二氧化氯作为灵芝培养灭菌剂的应用

摘要

本发明公开了一种二氧化氯作为灵芝培养灭菌剂的应用。该产品杀菌谱广，杀菌力强，对人畜无害，但对赤芝(Ganoderma lucidum)As.5.65及7种灵芝生长却没有影响。培养基不需要灭菌，只要添加适量灭菌剂便可用于灵芝子实体分离、菌种扩大培养和灵芝菌丝体、灵芝多糖的发酵，以及灵芝的固体栽培，大大简化了灵芝培养的生产工序、节约了能源，显著降低了生产成本。该灭菌剂价格便宜，成本低，可广泛推广应用于灵芝等菌种培养基的灭菌中。

说明书

技术领域

本发明涉及二氧化氯(ClO₂)的用途，尤其涉及二氧化氯作为灭菌剂的用途。

背景技术

二氧化氯是强氧化剂；能与酚类、硫类、三级胺、有机微生物、金属离子等发生强烈氧化反应；与烷类、烯类、醇类、醛类、酯类、有机酸等略微反应，不会产生氯酚，三氯甲烷等臭味物质和致癌物质，其对环境不会产生二次污染。八十年代后期，二氧化氯作为食品消毒剂，饮用水消毒剂，得到了美国农业部和美国环境保护局的认可，世界卫生局认为该物质完全没有致癌性、致畸形，把它排在安全消毒剂首位，广泛用于杀菌、消毒、防腐、除臭、保鲜等领域，被誉为第四代消毒杀菌剂。

在传统的灵芝培养中，配制好的培养基都需要经过高温灭菌，在接种及培养过程均要采取严格的无菌操作，灵芝培养成本高，技术要求高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵芝培养基灭菌剂。

本发明应用二氧化氯作为灵芝培养基灭菌剂。

具体地来说，二氧化氯作为灵芝培养基灭菌剂的添加浓度为每1000mL培养基液中添加7～10mL的二氧化氯。

本发明采用二氧化氯作为灭菌剂应用于灵芝培养基，杀菌谱广，杀菌力强，对人畜无害，但对赤芝(Ganoderma lucidum)As.5.65及7种灵芝生长却没有影响。实验研究表明：培养基不需要灭菌，只要添加适量灭菌剂便可用于灵芝子实体分离、菌种扩大培养和灵芝菌丝体、灵芝多糖的发酵，以及灵芝的固体栽培，大大简化了灵芝培养的生产工序、节约了能源，显著降低了生产成本。该灭菌剂价格便宜，成本低，可广泛推广应用于灵芝等菌种培养基的灭菌中。

为了更好地理解本发明的实质，下面将用实验数据来说明其在灵芝培养基的杀菌领域的显著效果。

1.灭菌剂对霉菌和细菌的抑制作用实验

采用0.1％～1.0％的二氧化氯作为灭菌剂的培养基与未经灭菌的对照组进行对比实验，培养时间为5天。

            表1  灭菌剂对霉菌和细菌的抑制作用

    0.9％    1.0％    对照    -    -    长满    -    -    长满    -    -    长满    -    -    长满

注：+有菌丝生长；++菌丝生长多；+++菌丝生长很多；-无菌丝生长

由表1分析得知：对照管5天之内都长满杂菌，而加了0.7％以上灭菌剂的培养基均未长菌，而添加0.1％的灭菌剂就能完全抑制根霉和各类细菌的生长；黑曲霉和青霉随着灭菌剂浓度的增加，受抑制程度也随之增加，当灭菌剂浓度增加到0.7％时，能完全抑制黑曲霉和青霉的生长。因此，在选用灭菌剂的浓度时，不应底于0.7％。

2.不同浓度灭菌剂对赤芝的抑制作用实验

采用0.1％～5.0％的二氧化氯作为灭菌剂的培养基与经高温灭菌的对照组进行对比实验，培养时间为10～12天。

      表2不同的灭菌剂浓度下对赤芝的生长情况

    0.3％    0.4％    0.5％    0.6％    0.7％    0.8％    0.9％    1.0％    2.0％    3.0％    4.0％    5.0％    对照    萌发    -    -    -    -    -    -    -    -    -    -    -    萌发    +    萌发    萌发    萌发    萌发    萌发    萌发    萌发    萌发    -    -    -    ++    +++    ++    ++    ++    ++    ++    ++    ++    +    -    -    -    +++    长满    长满    长满    长满    长满    长满    长满    长满    +++    -    -    -    长满

注：-无菌丝生长；+有菌丝生长；++菌丝生长多；+++菌丝生长很多

由表2得：灭菌剂浓度在0.4％时开始对赤芝有一定的抑制作用，使得赤芝萌发比对照组晚2天，但长满的时间大致相同，第12天后观察，都长满了，即(0.1％-1.0％)灭菌剂对赤芝的生长影响不大。灭菌剂浓度在2.0％时，对灵芝的萌发和长满都有影响，即2.0％灭菌剂对灵芝有抑制作用；灭菌剂浓度在3.0％时开始完全抑制赤芝的生长。

结合表1得：培养赤芝时，选用灭菌剂的浓度最好在(0.7％-1.0％)，此浓度能对霉菌起很好的抑制，而对赤芝生长影响不大。

3.灭菌剂对其它几种灵芝生长的影响实验

采用0.7％的二氧化氯作为灭菌剂的培养基与经灭菌的对照组进行对比实验，培养时间为10～12天。

    表3 0.7％灭菌剂对其它几种灵芝生长的影响

注：对照为培养基经过灭菌，其余都不灭菌；-无菌丝生长；+有菌丝生长；++菌丝生长多；+++菌丝生长很多

由表3得：对照组的灵芝菌均正常生长。而加了0.7％灭菌剂的美国灵芝、日本灵芝、赤芝、黑芝、惠州灵芝、信州灵芝)与对照比较，有些灵芝萌发时间稍推迟，但长满时间与对照组基本相同，说明0.7％的灭菌剂对灵芝类的影响不大。但该灭菌剂对于紫芝有明显的抑制作用。

4.灭菌剂半衰期实验

摇瓶12天观察：2瓶经灭菌的PDA综合液体培养基澄清，均无浑浊等现象。而5瓶不经高温灭菌加了0.7％灭菌剂的PDA综合液体培养基，也是澄清，无浑浊等现象。说明该灭菌剂的半衰期较长，一般在培养过程中无需再次加入灭菌剂防止染菌。

5.灭菌剂对灵芝摇瓶培养的影响实验

250ml三角瓶装培养基100ml和3000ml三角瓶装培养基1000ml摇瓶培养观察得：实验组(0.7％灭菌剂不灭菌)和对照组(灭菌培养基)于第2天均有菌丝萌发迹象，第8天，白色菌丝球均长满瓶，菌丝干重二者差异不大。上述实验重复多次，说明该灭菌剂对灵芝的深层培养有一定的实用价值。

6.灭菌剂对灵芝栽培的影响实验

常规料灵芝栽培：在固体料中加入0.7％灭菌剂不灭菌，第4天灵芝开始萌发，第20天后，物料均长满菌丝，而且无染菌现象，即菌丝均为白色，无其他颜色，袋中无难闻味道。灵芝子实体与对照差异不大。

具体实施方式

现以具体实施例说明二氧化氯灭菌剂在灵芝培养基中的应用。以下列物料配制各培养基：

1.斜面培养基

PDA综合培养基：土豆(去皮)200g，葡萄糖20g，KH₂PO₄ 0.75g，MgSO₄ 0.3g，琼脂20g，水1000ml。并在水中加入液态二氧化氯7ml。

2.摇瓶种子培养基

PDA综合培养基：土豆(去皮)200g，葡萄糖20g，KH₂PO₄ 0.75g，MgSO₄ 0.3g，水1000ml。并在水中加入液态二氧化氯7ml。

3.摇瓶发酵培养基

黄豆粉综合培养基：黄豆粉20g、葡萄糖20g、酵母膏2g、KH₂PO₄0.75g，MgSO₄ 0.3g，水1000ml。并在水中加入液态二氧化氯7ml。

4.固体栽培培养基

麸皮96.3％，蔗糖1％，石膏(CaSO₄)1％，过磷酸钙1％，水按每一公斤固体物料加入1000ml，并在水中加入液态二氧化氯7ml。