洛土辛碱在制药中的应用

摘要

本发明涉及洛土辛碱在制药中的应用。该物质具有明显的正性肌力作用且优于西药氨力农(Amrinone,Am)和罂粟碱(Papavirine);轻度延长心肌细胞动作电位时程,增加Ca

说明书

本发明涉及洛土辛碱的用途，特别是在医药领域中的用途。

洛土辛的化学名：1-二甲基-6-羟基-7-甲氧基-10-苄基(对-羟基)四氢异喹啉，中文名称为：洛土辛碱、莲心季铵碱、莲心单碱)，英文名称为：Lotusine；分子量：313.47；分子式：C₁₉H₂₃NO₃；化学结构式为：

该物质可以莲子心为原料制取。

择净、干燥莲子心8kg，预先用适量3％Na₂CO₃(约100ml/kg生药)浸润湿，再加入适量(约4000ml/kg)甲醇(或乙醇)于室温下浸泡一周，连续三次。合并甲醇浸泡液，回收甲醇，残留液用3％盐酸调pH至2-3，过滤，滤液用乙醚脱脂，将上述脱脂后酸性溶液，用浓氨水调pH至9左右，用氯仿提取各3次，回收氯仿。水层过滤，滤液用盐酸调pH至2-3，加入饱和雷氏铵盐，立即生成大量沉淀，收集沉淀物，室温下风干后，溶于丙酮，滤除不溶物，适量回收丙酮、浓缩后，加入饱和硫酸银，使之充分沉淀，滤除沉淀，滤液为水溶性总碱之硫酸盐溶液，(或滤液经适量减压浓缩后，加入饱和氯化钡，立即生成大量硫酸钡沉淀，充分沉淀后，滤除不溶物)，滤液经减压浓缩至糖浆状，放置析晶，得出粗品结晶8.3g。将粗品结晶8.3g分别回流下溶于无水乙醇200ml(或甲醇)及热水浴下溶于水50ml，反复结晶，得水溶性总生物碱结晶6.2g。再于无水乙醇中分步结晶，第一步结晶得针状结晶。过滤分离得母液；母液进行第二步结晶，得白色方晶5.6，经TLC鉴定为洛土辛，再于甲醇与水中反复结晶(依色泽而定，可用活性炭脱色)，得精品洛土辛4.7g。

所得物质——洛土辛碱的确认(理化及波谱鉴定)

主要理化常数及波谱数椐：洛土辛盐酸盐：白色方晶(无水乙醇)，MP：213～214℃；洛土辛硫酸盐：MP：224～225℃。229.2nm，283.2nm，252.4nm(在碱性(KOH)条件下蓝移)。254nm紫外光照射下不发荧光；cm^-1 3550、3390、3200、1615、1530、1520、1265、1240、1115、915、880、840。MS M/Z：314(M⁺¹)、298、206、192、107、73、58、44。NMR(D₂O)δ：3.02(3H)，3.28(3H，2×N-CH₃)，3.33(3H，O-CH₃)、4.39(1H，多重峰)，5.57(1H)：芳-H  6.72(1H)，6.74(4H)；上述数据与文献[古川宏Yakugaku Zasshi 1965；85(5)：472][王嘉陵等 中国中药杂志1991；16(11)：673-675][王嘉陵等 中药材1991；14(6)36-38]相符，故确认为洛土辛碱(Lotusine、莲心季铵碱、莲心单碱)，属单异喹啉类生物碱，文献中未见其药理作用的报道，也没有在制药领域中应用。

本发明的目的在于提供洛土辛碱在制药中的应用。

实际上，本发明涉及洛土辛碱在制备磷酸二酯酶III抑制药中的应用。

涉及洛土辛碱在制备磷酸二酯酶V抑制药中的应用。

涉及洛土辛碱在制备扩血管药中的应用。

还涉及洛土辛碱在制备抑制血小板凝聚药中的应用。

还涉及洛土辛碱在制备强心药中的应用。

还涉及洛土辛碱在制备治疗或预防阳痿药中的应用。

还涉及洛土辛碱在制备治疗或预防心衰药中的应用。

还涉及洛土辛碱在制备治疗或预防血管栓塞性疾病药中的应用。

下面将以洛土辛碱的药理试验及结果来说明其在制药领域中的用途。

洛土辛碱药理作用的实验结果：

1.在离体和在体标本上，洛土辛及其甲基化衍生物(1-100μmol/L)有明显的正性肌力作用且优于西药氨力农(Amrinone，Am，PDE III抑制剂)和罂粟碱(Papavirine，非选择性PDE抑制剂)，EC₅₀可与西药相当；

2.洛土辛轻度延长心肌细胞动作电位时程，增加Ca⁺⁺电流，对Ca⁺⁺通道影响的动力学特点不同于Bay K 8644和异丙肾上腺素；

3.洛土辛拮抗多种收缩血管药作用，舒张血管作用强度相当于罂粟碱；

4.洛土辛舒张阴茎海绵体血管且作用强度略优于罂粟碱和Am。

5.洛土辛抑制PDE，提高血小板内cAMP，cGMP含量。

结果表明洛土辛为磷酸二脂酶III(PDE III)和/或磷酸二脂酶V(PDE V)型抑制剂。

具体实验及结果：1·洛土辛抑制心肌PDE III并产生正性肌力作用

结果与结论：在离体和在体标本上，洛土辛及其甲基化衍生物(1-100μmol/L)有明显的正性肌力作用且优于西药氨力农(Amrinone，Am，PDE III抑制剂)和罂粟碱(Papavirinc，非选择性PDE抑制剂)，EC₅₀可与西药相当。

实验数据及结果：1·1 Lot的对离体心肌收缩力的正性肌力作用

对豚鼠左心房及乳头状肌收缩力的影响  在豚鼠左心房及乳头状肌标本上，Lot1～300μmol/L可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加19％和84％，使乳头状肌收缩力增加21％和91％。同样实验条件下，Am 1～300μmol/L也浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加9％和58％。表明Lot的作用明显优于Am。

表1：Lot及Am对豚鼠左心房及Lot豚鼠乳头状肌收缩力的影响(X±SD)

                          Lot(μmol/L)

        Control  1         3         10        30        100       300Fc(mg)      445±95  495±140  530±135  590±105  645±120  771±141  823±199Δ％        0        11±4     19±5     33±6     45±14    73±18    84±14GPla(n＝9)Fc(mg)      301±75  340±37   365±31   420±57   470±80   545±78   578±113Δ％        0        9±4      21±5     39±7     56±12    81±14    91±15GPc(n＝7)

                               Am(μmol/L)

                 1        3        10       30        100       300Fc(mg)      421±81  432±89  459±96  501±98  589±101  629±108  657±114Δ％        0        3±3     9±4     19±8    40±9     49±11    58±13GPla(n＝7)

1.2 对大鼠左心房及猫乳头状肌收缩力的影响

在大鼠左心房标本上，洛土辛1-300μmol/L可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使左心房收缩力增加23％和94％。在猫乳头状肌标本上，洛土辛1-300μmol/L同样可浓度依赖性地增加收缩力，3,300μmol/L分别使收缩力增加21％和117％。

表2：洛土辛对大鼠左心房(上)及猫乳头状肌(下)收缩力的影响

     (x±SD)，(n＝6～7)

                           洛土辛(μmol/L)

        对照     1       3         10        30        100       300大鼠左心房收缩力(mg)  487±98  514±1  602±112  693±154  756±196  875±238  945±243增加(％)    0        5.5±4  23±5     42±6     55±11    80±18    94±12Ratla(n＝7)猫乳头状肌增加(％)    0        7±5    13±6  21±11  47±13  84±22  117±32CatC(n＝7)

                       氨力农(μmol/L)

        对照     1        3        10       30       100大鼠左心房收缩力(mg)  463±31  471±33  490±45  511±61  562±57  616±64增加(％)    0        2±2     6±4     11±8    21±7    33±9RatLa(n＝6)猫乳头状肌收缩力(mg)  352±44  363±37  387±43  412±41  472±48  528±61增加(％)    0        3±4     10±4    17±7    34±11   51±12RatC(n＝6)

1.3 对利血平化豚鼠状肌收缩力的影响

在预先经利血平化处理^[9](5mg/kg，腹腔注射，24h后制备标本)或未经利血平化处理豚鼠乳头状肌标本上，洛土辛1-100μmol/L均可浓度依赖性地增加收缩力。但与未经利血平化处理组相比较，洛土辛增加利血平化豚鼠状肌收缩力的剂量—效应曲线明显右移并压低；100μmol/L洛土辛增加肌力作用，由未经利血平化处理组的83％降至经利血平化处理组的51％。提示洛土辛正性肌力作用与去甲肾上腺素能神经递质有关。同样实验条件下，罂粟碱1-100μmol/L可双相性地影响未经或经利血平化处理的豚鼠乳头状肌收缩力，使前者的量效应曲线呈现先升高后降低，而使后者呈现先略升而后抑制，甚至低于给药前水平。

表3：洛土辛对利血平化豚鼠状肌收缩力的影响(x±SD，n＝8)

             未经利血平化                     经利血平化

    药物       收缩力   增加                收缩力    增加

    (μmol/L)  (mg)     (Δ％)              (mg)      (Δ％)洛土辛  0          209±48  0                   233±56   0 

    10         270±50  29                  252±60   8

    30         318±90  52                  294±61   26

    100        382±63  83                  353±78   51罂粟碱  0          230±56  0                   218±40   0

    10         274±81  19                  224±30   3

    30         282±80  23                  245±86   12

    10         258±34  12                  186±68   -15

1.4 洛土辛正性肌力作用的动物种属选择性比较

比较Lot正性肌力作用可见，30μmol/L Lot分别使豚鼠、大鼠及家兔左心房收缩力增加45％、55％和51％；分别使豚鼠、大鼠及猫乳头状肌收缩力增加56％、53％和47％。表明Lot正性肌力作用并无明显地动物种属选择性。

表4：洛土辛30(mol/L)正性肌力作用动物种属选

     择性比较(n＝5～9，x±SD)标本                       肌力增加(％)豚鼠左心房                 45±14大鼠左心房                 55±11家兔左心房                 51±18豚鼠乳头肌                 56±12大鼠乳头肌                 53±13猫乳头肌                   47±13

1.5 洛土辛对氨力农、罂粟碱、Lema(Lemakalim，雷马卡林)、异丙肾上腺素正肌作用的影响及与普萘洛尔的相互作用

在豚鼠左心房及乳头状肌标本上，氨力农30μmol/L略增加心肌收缩力，在此基础上再给予洛土辛30μmol/L，心肌收缩力的增加明显高与单用氨力农或洛土辛组，提示两者有相加作用。同样，在豚鼠左心房肌标本上，在预先用罂粟碱30μmol/L处理，再给予洛土辛30μmol/L，心肌收缩力明显增高。

在豚鼠左心房标本上，预先用Lama 10μmol/L可使肌力明显下降，再给予洛土辛100μmol/L可翻转Lama的负肌作用为正肌作用。

在豚鼠左心房标本上，预先用洛土辛30μmol/L处理，再给予异丙肾上腺素，制作浓度—效应曲线。洛土辛略使异丙肾上腺素浓度—效应曲线左移，最大反应不变。

在预先用普萘洛尔0.1μmol/L处理的豚鼠左心房标本上，再给予洛土辛，普萘洛尔可显著拮抗或取消洛土辛的正肌作用。

表5：洛土辛30(μmol/L)对罂粟碱、氨力农、Lama、

     小檗碱正肌作用的影响(n＝6～9，x±SD)

      药物(μmol/L)    收缩力(mg)     增加(％)

      0                431±105       0  罂粟碱  30               564±165       31  罂粟碱+洛土辛            735±175       71

      0                420±92        0  氨力农  30               589±108       40  氨力农+洛土辛            773±139       83

      0                413±87        0Lama      30               302±79        -27Lama+洛土辛100             528±102       +28

      0                411±105       0小檗碱    30               512±89        25小檗碱+洛土辛              738±101       80

1.6 刺激频率对洛土辛正肌作用的影响

在豚鼠左心房标本上，Bay K 8644  10nmol/L正性肌力作用随刺激频率(0.25-2 Hz)的增快而增加，呈频率依赖性^[10]。而洛土辛100μmol/L正肌作用仅在低频率刺激时呈上升趋势，高频率刺激时却下降趋势。在豚鼠乳头状肌标本上也可见类似现象。

表5：刺激频率对洛土辛正肌作用的影响(省略)

1.7 洛土辛对右心房自搏频率的影响

在豚鼠及大鼠右心房标本上，洛土辛1-300μmol/L略增快右心房自搏频率，但无显著性意义。利血平化豚鼠右心房标本上，Lot仍不增快右心房自搏频率(n＝5，p＞0.05)。

表6：洛土辛右心房自搏频率的影响(n＝5～7，X±SD)

                       心率(次/分钟)洛土辛(μmol/L)         豚鼠         大鼠  0                     192±21      179±11  1                     188±20      177±9  3                     187±22      177±8 10                     190±17      178±7 30                     193±18      180±5100                     192±18      179±10300                     195±20      183±12

2.洛土辛离体心脏功能的影响

在离体工作心脏标本上，经左心房灌流插管，单剂量(10mmol/L，0.2ml)给予洛土辛(终浓度为20μmol/L)，0.5min后，左心室压(LVP)、左心室收缩速率(+dp/dt)及左心室舒张速率(-dp/dt)增加(-dp/dt负值加大)；冠脉流量(CO)及主动脉流量(MAO)略增而心率不变(p＞0.05)。表：洛土辛0.2ml(10mmol/L)对离体心脏的作用(n＝6，x±SD)

                             时间(分钟)指标         对照      0.5          1            3            5            10LVP(kPa)     9.1±1.1  10.6±0.88^* 11.6±1.4^** 11.2±1.3^** 11.4±1.5^** 10.4±1.3^*+dp/dt(kPa/s)152±21   168±22      208±39^**   181±27^*    186±29^**   163±28-dp/dt(kPa/s)103±24   106±24      113±27      111±26      108±23      107±24CO(ml)       7.5±1.3  7.6±1.2     7.8±1.3     7.7±1.4     8.1±1.4     7.9±1.5MAC(ml)      7.1±3.9  7.1±3.9     7.1土3.9     7.2±2.3     7.2±1.9     7.2±3.1HR(bpm)      151±38   153±44      151±55      145±29      145±32      146±34

3.洛土辛对5-羟色胺、甲氧胺及高K⁺引起的血管收缩反应的影响

结果与结论：洛土辛拮抗多种收缩血管药的作用，其舒张血管作用强度近似于罂粟碱。

  3.1  洛土辛对5-羟色胺30(μmol/L)引起的大鼠主动脉血管收缩反应的影响

       n＝8，x±SD，^*＜0.05，^**＜0.01，与对照比较

                                    洛土辛(μmol/L)

      0        0.5     1       3        10       30         100反应(％)  100±19  94±17  85±22  71±23^* 63±24^* 39±21^** 26±26^**3.2  洛土辛对甲氧胺10(μmol/L)引起的猪冠状动脉血管收缩反应的影响

 n＝5，x±SD，^*＜0.05，^**＜0.01，与对照比较

                                 洛土辛(μmol/L)

        0        0.5     1       3       10       30        100反应(％)    100±23  98±24  94±26  84±22  73±24^* 61±23^* 42±25^**3.3  洛土辛对高K+引起的大鼠主动脉血管收缩反应的影响n＝6，x±SD，^*＜0.05，

 ^**＜0.01，与对照比较

                             洛土辛(μmol/L)

      0        0.5     1       3       10      30       100反应(％)  100±29  98±27  94±26  88±22  82±24  81±23^* 78±25^*3.4  同样条件下，罂粟碱舒张血管作用略强于洛土辛，但两者间差异无显著性意义。  表：罂粟碱对5-羟色胺30(μmol/L)引起的大鼠主动脉血管收缩反应的影响n＝6，

  x±SD，^*＜0.05，^**＜0.01，与对照比较

                                洛土辛(μmol/L)

      0        0.5     1         3         10       30        100反应(％)  100±21  92±19  81±25^*  67±23^* 57±24^* 33±21^** 19±26^**

4.洛土辛舒张阴茎海绵体血管，兼有磷酸二酯酶V抑制剂作用

结果与结论：洛土辛舒张阴茎海绵体血管且作用强度略低于罂粟碱和氨力农，表明其兼有磷酸二酯酶V抑制剂作用。

4.1洛土辛、氨力农和罂粟碱对苯肾上腺素(1μmol/L)引起的家兔阴茎海绵体收缩作用的影响。

洛土辛对苯肾上腺素(1μmol/L)引起的家兔阴茎海绵体收缩作用的

影响(n＝8，x±SD)

                              洛土辛(μmol/L)

      0        1       3       10       30       100反应(％)  100±16  98±17  95±21  88±16^* 71±19^* 62±21^**氨力农对苯肾上腺素(1μmol/L)引起的家兔阴茎海绵体收缩作用的影响(n＝，x±SD)

                        氨力农(μmol/L)

    0        1       3       10        30        100反应(％)100±21  97±19  92±20  68±19^** 41±19^** 9±21^**罂粟碱对苯肾上腺素(1μmol/L)引起的家兔阴茎海绵体收缩作用的影响(n＝7，x±SD)

                          罂粟碱(μmol/L)

    0        1       3        10        30         100反应(％)100±19  92±17  82±21^* 68±18^** 49±121^** 22±24^**

5.洛土辛抑制磷酸二酯酶，提高血小板内cAMP，cGMP含量

结果与结论：洛土辛血小板上磷酸二酯酶III，提高血小板内cAMP含量，且这一作用较氨茶碱强，提示洛土辛可能有抗血小板聚集作用。

材料与方法

药品与试剂：洛土辛(Lottusine，Lot)自制品；cAMP/cGMP放射免疫测定试剂盒分别由中国人民解放军总医院东亚免疫技术研究所和上海中医学院同位素室提供。

动物：日本大耳白兔由同济医科大学实验动物中心提供。

血小板核苷酸cAMP，cGMP的测定：按文献法进行(《张夏英等。一种灵敏的血小板环磷酸腺苷(cAMP)测定法  中华心血管病杂志1980，8：142》；《张象贤等。血小板一磷酸鸟苷的放射免疫分析法  中国核医学杂志1983，3：94》)。兔麻醉后从颈总动脉取血，3.8％柠檬酸钠抗凝，以80xg离心10min制备富血小板血浆(PRP)，取PRP3ml，1800xg离心15min，沉淀物为所需血小板样品，沉淀样品中加入双蒸水1.0ml，保存2min，使残留的红细胞溶解，再加入4.5％NaCl 0.25ml恢复等渗，1800xg离心10min，弃上清液，将血小板悬浮于0.5ml的生理盐水中，加入Lot 31.2，62.5，125，250μmol·L^-1或生理盐水，置37℃水浴15min再加入10％三氯醋酸0.25ml，室温放置2h后，1800xg离心15min，取上清液，用水饱和乙醚提取3次，去除三氯醋酸，水层置60℃水浴，弃乙醚层，-20℃保存。最后按放免法测定血小板cAMP，cGMP含量。

结果

洛土辛对血小板cAMP，cGMP生成的影响：洛土辛明显地升高血小板内cAMP，略升高cGMP含量，此可能与抑制磷酸二酯酶有关。(见下表)

表：洛土辛 对兔血小板环核苷酸(cAMP和cGMP)含量的影响

      (n＝7～9，x±SD)药物      剂量           cAMP(Δ％)          cGMP(Δ％)

      (μmol·-L^-1) (pmol/10⁹血小板)   (pmol/10⁹血小板)对照      0              13.41±3.5          1.07±0.5洛土辛    10             16.92±2.55(26)^*   1.2±0.9(12)

      100            19.21±6.2(43)^**   1.27±0.9(18)6.洛土辛对大鼠血流动力学的影响结果与结论：洛土辛4mg/kg，iv明显增加麻醉大鼠及毁脊髓大鼠的左心室压(LVP)、左室上升速率(+dp/dt_max)、收缩压(SAP)，但不影响心率(见附图1)。

图1为洛土辛4mg/kg.静脉注射对麻醉大鼠(●)及毁脊髓大鼠(△)血流动力学影响的时效曲线图，n＝6～8，x±SD^*＜0.05，^**＜0.01，与对照水平比较。

从实验结果可以得知本发明的优点在于：

1.本发明提供了洛土辛的医药用途，并提供了洛土辛的制取方法。

2.本发明的物质原料来源丰富、价廉，其本生原为食物及中药材，无毒副作用，制备工艺简单，成本低，并可做成口服剂型、注射剂型、片剂等，使用方便。

3.洛土辛有明显的正性肌力作用且优于西药氨力农(Amrinone，Am，PDE III抑制剂)和罂粟碱(Papavirine，非选择性PDE抑制剂)，EC₅₀可与西药相当；洛土辛轻度延长心肌细胞动作电位时程，增加Ca⁺⁺电流；洛土辛拮抗多种收缩血管药作用，舒张血管作用强度相当于罂粟碱；洛土辛抑制PDE，提高血小板内cAMP，cGMP含量，从而能抗血小板凝聚，故可用于制造扩血管药、强心药、抗血小板凝聚药，用于治疗或预防心衰、血管栓塞性疾病等。洛土辛舒张阴茎海绵体血管且作用强度略优于罂粟碱和Am，故能用于治疗或预防阳痿。

4.本发明内容包括洛土辛作为磷酸二酯酶III抑制应用。

5.本发明内容包括洛土辛作为磷酸二酯酶V抑制应用。

以下为本发明的几个事实例，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1

择净、干燥莲子心8kg，预先用适量3％Na₂CO₃(约100ml/kg生药)浸润湿，再加入适量(约4000ml/kg)甲醇(或乙醇)于室温下浸泡一周，连续三次。合并甲醇浸泡液，回收甲醇，残留液用3％盐酸调pH至2-3，过滤，滤液用乙醚脱脂，将上述脱脂后酸性溶液，用浓氨水调pH至9左右，用氯仿提取各3次，回收氯仿。水层过滤，滤液用盐酸调pH至2-3，加入饱和雷氏铵盐，立即生成大量沉淀，收集沉淀物，室温下风干后，溶于丙酮，滤除不溶物，适量回收丙酮、浓缩后，加入饱和硫酸银，使之充分沉淀，滤除沉淀，滤液为水溶性总碱之硫酸盐溶液，(或滤液经适量减压浓缩后，加入饱和氯化钡，立即生成大量硫酸钡沉淀，充分沉淀后，滤除不溶物)，滤液经减压浓缩至糖浆状，放置析晶，得出粗品结晶8.3g。将粗品结晶8.3g分别回流下溶于无水乙醇200ml(或甲醇)及热水浴下溶于水50ml，反复结晶，得水溶性总生物碱结晶6.2g。再于无水乙醇中分步结晶，第一步结晶得针状结晶。过滤分离得母液；母液进行第二步结晶，得白色方晶5.6，经TLC鉴定为洛土辛，再于甲醇与水中反复结晶(依色泽而定，可用活性炭脱色)，得精品洛土辛4.7g。加大原料用量可提高产量。

实施例2

用实施例1方法制取洛上辛，按本领域技术人员公知的方法制备洛土辛片剂，其中所述的片剂中按实际需要能制成含有20％洛土辛，也可加大或减少洛土辛的含量。取50克洛土辛，35克淀粉、10克微晶纤维素、淀粉浆(10％)适量、0.8克硬脂酸镁，以常用湿法制粒，过16目筛，50_60℃干燥、压成片剂。片重：0.1克/片，洛土辛含量标示量：50毫克/片(限度为标示量的±5％)(成人口服治疗参考剂量：50-100毫克/次，3-4次/日)

实施例3

以实施例1方法制取洛±辛，将5000毫克洛土辛溶于1000毫克水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀，分装成10毫克/2毫升/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。