一种测定食品中棉籽糖和水苏糖含量的方法

摘要

一种测定食品中棉籽糖和水苏糖含量的方法，首先按以下步骤绘制棉籽糖或水苏糖标准曲线：(1)配制标准液；(2)将标准液在薄层板上采用条带点样，在层析缸中恒温展开；(3)吹干，喷上显色剂，置于烘箱中显色，在显色区域，取样收集于离心管中，加入水，离心，取上清液；(4)取上清液于具塞试管中，加苯酚溶液，摇匀，迅速加H

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速测定食品中棉籽糖和水苏糖含量的方法，特别涉及高寡糖含量制品中棉籽糖和水苏糖的薄层色谱检测方法。

背景技术

棉籽糖(raffinose)，beta.-D-fructofuranosyl O-.alpha.-D-Galactopyranosyl-(1→6)-.alpha.-D-Glucopyranoside，由右旋半乳糖、右旋葡萄糖和左旋果糖各一分子组成，是一种由三个单糖组成的新型功能性低聚糖。一般可以由棉子饼磨粉水解或甜菜糖蜜制得的一种三糖。长期以来人们都认为棉籽糖是肠胃胀气因子，常常在加工过程中利用各种方法将其除去。后来随着人们对棉籽糖的双歧杆菌促生作用的认识，发现棉籽糖不仅仅是是一种优良的双歧杆菌增殖因子外，还具有低能量、能抑制肠内腐败产物、改善排便功能、防止便秘及增强机体免疫力、抵抗肿瘤等多种生理功能。

水苏糖(stachyose)是一种非还原性四糖，存在于豆科植物中，是大豆中的主要碳水化合物。它对人体有双重作用。(1)有害作用。由于人体的消化系统中不分泌α-半乳糖苷酶，不能消化水苏糖。但该糖进人大肠后能被细菌分解，产生二氧化碳，氢和甲烷，易引起腹胀，成为豆类食品中的抗营养因素。(2)保健作用。由于此糖难以消化，对胃酸稳定，经口摄入后不被消化而到达人体结肠，被此处的双歧杆菌等有益菌选择代谢利用。此外，水苏糖还具有耐热、耐酸的特性。可将其添加到清凉饮料和酸性食品中作为配料，可供体内双歧杆菌等有益菌减少的老年人、体质虚弱者、糖尿病者和非母乳喂养的婴儿食用。

目前，棉籽糖和水苏糖的检测方法主要有高效液相色谱法(配示差折光检测器、蒸发光散射检测器或质谱)和薄层色谱法(Thin-layer chromatography，TLC)，HPLC法虽然准确，但是仪器昂贵，费用较高，不利于国内广大基层检测部门仪器落后，操作人员素质普遍偏低的环境下推广，对于目前大多数国内食品企业生产检测不太现实，因此，建立一种快速准确测定棉籽糖和水苏糖的方法很有必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单的检测食品中或大豆低聚糖中棉籽糖和水苏糖含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

1、棉籽糖或水苏糖标准曲线的绘制。

(1)配制一定梯度浓度的棉籽糖或水苏糖标准液；

(2)将棉籽糖或水苏糖标准液在薄层板上采用条带点样，条带的长度为2～3cm，点样量为5～6μL，在层析缸中25～35℃恒温展开；

(3)展开后取出，吹干，喷上显色剂，置于85～100℃烘箱中显色7～15min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖或水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的条带面积，收集于离心管中，加入3～4mL水摇匀超声10～20min后取出，3500～5000r/min离心5～10min，取上清液。所述层析缸中展开剂是乙腈∶冰乙酸∶水(5～7∶2～4∶1～3)，显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸，所述薄层板为硅胶薄层板(Si F250)；

(4)取1～2mL的上述上清液于具塞试管中，加1～2mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴3～5min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度；

(5)根据棉籽糖或水苏糖标准液吸光度和浓度绘制出标准曲线。

2、食品样品中棉籽糖或/和水苏糖含量的测定。

将食品样品前处理，去除蛋白质、脂肪、淀粉或其他多糖类的物质，然后按棉籽糖或水苏糖标准曲线的绘制中(2)-(4)的步骤进行操作，通过上述标准曲线计算出样品中的棉籽糖或/和水苏糖的含量。

本发明所述的检测方法，适用于食品中棉籽糖和水苏糖的薄层色谱检测。前处理完成之后，按上述(2)-(4)的步骤处理。食品前处理参照GB/T 5009.7-2003所述的方法来处理：

乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类：称取约50.0g～100.0g固体试样(吸取25.00mL～50.00mL液体试样)，置于250mL容量瓶中，加50mL水，慢慢加入4mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30min，用干燥滤纸过滤，滤液备用。

酒精性饮料：吸取100.0mL试样，置于蒸发皿中，用氢氧化钠(40g/L)溶液中和至中性，再水浴蒸发至原体积的四分之一后，移入250mL容量瓶中，加水至刻度。

含大量淀粉的食品，称取50.00g～100.00g试样置于250mL容量瓶中，加水200mL，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇。冷后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中，以下按乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类中自“慢慢加入5mL乙酸锌溶液......”起依法操作。

汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100.0mL～200.0mL试样置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用。

含脂肪比较多的食品：利用索氏提取法将其中的脂肪去除。

上述乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL；亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。

本发明所述的检测方法，也适用于大豆低聚糖中棉籽糖和水苏糖含量的薄层色谱检测。其过程是：将大豆低聚糖稀释2～10倍；然后按上述(2)～(4)的步骤处理。

本发明用于食品中棉籽糖和水苏糖的薄层检测方法的优点是：简便、快速、价格低廉，对仪器设备要求不高；样品检测准确，重复性好，具有良好的使用前景。

附图说明

图1为棉籽糖标准曲线图。

图2为不同梯度浓度的棉籽糖标准品薄层色谱图。

图3所示为测定可乐中棉籽糖和水苏糖含量的一个实施例色谱图。其中标记1为蔗糖、2为棉籽糖、3为水苏糖。

图4所示为测定冰激凌中棉籽糖和水苏糖含量的一个实施例色谱图。其中标记1为蔗糖、2为棉籽糖、3为水苏糖。

图5所示为测定饼干中棉籽糖和水苏糖含量的一个实施例色谱图。其中标记1为蔗糖、2为棉籽糖、3为水苏糖。

图6所示为测定大豆低聚糖中棉籽糖和水苏糖含量的一个实施例色谱图。其中标记1为蔗糖、2为棉籽糖、3为水苏糖、4为蔗糖标准样、5为棉籽糖标准样、6为水苏糖标准样。

具体实施方式

本发明将通过以下实施例作进一步的说明。

实施例1。

棉籽糖、水苏糖标准曲线的绘制。

(1)配制一定梯度浓度的棉籽糖或水苏糖标准液；

(2)将棉籽糖或水苏糖标准液在薄层板上采用条带点样，条带的长度为2cm，点样量为5μI，在层析缸中30℃恒温展开；

(3)展开后取出，吹干，喷上显色剂，置于90℃烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖或水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的条带面积，收集于离心管中，加入4mL水摇匀超声20min后取出，4000r/min离心8min，取上清液。所述层析缸中展开剂是乙腈∶冰乙酸∶水(5∶4∶1.5)，显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸，所述薄层板为硅胶薄层板(Si F250)；

(4)取1.5mL的上述上清液于具塞试管中，加1.5mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴5min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度；

(5)根据棉籽糖或水苏糖标准液吸光度和浓度绘制出标准曲线。

以下实施例中棉籽糖或/和水苏糖的含量的测定，采用本实施例中的棉籽糖、水苏糖的标准曲线作参照对比。

不同浓度梯度的棉籽糖标准样品标准曲线如图1所示；棉籽糖标准样品薄层色谱图如图2所示。

以下实施例为食品中棉籽糖或/和水苏糖的含量的测定。

实施例2。

(1)吸取200.0mL可乐饮料置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用；(2)将上述液体吸取5μL在所述薄层板上点样，点样采用条带点样，条带的长度为3cm，在所述展开剂中展开，将点样板置于层析缸中，25℃恒温；(3)待展开后取出吹干，喷上所述显色剂，置于85℃烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖和水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的斑点条带，收集于离心管中，加入3mL水摇匀超声20min后取出，4800r/min离心10min，取上清液；(4)取2mL的上述上清液于具塞试管中，加1mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴3min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据标准曲线来计算可乐中棉籽糖和水苏糖的含量。

测得棉籽糖吸光度为0.175，棉籽糖含量为2.65％。

测得水苏糖吸光度为0.502，水苏糖含量为4.89％。

可乐中棉籽糖和水苏糖薄层色谱图如图3所示。

实施例3。

(1)称取75g冰激凌于索氏提取器中，用索氏提取将其中的脂肪去除，萃取剂为石油醚，提取温度为80℃；(2)将除去脂肪之后的冰激凌置于250mL容量瓶中，加50mL水，慢慢加入4mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30min，用干燥滤纸过滤，滤液备用。(3)将上述滤液吸取5μL在所述薄层板上点样，点样采用条带点样，条带的长度为3cm，在所述展开剂中展开，将点样板置于层析缸中，25℃恒温；(4)待展开后取出吹干，喷上所述显色剂，置于85℃烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖和水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的斑点条带，收集于离心管中，加入3mL水摇匀超声20min后取出，4800r/min离心10min，取上清液；(5)取2mL的上述上清液于具塞试管中，加1mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴3min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据标准曲线来计算冰激凌中棉籽糖和水苏糖的含量。

测得棉籽糖吸光度为0.08，棉籽糖含量为4.43％。

测得水苏糖吸光度为0.198，水苏糖含量为5.6％。

冰激凌中棉籽糖和水苏糖薄层色谱图如图4所示。

实施例4。

(1)称取100g饼干粉末于索氏提取器中，用索氏提取将其中的脂肪去除，萃取剂为石油醚，提取温度为80℃；(2)将去除脂肪的饼干残渣置于250mL容量瓶中，加200mL水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇。冷却后加水至刻度，混匀，静置。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中，慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用；(3)将上述滤液吸取5μL在所述薄层板上点样，点样采用条带点样，条带的长度为3cm，在所述展开剂中展开，将点样板置于层析缸中，25℃恒温；(4)待展开后取出吹干，喷上所述显色剂，置于85℃烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖和水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的斑点条带，收集于离心管中，加入3mL水摇匀超声20min后取出，4800r/min离心10min，取上清液；(5)取2mL的上述上清液于具塞试管中，加1mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴3min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据标准曲线来计算饼干中棉籽糖和水苏糖的含量。

测得棉籽糖吸光度为0.09，棉籽糖含量为4.4％。

测得水苏糖吸光度为0.22，水苏糖含量为5.75％。

饼干中棉籽糖和水苏糖薄层色谱图如图5所示。

实施例5。

(1)将大豆低聚糖配制成50mg/mL的大豆低聚糖溶液；(2)吸取5μL上述溶液在所述薄层板上点样，点样采用条带点样，条带的长度为3cm，在层析缸中25℃恒温展开；(3)待展开后取出吹干，喷上所述显色剂，置于85℃烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在棉籽糖和水苏糖的显色区域，取2cm×4cm的斑点条带，收集于离心管中，加入3mL水摇匀超声20min后取出，4800r/min离心10min，取上清液备用；(4)取2mL的上述上清液于具塞试管中，加1mL的5％苯酚溶液，摇匀，迅速加5mL H₂SO₄，摇匀，沸水浴3min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据实施例1中标准曲线来计算大豆低聚糖中棉籽糖和水苏糖的含量。

测得棉籽糖吸光度为0.082，棉籽糖含量为26.9％。

测得水苏糖吸光度为0.275，水苏糖含量为44.9％。

大豆低聚糖中棉籽糖和水苏糖薄层色谱图如图6所示。