双苯并异硒唑乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物及其制备方法和其用途

摘要

本发明涉及Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物，以及制备包合物的方法和其用途。本发明通过环糊精对Eb乙烷进行包合处理，大大提高Eb乙烷的水溶性和生物利用度，以便更好地发挥Eb乙烷的治疗作用。本发明还将Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物制成适用临床的固体剂型或液体剂型，如输液、水针、粉针、口服液、糖浆剂、片剂、胶囊、颗粒剂或分散片等。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，具体地说，本发明涉及双苯并异硒唑乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物，以及制备包合物的方法及其包合物的用途。

背景技术

近年来硒与硒化合物的抗肿瘤活性受到普遍关注。临床实践与流行病学研究显示：硒对抑制肿瘤的发展有保护作用，而硒化合物的剂量和形式是抗肿瘤活性的关键因素。有机硒化合物比自然界存在的无机硒化合物(如亚硒酸盐)具有更好的化学防护作用和更低的毒性。因而，人们一直志于精心设计与改造有机硒化合物，以寻找抗肿瘤活性强、抗瘤谱广、毒副作用低、适用临床的抗肿瘤有机硒药物。

CN116665C中公开了R-双或糖苯并异硒唑取代化合物的制备及其抗炎、抗肿瘤作用，CN1511834A和CN1511835A分别公开了苯并异硒唑衍生物的制备，及其免疫调节、生物治疗、抗炎、抗肿瘤和抗血栓形成等作用。这些专利文献均报导了化合物1，2-[二(1，2-苯并异硒唑酮-3(2H)-酮)]乙烷的制备(又称双苯并异硒唑乙烷，以下简称Eb乙烷)及其所具有的良好的抗炎、抗肿瘤活性以及多靶点生物应答调节剂的作用。且迄今为止，发明人经动物实验和体外细胞实验研究结果均证实：Eb乙烷具有良好的抗肿瘤活性和明显的诱导细胞凋亡作用。但由于Eb乙烷难溶于水，使其推广到临床应用成为一种新的抗肿瘤药物受到很大限制，因此，研究适合Eb乙烷的制剂以解决其水溶性和生物利用度，以扩大其临床应用前景是本发明所要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的一是提供一种包合物，该包合物含有1，2-[二(1，2-苯并异硒唑酮-3(2H)-酮)]乙烷(又称双苯并异硒唑乙烷，以下简称Eb乙烷)和环糊精或环糊精衍生物，其中Eb乙烷与环糊精或环糊精衍生物的质量比为24-1∶1-24，优选质量比为5-1∶1-5，更优选质量比为2.5-1∶1-2.5，最优选质量比为1∶1。

Eb乙烷是一种难溶于水的有机硒化合物，经初步溶解度测定实验证明，Eb于水中的溶解度约为2.5μg/mL，仅在常用的有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)中溶解。Eb乙烷的结构如式I所示：

式I

因此，本发明通过环糊精或环糊精衍生物对Eb乙烷进行包合作用来提高Eb乙烷的水溶性，并将其开发成适用临床的多种固体剂型和液体剂型，以扩大其临床应用范围和大大提高其生物利用度。

所述环糊精包括：α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精。

所述的环糊精衍生物包括但不仅限于：

1、水溶性环糊精及其衍生物

1)α-环糊精；

2)羟乙基-β-环糊精(HP-β-CYD)，甲基-β-环糊精、碘酸基-β-环糊精；

3)羟丙基-β-环糊精，如2-羟丙基-β-环糊精，3-羟丙基-β-环糊精，二羟丙基-β-环糊精或2，3-羟丙基-β-环糊精；

4)β-环糊精甲基化衍生物，如甲基-β-环糊精、2，6-二甲基-β-环糊精或2，3，6-二甲基-β-环糊精；

5)支链环糊精

葡糖基-环糊精：如葡糖基-β-环糊精、葡糖基-α-环糊精或二葡糖基-β-环糊精；

麦芽糖基-环糊精：如麦芽糖基-β-环糊精、麦芽糖基-α-环糊精或麦芽糖基-γ-环糊精；

麦芽三糖基-环糊精：如麦芽三糖基-β-环糊精、麦芽三糖基-α-环糊精或麦芽三糖基-γ-环糊精；

6)环糊精聚合物：如CDPS、CDPS-H、CDPS-L等，以及羧甲基环糊精或磺烷基环糊精。

2、疏水性环糊精：包括乙基化-β-环糊精，如2，6-二乙基-β-环糊精，2，3，6-三乙基化-β-环糊精。

本发明优选空洞大小适中、溶解性适合的羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)作为包合材料以制备Eb乙烷的包合物，改善Eb乙烷的溶解性能和提高其生物利用度，以扩大其临床使用范围。

本发明的另-目的是提供-种制备包合物的方法，包括如下步骤：将环糊精或环糊精衍生物加入适宜溶媒中，制成浓度范围在10-70mmol.L^-1的溶液，按照Eb乙烷与环糊精或环糊精衍生物的分子质量比24-1∶1-24的范围，将Eb乙烷加入上述溶液，在25℃-50℃下包合8-48h，即得；优选Eb乙烷与环糊精或环糊精衍生物的质量比5-1∶1-5，更优选质量比为2.5-1∶1-2.5，最优选质量比为1∶1。。

还可将液体Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物于40-80℃的温度下干燥，即得固体Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物；或者将液体Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物浓缩至环糊精或环糊精衍生物浓度范围在10-15％(W/V)的溶液，冷藏12小时，使其析出沉淀，将过滤所得滤液置于40-80℃干燥，即得固体Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物。

所述环糊精或环糊精衍生物的适宜溶媒可定义为能够溶解环糊精或环糊精衍生物的常规溶剂，如水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇或丙酮等，也可以是其混合物，其中优选溶媒为乙醇，更优选溶媒为95％的乙醇。

所述的包合可为本领域熟知的包合方法，如饱和水溶液法(又称重结晶法或共沉淀法)，超声波法、研磨法、冷冻干燥法(可制成粉针剂)、喷雾干燥法或溶液—搅拌法等，并优选包合时间为24h。

所述的干燥液体包合物的方法可选自直接干燥、喷雾干燥、减压干燥、冷冻于燥等。

本发明的另一目的是提供Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物在制备药物制剂中的应用。

本发明的Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物可直接用于制备注射剂、输液、水针、粉针(如冻干粉针、无菌粉针)、口服液、栓剂、喷雾剂、糖浆剂等液体剂型，以及制成片剂、颗粒剂、丸剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、分散片等固体剂型。

还可将所得的Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物与Eb乙烷粉末、药学上可接受的载体均匀混合以制成片剂、颗粒剂、丸剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、分散片等固体剂型。

本发明的有益效果是通过环糊精或环糊精衍生物对Eb乙烷进行包合，使Eb乙烷分子包埋于环糊精或环糊精衍生物分子的管状结构中，成为Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物的包合物，从而提高Eb乙烷的水溶性和其生物利用度，以扩大临床使用范围，使得Eb乙烷可以包合物形式直接制成适用临床的固体、液体剂型，很好解决了Eb乙烷水溶性低，临床推广运用受到限制的问题。

附图说明

图1由水和95％乙醇为包合溶剂制得Eb乙烷/HP-β-CD包合物的相溶度图，其中—◆—表示水(water)；—●—表示95％乙醇(95％alcohol)。

具体实施方式

以下将结合实施例和试验例具体说明本发明，本发明的实施例和试验例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。

实施例1：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精衍生物包合物的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml95％乙醇溶液溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精乙醇溶液；

(2)另称取Eb乙烷12.8g加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，过滤即得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物。

还可将所得的液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物通过常用的干燥方法制得其固体包合物，所述的干燥方法选自直接干燥、喷雾干燥、减压干燥、冷冻于燥等。还可按本领域熟知的制剂方法制备其片剂、颗粒剂、丸剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂以及分散片等剂型。

还可以用本领域熟知的包合方法来制备本发明包合物，如饱和水溶液法(又称重结晶法或共沉淀法)，超声波法、研磨法、冷冻干燥法、喷雾干燥法或溶液—搅拌法等。

实施例2：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精衍生物包合物的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml95％乙醇溶液溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精乙醇溶液；

(2)另称取Eb乙烷32g加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，过滤即得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物。

实施例3：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精衍生物包合物的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml95％乙醇溶液溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精乙醇溶液；

(2)另称取Eb乙烷6.4g加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，过滤即得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物。

实施例4：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精衍生物包合物的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml95％乙醇溶液溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精乙醇溶液；

(2)另称取Eb乙烷3.2g的加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，过滤即得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物。

实施例5：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精衍生物包合物的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml水溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精水溶液；

(2)另称取Eb乙烷12.8g的加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，过滤即得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物。

实施例6：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉针的制备

(1)称取32g羟丙基-β-环糊精，加入35ml95％乙醇溶液溶解，制得浓度为60mmol.L^-1的羟丙基-β-环糊精乙醇溶液；

(2)另称取Eb乙烷12.8g加入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃-50℃下振荡包合24h，得液体Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物；

(4)将3)所得的Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物置于冻干机中，冷冻干燥，压盖即得其冻干粉针。

实施例7：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物氯化钠输液的制备

(1)按照实施例1所述方法制备得到Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物；

(2)包合物溶液补水至800ml，加入注射用7-8g氯化钠，测PH，并用0.05N的盐酸和0.05N的氢氧化钠调PH＝3.5-7，补水至1000ml，加入0.1g注射用活性炭，搅拌20分钟；

(3)溶液脱炭灌装(100ml/瓶)，115℃、30分钟热压灭菌即得。

实施例8：Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物葡萄糖输液的制备

(1)按照实施例1所述方法制备得到Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物；

(2)称取注射用葡萄糖50g，加水搅拌溶解使体积达100ml，加入0.1g活性炭，加热微沸15分钟，脱炭。

(3)葡萄糖液倒入包合物溶液中，补水至800ml，用0.05N的盐酸和0.05N氢氧化钠调PH＝4，补水至1000ml，加入0.1g注射用活性炭，搅拌20分钟。

(4)溶液分别用过滤器或砂滤棒(孔径1.0μm、0.45μm、0.22μm)进行粗滤、精滤，然后灌装，115℃、30分钟热压灭菌即得。

发明人为了进一步研究和选择包合条件，还进行了如下试验例研究。应当说明以下试验例用于具体说明本发明，并非限定本发明的实质。

试验例1包合因素的选择研究

发明人以包合时间、HP-β-CD与药物的质量比、HP-β-CD的浓度为主要因素，选择L₉(3⁴)正交表进行正交试验设计，实验中以包合率(被包合的Eb乙烷质量与Eb乙烷投料质量的比值)和载药量(被包合的Eb乙烷质量与所用包合材料的比值)为评价指标。试验安排、结果与分析见表1和表2。

Table 1 Factors and levels of the orthogonal experiment

  Level  A/h  B(ratio of weight)  C(mg/mL)  1  2  2  8  16  24  2.5∶1  5∶1  10∶1  100  200  500

Table 2 The plan of the orthogonal experiment and result

  Groups   A  /h  B(Ratio of  weight)  C  (mg/mL)  Included  rate(％) Loaded Eb乙 烷rate(％)  1  2  3  4  5  6  7  8  9  Ij  IIj  IIIj  Rj  Ijj  IIjj  IIIjj  Rjj  1  1  1  2  2  2  3  3  3  3.86  4.55  4.97  1.11  0.82  0.98  1.06  0.24  1  2  3  2  3  1  3  1  2  3.66  4.29  5.41  1.75  1.46  0.86  0.54  0.92  1  2  3  1  2  3  1  2  3  4.46  4.32  4.59  0.27  0.91  0.94  1.01  0.1  3.23  3.48  4.86  4.29  5.53  3.81  5.85  3.95  5.10          1.29  0.70  0.49  0.86  0.55  1.52  0.58  1.58  1.02        

考虑到实际给药量，由表2极差分析结果可见，正交试验优化的最佳工艺是HP-β-CD与药物的质量比(2.5∶1)、包合温度(回流温度)、包合时间(24h)、溶剂(95％乙醇)、HP-β-CD浓度为500mg·mL^-1。。验证实验结果为：包合率为(4.06±0.14)％，载药量为(1.62±0.06)％(n＝3)，高于试验设计中的其他工艺条件，进一步验证工艺条件的合理性。

试验例2包合溶剂的选择和研究

分别以水和95％乙醇为溶剂，精密配制浓度在0-70mmol·L^-1范围的HP-β-CD的系列水与95％乙醇溶液。分别取各浓度的HP-β-CD溶液5mL置于10mL量瓶中，加入过量的Eb乙烷固体粉末约5.0mg，密塞，置于恒温振荡器中分别在25℃、35℃、45℃和50℃下振荡包合24h，制得其相应的包合物。

以水为溶剂的不同浓度的HP-β-CD试样包合结束后用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液减压干燥(＜70℃)，于残渣中精密加入10mL的DMSO溶解，溶液于320nm处测定吸光度，并计算Eb乙烷含量。

以95％乙醇为溶剂的不同浓度的HP-β-CD试样包合结束后减压干燥，干燥物加水5mL溶解，涡旋1min，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液减压旋转干燥(＜70℃)，残渣中精密加入10mL的DMSO溶解，溶液于320nm处测定吸光度，计算Eb乙烷含量。

结果以Eb乙烷浓度(mmol·L^-1)为纵坐标，HP-β-CD浓度(mmol·L^-1)为横坐标，分别绘制Eb乙烷/HP-β-CD在水中和95％乙醇中的相溶度图。可见Eb乙烷乙烷在以95％乙醇为包合溶剂可以获得更好的包封率和载药量。试验结果参见附图1。

试验例3Eb乙烷羟丙基-β-环糊精包合物的血管刺激性试验

取家兔8只分为试验组和对照组两组。试验组由兔耳缘静脉缓慢滴注该包合物，每日一次，剂量2.45g/kg，加5％葡萄糖注射液40ml，滴速1.5ml/分钟，连续给药3天；对照组给予10％冰醋酸，在对侧兔耳滴注5％葡萄糖注射液为阴性对照，连续给药3天。结果表明：试验组连续给药3天，局部未见异常，与对侧注射5％葡萄糖注射液一样，而注射10％冰醋酸后可见局部充血、变厚、渗出。

可见，滴注本发明的包合物对动物的血管刺激小，适合于将该包合物制备成注射剂型。

此外，发明人还经大鼠体内实验结果证明：口服Eb乙烷包合物与Eb乙烷原料相比较，生物利用度提高了近16倍，并且避免了DMSO对胃肠道的刺激性，达到了预期的实验结果。

综上所述，环糊精或环糊精衍生物是一种毒性较小的水溶性药用辅料，用其制备的Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物适合于制成多种液体制剂和固体制剂。Eb乙烷环糊精或环糊精衍生物包合物，具有水溶性好、血管刺激性小的特点。并且由于提高了水溶性，用其制备的固体制剂具有崩解快、溶出好、生物利用度高的特点，更利于临床应用。