丙型肝炎病毒(HCV)一步荧光定量RT－PCR检测方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及丙型肝炎病毒(HCV)一步实时荧光定量RT－PCR检测方法以及试剂盒组成。首先，检索到人体丙型肝炎病毒基因组全序列，并对检索所得HCV各个亚型序列进行同源性比对，再针对其保守基因序列设计出一对特异性引物和一条用荧光染料标记的探针，采用实时荧光定量PCR方法扩增目的基因。在一适当波长下检测反应始终扩增产物荧光强度，Ct值为0或大于27：丙型肝炎病毒呈阴性；Ct值小于26：则呈阳性，病人丙型肝炎病毒感染。此外，本发明采用改进的Trizol法结合特异性硅基质核酸吸附柱来提取HCV RNA，同时，利用一步荧光定量RT－PCR技术对丙型肝炎病毒进行检测。在核酸提取结束后直接在体系中加入RT－PCR反应液，cDNA的合成与PCR反应在同一管中进行，不用增加额外的步骤。