用高保真DNA聚合酶介导的PCR检测β地中海贫血热点突变

摘要

目的 用高保真DNA聚合酶介导的PCR检测β地中海贫血基因热点突变.方法 选取已知中国人群β珠蛋白基因CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26热点突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因位点或突变型基因位点完全配对的引物,并用硫化磷酸修饰,进行高保真DNA聚合酶介导的引物延伸反应.用多重PCR反应体系检测临床已知分别含CD26和TATAbox-28突变热点患者的DNA标本.结果 对野生模板而言,仅有野生型等位基因相关引物有产物产生,而突变型等位基因位点特异性引物无产物产生.反之,使用突变模板,仅突变型等位基因位点相关引物有产物产生,而野生型等位基因位点特异性引物无产物产生.高保真DNA聚合酶介导的多重引物延伸反应筛查含有CD26或TATAbox-28突变的患者DNA标本时显示,突变引物混合物只有相应突变位点的产物产生,而野生引物混合物则有除突变位点以外的其他5个位点的产物产生.结论 建立了基于高保真DNA聚合酶的筛查β地中海贫血基因热点突变的PCR技术.