一种基于PXR启动子报告基因药物筛选方法的构建及其应用

摘要

构建一种基于小鼠孕烷X受体(mouse pregnane X receptor,mPXR)基因启动子双荧光素酶报告基因的药物筛选方法,并应用此方法筛选PXR的诱导剂.同源重组法设计引物,扩增mPXR基因启动子,回收片段,克隆至含有荧光素酶报告基因的pGL3-basic载体,构建pGL3-basic-PXRpro重组质粒.将构建的重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染至Hepa1-6小鼠肝癌细胞中,给予小鼠PXR的阳性诱导剂地塞米松,24 h后检测PXR转录活性的诱导效果.利用此方法从恩诺沙星、氟苯尼考及10种连翘天然产物中筛选PXR诱导剂.经单克隆菌落PCR、重组质粒双酶切及DNA测序鉴定后获得阳性克隆,瞬时转染Hepa 1-6细胞后,通过双荧光素酶报告系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被地塞米松诱导,其相对活性为0.1129(P<0.05).经报告基因药物筛选方法得出,2种抗菌药物及9种连翘天然产物对PXR启动子起激活作用.成功构建了小鼠pGL3-basic-PXRpro报告基因的药物筛选方法,为筛选PXR诱导剂提供了工具.应用此报告基因法筛选了诱导PXR的天然产物,为PXR为靶点的疾病防治提供候选药物.