猪传染性胃肠炎快速检测方法中粪便病料的处理工艺

摘要

本发明提供的是取发病猪的粪便与裂解液以1∶8－12的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris－HCl，pH8.3，20％PVP－40，1％PEG 6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。本发明的方法对猪传染性胃肠炎发病猪粪便使用特异的裂解液进行裂解，使病毒从细胞中释放出来从而为诊断本病提供了一种特异性强的诊断抗原，大大缩短了疾病诊断的时间，为猪传染性胃肠炎的及早发现及预防争得了宝贵的时间和经济效益。

说明书

(一)技术领域

本发明涉及的是一种物料处理工艺，具体地说是一种对检验用粪便病料的处理工艺。

(二)背景技术

猪群在产仔期间，仔猪TGE发病症状明显，损失也最大，当该病发生于育成猪、育肥猪和成年猪时，由于临床症状轻微，一般只有几天厌食或腹泻，常常得不到确诊，成为潜在传染源，而且目前没有有效而实用的治疗方法，可买到的商品疫苗交叉保护力不高。目前，包括我国在内的许多国家均有TGE流行的报道，TGEV给养猪业造成了严重的经济损失。

快速准确的疫病诊断是防治猪传染性胃肠炎的重要前提。而目前我国还没有一套行之有效的防治办法。在临床诊断上对可疑病料进行病毒分离与鉴定是本病最为直观的诊断方法，但分离病毒需一定的条件和相当长的时间，因此，这种诊断方法存在着费时、费力又不能快速诊断的弊端；本病的快速诊断方法最常应用的是血清学试验，如中和试验、荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验及RT-PCR方法等。而快速诊断猪传染性胃肠炎的各种方法中，粪便病料是最为常用的抗原，其处理工艺决定了诊断方法的特异性。传统的抗原获得是将粪便病料进行稀释并过滤除菌后接种敏感的宿主细胞进行培养，这种处理过程烦琐、耗时较长，同时初代培养的病毒又难以迅速出现病变，因此不利于快速诊断。寻找特异有效的粪便病料的病毒释放方法是广大科研工作者不断探求的课题。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种可以大大缩短诊断时间，提高诊断准确率的猪传染性胃肠炎快速检测方法中粪便病料的处理工艺。

本发明的目的是这样实现的：取发病猪的粪便与裂解液以1∶8-12的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是每升中含有500mmol/LTris-HCl(萃司盐酸)，pH8.3，20％PVP_-40(聚乙烯吡咯烷酮-40)，1％PEG6000(聚乙二醇6000)，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20(吐温-20)的溶液，其中的百分比为体积比。

本发明的方法对猪传染性胃肠炎发病猪粪便使用特异的裂解液进行裂解，使病毒从细胞中释放出来从而为诊断本病提供了一种特异性强的诊断抗原，大大缩短了疾病诊断的时间，为猪传染性胃肠炎的及早发现及预防争得了宝贵的时间和经济效益。本发明的方法可以获得含有高滴度病毒的抗原试剂，这种抗原试剂可用于上述各种快速诊断方法。

(四)具体实施方案

下面举例对本发明作更详细的描述：

取发病猪的粪便与裂解液以1∶8的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris-HCl，pH8.3，20％PVP_-40，1％PEG 6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。

取发病猪的粪便与裂解液以1∶10的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris-HCl，pH8.3，20％PVP_-40，1％PEG6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。

取发病猪的粪便与裂解液以1∶12的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris-HCl，pH 8.3，20％PVP_-40，1％PEG6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。