控制水稻种子萌发的miR1866基因、过表达载体、gRNA表达载体、制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种控制水稻种子萌发的miR1866基因、过表达载体、gRNA表达载体、制备方法及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明依据CRISPR/Cas9和高表达miRNA的技术原理对水稻中miR1866基因的表达进行调控。设计miR1866基因小干扰片段，构建pH‑Ubi‑CAS9‑miR1866和pTCK303‑miR1866表达载体，利用农杆菌介导法导入粳稻品种日本晴，以潮霉素(Hyg)抗性标记筛选获得阳性转基因植株，分别测序和qRT‑PCR的方法鉴定miR1866的突变和miR1866基因表达量，结果表明：分别获得了miR1866突变植株和miR1866高表达植株。具有重要应用价值的水稻miR1866突变植株和miR1866高表达植株，与野生型日本晴相比，miR1866突变植株种子萌发速率显著变慢，而miR1866高表达植株种子萌发速率显著加快。