利用RNA干扰现象介导功能基因下调的腺相关病毒载体

摘要

本发明涉及用质粒携带RNAi核苷酸片段，将携带RNAi的质粒转染至体外培养的细胞内或动物体内，从而使质粒能在细胞内或动物体内源源不断地复制RNAi核苷酸片段，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。另外，该RNAi核苷酸片段也被包装成为一种携带了RNAi核苷酸片段的重组腺相关病毒载体，通过腺相关病毒载体进行RNAi核苷酸片段的基因转移和复制，来达到RNAi核苷酸片段应起到的生物学作用。在本发明中，构建了一个短发夹环表达质粒在BHK－21细胞中抑制荧光素酶的表达。具体方法是从人基因组DNA中设计引物用PCR调出人U6 snRNA启动子，与被9bp序列间隔的21bp荧光素酶靶序列的反向重复，以及AAV载体质粒pSNAV相连接，构建成荧光素酶RNAi表达质粒pSNAV/U6/Luc。与pMAMneoLuc质粒共转染BHK－21细胞，以及单独转染荧光素酶细胞株，分别检测对荧光素酶表达的抑制效果。实验结果显示pSNAV/U6/Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制50％，而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制70％。抑制实验证实体内转录出的短发夹环荧光素酶能够有效抑制其在BHK－21细胞中的表达。