一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建方法

摘要

一种杜氏盐藻叶绿体转化载体的构建，具体是以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN、chlB或者chlL基因为同源片段，以氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）和除草剂草丁膦（PPT）的抗性基因bar为筛选标记，并以atpA启动子和rbcL终止子为表达元件，构建双交换双筛选标记杜氏盐藻叶绿体转化载体。通过基因枪法或者电激法转化杜氏盐藻，再经两步法筛选实现同质化，确保外源基因在杜氏盐藻叶绿体基因组的定点整合，最终获得稳定表达外源蛋白的叶绿体转化杜氏盐藻藻株。本发明选取chlN、chlB或者chlL基因作为同源片段，可作为转化子的辅助筛选标记；选择氯霉素抗性CAT基因和草丁膦抗性bar基因共同作为筛选标记基因，有利于在较短时间内获得稳定转化株。