一种龙葵曲顶病毒侵染性克隆的构建方法

摘要

本发明提供了一种龙葵曲顶病毒侵染性克隆的构建方法，分别设计引物P1与P2，P3与P4，以pLB‑NCTV作为模板，PCR扩增NCTV的第一拷贝片段和NCTV的第二拷贝片段；设计引物P5与P6，以pCB301载体为模板，进行PCR，其产物作为NCTV侵染性克隆的载体骨架；采用多片段同源重组技术将第一和第二拷贝片段构建到所述载体骨架上，获得包含NCTV两个拷贝片段的侵染性克隆；本发明建立了龙葵曲顶病毒侵染性克隆构建体系，保证了病毒序列高保真度，致病性高，病毒侵染性克隆构建的成功率高，侵染效率高，同时还提供了龙葵曲顶病毒冻干阳性样品，对龙葵曲顶病毒的进一步研究具有重要意义。