基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法

摘要

本发明提供基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法，包括：(1)，设计两对引物，其中一对为突变引物即MPF和MPR，这对引物的5'端互补序列长度为12‑15bp，互补区可以任意引入单点或多点突变，任意长度的缺失突变，插入突变1‑20bp；另一对引物是协助PCR的引物，由于这一对引物的位置可以设置在已知序列区内，是可变动的，可以在突变位点的前面或后面设置，称之为PCR可变引物PCRVF和PCRVR；(2)聚合酶链式反应设置和产物纯化；(3)重组酶连接反应；(4)转化，质粒提取和测序分析。本发明可在其互补区域取任意置换碱基，进行任意长度的缺失突变，长片段拆入突变，可以用于大载体DNA定点突变而且表现出很高突变效率。