步骤c中，所述柱温控制方法采用程序升温：起始温度为100-180 ℃，保持3-15分钟，以每分钟0.1-10℃的速率升温至150-240℃， 保持1-10分钟，再以每分钟5-30℃的速率升温至200-280℃，保持 3-15分钟；优选程序升温为：起始温度为130℃，保持5分钟，以每 分钟0.8℃的速率升温至180℃，保持2分钟，再以每分钟20℃的速 率升温至220℃，保持5分钟。

进一步的，考虑到供试品为复方中药栓剂，要检测其中麝香酮应 先进行萃取，但是这类含有人工麝香中药栓剂组分复杂且人工麝香使 用量微小，类似结构及性质的成分在检验过程中会起干扰作用，而萃 取时有可能会发生不仅萃取到麝香酮同时还会萃取到其它物质，或者 因为萃取过程不当或方法不合理造成微量成份无法萃取出来，从而影 响最终检测结果的准确性甚至可行性，发明人根据药物的性质及相似 相溶的原则问题，在保护或无破坏被研究的主要成分麝香酮的同时、 通过改变不同主要成分的溶解度性质和合理保护有效成份免受破坏 (如麝香酮属于挥发性物质，温度过高容易造成成分部分或全部丢 失)以达到尽可能分离纯化样品的方法，非常适合复方中药制剂的分 离。针对麝香痔疮栓的特点和检测要求，需要事先提取供试样品，为 了尽可能的避免上述的各种干扰，发明人利用麝香酮具有极微溶于水 的性质(极微溶解系指溶质1g(ml)能在溶剂1000-不到10000ml 中溶解)，先采用一定量的水进行溶解摇匀，再根据药物的性质及相 似相溶的原理，采用石油醚振摇提取以保证栓剂中的主要成分麝香酮 充分萃取出来，同时又不会萃取到其它成份；针对麝香痔疮栓本身组 份多及麝香中雄甾烷衍生物检验干扰，麝香酮容易挥发的问题，石油 醚的萃取温度需要控制在30-60℃，在该温度下，可以有效纯化样品， 排除麝香痔疮栓及麝香中雄甾烷衍生物、胆甾醇类、脂肪、蛋白质、 蜡及无机盐(铵盐、钙盐)的干扰，从而大大提高麝香酮的分离效果， 且降低因成分挥发带来的含量检测的准确性差的问题。所述萃取方法 为，将80-120ml石油醚加入160-240ml溶解有麝香痔疮栓的溶解液 中，振摇后分离萃取液(石油醚层)，或者继续再将80-120ml石油醚 加入分离后的溶解液中，振摇后分离萃取液(石油醚层)，以此萃取 1-4次，合并萃取液，并采用自然挥干的方式获得干燥残留物，以防 止干燥过程对主要成份麝香酮的损失或破坏，以达到纯化供试样品作 用，利用不同成份在不同溶剂中的溶解性质不一样同时免受萃取过程 中温度对有效成分的影响，从而使产品纯化，萃取出干燥残留物中麝 香酮浓度和纯度都很高，损失达到最小，为下步采用外标法进行气相 色谱法对麝香酮的测定提供了有效保障。并且，为了保证制备的供试 品溶液和对照品溶液的一致性，对于对照品和供试品均采用无水乙醇 进行溶解。

进一步的，发明人通过反复研究摸索发现，为保证检测的准确性 和灵敏性，还需要对色谱柱条件进行严格控制：色谱柱使用弹性石英 毛细管柱，固定相为聚乙二醇6000-20000毛细管柱(PEG-20M)的强 极性毛细管柱，柱长为2-30m，特别优选柱长为30m，内径为0.32mm， 膜厚度为0.5um。配合程序化升温过程，使得样品分离效果明显，样 品峰分离度及分离纯度大幅度提高，满足了检测的准确性和精确性要 求，明显改善中药成分繁杂难分离的影响。

有益效果：

1.本发明填补了含有人工麝香的复方制剂中麝香酮含量检测的 空白，不仅能够有效鉴别栓剂中微量成份麝香酮的有无，更可以及时 准确检测麝香酮的含量。

2.通过对色谱条件的控制和选择，对供试品用一定比例的水进 行前期初溶解分散处理，利用麝香酮具有极微溶于水的性质使麝香酮 在合适体积的水中先行溶解以提高麝香酮的萃取纯度，最大程度的避 免中药栓剂样品溶液中复杂的不溶于水的脂溶性或水难溶性成份在 测定过程中的干扰作用。

3.利用一定温度的石油醚进行至少1次的萃取以保证麝香酮溶 于石油醚并被充分提取，利用自然挥干获得干燥残留物避够过高温挥 干对主要成份麝香酮的损失或破坏。

4.采用本发明气相色谱法对小分子易挥发成份检查准确，样品 峰纯度高，分离度效果及理论板数均非常高，理论板数按麝香酮计算 高于6000，分离度高于3，远远高于方法学研究基本要求理论板数及 分离度要求(理论板数按麝香酮计算不少于1500，分离度大于1.5)， 且微细成分能够被充分萃取，准确性好，精确度高，重复性实验结果 RSD仅为1.2％。

5.通过对不同批次含有人工麝香的中药栓剂中麝香酮的鉴别或 含量的测定，可以反应不同批次间麝香酮的含量变化，对调整工艺、 原料配方优化等研究具有重要意义；通过对中药栓剂置放不同时间后 麝香酮含量的测定，从而可以对其有效期的确定具有重要参考价值。

6.本发明适合各种含有人工麝香的中药栓剂中麝香酮含量的测 定，也适用于其它含有人工麝香的复方中药剂型，如散剂、眼膏、乳 剂、软膏剂等，特别适合于背景技术中介绍的由马应龙药业集团股份 有限公司生产的复方中药栓剂麝香痔疮栓(专利号02139187)和痔 疮膏(专利号02139188)。

具体实施方式

实施例1：

对照品溶液的制备

精密称量5mg麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所，供含量 测定用，批号：110719-200512))，加无水乙醇50ml制成0.1mg.mL-1 的溶液，最终得到的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

供试品：马应龙药业集团股份有限公司制“麝香痔疮栓”(批号： 101005)。

配制方法：取30g麝香痔疮栓，研磨混匀，加水200ml，摇匀， 用45℃石油醚(分析纯，天津博迪化工股份有限公司)进行振摇提 取2次，每次加入石油醚100ml，合并两次石油醚层溶液(萃取液)， 自然放置条件挥干得到残留干燥物，将残留干燥物用无水乙醇(分析 纯，国药集团化学试剂有限公司)溶解，制得残留干燥物浓度约为 15mg.mL^-1的供试品溶液。

测定

仪器：气相色谱仪(型号：HP6890型，美国安捷伦科技有限公 司制)。控制色谱条件：色谱柱采用弹性石英毛细管柱，固定相为聚 乙二醇20000毛细管柱(型号PEG-20M)的强极性毛细管柱，美国安 捷伦科技有限公司制。柱长采用30m，内径为0.32mm，膜厚度为0.5um。 柱温按下述程序升温：起始温度为130℃，保持5分钟，以每分钟0.8 ℃的速率升温至180℃，保持2分钟，再以每分钟20℃的速率升温至 220℃，保持5分钟。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0ul，注入气相色谱 仪，控制柱温按程序升温对其分别进行测定。测量的理论板数按麝香 酮峰计算为10879.230，分离度为6.9，主峰与前后峰分离效果好。

实验

1.供试品色谱中呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。 因与其他杂质峰分离明显，峰纯度高，其他成份对麝香酮的检测和鉴 别干扰非常小，与实际投料量理论计算结果相仿，完全可以作为麝香 酮的鉴别和含量检测使用。

2.精密度试验：取实施例1对照品溶液，吸取10ul注入高效液 相色谱仪分析，连续分析6次，计算各峰面积比的RSD为0.9％。

3.重复性试验：取实施例1供试品溶液6份，各吸取10ul注入 高效液相色谱仪分析，计算麝香酮含量，测定结果RSD为1.2％。

实施例2：

对照品溶液的制备

精密称量5mg麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所，供含量 测定用，批号：110719-200512))，加无水乙醇制成0.01mg.mL^-1的溶 液，最终得到的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

供试品：马应龙药业集团股份有限公司制“麝香痔疮栓”(批号： 101005)。

配制方法：取30g麝香痔疮栓，研磨混匀，加水160ml，摇匀， 用30℃石油醚(分析纯，天津博迪化工股份有限公司)进行振摇提 取4次，每次加入石油醚80ml，合并4次石油醚层溶液(萃取液)， 自然放置条件挥干得到残留干燥物，将残留干燥物用无水乙醇(分析 纯，国药集团化学试剂有限公司)溶解，制得残留干燥物的浓度约为 0.1mg.mL^-1的供试品溶液。

测定

仪器：气相色谱仪(型号：HP6890型，美国安捷伦科技有限公 司制)。控制色谱条件：色谱柱采用弹性石英毛细管柱，固定相为聚 乙二醇20000毛细管柱的强极性毛细管柱，美国安捷伦科技有限公司 制。柱长采用20m，内径为0.32mm，膜厚度为0.5um。柱温按下述程 序升温：起始温度为180℃，保持3分钟，以每分钟0.1℃的速率升 温至240℃，保持10分钟，再以每分钟5℃的速率升温至280℃，保 持3分钟。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0ul，注入气相色谱 仪，控制柱温按程序升温对其分别进行测定。测量的理论板数按麝香 酮峰计算为2879.190，分离度为1.9，主峰与前后峰分离效果较好。

实施例3：

对照品溶液的制备

精密称量5mg麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所，供含量 测定用，批号：110719-200512))，加无水乙醇制成10mg.mL^-1的溶液， 最终得到的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

供试品：马应龙药业集团股份有限公司制“麝香痔疮栓”(批号： 101005)。

配制方法：取30g麝香痔疮栓，研磨混匀，加水240ml，摇匀， 加入60℃石油醚(分析纯，天津博迪化工股份有限公司)120ml振摇 提取1次，萃取的石油醚层溶液(萃取液)自然放置条件挥干得到残 留干燥物，将残留干燥物用无水乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有 限公司)溶解，制得残留干燥物的浓度约为30mg.mL^-1的供试品溶液。

测定

仪器：气相色谱仪(型号：HP6890型，美国安捷伦科技有限公 司制)。控制色谱条件：色谱柱采用弹性石英毛细管柱，固定相为聚 乙二醇20000毛细管柱的强极性毛细管柱，美国安捷伦科技有限公司 制。柱长采用2m，内径为0.32mm，膜厚度为0.5um。柱温按下述程 序升温：起始温度为100℃，保持15分钟，以每分钟10℃的速率升 温至150℃，保持1分钟，再以每分钟30℃的速率升温至200℃，保 持15分钟。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0ul，注入气相色谱 仪，控制柱温按程序升温对其分别进行测定。测量的理论板数按麝香 酮峰计算为1631.630，分离度为1.6，主峰与前后峰分离效果较好。

实施例4：

对照品溶液的制备

精密称量5mg麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所，供含量 测定用，批号：110719-200512))，加无水乙醇制成0.1mg.mL^-1的溶 液，最终得到的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

供试品：马应龙药业集团股份有限公司制“麝香痔疮栓”(批号： 101005)。

配制方法：取30g麝香痔疮栓，研磨混匀，加水210ml，摇匀， 加入50℃石油醚(分析纯，天津博迪化工股份有限公司)90ml振摇 提取2次，萃取的石油醚层溶液(萃取液)自然放置条件挥干得到残 留干燥物，将残留干燥物用无水乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有 限公司)溶解，制得残留干燥物的浓度约为15mg.mL^-1的供试品溶液。

测定

仪器：气相色谱仪(型号：HP6890型，美国安捷伦科技有限公 司制)。控制色谱条件：同实施例1。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0ul，注入气相色谱 仪，控制柱温按程序升温对其分别进行测定。测量的理论板数按麝香 酮峰计算为3879.560，分离度为3.8，主峰与前后峰分离效果良好。 比较例(以常规麝香原料的方法制备对照品及供试品溶液，再利用气 相色谱法测定)

对照品溶液的制备

精密称量75mg麝香酮对照品(同上)，加无水乙醇50ml制成 0.1mg.mL^-1的溶液，最终得到的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

供试品：马应龙药业集团股份有限公司制“麝香痔疮栓”(批号： 101005)。

配制方法：取10g麝香痔疮栓，研磨混匀，精密加入无水乙醇 20ml，密塞，振摇，放置1小时，滤过，取续滤液为供试品溶液。

测定

仪器：气相色谱仪(型号：HP6890型，美国安捷伦科技有限公 司制)。控制色谱条件：以苯基(50％)甲基硅酮(OV-17)中极性为 固定相的毛细管色谱柱，涂布浓度为2％，柱长10m，柱温为：固定检 测温度200℃±10℃。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入气相色谱 仪，测定。测量的理论板数按麝香酮峰计算为609.167，分离度为0.8， 主峰与前后峰分离严重干扰。无法进行麝香酮的鉴别和含量检测。