一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法

摘要

本发明公开一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法，该方法为：步骤1，基因改造：通过基因改造使出发菌株染色体上LAC4基因无法表达正常功能的LAC4蛋白，得到LAC4基因缺陷的菌株，该LAC4基因缺陷的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上无法正常生长；步骤2，基因恢复：将目标基因与正常的LAC4基因连接构成供体片段，将此供体片段转入前述LAC4基因缺陷的菌株，使LAC4基因恢复正常的表达功能；步骤3，基因恢复后的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上进行培养，能够正常生长的菌株为LAC4基因恢复的菌株，也是目标基因正常插入的菌株。相比无筛选功能的CRISPR/Cas9系统，本系统通过筛选可剔除绝大部分基因编辑阴性的菌株，大大提高筛选阳性率，可基本无需PCR筛选，节省时间和成本。