酵母片用于治疗和/或预防高胰岛素血症的用途

摘要

本发明涉及酵母片在制备治疗和/或预防高胰岛素血症的药物组合物中的用途。

说明书

本发明涉及酵母片(yeast flakes)用于治疗和/或预防高胰岛素血症的用途。

胰岛素是由朗氏胰岛β细胞分泌的低血糖激素。胰岛素可以降低血糖，特别是通过激活葡萄糖向靶组织(肌肉、肝和脂肪组织)的运输。

2型糖尿病的特征在于第一期中的抗胰岛素转化，如同高胰岛素血症。某些肥胖也伴随高胰岛素血症。对于抗胰岛素的糖尿病，可以采用能降低过量血糖而不刺激胰岛素分泌的医药产品(例如二甲双胍)。

文件JP-A-61-167622公开包含啤酒酵母的细胞部分(cell fraction)的抗糖尿病试剂，该细胞部分在文件中称为细胞壁，且通过脱苦味啤酒酵母在50至70℃水解至少2个小时和对水溶性成分进行水相萃取而获得。特别地，所述啤酒酵母的细胞部分具有大约14.8％的葡聚糖含量，大约13.9％的甘露聚糖含量。所述细胞部分还具有大约24.9％的糖原含量。糖原是还存在于肌肉，特别是肝脏里的储备多糖。该糖原还是酵母的储备物质，其作为能量源用于酵母以确保酵母的存活。虽然在该日本申请中糖原是细胞部分的主要成分，但它不形成酵母的细胞壁部分。

专利申请WO2005/021015描述酵母片用于预防和治疗高胰岛素血症和稳定血糖的用途，所述酵母片具有低糖原含量且能通过简单酶自溶或水解方法获得。所述酵母片的葡聚糖和甘露聚糖的总含量为至少34.0重量％的干物质。

酵母细胞壁的β-葡聚糖基本上是葡萄糖聚合物，其主链的葡萄糖单元通过β-1，3键连接，其支链通过β-1，6键连接。酵母的β-葡聚糖是不溶解的且粘度低。

从酵母细胞壁纯化来的β-葡聚糖具有免疫刺激性。特别是，显示出酵母的β-葡聚糖能与巨噬细胞结合并激活它们。研究了酵母的β-葡聚糖的抗菌、抗病毒和抗肿瘤的应用(Adams D.S.，Journal of LeukocyteBiology，1997)。

本发明的主题是酵母片作为胰岛素调节剂的用途。

特别地，本发明的一个目的是酵母片用于治疗和/或预防高胰岛素血症的用途。

本发明的一个目的是酵母片在制备治疗和/或预防高胰岛素血症的药物组合物中的用途，所述酵母片具有：

·至少34.0重量％干物质含量的葡聚糖和甘露聚糖的总含量，和

·小于10.0重量％干物质含量的糖原含量。

术语“酵母片”指酵母细胞的不溶性部分，富含非铬，基本上通过蛋白酶，自溶或酶水解后得到，致使整个酵母细胞的至少50重量％，优选至少60％的干物质的溶解且保存细胞壁的结构性多糖，即β-葡聚糖和甘露聚糖，这些甘露聚糖为甘露糖蛋白的形式。

进行这个自溶或酶水解从而溶解大部分的酵母细胞的储备糖，即糖原和海藻糖。通过使用自溶或酶水解，优选持续至少18小时而分离可溶性部分得到酵母片。参考书《酵母技术》(Yeast Technology)，第2版，1991，G.Reed和T.W.Nogodawithana，Van Nostrand Reinhold出版，NewYork，ISBN 0-442-31892-8，描述了优选的酵母膏的自溶方法。然后通常使用常规干燥方法，例如喷雾干燥或热滚筒中干燥来干燥得到的酵母片。

本发明的酵母片具有在细胞壁中至少34.0重量％干物质的葡聚糖和甘露聚糖的总含量(系统地表现为葡萄糖和甘露糖的各自当量-见下面的测定方法)，和小于10.0重量％干物质的糖原含量(系统地表现为葡萄糖当量)。

术语“高胰岛素血症”是指基础高胰岛素血症和餐后高胰岛素血症。在一个有利的具体实施方案中，本发明的酵母片用于预防和/或治疗餐后高胰岛素血症。或者，本发明的酵母片用于预防和/或治疗基础高胰岛素血症。在另一个具体实施方案中，本发明的酵母片用于预防和/或治疗基础高胰岛素血症和餐后高胰岛素血症。

基础高胰岛素血症的特征在于高的基础血浆胰岛素水平。基础水平对应进餐之间，特别是一个人空腹时的胰岛素水平。通常，生理学的基础水平在苗条、健康个体中等于或小于10mU/L。因此，基础高胰岛素血症的特征在于进餐之间(特别是当空腹时)的基础水平大于10mU/L。

餐后高胰岛素血症对应食物摄入后的过量胰岛素反应。

通过口服葡萄糖耐受试验(OGTT)能够证实餐后高胰岛素血症。OGTT试验的生理学反应的特征在于健康苗条的个体中的胰岛素分泌峰通常在30至60mU/L。因此，餐后高胰岛素血症的特征在于胰岛素分泌峰大于60mU/L的OGTT反应。

使用本领域技术人员已知的常规技术测定患者的血浆胰岛素水平。特别是，对采自患者的血浆样品可以进行RIA试验(放射免疫测定)(例如，RIA，Biosurce，Medgenix Diagnostics，Rungis，France)。

治疗高胰岛素血症的目的在于降低基础血浆胰岛素水平和/或在食物摄入后恢复生理学胰岛素反应。

预防高胰岛素血症的目的特别在于保持基础血浆胰岛素水平在生理值和/或在食物摄入后保持生理学胰岛素反应。

本发明的主题特别在于治疗和/或预防餐后高胰岛素血症。

本发明的目的特别在于如上所述的用途，其中所述酵母片是釀酒酵母类(the genus Saccaromyces cerevisiae)。

所述酵母优选为面包酵母。面包酵母是属于釀酒酵母类的酵母，其基本上如上面所述的《酵母技术》的教导通过需氧增殖或培养生成，且与啤酒酵母相反，在面包酵母自溶或酶水解前不用于任何目的，例如啤酒酵母是制备啤酒的子产品，因此在被收集用于酶自溶或水解前，啤酒酵母用于制备啤酒。基本上啤酒酵母在厌氧条件下培养(啤酒的生产是一个厌氧过程)。

本发明的目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有至少40.0重量％干物质含量，优选至少45.0重量％干物质含量的葡聚糖和甘露聚糖的总含量。

本发明的酵母片具有以重量计17.0％至35.0％干物质含量，优选18.0％至26.0％干物质含量的蛋白质含量N×6.25。

本发明的特别目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有小于30重量％干物质含量的甘露聚糖含量。

在本发明一个优选的具体实施方案中，酵母片的甘露聚糖为以重量计20至26％的干物质含量。该具体实施方案对应于通过酶自溶或水解，例如前面和实施例1.1(标题：含有甘露聚糖的酵母片的制备)所述的可溶性部分的分离和不溶性部分的干燥而得到的酵母片。口服葡萄糖耐受试验(OGTT)后，相比于2型糖尿病患者使用的安慰剂，所述产品得到降低的胰岛素峰(参见实施例2)。

本发明的目的特别是如上所述的用途，其中所述酵母片具有小于2重量％干物质含量，特别是小于1重量％干物质含量，特别是小于0.1重量％干物质含量的甘露聚糖含量。

在本发明另一优选的具体实施方案中，酵母片的甘露聚糖含量小于0.1重量％干物质含量。

可以通过热碱处理去除甘露聚糖。热碱处理由以下步骤组成：将如上所述得到的本发明的酵母片放置于含水混悬液，在70℃至100℃下加热碱性介质中的混悬液持续最长3小时的时间。通过该处理溶解的包含大部分，甚至全部的甘露糖蛋白的部分通过离心和洗涤去除。收集且通常干燥残余的不溶性部分。

优选通过热碱处理去除甘露聚糖，接着进行酸处理以全部去除甘露聚糖。

这些处理在实施例部分有所详述。

对于从前述酵母片进行热碱性处理和任选地如前所述的酸处理(参见实施例1.1标题：不含甘露聚糖的酵母片的制备)，且其中甘露聚糖被全部或几乎全部去除(葡聚糖代表葡聚糖和甘露聚糖总含量的大部分)得到的所述产品，在2型糖尿病或超重患者中，相比于安慰剂，甚至相比于其中没有去除甘露聚糖的酵母片，OGTT试验后能得到降低的胰岛素峰(参见实施例2)。

本发明的目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有等于或小于90重量％干物质含量，特别是等于或小于80重量％干物质含量，特别是等于或小于70重量％干物质含量的葡聚糖和甘露聚糖的总含量。

更特别地，本发明的目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有以重量计45％至90％干物质含量，特别以重量计52％至80％干物质含量，优选以重量计65％至77％干物质含量，且进一步优选以重量计72％至77％的干物质含量的葡聚糖和甘露聚糖的总含量。因此，根据一个特别有利的具体实施方案，葡聚糖和甘露聚糖的含量为以重量计72％至77％的干物质含量。

显著地，在一个特别的具体实施方案中，本发明的目的是如上所述的用途，其中葡聚糖和甘露聚糖的含量为以重量计72％至77％的干物质含量，且甘露聚糖的含量小于2重量％的干物质含量，特别小于1重量％的干物质含量，特别小于0.1％。

或者，葡聚糖和甘露聚糖的含量还可以等于或小于55重量％干物质含量，条件是其保持高于45重量％的干物质含量。

因此，根据一个有利的具体实施方案，葡聚糖和甘露聚糖的含量为以重量计52％至57％的干物质含量。

显著地，在一个特别具体实施方案中，本发明的目的是如上所述的用途，其中葡聚糖和甘露聚糖的含量为以重量计52％至57％的干物质含量，且甘露聚糖的含量小于2重量％的干物质含量，特别小于1重量％的干物质含量，特别小于0.1％。

本发明的目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有小于8.0重量％干物质含量，优选小于5.0重量％干物质含量，优选小于3.0重量％干物质含量，优选小于1.0重量％干物质含量，且进一步优选小于0.1重量％干物质含量的糖原含量。

为了从酵母片中完全或几乎完全去除糖原，可以使本发明的酵母片进行如上所述的热碱处理，且优选热碱性处理，接着进行酸处理。

采用所述处理能生成具有以重量计45％至90％干物质含量，优选以重量计52％至80％干物质含量，优选以重量计65％至77％干物质含量，且进一步优选以重量计72％至77％干物质含量的葡聚糖和甘露聚糖的总含量的本发明的酵母片。采用所述处理特别能生成还包含小于1.0重量％干物质含量的糖原，优选小于0.1重量％干物质含量的糖原的酵母片。

本发明的药物组合物可以不同形式或规格给药。

本发明的药物组合物包含至少一种以酵母片为代表的活性物质和药学上可接受的载体。

本发明的药物组合物可以包含一种或多种其它活性物质，例如选自降血糖剂或胰岛素敏化剂，特别地选自降血糖的磺酰胺、双胍、二甲双胍或噻唑烷二酮类衍生物、α-葡萄糖苷抑制剂。

所述制剂还可以包含一种或多种维生素，特别选自维生素A、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、维生素B1(硫胺)、B2(核黄素)、B3(烟酸)、B5(泛酸)、B6、B8(生物素)、B9(叶酸)、B12(钴胺素)和/或一种或多种食品矿物质，特别选自钙、磷、钾、钠、镁或铁。

本发明的目的还是如上面定义的包含铬的药物组合物。

药物组合物还可以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在一个优选的具体实施方案中，本发明的药物组合物适于经口服途径给药。

特别地，药物组合物为片剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒或混悬液的形式。

特别地，药物组合物可以以一剂摄入量为本发明酵母片的干物质含量小于10g，优选8至9g的形式。

在一个优选具体实施方案中，本发明的目的是如上所述的用途，其中所述酵母片具有等于或大于90重量％，优选等于或大于94重量％，且进一步优选等于或大于96重量％的干物质含量。

对于所述干物质含量等于或大于90重量％，优选等于或大于94重量％，且进一步优选等于或大于96重量％，能得到酵母片的更好保存性，特别是更好的细菌学稳定性和更好的抗不良反应的稳定性(无论是否是酶源的不良反应)。

本发明的目的是如上定义的酵母片用于预防和/或治疗高胰岛素血症，无论基础或餐后高胰岛素血症的用途，不考虑高胰岛素血症的起源。

特别地，本发明的目的是如上定义的酵母片针对患有该源的高胰岛素血症的任何类型的患者，用于预防和/或治疗伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的高胰岛素血症的用途。

然而，虽然本发明用于预防和治疗任何类型的高胰岛素血症，适于任何类型的患者，但是在一个有利的具体实施方案中，本发明的片用于制备预防和/或治疗非糖尿病患者的高胰岛素血症的医药产品。在这种情况下，本发明的目的特别是如上定义的酵母片用于预防和/或治疗非糖尿病患者的伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的高胰岛素血症的用途。

或者，本发明的片还可以用于制备用于预防和/或治疗2型糖尿病患者的高胰岛素血症的医药产品。特别地，本发明的目的是如上定义的酵母片用于预防和/或治疗2型糖尿病患者的伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的高胰岛素血症的用途。

术语“2型糖尿病”还指非胰岛素依赖型糖尿病NIDD。2型糖尿病的特征在于空腹血糖大于1.26g/L。

当空腹血糖在1.10g/L至1.26g/L之间，使用术语血糖异常。

特别地，本发明的目的是如上定义的酵母片在2型糖尿病的第一期期间，用于预防和/或治疗高胰岛素血症的用途。

术语“抗胰岛素”是指胰岛素依赖型组织对胰岛素作用缺乏反应。然后胰腺继续分泌胰岛素导致血浆水平变得非常高。

术语“超重”或“肥胖”是指体重过重。对成人而言，超重特征在于体重指数(BMI)在25至30kg/m²之间，肥胖的体重指数(BMI)大于30kg/m²。人的体重指数如下列公式定义：

表述“非糖尿病人的超重或肥胖”指会正常调节血糖的人的如上定义的超重或肥胖。

特别地，空腹非糖尿病人的葡萄糖浆水平小于1.26g/L(7mmol/L)，特别是小于1.10g/L(6.1mmol/L)。

表述“代谢综合征”是指发展成心血管疾病，中风和2型糖尿病的风险因素。

代谢综合征的诊断基于数个参数的评价，包括腰围尺寸(wastesize)、胆固醇和甘油三酯水平、空腹血糖、胰岛素血症和血压。

特别地，根据NCEP-ATPIII(国家胆固醇教育规划-成人治疗委员会III，National Cholesterol Education Program-Adult treatment PanelIII)，如果存在三种或三种以上下列风险因素就可以诊断代谢综合征：

-女人腰围尺寸超过88cm，男人腰围尺寸超过102cm

-男人HDL胆固醇水平小于1mmol/l，女人HDL胆固醇水平小于1.2mmol/l，

-甘油三酯水平等于或大于1.7mmol/l

-空腹血糖等于或大于6.1mmol/l

-血压高于130mm Hg/85mm Hg。

餐后高胰岛素血症在代谢综合征的发展中起到特别的作用。

本发明还涉及治疗和/或预防患者高胰岛素血症的方法，包括给予患者本发明的药物组合物。

特别地，治疗和/或预防患者高胰岛素血症的方法可以是预防和/或治疗伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的高胰岛素血症的方法。在一个有利的具体实施方案中，患者是非糖尿病患者。或者，患者是2型糖尿病患者。

本发明特别涉及药物组合物经口服途径给予患者的方法。

特别地，本发明不同的方法包括给予患者日剂量为1至10g，优选8至9g的本发明的酵母片的药物组合物，所述日剂量可能以单剂量给予或单次摄入例如早餐给予，或者以数个部分剂量给予，即在整天中分次给予。

本发明的方法还包括在急性或慢性给予药物组合物后的至少一个验证步骤，以检查患者的基础胰岛素水平和/或食品摄入后或OGTT试验后的胰岛素反应。

本发明的方法还包括在急性或慢性给予上述药物组合物前的测量步骤，以测量患者的基础胰岛素水平和/或以评价食品摄入后或OGTT试验后的胰岛素反应。

本发明还涉及降低或稳定患有基础高胰岛素血症的患者的基础胰岛素血浆水平的方法，包括给予所述患者有效量的本发明的药物组合物。

特别地，降低或稳定基础胰岛素血浆水平的方法可以涉及患有伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的基础高胰岛素血症的患者。在一个有利的具体实施方案中，患者是非糖尿病患者。或者，患者是2型糖尿病患者。

本发明还涉及降低患有餐后高胰岛素血症的患者在食品摄入后的胰岛素分泌峰的方法，包括给予所述患者有效量的本发明的药物组合物。

特别地，降低在食品摄入后的胰岛素分泌峰的方法可以涉及患有伴随有抗胰岛素、超重、肥胖或代谢综合征的餐后高胰岛素血症的患者。在一个有利的具体实施方案中，患者是非糖尿病患者。或者，患者是2型糖尿病患者。

附图说明

-图1：超重患者的餐后高胰岛素血症的动力学(n＝12)。

研究3天的结果以平均值±标准误差(SEM)表示。已经摄入牛奶的对照组的胰岛素血症显示为带有正方形的实线，已经摄入不含甘露聚糖(β-葡聚糖)的酵母片的人的胰岛素血症显示为带有菱形的虚线，已经摄入含有甘露聚糖的酵母片的人的胰岛素血症显示为带有三角形的点划线。胰岛素水平(mU/L)为时间(分钟)的函数。

-图2：超重的人的餐后高胰岛素血症的趋势显示为曲线下的面积(AUC)(n＝12)。

研究3天的结果以平均值±标准误差表示。已经摄入牛奶的对照组的曲线下面积显示为黑线，已经摄入不含甘露聚糖(β-葡聚糖)的酵母片的人的曲线下面积显示为密集的点划线，已经摄入含有甘露聚糖的酵母片的人的曲线下面积显示为稀疏的点划线。给出0-300分钟期间(总计)，0-120分钟期间和120-300分钟期间的胰岛素血症的面积(mU/L*时间)。

-图3：2型糖尿病人的餐后高胰岛素血症的动力学(n＝11)。

研究3天的结果以平均值±标准误差(SEM)表示。已经摄入牛奶的对照组的胰岛素血症显示为带有正方形的实线，已经摄入不含甘露聚糖(β-葡聚糖)的酵母片的人的胰岛素血症显示为带有菱形的虚线，已经摄入含有甘露聚糖的酵母片的人的胰岛素血症显示为带有三角形的点划线。胰岛素水平(mU/L)为时间(分钟)的函数。

-图4：2型糖尿病患者的餐后高胰岛素血症的趋势显示为曲线下的面积(AUC)(n＝11)。

研究3天的结果以平均值±标准误差(SEM)表示。已经摄入牛奶的对照组的曲线下面积给出为黑色，已经摄入不含甘露聚糖(β-葡聚糖)的酵母片的人的曲线下面积显示为密集的点划线，已经摄入含有甘露聚糖的酵母片的人的曲线下面积显示为稀疏的点划线。给出0-300分钟期间(总计)，0-120分钟期间和120-300分钟期间的胰岛素血症的面积(mU/L*时间)。

实施例

实施例1：本发明酵母片的制备

1、材料和方法

含有甘露聚糖的酵母片的制备

使具有以重量计12至18％干物质含量的釀酒酵母的含水乳膏(即酵母细胞在水中的混悬液)，采用所述酵母细胞的内源性酶，任选补充有酵母细胞的外源性蛋白酶，例如木瓜蛋白酶，进行水解。在50℃进行水解持续24小时从而溶解至少60重量％的酵母细胞的干物质。

在实践中，通常在45℃至55℃进行自溶和酶水解持续18至36小时，而不使用能溶解葡聚糖或甘露糖蛋白的任何酶。

通过数个连续的步骤采用离心和水洗涤从不溶性部分中分离可溶性部分。

在热滚筒中将不溶性部分干燥至95重量％的干物质含量。采用筛分去除形成的附聚体，并得到本发明的酵母片。

不含甘露聚糖的酵母片的制备

将前面得到的酵母片置于含水混悬液中并在碱性介质中于70℃至100℃下加热不超过3个小时。特别地，将碱性氢氧化钠含水介质的混悬液加热至85℃持续2个小时。

去除通过该处理可溶的部分，收集，洗涤和通常干燥残余的不溶性部分。通过离心和洗涤去除包含甘露糖蛋白和糖原的可溶性部分。

优选将热碱性处理后得到的酵母片进行酸处理以去除非常微量的甘露糖蛋白。下一步将不溶性部分用磷酸或乙酸酸化，然后在80℃培养1至2小时。通过离心和洗涤去除含有甘露糖蛋白、糖原和某些脂质的残余物的可溶性部分。

糖原含量的测定

将0.5ml的0.25M Na₂CO₃加至20mg干燥酵母片的样品中，即具有至少90重量％干物质含量的酵母片，并将混合物在95℃放置4小时。

然后通过加入0.3ml的1M乙酸和1.2ml的0.2M乙酸钠，并混合各成分以将混合物调至pH 5.2。加入蒸馏水至总体积2ml。

在例如由ROCHE以目录编号102857市售的，黑曲霉素的过量淀粉葡萄糖苷酶的存在下，将由此得到的0.5ml混悬液在55℃培养15小时。

过滤后，通过酶分析法分析释放的葡萄糖。

手册《生化分析和食品分析的方法-使用单个反应剂》(Methods ofBiochemical Analysis and Food Analysis-using Single reagents)，BOEHRINGER MANNHEIM GmbH Biochemica出版1989，50至55页特别描述了葡萄糖的酶分析法，并优选使用“联合试验D-葡萄糖/-果糖(Test-Combination D-Glucose/-Fructose)”目录编号139 106(来自ROCHE附属公司：BOEHRINGER MANNHEIM GmbH/R-BIOPHARM GmbH Darmstadt Germany)进行葡萄糖的酶分析法。

因此，分析的葡萄糖的量(mg)对应存在于样品中，以葡萄糖当量表示的糖原的量。

葡聚糖和甘露聚糖的总含量的测定

将20mg的干燥酵母片样品，即具有至少90重量％的干物质含量的酵母片，通过与20ml的2N HCl混合进行酸水解，将混合物在闭合螺旋盖管中于103℃，烘箱内，每15mn搅拌下放置4小时。

然后中和由此得到的酸溶液，在中和的溶液中酶法分析葡萄糖和甘露糖的分别量。

在上面所述的手册50至55页还描述了葡萄糖和甘露糖的酶分析法，优选采用“联合试验”目录号139 106进行酶分析。

计算使用该方法分析的葡萄糖的量(以mg表示)，和使用上面方法对这些酵母片分析的葡萄糖的量(也以mg表示)之间的差异，从而测定糖原的含量。

两种葡萄糖分析量的差异(以mg计)对应样品中存在的葡聚糖的总量，该量以葡萄糖当量表示。

甘露糖分析量(以mg计)对应样品中存在的甘露聚糖的总量，该量以甘露糖当量计。

2、结果

由此得到的酵母片具有95重量％的干物质含量。

在表1中给出含有甘露聚糖的酵母片组合物和不含甘露聚糖的酵母片的组合物(通过热碱处理而获得的)。

表1：本发明酵母片的细合物

对于两种类型的酵母片，糖原的含量小于10重量％干物质含量。

实施例2：本发明酵母片对超重非糖尿病人的胰岛素水平和非胰岛素依赖型糖尿病人的胰岛素水平的作用

在残余物中，含有甘露聚糖的酵母片被称为“酵母片”，不含甘露聚糖的酵母片被称为“β-葡聚糖”。

1、材料和方法

受试者、特性和样品大小

征集2种类型的24例自愿受试者：12例健康超重自愿受试者和12例2型糖尿病人(男人或女人)。

对于超重自愿受试者，纳入标准是：体重指数25至30kg/m²(包含界限)，年龄30至65岁(包含界限)，正常空腹血糖：＜7mmol/l，HbAlc：＜6％，总胆固醇：≤7.0mmol/l，甘油三酯：≤4.0mmol/l。

对于2型糖尿病受试者，纳入标准是：年龄30至65岁(包含界限)，接受二甲双胍和/或降血糖的磺酰胺和/或格列奈和/或格列酮治疗至少3个月，HbAlc：＜10％，总胆固醇：≤7.0mmol/l，甘油三酯：≤4.0mmol/l。

主要的排除标准是：1型糖尿病，接受胰岛素或阿卡波糖治疗的2型糖尿病、胰岛素贫乏症(insulinopenia)、慢性肾虚或肝虚、慢性胃肠疾病史、内分泌病理学、可能妨碍碳水化合物代谢和摄食行为的治疗、对牛奶不耐受、幽居恐怖症(量热测定)、妊娠妇女、消费大量禁用食品名单上的产品的人。

只有一例糖尿病人在第一次诱导高血糖期间证实是胰岛素贫乏型的，由于不符合定义的纳入标准，所以被从试验排除。其他23例受试者完成了研究。

口服葡萄糖耐受试验(OGTT)

试验进行超过3次的住院治疗，以7至14天为间隔。每个受试者给予3种OGTT随机顺序抽取。

在OGTT试验中使用8g酵母片和9g β-葡聚糖。应注意8g计划剂量酵母片的消耗量没有超出面包酵母和食品酵母中观测的消耗量水平。

将产品稀释在167ml的含有50g ¹³C葡萄糖的30％ ¹³C葡萄糖溶液中。对于安慰餐试验，167ml的¹³C葡萄糖溶液补充有28ml的全脂牛奶和50ml半脱脂牛奶以得到等于8g酵母片和9g β-葡聚糖的能量摄入。

代谢期被分成两部分：基础时期(T-120至T0)，在该时期测定基础条件(空腹)，然后是4小时45分钟的餐后时期(T15-T300)，以连续进行OGTT试验。

在OGTT试验期间，在T0给予患者50g的¹³C葡萄糖。取决于随机顺序，进行可能的临时添加(extemporaneous addition)以制成酵母片溶液或β-葡聚糖溶液或牛奶。少于10分钟摄入该溶液。保持卧姿的患者在接下5小时不能睡眠。在研究期间，允许受试者喝水(最多300ml)。

在基础时期(T-120至T0)和餐后时期(T15至T300)测定血浆胰岛素水平。将静脉样品快速离心，并收集血浆用于胰岛素分析。通过放射免疫分析(MedgenixRungis France)进行血浆胰岛素分析。

统计处理

结果存在为每组平均值±平均数的标准误差(SEM)。采用非参数威而克森检验(non-parametric Wilcoxon test)对配对组成对地比较得到的结果，该结果具有3种条件(酵母片、β-葡聚糖和安慰剂(牛奶))。为了进行这些统计试验，使用的软件是Statview(Statview，AbacusConcepts，Berkeley，CA)。

2、结果

观测两种测试酵母产品的良好消化耐受。

超重受试者在贯穿3种OGTT试验中的胰岛素血症的趋势

对口服葡萄糖摄入的反应导致胰岛素血症的增加，相比于安慰剂，在β-葡聚糖存在下显著降低。

相比于安慰剂，在β-葡聚糖存在下胰岛素峰显著降低(63.0±7.7mU/L对比牛奶条件下的91.6±13.4mU/L)(P＜0.01)(图1)。在β-葡聚糖存在下胰岛素血症的曲线下面积显著低于安慰剂的胰岛素血症的曲线下面积(P＜0.05)(图2和表2)。

对于酵母片，相比于安慰剂观测到胰岛素峰和曲线下面积降低的趋势。

表2：超重受试者的胰岛素峰(mU/L)和胰岛素血症的曲线下面积(mU/L*时间)。结果以平均值±平均数的标准误差表示(n＝12)。p＜x＝相比于安慰剂(牛奶)的显著差异。

  超重胰岛素血症  牛奶  酵母片  β-葡聚糖  胰岛素峰  91.6±13.4  84.2±13.2  63.0±7.7  P＜0.01  曲线下面积  0-300mn  8715±1130  8570±1444  6736±591  P＜0.05  曲线下面积  0-120min  6499±903  6214±960  4816±504  P＜0.05  曲线下面积  2216±335  2356±548  1920±158  120min

2型糖尿病受试者在贯穿3种HGPO试验中的胰岛素血症的趋势

在β-葡聚糖存在下和酵母片存在下还观测到2型糖尿病受试者胰岛素反应的降低趋势。

在β-葡聚糖和酵母片存在下胰岛素峰显著降低(分别地44.2±6.0mU/L和43.8±4.7mU/L对比牛奶56.1±8.8mU/L)(P＜0.05)(图3和表3)。

相比于安慰剂，在酵母片和β-葡聚糖存在下曲线下面积显著降低(图4和表3)

表3：2型糖尿病受试者的胰岛素峰(mU/L)和胰岛素血症的曲线下面积(mU/L*时间)。结果以平均值±平均数的标准误差表示(n＝11)。p＜x＝相比于安慰剂(牛奶)的显著差异。

  超重胰岛素血症  牛奶  酵母片  β-葡聚糖  胰岛素峰  56.1±8.8  43.8±4.7  P＜0.05  44.2±6.0  P＜0.05  曲线下面积  0-300min  9049±1070  7947±821  P＝0.05  8248±878  P＜0.05  曲线下面积  0-120min  4325±619  3644±381  3708±404  曲线下面积  120min  4725±587  430±502  4540±498

因此，在两组人群，即非糖尿病超重患者和2型糖尿病患者中的胰岛素血症的结果显示出在摄入不含甘露聚糖的酵母片之后对胰岛素反应的明显降低。相同结果也应用于摄入含甘露聚糖的酵母片的2型糖尿病患者。