一种从五味子制备恰米醛的方法

摘要

本发明提供一种从中药五味子制备恰米醛的方法，将五味子药材经超临界CO

说明书

技术领域

本发明属于中药有效成分的提取、分离与纯化方法，具体涉及从五味子制备恰米醛的方法，是从超临界CO₂萃取的五味子浸膏中分离、纯化获得恰米醛化合物的方法。

背景技术

五味子为木兰科植物五味子Schisqndra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。五味子是我国名贵中药之一，具有益气、滋肾、敛肺、固精、益脾、生津、安神等多种功效，传统医学对五味子的功效有详细记载。现代药理学研究证明，五味子挥发油中主要成分为柠檬醛(Citral)、α-依兰烯(α-Yiangene)、α-恰米稀(α-Chamigrene)、β-恰米烯(β-chamgrene)和恰米醛(Chamigrenal)等，对中枢神经系统不但有安定作用，而且还有抗惊蕨作用。

近年来，五味子的开发与应用的研究取得了多方面的进展。专利CN101177436提出了一种制备五味子素的方法，通过溶剂油浸提、蒸馏浓缩等工艺步骤，得到富含五味子素的总木质素浸膏，然后进一步分离、制备高纯度的五味子素。专利CN1559492公开了一种从五味子中提取抗脑老化物质的方法，并开发了一种具有增强记忆作用的中药。专利CN101301356则发明了一种具有保肝作用的新药，其主要成分是五味子木脂素类化合物。据报道，该药物对酒精肝有良好的治疗效果，又不会对肝脏造成二次伤害。专利CN1919258研究了五味子的提取物在降低抗肿瘤药物副作用的功效，发现五味子的醇提物能减轻抗癌药引起的心血管毒性、肝肾毒性、免疫抑制和脱发等毒副作用。专利CN101301357以含有五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素等有效成分的提取物为原料，开发了多种剂型的抗抑郁药。五味子抗抑郁药不仅抗抑郁效果良好，还避免了常规抗抑郁药会诱发癫痫等缺陷。

显然，五味子有效成分的提取工艺及得到了广泛的关注和研究。但是，国内开发五味子药物的工艺普遍采用的还是传统的技术和方法。例如，五味子挥发性有效部位的制备依然是传统的水蒸气蒸馏法或有机溶剂浸提法为主导。因为工艺技术和装备落后，五味子提取物的有效成分含量偏低且质量不稳定。因此，迫切需要引入新的制备、分离和纯化技术手段。专利CN1437972将超临界萃取新工艺用于从五味子提取治疗失眠的有效成分，得到了高纯度的有效物质，具有良好的治疗效果。

超临界流体萃取是近年来迅速发展起来的一种新型“绿色”萃取技术，具有操作温度低，时间短，提取效率高，产品质量好且无溶剂残留、无环境污染等优点，特别适于脂溶性、低沸点、热敏性成分的提取。但是，中药材是多组分体系，挥发油中化合物也是种类繁多。因此，为了得到较纯的有效部位或纯净物，就必须结合其它分离技术。柱层析技术是目前分离复杂体系最有效的方法，而且操作条件温和，不会破坏有效成分的生物活性，因而在中药有效部位或单体化合物分离纯化领域广泛应用。因此，超临界萃取与层析分离的耦合技术在中药中挥发性药效成分的制备方面具有明显的技术优势与工业前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从中药五味子制备恰米醛的方法。该方法的优点是利用超临界萃取与层析分离的特长，从五味子制备一种有安定、抗惊厥作用的有效成分。所得到的产物经高效液相色谱分析，其纯度在90％以上(峰面积归一法)。此外，核磁鉴定确定该提取产物的分子结构为恰米醛。

本发明通过以下技术手段达到目标化合物的制备：

以中药五味子为原料，经超临界CO₂萃取得到浸膏状萃取物；所得萃取物经硅胶柱吸附，并通过石油醚洗脱；洗脱液用薄层色谱检测，收集含目标物斑点的洗脱液；洗脱液经减压浓缩后得到澄清油状中间体；中间体再通过十八烷基硅烷键合硅胶填料柱层析分离，乙醇溶液洗脱，洗脱液再经浓缩后得到最终目标产物，经分析鉴定为恰米醛。

超临界CO₂萃取首先设定一、二级分离器的工作压力和温度，萃取釜压力范围为15～40MPa，其中以20～25MPa为较好；萃取温度为35～60℃，其中以45～55℃为较好。一级分离器的压力为7～9MPa，温度为50～60℃；二级分离器的压力为4～6MPa，温度为40～55℃。根据超临界萃取设备的能力设定合适的CO₂的流量，并循环使用，萃取过程中，相对于容积为1L的萃取釜，CO₂流量范围为10～30L/h，其中以15～20L/h为较好。动态提取的时间为3～5小时。萃取物从分离器的底部放出，收集在容器中。

将超临界萃取物经硅胶柱吸附，然后用沸点为60℃-90℃的石油醚为洗脱剂洗脱。洗脱液用薄层色谱检测，薄层色谱检测的展开剂为石油醚∶乙酸乙酯(体积比)＝50∶1，目标物斑点R_f值约为0.6，在254nm下有紫色荧光，收集含目标物斑点的洗脱液，然后在真空状态下浓缩洗脱液，得到微黄色有淡香味的澄清油状液体(中间体)。

中间体进一步通过十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)柱层析分离，以乙醇水溶液为洗脱剂，乙醇的浓度为50％～95％，其中以60％～70％为较好。洗脱液用相同的薄层色谱方法检测，收集含目标物斑点的洗脱液，然后再浓缩，得到白色澄清而具挥发性的产物。

本发明的优点在于：(1)制备工艺路线设计合理、操作步骤紧凑，综合利用超临界萃取与层析分离的技术优势，所制备的化合物纯度较高。(2)因为采用超临界萃取技术和严格控制操作温度，能够有效地避免有效成分的氧化或受热分解。

附图说明

图1为本发明制备产物的HPLC。

图2为本发明制备产物的氢谱图。

图3为本发明制备产物的碳谱图。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例1

将300g粉碎后的五味子粉末放入1L萃取釜内，将整个萃取系统用CO₂置换并充满。设定萃取装置参数，CO₂流量20L/h；萃取压力为25MPa，温度为45℃；一级分离器的压力为8MPa，温度为35℃，二级分离器的压力为6MPa，温度为40℃。连续动态萃取4h后，所得产物为黄色油状物，且具有五味子特有的清香味。称重提取物，共计33.6g，萃取得率为11.2％。

实施例2

将300g粉碎后的五味子粉末放入1L萃取釜内，将整个萃取系统用CO₂置换并充满。设定萃取装置参数，CO₂流量20L/h；萃取压力为20MPa，温度为38℃；一级分离压力为8MPa，温度为35℃，二级分离压力为6MPa，温度为40℃。连续动态萃取4h后，从分离器底部出料后收集黄色油状萃取物，共计27.0g，萃取得率为9.0％。

实施例3

将300g粉碎后的五味子粉末放入1L萃取釜内，将整个萃取系统用CO₂置换并充满。设定萃取装置参数，CO₂流量15L/h；萃取压力为23MPa，温度为38℃；一级分离压力为8MPa，温度为35℃，二级分离压力为6MPa，温度为40℃。连续动态萃取5h后，从分离器底部出料后收集黄色油状萃取物，共计30.3g，萃取得率为10.1％。

实施例4

取20g实施例1所得到萃取物，用硅胶柱(长35.5cm，底面直径5.0cm，青岛海洋化工有限公司提供)吸附，并用沸点为60℃-90℃的石油醚洗脱。洗脱液用薄层色谱检测。在展开剂为石油醚∶乙酸乙酯(体积比)＝50∶1下展开，目标点R_f值约为0.6，且在254nm下有紫色荧光。收集所有含目标物斑点的洗脱液，然后在55℃下减压浓缩，得到1.5g微黄色有淡香味的澄清油状液体(中间体)。

实施例5

将实施例4所得1.5g中间体用另一ODS柱吸附(长27.5cm，底面直径1.8cm)，并以60％乙醇洗脱。收集洗脱液并用薄层色谱检测，检测方法和要求与实施例4相同。然后，将所有含目标物斑点的洗脱液集中，在60℃下减压浓缩，得到0.482g白色澄清而具挥发性(静置一段时间后，试管上壁会有乳白色浑浊的雾化物)的产物。

实施例6

将制备得到的产物溶于少量甲醇，用高效液相色谱(HPLC)检测其纯度。所用色谱柱为汉邦的Lichrospher C₁₈柱(250mm×4.6mm)。流动相为甲醇∶水＝70∶30。检测波长为250nm。流速为1mL/min。液相图谱参见附图1。图中出峰时间为38.401的物质即为目标产物，由峰面积归一法可得主成分的含量为91.4％

实施例7

将制备得到产物溶于氘代氯仿，通过核磁共振技术(NMR)来鉴定其主成分的分子结构。所得氢谱结果见附图2，所得碳谱结果见附图3。综合分析核磁共振谱图所包含的信息，推断所制备化合物为恰米醛，其分子式为C₁₅H₂₂O，结构式为：