一种耐热植酸酶毕赤酵母工程菌及其耐热植酸酶的生产方法

摘要

本发明提出一种产耐热重组植酸酶的毕赤酵母工程菌GS115/appA NR的构建及利用该菌株生产耐热植酸酶的方法。本发明采用两步PCR法合成耐热植酸酶基因并构建重组质粒电击转入比赤酵母菌株GS115，表达步骤为：1)将两步PCR合成的耐热植酸酶基因克隆至巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体中，获得毕赤酵母重组表达质粒；2)将此重组表达质粒电击转化至毕赤酵母宿主菌GS115，经MD平板和含植酸钙的底物平板筛选再从中筛选出出现最大水解圈的菌株；3)挑取阳性克隆利用0.5％甲醇诱导表达。通过测定，毕赤酵母工程菌GS115/appA NR表达的重组耐热植酸酶热稳定性较E.coli K12野生型植酸酶有很大的提高，具体表现为在95℃水浴10min，仍能保持92％的酶活。用该酵母基因工程菌发酵生产的重组植酸酶，其发酵粗酶酶活性可达978U/mL。