一种用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质及一种铁皮石斛植株的栽培方法

摘要

本发明公开了一种用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质和一种铁皮石斛植株的栽培方法。本发明提供的用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质的上层为木屑与SiO2粉末的混合基质，下层为木块，且所述木块粒径为0.5cm～4.0cm。本发明提供的铁皮石斛植株的栽培方法，将铁皮石斛植株种植到所述的栽培基质中，在8月中上旬之前，当所述栽培基质含水量降至80％时，给所述栽培基质浇水直至所述栽培基质的下层滴水；8月中下旬之后，当所述栽培基质含水量降至50％才浇水，且只浇湿所述栽培基质的上层，并增施钾肥；8月中下旬开始，每月施用钾肥一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的栽培及其栽培方法，具体涉及一种用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质及一种铁皮石斛植株的栽培方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为我国传统中药材，是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)中名贵的药用植物，主要分布于贵州、云南、广西、江西、安徽和湖南等地。据《本草纲目》记载，铁皮石斛具有“主治伤中、补五脏虚劳、强阴益精、补内绝不足、平胃气、长肌肉益智除惊、轻身延年之功效功效”。据2010年版的《中华人民共和国药典》记载，铁皮石斛具有益胃生津和滋阴清热等功效，常用于热病津伤、口干烦渴、胃阴不足、食少干呕、病后虚热不退、阴虚火旺、骨蒸劳热、目暗不明和筋骨痿软等症之治疗。其茎入药，对治疗咽喉疾病、提高人体免疫力乃至抑制肿瘤都具有显著效果，是驰名中外的保健佳品。

铁皮石斛对生长环境要求严格，大多分布在海拔250-900米的温凉高湿地带，受小环境内的相对湿度、温度、光照等气候因子影响较大，由于对其生长环境需要不甚了解，人工栽培较为困难，长期以来主要依赖野生资源，目前野生铁皮石斛资源濒临灭绝。铁皮石斛是《濒危野生植物国际贸易公约》的保护物种及我国二级保护濒危植物，在国际上是禁止贸易的。目前对铁皮石斛水溶性多糖方面的研究主要包括多糖在不同器官中的分布规律、提取、分离、纯化和主要组分的结构鉴定，以及药理功效等方面，研究结果表明不同栽培方式下铁皮石斛的多糖含量会有差异。

现代医学研究证明，铁皮石斛中的多糖能显著提高人体SOD水平，降低LPO水平，能促进T细胞生长，从而起到增强免疫和抗衰老的作用，对老人、癌症病人放化疗后的补养有显著的效果。在治疗糖尿病、白内障、慢性咽炎等方面均有很好的、确切的疗效。授权公告号为CN102172152B的专利同时利用光照、温度、肥料喷施、水浇灌、声波刺激，并结合花蕾刚萌发时控蕾和对已经开花部分人工摘除花蕾的方法进行栽培管理，结果显示该方法可以提高铁皮石斛中多糖的含量，但该方法操作复杂，不利于产业化生产应用。

因此，希望提供一种方法简单，且能够显著提高铁皮石斛茎中多糖的含量的基质和栽培方法。

发明内容

为此，本发明提出了一种可以解决上述问题的至少一部分的新型用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质及一种铁皮石斛植株的栽培方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质，其特征在于：所述的栽培基质的上层为木屑与SiO₂粉末的混合基质，下层为木块，且所述木块粒径为0.5cm～4.0cm。

可选地，根据本发明的一个实施方式，其特征在于：所述的木屑包括松木和/或杉木加工后产生的木屑。

可选地，根据本发明的一个实施方式，其特征在于：所述木块包括松木和/或杉木。

可选地，根据本发明的一个实施方式，其特征在于：在所述混合基质中，每公斤木屑中含有1～2克的SiO₂粉末。

根据本发明的另一个方面，提供了一种铁皮石斛植株的栽培方法，其特征在于：将铁皮石斛植株种植到权利要求1-4中任意一项所述的栽培基质中，

在8月中上旬之前，当所述栽培基质含水量降至80％时，给所述栽培基质浇水直至所述栽培基质的下层滴水，

8月中下旬之后，当所述栽培基质含水量降至50％才浇水，且只浇湿所述栽培基质的上层，并增施钾肥，

8月中下旬开始，每月施用钾肥一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

可选地，根据本发明的一个实施方式，其特征在于：所述的栽培基质由以下成分组成：上层为木屑与SiO₂粉末混合基质，下层为木块，且木块粒径为0.5cm～4.0cm。

可选地，根据本发明的一个实施方式，其特征在于：每公斤所述木屑中含有1～2克的SiO₂粉末。

本发明提供的用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质及一种铁皮石斛植株的栽培方法至少可以显著提高铁皮石斛茎中多糖的含量。

具体实施方式

本发明提供了许多可应用的创造性概念，该创造性概念可大量的体现于具体的上下文中。在下述本发明的实施方式中描述的具体的实施例仅作为本发明的具体实施方式的示例性说明，而不构成对本发明范围的限制。

发明人发现，在铁皮石斛种苗从无菌状态的试管苗移栽到室外后，栽培基质的选择对于铁皮石斛植株的生长状态影响较大，本发明中的栽培基质采用层级结构：上层为木屑粉末，下层为木块，木块粒径为0.5cm～4.0cm，且在上述基质的基础上，发明人意外的发现将一定量的纳米SiO2与上层的木屑粉末混合后，对于铁皮石斛植株的生长状态及多糖含量影响较大；另外，常规培育铁皮石斛植株要保持栽培基质的湿度(最佳湿度要求在80％以上)，而本发明人却发现，采用上述常规方法栽培的铁皮石斛植株多糖含量成分较低，无法满足市场对高多糖含量铁皮石斛植株的需求，相反，控制栽培基质的湿度(将湿度降低到50％)，即向栽培基质喷水频率降低，反而会增加铁皮石斛植株中的多糖含量，这可能与控制铁皮石斛对水分的吸收可以刺激铁皮石斛植株茎中多糖含量的增加有关；本发明人还发现，在铁皮石斛植株移栽后在特定阶段喷施钾肥，也可以提高铁皮石斛植株多糖含量。

多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式(C6H10O5)n表示。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性和变旋现象。石斛多糖主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖及甘露糖等单糖组成，由于不同石斛间存在差异，所以不同石斛间多糖的单糖组分和含量也不尽相同。其中，铁皮石斛中的多糖主要由D-木糖、L-阿拉伯糖和D-葡萄糖等组成。

纳米二氧化硅(SiO₂)是极其重要的高科技超微细无机新材料之一,因其粒径很小，比表面积大，表面吸附力强，表面能大，化学纯度高、分散性能好，热阻、电阻等方面具有特异的性能，以其优越的稳定性、补强性、增稠性和触变性，在众多学科及领域内独具特性，有着不可取代的作用。

具体地说，本发明提供的用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培基质：所述的栽培基质由以下基质组成：上层为木屑粉末和纳米SiO2的混合材料，厚度为2～4cm，下层为木块，且木块粒径为0.5cm～4.0cm，

所述的木屑粉末优选为松木木屑粉末、杉木木屑粉末，或松木木屑与杉木木屑的混合，木屑在使用前用清水浸润约1min后捞出沥水，直至木屑不再滴水为止备用。

所述的下层的木块优选为松木和/或杉木，木块在使用前需用清水清洗干净并沥去水分后备用；

所述的纳米SiO₂可以自主制备，也可以买市售产品，本发明中的纳米SiO₂均为市售产品。

所述的木屑粉末和纳米SiO₂混合材料的配制方法为：每一公斤沥水后的木屑粉末加入1g～2g的纳米SiO₂混合搅拌均匀。

本发明的另一个目的在于提供一种用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培方法。

本发明人发现，在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量降至80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量降至50％时才浇水，且只浇湿上层基质，浇水频率过高会导致种苗根腐烂，即使种苗生长状态良好，种苗的茎部的多糖含量也较低。另外，在铁皮石斛植株生长过程中，8月中下旬开始，施用钾肥，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克，发明人发现，在特定的生长阶段给铁皮石斛植株施用钾肥可以促进铁皮石斛茎部多糖的合成。

具体地说，本发明提供的用于提高铁皮石斛植株多糖含量的栽培方法为：

1.移栽铁皮石斛试管苗到栽培基质：所述的栽培基质由以下成分组成，上层为木屑粉末和纳米SiO₂的混合材料，厚度为2～4cm，下层为木块，且木块粒径为0.5cm～4.0cm；

2.在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，即在栽培基质含水量降至80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量降至50％时才浇水，且只浇湿上层基质；

3.在铁皮石斛种苗生长过程中，施用钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

进一步地，所述的木屑粉末优选为松木木屑粉末和/或杉木木屑粉末，木屑在使用前用清水浸润约1min后捞出沥水，直至木屑不再滴水为止备用；所述的下层的木块优选为松木和/或杉木木块，木块在使用前需用清水清洗干净并沥去水分后备用；所述的纳米SiO₂可以自主制备，也可以买市售产品，本发明中的纳米SiO₂均为市售产品；所述的木屑粉末和纳米SiO₂混合材料的配制方法为：每一公斤沥水后的木屑粉末加入1g～2g的纳米SiO₂混合搅拌均匀。

上述所述的铁皮石斛试管苗均为采用组织培养方法培育的无菌试管苗，培养周期一年后移栽至室外的栽培基质中继续生长，当然，也可将野生的铁皮石斛种苗应用上述栽培基质及栽培方法进行繁育。

所述的基质的湿度可以采用湿度测试仪器进行监控，在向基质浇水时，采用喷雾式浇水方式，以保证栽培基质的湿度均一。

由于对铁皮石斛在繁育过程中的成本控制，应合理控制纳米SiO₂的使用量，用量偏大造成不必要的经济浪费。

本发明的有益效果：

1.使用本发明中所述的栽培基质及方法进行铁皮石斛栽培，生长状态良好，不会发生徒长等现象，另外，茎部多糖含量最高可达43％，满足了市场对多糖量含高的铁皮石斛产品的需求；

2.本申请的栽培基质中添加了纳米SiO₂，由于其特殊的表面积及生理作用，对铁皮石斛植株茎部多糖含量的积累起到了促进作用，且纳米SiO₂无毒副作用，培育出的铁皮石斛可以放心食用；

3.应用本发明中所述的栽培方法栽培的铁皮石斛植株抗病性增强，大大减少了农药的使用量；

4.通过本发明方法栽培铁皮石斛植株，铁皮石斛的采收时间可提早1个月以上，即从每年的11月份提早到10月份；

5.本发明方法通过控制栽培基质的组成及其湿度以提高铁皮石斛植株的多糖含量，栽培基质成分易得，该方法具有可控性、操作简单、易标准化的特点。

下述实验例用于进一步证明本发明的效果，但不能理解为对本发明保护范围缩小性理解。

实验例

实验例1栽培基质对铁皮石斛植株生长状态及多糖含量的影响

1.铁皮石斛试管苗的准备

(1)外植体消毒材料来源于贵州的野生铁皮石斛。选择高为3～5cm的健康植株，用刀片切取茎段，先用体积分数为70％的乙醇脱脂药棉擦洗整个带叶和叶鞘的的幼茎，再剥去下部叶和叶鞘，留下包裹茎尖的1～2片叶，在1g/L升汞(加2滴吐温20中浸泡8min，100g/L的NaCl0溶液中20min，蒸馏水洗4～5次，用刀背挤出茎尖接种。

(2)培养基与培养条件：不定芽诱导培养基为1/2MS+3.0mg/L6-BA+0.75mg/L NAA+100g/L椰乳+7.Og/L琼脂+25g/L蔗糖，每隔50天继代1次。

(3)生根培养：当幼苗长到2～3cm高，有3～4张叶片，3～4条根时，将幼苗移入生根培养基进行培养。每种培养基移入100株幼苗。

(4)培养条件：培养基的pH值5.8，光照培养室温度(25士2)℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。

2.铁皮石斛试管苗的移栽

选择高度为3～4cm、2～5条根的铁皮石斛试管苗移栽至表1所示的栽培基质中继续培养，每种栽培基质移栽100株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

表1栽培基质的结构

3.铁皮石斛试管苗移栽后的管理

在8月10号之前按正常管理，即在栽培基质含水量降至80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月10号之后，在栽培基质含水量降至50％时才浇水，且只浇湿上层基质，并增施钾肥，8月10号开始，每月定期施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

4.铁皮石斛多糖含量的测定

4.1样品处理

样品在60℃烘箱中烘干，粉碎，过60目筛。取各铁皮石解样品粗粉0.25g加入石油醚(60～90℃)100ml,回流提取1h脱脂。过滤，挥干溶媒，加入80％乙醇100m L回流提取1h趁热过滤，挥干溶媒，加入蒸馏水100m L回流提取2次，每次1h趁热过滤，合并滤液，定容到250ml量瓶，以苯酚硫酸比色法测定含量，试验平行3次。

4.2线性关系考察

精密称取干燥恒重的无水葡萄糖对照品100mg加水溶解并定容至100mI，精密吸取10ml，加水稀释并定容至100ml，每10μl含葡萄糖1μg，精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0ml，分别置于具塞试管中，各加蒸馏水至2.Oml，再加苯酚试液1.0ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.Oml，摇匀后放置5min，沸水浴加热15min，取出快速冷却至室温，另以蒸馏水2.Oml为空白，同法操作，于490rm处测定吸光度，得吸光度与浓度的回归方程：C＝6.71062A+0.00549，r＝0.99965。在0～0.1mg具有良好的线性关系。

4.3显色稳定性试验

精取某一样品溶液0.2ml，加水稀释至2.OmI,再加苯酚试液1.0mI，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mI，摇匀后放置5min沸水浴加热15min取出快速冷却至室温，另以蒸馏水2.Oml为空白，同法操作，于490rm处测定吸光度，分别在0，10，20，40，60，80，100，120min测定吸光度。结果显示该显色在2h内稳定。

4.4精密度试验

精取0.1g/L的葡萄糖溶液0.2mI，加水稀释至2.OmI，另取2.OmL水作对

照，其余操作同上，测定5次。结果显示，RSD1.6％。

4.5重复性试验

取同一样品5份，按照样品中多糖提取步骤提取样品溶液，分别吸取各样品溶液0.2mL至试管，加水稀释至2.OmI,其余操作同上，测定吸光度，结果显示，RSD 1.8％(n＝5)。

4.6加样回收率试验

取某一样品，精密加入铁皮石解精多糖25mg按照样品中多糖提取步骤提取

样品溶液，吸取0.2ml至试管，加水稀释至2.0m I，其余操作同上，测定5次，平均回收率97.35％，RSD4.2％。

5.铁皮石斛植株的生长状态及多糖含量

从表2所示的结果表明：在栽培基质1及4中植株状态最好，植株的茎部较粗，且种苗根部发达，成活率达到100％；而在栽培基质3、5中，种苗生长状态较差，叶片徒长现象严重，且茎部较细，成活率也较低，可见，栽培基质的结构及成分组成是十分必要的，这可能与铁皮石斛的生长特性有关。

从表3所示的结果表明：在添加了纳米SiO2粉末的栽培基质中的种苗多糖含量明显升高，其中，两年生的种苗多糖含量高达41.87，可见纳米SiO2粉末对于铁皮石斛生长状态及多糖含量的增加均起到促进作用。

表2铁皮石斛种苗的生长状态

表3铁皮石斛种苗的多糖含量

栽培基质一年生二年生平均值133.7840.4537.12227.4529.3328.39325.9331.4328.68435.6541.8738.76526.8932.6629.78

实验例2栽培基质的湿度控制及钾肥对铁皮石斛植株多糖含量的影响

1.铁皮石斛试管苗的准备

铁皮石斛试管苗的获得方法与实验例1中相同。

2.铁皮石斛试管苗移栽

选择高度为3～4cm、2～5条根的铁皮石斛试管苗移栽至下述栽培基质中继续培养，每种栽培基质移栽400株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

表4栽培基质的组成

3.铁皮石斛试管苗移栽后的管理

在将铁皮石斛试管苗400株移栽至上述栽培基质后，分成五组开展移栽后管理实验：

第一组：在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量降至80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后给基质的浇水频率为10天1次(湿度保持60％左右)，且只浇湿上层基质，另外，增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

第二组：在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后给基质的浇水频率为3天1次(湿度保持85％以上)，且只浇湿上层基质，另外，增施钾肥(可根据本领域普通技术人员的技术进行施肥)，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

第三组：在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后给基质的浇水频率为5天1次(湿度保持80％以上)，且只浇湿上层基质，另外，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

第四组：在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后给基质的浇水频率为13天1次(湿度保持50％左右)，且只浇湿上层基质，另外，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

第五组：在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后给基质的浇水频率为16天1次(湿度保持35％左右)，且只浇湿上层基质，另外，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。

4.铁皮石斛多糖含量的测定

测定方法与实验例1中相同。

5.栽培基质的湿度对铁皮石斛种苗多糖含量的影响

由表5所示的多糖含量可以看出，栽培基质的湿度影响铁皮石斛种苗多糖含量，在8月份之后，上层基质的湿度在80％以上时，例如3天或5天喷水一次，多糖含量反而降低，植株状态也较差，这可能是由于基质水分的增加抑制植株中多糖合成有关。而当基质湿度降至35％再浇水，植株由于严重缺水发生叶片局部变黄的现象，可见，湿度的合理控制对种苗的生长及多糖的含量影响较大。

另外，我们还发现，在采用第四组的栽培方式繁育铁皮石斛植株期间，病害的发病几率明显降低，这也降低了农药的使用量，保证了培育出来的铁皮石斛种苗食用的安全性；且常规培养方式在每年的11月份采收，而采用第四组栽培方式培育的铁皮石斛植株在植株高度、多糖含量、植株生长状态方面10月份即可采收，可见采收期也提前了一个月。

表5栽培基质的控水方案对铁皮石斛植株多糖含量的影响

栽培管理一年生植株多糖含量植株状态第一组31.69植株茎部较粗，叶宽

第二组27.88植株茎部细长，植株有烂根现象第三组29.76植株茎部细长，植株有烂根现象第四组35.99植株茎部较粗，叶宽第五组28.33植株茎部较短且细，叶局部变黄

实施例

实施例1

选择高度为3～4cm、2～5条根的铁皮石斛试管苗移栽下述栽培基质中继续培养，上层为松木木屑及SiO2的混合基质，其中为每公斤松木木屑含2g SiO2，下间层为松木木块，厚4.0cm；移栽100株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量低于50％时才浇水，且只浇湿上层基质，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。移栽2年后按照实验例1的方法测定多糖含量为43.12％。

实施例2

选择高度为3-4cm、2-5条根的铁皮石斛试管苗移栽下述栽培基质中继续培养，上层为松木木屑及SiO2的混合基质，其中为每公斤杉木木屑含1g SiO2，下层为杉木木块，厚3.5cm；移栽100株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量低于50％时才浇水，且只浇湿上层基质，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。移栽2年后按照实验例1的方法测定多糖含量为40.89％。

实施例3

选择高度为3-4cm、2-5条根的铁皮石斛试管苗移栽下述栽培基质中继续培养，上层为松木木屑、杉木木屑及SiO2的混合基质，其中混合基质的组成为：0.5kg松木木屑、0.5kg杉木木屑、1g SiO2，上述三种基质成分混匀，下层为杉木木块，厚3.5cm；移栽100株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量低于50％时才浇水，且只浇湿上层基质，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。移栽2年后按照实验例1的方法测定多糖含量为40.89％。

实施例4

选择高度为3-4cm、2-5条根的铁皮石斛试管苗移栽下述栽培基质中继续培养，上层为松木木屑、杉木木屑及SiO2的混合基质，其中混合基质的组成为：0.5kg松木木屑、0.5kg杉木木屑、1g SiO2，上述三种基质成分混匀，下层为杉木木块及松木木块的混合，厚4.0cm；移栽100株铁皮石斛种苗。在进行试管苗移栽时，先去除根部的培养基，并用清水清洗掉残余的培养基，再以株间距5cm移栽至栽培盘中。

在将铁皮石斛试管苗移栽至上述栽培基质后，在8月中上旬之前按正常管理，在栽培基质含水量低于80％时浇水，且浇水时浇至栽培基质的下层滴水为止，8月中下旬之后，在栽培基质含水量降至45％时才浇水，且只浇湿上层基质，并增施钾肥，8月中下旬开始，每月施用一次，直到采收，每亩每次施用氯化钾3千克。移栽2年后按照实验例1的方法测定多糖含量为42.89％。

实施例5

1.铁皮石斛多糖的提取

取采用实施例2方法培育的铁皮石斛种苗，烘干后再取茎部并加工成粉末经95％乙醇和丙酮提取后，加20倍水，于90℃温度下水浴1h，残渣反复提取3次。过滤，合并滤液，减压浓缩，4倍体积的95％乙醇沉淀4～6次，再溶解、浓缩、透析、冻干，得石斛粗多糖。称取0.2g石斛粗多糖样品溶于20ml双蒸水中，置于40ml离心管中，按样品溶液和脱蛋白试剂体积比为4：1加Sevag试剂(异戊醇：氯仿为1：4)5ml，振荡2min，常温下3000r/min离心20min，取上清重复上述操作，直至脱蛋白完全。上清加4倍95％乙醇，收集沉淀物依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，挥去溶剂，真空干燥得粗制品，溶于热水，滤去不溶物。浓缩，干燥得石斛粗多糖。

2.铁皮石斛多糖的纯化

称取1.0g石斛粗多糖溶于50ml水中，DEAE-纤维素柱(3.6cm×70cm)分批上样，然后依次用水、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，部分收集仪收集，以1.5倍洗脱液，柱温为12℃，流速为2ml/min。各洗脱峰分别收集合并，减压浓缩后水洗部分用透析袋脱盐，盐洗部分用Sephadex G-10凝胶柱色谱脱盐，再次浓缩，冻干，结果获得不同组分的纯化石斛多糖。

3.铁皮石斛多糖对外周血白细胞数的影响

取纯种小鼠NIH36只，每只体重18～20g，随机分为3组，每组12只，雌雄各半，分别为空白对照组、模型对照组和铁皮石斛多糖组。

第1天，空白对照组每只小鼠腹腔注射0.5ml生理盐水，模型对照组和石斛多糖组每只小鼠腹腔注射环磷酰胺1.5mg。

从第2天开始，直至第10天，石斛多糖组每天每只小鼠口服铁皮石斛多糖0.5mg，空白对照组和实验对照组口服等量的生理盐水。

第11天，在小鼠的腋窝取血。结果显示，铁皮石斛多糖能够强有力地抵消实验条件下免疫抑制剂环磷酰胺的加入所引起的外周白细胞数的剧烈下降，消除其破坏性的副作用。同空白对照组相比，铁皮石斛多糖能够明显提升外周血白细胞数。

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