人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免疫测定板

摘要

人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免疫测定板，是用于测定人血红细胞Cu、Zn-SOD总含量的专用测定板。该板用含有蛋白染料、指示剂和中性盐以及高效价抗人Cu、Zn-SOD血清的1％离子琼脂糖灌制而成。消除了血样品中血红蛋白对测定的干扰，省略了常规方法的繁琐步骤。采血量少，反应结果清晰，容易观察，方法简便，适于各医疗、科研单位使用。

说明书

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本发明是用于测定人血红细胞中铜、锌一超氧化物歧化酶（CuproZinc-Superoxide    Dismutase，Cu、Zn-SOD）含量的彩色免疫板。

目前测定Cu、Zn-SOD的方法有联大茴香胺法、化学发光法等，都是利用SOD歧化超氧化物阴离子自由基（O-₂）生成过氧化氢和氧这一原理，间接地测定有活性部分SOD含量，不能测定SOD总含量。而用免疫学方法测定SOD总含量，测定程序复杂，流程长，只限于实验室使用，推广困难。

为了解决这个问题，使SOD测定做为诊断和辅助诊断的检查手段应用到临床医院，制成用指示剂衬托沉淀环位置的彩色免疫板，但由于血样品为溶血液而非无色的血清，血红蛋白干扰测定的问题未能消除。

本发明的目的在于提供一种人血SOD彩色免疫测定板。它能简便、快速而准确的测定人血Cu、Zn-SOD的含量，消除了血红蛋白对测定的干扰，省略了常规方法浸洗、染色、脱色等繁琐步骤。

本发明是这样实施的：在灌制彩色免疫板的溶液中加入某些蛋白染料，如丽春红、氨基黑等，它可以使彩色免疫板中的抗原、抗体被特异染色，在扩散结合成抗原-抗体复合物后，形成颜色深于彩色免疫板底色的沉淀环;还加入了一定浓度的中性盐，使沉淀环通过盐析作用显露出来，使该板颜色柔和，结果清晰，观察清楚。

本发明实施例，SOD彩色免疫板的制作：在1%琼脂糖一巴比妥盐酸缓冲液中（离子强度0.025，PH8.2）加入氨基黑染液、指示剂酚酞、防腐剂叠氮钠和中性盐氯化钠，加热溶解后，再加入高效价抗人Cu、Zn-SOD血清，铺在5×10厘米的特制塑料板上，冷却凝固。该塑料板上有三排横向刻度，根据板上刻度按标记打孔，每横排6孔，共18孔，每孔直径3毫米，放置4℃待用。

测定方法：取人耳垂血20微升，加入40微升蒸馏水中，使其充分溶血制成溶血液，放置4℃待测。测定时，分别在测定孔中加入标准SOD溶液和待测溶血液各10微升，将该板在室温下放置15小时，可直接读取沉淀环直径，通过计算获得SOD含量，以SOD微克/每克血红蛋白表示。

由于提供这种人血超氧化物歧化酶彩色免疫测定板，使Cu、Zn-SOD的测定可以应用到临床检查。仅用微量耳血，就能快速、准确地测定SOD含量。与其它方法相比，该方法简便，不用特殊试剂和仪器，不受血中其它物质干扰，易于广大医疗，科研单位推广使用，特别是条件较差的基层单位或大量普查时使用更为方便。