使用漆酶在饲料产品中降解玉米赤霉烯酮的方法

摘要

本发明涉及用于受到真菌毒素玉米赤霉烯酮污染的饲料产品解毒的方法。

说明书

涉及序列表

本申请含有计算机可读形式的序列表。将所述计算机可读形式通过题述并入本文。

发明领域

本发明涉及解毒受到真菌毒素玉米赤霉烯酮(mycotoxin zearalenone)污染的饲料产品的方法。

发明背景

谷物上的几种植物致病性和/或收获后镰孢属菌种产生牲畜和家禽生产者相当关注的毒性物质，例如，脱氧瓜萎镰菌醇(deoxynivalenol)、T-2毒素、HT-2毒素、蛇形菌素(diacetoxyscirpenol)和玉米赤霉烯酮。

玉米赤霉烯酮存在于世界范围的多种谷类作物中，如玉米、大麦、燕麦、小麦、黑麦、稻、黍和高粱。在收获前玉米赤霉烯酮的产生似乎不以显著的量发生，但在合适的环境条件下，其易在储藏中的玉米和小谷粒上产生。

当在乙醇生产中使用谷物颗粒并消耗淀粉时，玉米赤霉烯酮集中在发酵副产品(例如，蒸馏干酒糟(distiller’s dried grain))中。发酵副产品中的玉米赤霉烯酮含量可能相对于谷物颗粒增加为三倍。

所述毒素是热稳定的，并且不因长期储存、烘烤或因丙酸或霉菌生长延缓剂的加入而受到破坏。

尽管它们与甾族雌激素在结构上不相似，但是玉米赤霉烯酮及其几种衍生物具有雌激素活性。玉米赤霉烯酮经过折叠使得羟基或潜在的羟基变成合适的朝向以促进与通常结合雌激素的组织受体结合。

玉米赤霉烯酮是引起不育、败育或其它繁殖问题的主要毒素，特别是在猪中。所述症状在青春期前的小母猪(prepubertal gilt)中尤其严重，包括乳房增大、子宫和阴门肿胀和卵巢萎缩。在严重的情况中，可能发生阴门和直肠下垂。公猪展现出乳房增大和睾丸下垂。

玉米赤霉烯酮存在于来自用受污染的谷物喂养的动物的肉中，以及从受污染的小麦焙烤的面包中。尽管人中毒的情况罕见，但是存在对于人长期曝露于这种雌激素活性的结果的关注。

使用环氧酶或内酯酶失活真菌毒素(包括玉米赤霉烯酮)在WO9612414中公开。

需要进一步的解毒受到真菌毒素玉米赤霉烯酮污染的动物饲料产品的方法，所述产品例如，如发酵副产品，包括蒸馏湿酒糟和干酒糟。

发明内容

本发明的发明人发现了饲料产品中的真菌毒素能够通过用漆酶处理所述饲料产品而降解成无毒物质。因此，在第一个方面本发明提供用于降解饲料产品中真菌毒素的方法，所述方法包括用漆酶处理所述饲料产品。所述真菌毒素优选是玉米赤霉烯酮。

在第二个方面本发明提供漆酶用于降解真菌毒素的用途。

发明详述

玉米赤霉烯酮

在本发明的上下文中，术语“玉米赤霉烯酮”包括自某些镰孢属菌种(Fusarium sp.)产生的真菌毒素玉米赤霉烯酮。IUPAC名称为(4S，12E)-15，17-二羟基-4-甲基-3-氧杂二环[12.4.0]十八碳-12，15，17，19-四烯-2，8-二酮((4S，12E)-15，17-Dihydroxy-4-methyl-3-oxabicyclo[12.4.0]octadeca-12，15，17，19-tetraene-2，8-dione)。术语“玉米赤霉烯酮”还包括任何玉米赤霉烯酮的衍生物，其包含一个或多个对漆酶的修饰易感的羟基。

动物饲料产品

术语“动物”包括所有动物，包括人。动物的实例是牛(cattle)，(包括但不限于乳牛/母牛(cow)和牛犊(calf))；单胃动物，例如猪(pig or swine)(包括，但不限于，小猪(piglet)、饲育猪(growing pig)和母猪(sow))；家禽如火鸡(turkey)和鸡(chicken)(包括但不限于雏鸡(broiler chick)、蛋鸡(layer))；和鱼(包括但不限于鲑鱼(salmon))。

术语“饲料”或“饲料产品”意指任何适用于或意图用于由动物摄取的化合物、制备物、混合物或组合物。

所述饲料产品可以是与不想要的水平的玉米赤霉烯酮分离的产品，其适合于由动物食用(consumption)。所述饲料产品也可以是疑似包含不想要的水平的玉米赤霉烯酮的产品，和/或玉米赤霉烯酮水平未知的产品，包括不包含可检测水平的玉米赤霉烯酮的产品。

所述饲料产品优选是基于谷粒的产品。所述基于谷粒的产品优选包含谷物，例如，玉米、小麦、大麦、黑麦、稻、高粱和黍中的一种或多种。在一个实施方案中，所述饲料产物可以例如仅源自一种或多种谷物，而在另一个实施方案中部分源自豆类(例如源自大豆)且部分源自谷物。所述基于谷粒的产品可以包含完整的或研磨的谷粒，例如，湿磨或干磨的谷粒，包括包含湿磨或干磨谷粒的级分的基于谷粒的产品，所述级分例如，谷蛋白、蛋白质、淀粉和/或油级分。还优选包含来自酿造和/或发酵过程的副产品(例如，酒糟(spent grain))的产品。酒糟是来自酒精饮料和乙醇燃料生产的副产品。啤酒酒糟(brewers’spent grain)(BSG)是酿酒厂中啤酒酿造的残余物，这种酿酒厂使用发芽大麦作为主要原料。蒸馏酒糟(distiller’s spent grain)(DSG)是在从发酵的谷粒如玉米、小麦、大麦、稻和黑麦通过蒸馏去除醇之后在蒸馏室(distillery)中剩余的产品。蒸馏酒糟也称作酒糟(distiller’s grain)。将湿酒糟(WDG)干燥产生干酒糟(DDG)，其主要用作动物饲料。

漆酶

在本发明的上下文中，术语“漆酶”包括由酶类别E.C.1.10.3.2所包含的酶。

优选下述的酶，特别是重组的和/或基本上纯化的酶。

优选地，所用的漆酶源自多孔菌属菌种(Polyporus sp.)的菌株，特别是Polyporus pinisitus或杂色多孔菌(Polyporus versicolor)，或毁丝霉属菌种(Myceliophthera sp.)的菌株，例如嗜热毁丝霉(M.thermophila)，或丝核菌属菌种(Rhizoctonia sp.)的菌株，特别是Rhizoctonia praticola或立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的菌株，或盐肤木属物种(Rhus sp.)，特别是木蜡树(Rhus vernicifera)的株。

在本发明的具体实施方案中，所述氧化还原酶是多孔菌属菌种漆酶，特别是WO 96/00290中描述的Polyporus pinisitus漆酶(也称长绒毛栓菌(Trametesvillosa)漆酶)或毁丝霉属菌种漆酶，特别是WO 95/33836中描述的嗜热毁丝霉漆酶。

进一步地，漆酶可以是柱顶孢属菌种(Scytalidium sp.)漆酶，如WO95/33837中描述的嗜热柱顶孢(S.thermophilium)漆酶，或梨孢属(Pyricularia sp.)漆酶，如能够以商品名SIGMA no.L5510购自SIGMA的稻梨孢/稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)漆酶，或鬼伞属菌种(Coprinus sp.)漆酶，如灰盖鬼伞(C.cinereus)漆酶，特别是灰盖鬼伞IFO 30116漆酶，或丝核菌属菌种漆酶，如立枯丝核菌漆酶，特别是WO 95/07988中描述的、具有范围在6.0至8.5的最适pH的中性立枯丝核菌漆酶。

漆酶也可以源自真菌如金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、曲霉属(Aspergillus)、脉孢菌属(Neurospora)、柄壳孢属(Podospora)、射脉菌属(Phlebia)(例如辐射射脉菌(P.radiate)(WO92/01046))、革盖菌属菌种(Coriolus sp.)(例如毛革盖菌(C.hirsitus)(JP2-238885))、或葡萄孢属(Botrytis)。

在优选的实施方案中，漆酶是来自嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)(MtL)的、具有作为GENESEQP：AAR88500保藏并在本文作为SEQ ID NO：1显示的氨基酸序列的漆酶，来自Polyporus pinsitus(PpL)的、具有作为UNIPROT：Q99044保藏并在本文作为SEQ ID NO：2显示的氨基酸序列的漆酶，来自天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)ScL的、具有作为SWISSPROT：Q9XAL8保藏并在本文作为SEQ ID NO：3显示的氨基酸序列的漆酶，或具有与这些序列中的任一同源的氨基酸序列的漆酶。

漆酶必需以有效量存在于要解毒的介质中。漆酶优选以0.01-100mg酶蛋白每kg干物质，优选0.1-10mg酶蛋白每kg干物质，或更优选1-5mg酶蛋白每kg干物质的浓度存在。

介体(mediator)

在一个实施方案中，将充当供漆酶用的电子供体的介体与漆酶一起使用。所述介体应该以有效量存在于要解毒的介质中。

已知多种介体；参见例如WO9412620、WO9412621、WO9501626、WO9600179和WO9923887。将其中的介体通过提述并入本文。

优选用于本发明的是选自以下的介体：丁香酸甲酯(Methylsyringate)(MES)、吩噻嗪-10-丙酸(phenothiazine-10-propionicacid)(PPT)、N-(4-氰基苯基)乙酰氧肟酸(N-(4-cyanophenyl)acetohydroxamic acid)(NCPA)、乙酰丁香酮(acetosyringone)、丁香醛(syringaldehyde)、对香豆酸(p-coumaric acid)、2，2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2，2′-Azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate))、1-羟基苯并三唑(1-hydroxybenzotriazole)、2，4-戊二酮和吩噻嗪。

所述介体是商业上可获得的或能够通过本领域已知方法制备的。

介质(medium)

在一个实施方案中，漆酶降解包含饲料产品的介质中的玉米赤霉烯酮。所述介质优选是水性的并且可以是液体、糊剂(paste)或浆。为了形成合适的介质，可以向饲料产品加入水。漆酶和介体可以单独或一起包含在适合施用于所述介质的固态或液态配制剂中。

在一个实施方案中，漆酶以某种程度降解玉米赤霉烯酮，由此使每kg干物质饲料产品的玉米赤霉烯酮含量降低至低于初始量的50％、低于60％、低于70％、优选低于80％、更优选低于85％、还更优选低于90％、和最优选低于95％。

本发明的解毒效力依赖于例如介质的氧的可用性、pH、温度和缓冲液。例如，处理可以在实际漆酶(actual laccase)的相对活性为至少50、或60、或70、或80或90％的pH值进行。同样，例如，处理可以在实际漆酶的相对活性为至少50、或60、或70、或80或90％的温度进行。相对活性是相对于观察到最高活性的pH值的活性计算的。

介质中的氧

漆酶所需的氧的来源可以是来自大气的氧或用于原位产生氧的氧前体。来自大气的氧会通常以充足的量存在。如果需要更多的O₂，可以加入额外的氧，例如，作为加压的大气或作为加压的纯氧。

介质中的pH

依赖于漆酶的特征和所用的介体等，所用介质的pH应通常在5-11的范围，优选在6-10的范围，例如6.5-8.5。

介质中的温度

优选使用接近于用于漆酶的最适温度的反应温度。在本发明的多个实施方案中，应使用范围在10-65℃，更优选30-50℃的温度。

处理持续时间

处理的持续时间依赖于处理类型、要处理的对象(item)的类型、介质的性质(例如温度和pH)和所用的酶和介体的类型和量等。

酶反应不断进行直到达到期望的结果，其后可以可以或可以不通过使酶失活(例如，通过热处理步骤)终止所述酶反应。

为了解毒的目的，可以使用范围在1分钟至1周的处理时间。在许多情况下，范围在6-48小时的处理时间将是合适的。

同一性

两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联性用参数“同一性”描述。

就本发明而言，两个氨基酸序列之间的同一性程度是使用如EMBOSS程序包(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite，Rice等，2000，Trends in Genetics 16：276-277)(优选版本3.0.0或更新的版本)的Needle程序中所执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443-453)来确定的。所用的可选参数是：缺口产生罚分(gapopen penalty)为10，缺口延伸罚分(ap extension penalty)为0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用Needle标记为“longestidentity”(“最长同一性”)的输出结果(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性并且该输出结果是如下计算的：

(相同的残基数x100)/(比对的长度-比对中的缺口总数)

就本发明而言，两个脱氧核糖核苷酸序列之间的同一性程度是使用如EMBOSS程序包(EMBOSS：The European Molecular Biology Open SoftwareSuite，Rice等，2000，见上文)(优选版本3.0.0或更新的版本)的Needle程序中所执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，见上文)来确定的。所用的可选参数是：缺口产生罚分为10，缺口延伸罚分为0.5，和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用Needle标记为“longest identity”(“最长同一性”)的输出结果(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性并且该输出结果是如下计算的：

(相同的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对的长度-比对中的缺口总数)

同源序列

术语“同源序列”定义为在使用指定序列进行的tfasty检索(Pearson，W.R.，1999，于Bioinformatics Methods and Protocols，S.Misener和S.A.Krawetz编，185-219页)中给出的E值(或期望得分)小于0.001的预测蛋白。

术语“同源序列”也可以定义为与指定序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或甚至100％同一性程度的序列。

实施例

实施例1

材料和方法

酶

来自嗜热毁丝霉(MtL)的、具有在本文如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的漆酶。

来自Polyporus pinsitus(PpL)的、具有在本文如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的漆酶。

来自天蓝色链霉菌(ScL)的、具有在本文如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的漆酶。

介体

丁香酸甲酯(MeS)

吩噻嗪-10-丙酸(PPT)

测定法：反应在Eppendorf管中的300微升体积中进行，其中包含玉米赤霉烯酮30μM、介体0.2mM、乙酸钠100mM和酶0.1mg EP/mL。在对照反应中，将所述含酶体积用等量H₂O替代。将反应在37℃温育24小时，其后通过加入600μL的100μM乙腈终止溶液来终止反应。将反应储存在-20℃直到进行层析分析。

层析分析：将样品离心并通过HPLC-DAD如Smedsgaard(J.Chromatogr.A，1997，760，264-270)所述分析上清液的玉米赤霉烯酮。DAD扫描从200-600nm。在Phenomenex(Torrance，CA)Luna C18(2)10×2mm ID，3μM，柱2上在20分钟使用从5％到100％乙腈的线性梯度进行分离。相对于对照计算残余的玉米赤霉烯酮。结果示于表1和2中。

表1.在pH 4.5分别以3种不同的漆酶和两种介体温育24小时之后的残余玉米赤霉烯酮(ZEA)

表2.在pH 6分别以3种不同的漆酶和两种介体温育24小时之后的残余玉米赤霉烯酮(ZEA)

序列表

<110>诺维信公司(Novozymes A/S)

 

<120>使用漆酶在饲料产品中降解玉米赤霉烯酮的方法

 

<130>11338.204-WO

 

<160>3

 

<170>PatentIn version 3.5

 

<210>1

<211>620

<212>PRT

<213>嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)

 

<220>

<221>成熟肽

<222>(1)..(620)

 

<400>1

 

Met Lys Ser Phe Ile Ser Ala Ala Thr Leu Leu Val Gly Ile Leu Thr

1               5                   10                  15

Pro Ser Val Ala Ala Ala Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gln Arg Asp Leu

            20                  25                  30

Leu Val Pro Ile Thr Glu Arg Glu Glu Ala Ala Val Lys Ala Arg Gln

        35                  40                  45

Gln Ser Cys Asn Thr Pro Ser Asn Arg Ala Cys Trp Thr Asp Gly Tyr

    50                  55                  60

Asp Ile Asn Thr Asp Tyr Glu Val Asp Ser Pro Asp Thr Gly Val Val

65                  70                  75                  80

Arg Pro Tyr Thr Leu Thr Leu Thr Glu Val Asp Asn Trp Thr Gly Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Val Lys Glu Lys Val Met Leu Val Asn Asn Ser Ile Ile

            100                 105                 110

Gly Pro Thr Ile Phe Ala Asp Trp Gly Asp Thr Ile Gln Val Thr Val

        115                 120                 125

Ile Asn Asn Leu Glu Thr Asn Gly Thr Ser Ile His Trp His Gly Leu

    130                 135                 140

His Gln Lys Gly Thr Asn Leu His Asp Gly Ala Asn Gly Ile Thr Glu

145                 150                 155                 160

Cys Pro Ile Pro Pro Lys Gly Gly Arg Lys Val Tyr Arg Phe Lys Ala

                165                 170                 175

Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Trp Tyr His Ser His Phe Ser Ala Gln Tyr

            180                 185                 190

Gly Asn Gly Val Val Gly Ala Ile Gln Ile Asn Gly Pro Ala Ser Leu

        195                 200                 205

Pro Tyr Asp Thr Asp Leu Gly Val Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Tyr Tyr

    210                 215                 220

Ser Ser Ala Asp Glu Leu Val Glu Leu Thr Lys Asn Ser Gly Ala Pro

225                 230                 235                 240

Phe Ser Asp Asn Val Leu Phe Asn Gly Thr Ala Lys His Pro Glu Thr

                245                 250                 255

Gly Glu Gly Glu Tyr Ala Asn Val Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg His

            260                 265                 270

Arg Leu Arg Leu Ile Asn Thr Ser Val Glu Asn His Phe Gln Val Ser

        275                 280                 285

Leu Val Asn His Thr Met Cys Ile Ile Ala Ala Asp Met Val Pro Val

    290                 295                 300

Asn Ala Met Thr Val Asp Ser Leu Phe Leu Gly Val Gly Gln Arg Tyr

305                 310                 315                 320

Asp Val Val Ile Glu Ala Asn Arg Thr Pro Gly Asn Tyr Trp Phe Asn

                325                 330                 335

Val Thr Phe Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Gly Ser Arg Asn Pro Tyr

            340                 345                 350

Pro Ala Ala Ile Phe His Tyr Ala Gly Ala Pro Gly Gly Pro Pro Thr

        355                 360                 365

Asp Glu Gly Lys Ala Pro Val Asp His Asn Cys Leu Asp Leu Pro Asn

    370                 375                 380

Leu Lys Pro Val Val Ala Arg Asp Val Pro Leu Ser Gly Phe Ala Lys

385                 390                 395                 400

Arg Ala Asp Asn Thr Leu Asp Val Thr Leu Asp Thr Thr Gly Thr Pro

                405                 410                 415

Leu Phe Val Trp Lys Val Asn Gly Ser Ala Ile Asn Ile Asp Trp Gly

            420                 425                 430

Arg Ala Val Val Asp Tyr Val Leu Thr Gln Asn Thr Ser Phe Pro Pro

        435                 440                 445

Gly Tyr Asn Ile Val Glu Val Asn Gly Ala Asp Gln Trp Ser Tyr Trp

    450                 455                 460

Leu Ile Glu Asn Asp Pro Gly Ala Pro Phe Thr Leu Pro His Pro Met

465                 470                 475                 480

His Leu His Gly His Asp Phe Tyr Val Leu Gly Arg Ser Pro Asp Glu

                485                 490                 495

Ser Pro Ala Ser Asn Glu Arg His Val Phe Asp Pro Ala Arg Asp Ala

            500                 505                 510

Gly Leu Leu Ser Gly Ala Asn Pro Val Arg Arg Asp Val Ser Met Leu

        515                 520                 525

Pro Ala Phe Gly Trp Val Val Leu Ser Phe Arg Ala Asp Asn Pro Gly

    530                 535                 540

Ala Trp Leu Phe His Cys His Ile Ala Trp His Val Ser Gly Gly Leu

545                 550                 555                 560

Gly Val Val Tyr Leu Glu Arg Ala Asp Asp Leu Arg Gly Ala Val Ser

                565                 570                 575

Asp Ala Asp Ala Asp Asp Leu Asp Arg Leu Cys Ala Asp Trp Arg Arg

            580                 585                 590

Tyr Trp Pro Thr Asn Pro Tyr Pro Lys Ser Asp Ser Gly Leu Lys His

        595                 600                 605

Arg Trp Val Glu Glu Gly Glu Trp Leu Val Lys Ala

    610                 615                 620

 

<210>2

<211>520

<212>PRT

<213>薄盖多孔菌(Polyporus pinsitus)

<220>

<221>成熟肽

<222>(1)..(520)

 

<400>2

 

Met Ser Arg Phe His Ser Leu Leu Ala Phe Val Val Ala Ser Leu Thr

1               5                   10                  15

Ala Val Ala His Ala Gly Ile Gly Pro Val Ala Asp Leu Thr Ile Thr

            20                  25                  30

Asn Ala Ala Val Ser Pro Asp Gly Phe Ser Arg Gln Ala Val Val Val

        35                  40                  45

Asn Gly Gly Thr Pro Gly Pro Leu Ile Thr Gly Asn Met Gly Asp Arg

    50                  55                  60

Phe Gln Leu Asn Val Ile Asp Asn Leu Thr Asn His Thr Met Val Lys

65                  70                  75                  80

Ser Thr Ser Ile His Trp His Gly Phe Phe Gln Lys Gly Thr Asn Trp

                85                  90                  95

Ala Asp Gly Pro Ala Phe Ile Asn Gln Cys Pro Ile Ser Ser Gly His

            100                 105                 110

Ser Phe Leu Tyr Asp Phe Gln Val Pro Asp Gln Ala Gly Thr Phe Trp

        115                 120                 125

Tyr His Ser His Leu Ser Thr Gln Tyr Cys Asp Gly Leu Arg Gly Pro

    130                 135                 140

Phe Val Val Tyr Asp Pro Asn Asp Pro Ala Ala Asp Leu Tyr Asp Val

145                 150                 155                 160

Asp Asn Asp Asp Thr Val Ile Thr Leu Val Asp Trp Tyr His Val Ala

                165                 170                 175

Ala Lys Leu Gly Pro Ala Phe Pro Leu Gly Ala Asp Ala Thr Leu Ile

            180                 185                 190

Asn Gly Lys Gly Arg Ser Pro Ser Thr Thr Thr Ala Asp Leu Ser Val

        195                 200                 205

Ile Ser Val Thr Pro Gly Lys Arg Tyr Arg Phe Arg Leu Val Ser Leu

    210                 215                 220

Ser Cys Asp Pro Asn Tyr Thr Phe Ser Ile Asp Gly His Asn Met Thr

225                 230                 235                 240

Ile Ile Glu Thr Asp Ser Ile Asn Thr Ala Pro Leu Val Val Asp Ser

                245                 250                 255

Ile Gln Ile Phe Ala Ala Gln Arg Tyr Ser Phe Val Leu Glu Ala Asn

            260                 265                 270

Gln Ala Val Asp Asn Tyr Trp Ile Arg Ala Asn Pro Asn Phe Gly Asn

        275                 280                 285

Val Gly Phe Thr Gly Gly Ile Asn Ser Ala Ile Leu Arg Tyr Asp Gly

    290                 295                 300

Ala Ala Ala Val Glu Pro Thr Thr Thr Gln Thr Thr Ser Thr Ala Pro

305                 310                 315                 320

Leu Asn Glu Val Asn Leu His Pro Leu Val Thr Thr Ala Val Pro Gly

                325                 330                 335

Ser Pro Val Ala Gly Gly Val Asp Leu Ala Ile Asn Met Ala Phe Asn

            340                 345                 350

Phe Asn Gly Thr Asn Phe Phe Ile Asn Gly Thr Ser Phe Thr Pro Pro

        355                 360                 365

Thr Val Pro Val Leu Leu Gln Ile Ile Ser Gly Ala Gln Asn Ala Gln

    370                 375                 380

Asp Leu Leu Pro Ser Gly Ser Val Tyr Ser Leu Pro Ser Asn Ala Asp

385                 390                 395                 400

Ile Glu Ile Ser Phe Pro Ala Thr Ala Ala Ala Pro Gly Ala Pro His

                405                 410                 415

Pro Phe His Leu His Gly His Ala Phe Ala Val Val Arg Ser Ala Gly

            420                 425                 430

Ser Thr Val Tyr Asn Tyr Asp Asn Pro Ile Phe Arg Asp Val Val Ser

        435                 440                 445

Thr Gly Thr Pro Ala Ala Gly Asp Asn Val Thr Ile Arg Phe Arg Thr

    450                 455                 460

Asp Asn Pro Gly Pro Trp Phe Leu His Cys His Ile Asp Phe His Leu

465                 470                 475                 480

Glu Ala Gly Phe Ala Val Val Phe Ala Glu Asp Ile Pro Asp Val Ala

                485                 490                 495

Ser Ala Asn Pro Val Pro Gln Ala Trp Ser Asp Leu Cys Pro Thr Tyr

            500                 505                 510

Asp Ala Leu Asp Pro Ser Asp Gln

        515                 520

 

<210>3

<211>343

<212>PRT

<213>天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)

 

<220>

<221>成熟肽

<222>(1)..(343)

 

<400>3

 

Met Asp Arg Arg Gly Phe Asn Arg Arg Val Leu Leu Gly Gly Ala Ala

1               5                   10                  15

Ala Ala Thr Ser Leu Ser Ile Ala Pro Glu Val Ala Gly Ala Ala Pro

            20                  25                  30

Ala Ala Lys Gly Ile Thr Ala Arg Thr Ala Pro Ala Gly Gly Glu Val

        35                  40                  45

Arg His Leu Lys Met Tyr Ala Glu Lys Leu Ala Asp Gly Gln Met Gly

    50                  55                  60

Tyr Gly Phe Glu Lys Gly Lys Ala Ser Val Pro Gly Pro Leu Ile Glu

65                  70                  75                  80

Val Asn Glu Gly Asp Thr Leu His Ile Glu Phe Thr Asn Thr Met Asp

                85                  90                  95

Val Arg Ala Ser Leu His Val His Gly Leu Asp Tyr Glu Ile Ser Ser

            100                 105                 110

Asp Gly Thr Ala Met Asn Lys Ser Asp Val Glu Pro Gly Gly Thr Arg

        115                 120                 125

Thr Tyr Thr Trp Arg Thr His Lys Pro Gly Arg Arg Asp Asp Gly Thr

    130                 135                 140

Trp Arg Pro Gly Ser Ala Gly Tyr Trp His Tyr His Asp His Val Val

145                 150                 155                 160

Gly Thr Glu His Gly Thr Gly Gly Ile Arg Asn Gly Leu Tyr Gly Pro

                165                 170                 175

Val Ile Val Arg Arg Lys Gly Asp Val Leu Pro Asp Ala Thr His Thr

            180                 185                 190

Ile Val Phe Asn Asp Met Thr Ile Asn Asn Arg Lys Pro His Thr Gly

        195                 200                 205

Pro Asp Phe Glu Ala Thr Val Gly Asp Arg Val Glu Ile Val Met Ile

    210                 215                 220

Thr His Gly Glu Tyr Tyr His Thr Phe His Met His Gly His Arg Trp

225                 230                 235                 240

Ala Asp Asn Arg Thr Gly Ile Leu Thr Gly Pro Asp Asp Pro Ser Arg

                245                 250                 255

Val Ile Asp Asn Lys Ile Thr Gly Pro Ala Asp Ser Phe Gly Phe Gln

            260                 265                 270

Ile Ile Ala Gly Glu Gly Val Gly Ala Gly Ala Trp Met Tyr His Cys

        275                 280                 285

His Val Gln Ser His Ser Asp Met Gly Met Val Gly Leu Phe Leu Val

    290                 295                 300

Lys Lys Pro Asp Gly Thr Ile Pro Gly Tyr Glu Pro His Glu His Gly

305                 310                 315                 320

Gly Ala Thr Ala Lys Ser Gly Glu Ser Gly Glu Pro Thr Gly Gly Ala

                325                 330                 335

Ala Ala His Glu His Glu His

            340