蛹虫草在制备缓解压力性尿失禁的产品中的应用

摘要

本发明公开了蛹虫草在制备缓解压力性尿失禁的产品中的应用。本发明所提供的蛹虫草在制备缓解压力性尿失禁的产品中的应用中，所述蛹虫草(Cordyceps millitaris)为蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体。实验证明，随着本申请的蛹虫草子实体给药剂量的增加，SD大鼠喷嚏实验阳性率逐渐降低，SD大鼠的LPP和ALPP均逐渐升高。蛹虫草子实体对压力性尿失禁具有有效的治疗作用。本申请的蛹虫草子实体可用来治疗压力性尿失禁，也可用来制备缓解压力性尿失禁的产品。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域中蛹虫草在制备缓解压力性尿失禁的产品中的应用。

背景技术

尿失禁是由于膀胱括约肌损伤或神经功能障碍而丧失排尿自控能力，使尿液不自主地流出。尿失禁按照症状可分为充溢性尿失禁、无阻力性尿失禁、反射性尿失禁、急迫性尿失禁及压力性尿失禁5类。

各种尿失禁的临床表现为：

1.充溢性尿失禁，尿液不断地自尿道中滴出，这类患者的膀胱呈膨胀状态；

2.无阻力性尿失禁，患者在站立时尿液全部由尿道流出；

3.反射性尿失禁，患者不自主地间歇排尿(间歇性尿失禁)，排尿没有感觉；

4.急迫性尿失禁，患者有十分严重的尿频，尿急症状，由于强烈的逼尿肌无抑制性收缩而发生尿失禁；

5.压力性尿失禁，当腹压增加时(如咳嗽，打喷嚏，上楼梯或跑步时)即有尿液自尿道流出，引起这类尿失禁的病因很复杂，不同患者具体病因不同，需进行临床诊断。

蛹虫草(Cordyceps millitaris)属子囊菌门核菌纲球壳目麦角菌科虫草属，别名为蛹草、北冬虫夏草、北虫草。蛹虫草与冬虫夏草(C.sinensis)同归于虫草属，是一种珍贵药材，药效类似冬虫夏草，具有治疗肺结核、止血化痰、补精髓、抑制癌细胞、延缓衰老、提高免疫力等功能。蛹虫草富含蛋白、氨基酸以及多种微量元素及维生素、虫草酸等有效成分。蛹虫草已能大规模商品化栽培，市场价格也逐步降低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何缓解压力性尿失禁。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了蛹虫草(Cordyceps millitaris)在制备缓解尿失禁的产品中的应用

上述应用中，所述蛹虫草(Cordyceps millitaris)可为蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体。

上述应用中，所述蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体可为蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体干粉。

上述应用中，所述缓解尿失禁的产品为缓解压力性尿失禁的产品。

上述应用中，所述产品可为药物、保健品、食品或食品添加物、药物散剂(如冻干粉)或胶囊(如冻干粉胶囊)。

上述应用中，所述产品可以包含其它药学上可接受的载体。可作为药学上可接受的载体或其组分可为：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如甘油、甘露糖醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；磷脂，如卵磷脂，大豆磷脂，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇，磷脂酰丝氨酸，硬脂酰胺；胆固醇；大分子高聚物，如聚乙烯亚胺，壳聚糖，透明质酸；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等；生理盐水、甘油和磷酸盐缓冲盐水。

上述应用中，所述蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体干粉可以包含其它药学上可接受的载体。可作为药学上可接受的载体或其组分可为：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如甘油、甘露糖醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；磷脂，如卵磷脂，大豆磷脂，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇，磷脂酰丝氨酸，硬脂酰胺；胆固醇；大分子高聚物，如聚乙烯亚胺，壳聚糖，透明质酸；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等；生理盐水、甘油和磷酸盐缓冲盐水。

实验证明，随着本申请的蛹虫草子实体给药剂量的增加，SD大鼠喷嚏实验阳性率逐渐降低：与模型组SD大鼠相比，低剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性、中剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率和高剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率降低，其中，中剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率和高剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率达到极显著水平。随着本申请的蛹虫草子实体给药剂量的增加，SD大鼠的LPP和ALPP均逐渐升高：与模型组的SD大鼠相比，口服82mg蛹虫草子实体/kg体重的中剂量组SD大鼠的LPP和ALPP均呈显著性升高(P≤0.05)；与模型组的SD大鼠相比，口服164mg蛹虫草子实体/kg体重的高剂量组SD大鼠的LPP和ALPP均呈极显著性升高(P≤0.01)。说明蛹虫草子实体对压力性尿失禁具有有效的治疗作用。本申请的蛹虫草子实体干粉可用来治疗压力性尿失禁，也可用来制备缓解压力性尿失禁的产品。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了 阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的蛹虫草(Cordyceps millitaris)于本申请的申请日前收藏于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心(简称ACCC，地址：北京市海淀区中关村南大街12号，中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，邮编100081)，其保藏编号为ACCC50383，公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心获得该菌株。

下述实施例中的蛹虫草子实体干粉是将风干的上述蛹虫草(Cordyceps millitaris)子实体进行粉碎得到的蛹虫草子实体粉末。

下述实施例中的SD大鼠(Sprague Dawley大鼠)，均为雌性成年未生产过的3月龄SD大鼠，平均体重为250g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心(许可证号：SCXK-(军)2007-004)提供。

实施例1、蛹虫草(Cordyceps millitaris)的缓解压力性尿失禁的作用

1、制备压力性尿失禁的模型大鼠

将32只SD大鼠均按照下述方法制备造模大鼠：用无菌生理盐水溶解氨基甲酸乙酯后得到氨基甲酸乙酯溶液，按照1.0g氨基甲酸乙酯/kg体重的标准向SD大鼠腹腔注射氨基甲酸乙酯溶液得到麻醉的SD大鼠。对麻醉的SD大鼠进行双侧卵巢切除术，再取仰卧位，固定四肢，将气囊前端已部分去除的8Fr弗莱氏尿管插入大鼠阴道内2-3cm，向气囊中注入5ml无菌生理盐水，给予平行阴道径向拉力，8h后取出水囊导尿管，术后恢复3天，得到压力性尿失禁模型大鼠。

2、压力性尿失禁模型大鼠的治疗

将步骤1的32只压力性尿失禁模型大鼠按每组8只随机分组，分别得到模型组SD大鼠、高剂量组SD大鼠、中剂量组SD大鼠和低剂量组SD大鼠。另取8只SD大鼠作为对照组SD大鼠。

对上述五组大鼠进行如下治疗：按照164mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的标准，向高剂量组的每只SD大鼠连续口服给药蛹虫草子实体干粉悬浮液(将蛹虫草子实体干粉悬浮于蒸馏水得到的悬浮液)15天，每天给药1次2.0mL蛹虫草子实体干粉悬浮液，每次给药剂量均为164mg蛹虫草子实体干粉/kg体重；按照82mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的标准，向中剂量组的每只SD大鼠连续口服给药蛹虫草子实体干粉悬浮液(将蛹虫草子实体干粉悬浮于蒸馏水得到的悬浮液)15天，每天给药1次2.0mL蛹虫草子实体干粉悬浮液，每次给药剂量均为82mg蛹虫草子实体干粉/kg体重；按 照41mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的标准，向低剂量组的每只SD大鼠连续口服给药蛹虫草子实体干粉悬浮液(将蛹虫草子实体干粉悬浮于蒸馏水得到的悬浮液)15天，每天给药1次2.0mL蛹虫草子实体干粉悬浮液，每次给药剂量均为41mg蛹虫草子实体干粉/kg体重；向模型组的每只SD大鼠连续口服蒸馏水2.0mL 15天，每天1次；向对照组的每只SD大鼠连续口服蒸馏水2.0mL 15天，每天1次。

3、压力性尿失禁模型大鼠的喷嚏实验

对步骤2治疗结束6小时后的模型组SD大鼠、对照组SD大鼠、高剂量组SD大鼠、中剂量组SD大鼠和低剂量组SD大鼠的每只SD大鼠进行喷嚏实验，具体步骤如下：

先排空SD大鼠膀胱中的尿液，通过微量泵向膀胱内注入亚甲蓝溶液(亚甲蓝溶液为用生理盐水溶解亚甲蓝得到的浓度为1.0％的溶液)，至尿道外口有蓝色液体溢出，此时膀胱中亚甲蓝溶液的体积为最大膀胱容量，记录该数值。排空膀胱中的亚甲蓝溶液，通过微量泵向膀胱内注入1/2最大膀胱容量的亚甲蓝溶液。剪取一段鼠须深入大鼠鼻孔内致其出现喷嚏反射。当有蓝色液体从尿道口流出时为喷嚏实验阳性，无蓝色液体从尿道口流出则为阴性，统计喷嚏实验阳性的SD大鼠数量，喷嚏实验阳性的SD大鼠的平均数量及阳性率见表1。

表1、蛹虫草子实体干粉对压力性尿失禁模型大鼠的缓解作用(喷嚏实验)

分组 剂量(mg/kg) 喷嚏实验阳性动物数 喷嚏实验阳性率(％) 对照组 0 0 0 模型组 0 8 100.0 低剂量组 41 6 75.0 中剂量组 82 3 37.5** 高剂量组 164 1 12.5**

注：**表示与模型组比较P≤0.01(t检验)。

与对照组SD大鼠相比，模型组SD大鼠喷嚏实验阳性率为100％，说明造模成功。口服41mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的低剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率为75.0％，口服82mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的中剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率为37.5％，口服164mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的高剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率为12.5％。与模型组SD大鼠相比，低剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性、中剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率和高剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率降低，其中，中剂量组SD大鼠喷嚏实 验阳性率和高剂量组SD大鼠喷嚏实验阳性率达到极显著水平。结果表明，随着蛹虫草子实体干粉给药剂量的增加，SD大鼠喷嚏实验阳性率逐渐降低，表明蛹虫草子实体干粉对压力性尿失禁具有有效的缓解作用。

4、尿动力学测定

按照下述方法对完成步骤3喷嚏实验的模型组SD大鼠、对照组SD大鼠、高剂量组SD大鼠、中剂量组SD大鼠和低剂量组SD大鼠的每只SD大鼠分别进行膀胱顶导管植入术及漏尿点压力(leak point pressure，LPP)和腹部漏尿点压力(abdominal leak point pressure，ALPP)的测定：

膀胱顶导管植入术：取步骤1的氨基甲酸乙酯溶液，按照1.0g氨基甲酸乙酯/kg体重的标准向SD大鼠腹腔注射氨基甲酸乙酯溶液麻醉SD大鼠。对麻醉的SD大鼠取仰卧位固定，取下腹正中切口，暴露提出膀胱，在膀胱顶造瘘，直径为2 mm，植入2支导管，膀胱内导管长度为0.5～1.0cm，并用5/0丝线缝合固定。2支导管中的一支连接在压力传导仪上，另一支连接在一微泵上。

漏尿点压力(LPP)的测定：通过微泵向膀胱内以0.04ml/min的速度注入室温生理盐水，尿道口出现第一滴尿液时膀胱内压力为漏尿点压力，此时的膀胱容量为最大膀胱容量，并记录最大膀胱容量及漏尿点压力。实验重复三次。

腹部漏尿点压力(ALPP)的测定：漏尿点压力测定结束后，排空膀胱，然后关腹，通过微泵向膀胱内以0.04ml/min的速度注入室温生理盐水，注入量为同一只SD大鼠LPP测定时的最大膀胱容量的一半。在SD大鼠耻骨上腹部上用手指施加压力，压力逐渐增大直至尿道口有液体溢出，此时膀胱内压力为ALPP，记录ALPP。实验重复三次。

表2、蛹虫草子实体干粉对压力性尿失禁模型大鼠的缓解作用(尿动力学测定结果)

分组 剂量(mg/kg) LPP(mmHg) ALPP(mmHg) 对照组 0 31.062±1.980 38.755±3.901 模型组 0 21.926±2.119 25.629±2.886 低剂量组 41 22.987±2.718 26.497±4.433 中剂量组 82 23.931±2.085* 28.315±3.126* 高剂量组 164 24.889±2.790** 30.155±3.806**

注：*表示与模型组比较P≤0.05(t检验)；**表示与模型组比较P≤0.01(t检验)。

与对照组SD大鼠相比，造模后的SD大鼠的LPP和ALPP均呈极显著下降(P≤0.01)。与模型组的SD大鼠相比，口服41mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的低剂量组SD大鼠的LPP和ALPP均升高，但差异不显著(P＞0.05)；与模型组的SD大鼠相比，口服82mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的中剂量组SD大鼠的LPP和ALPP均呈显著性升高(P≤0.05)；与模型组的SD大鼠相比，口服164mg蛹虫草子实体干粉/kg体重的高剂量组SD大鼠的LPP和ALPP均呈极显著性升高(P≤0.01)。结果表明，随着蛹虫草子实体干粉给药剂量的增加，SD大鼠的LPP和ALPP均逐渐升高，表明蛹虫草子实体干粉对压力性尿失禁具有有效的缓解作用。

实验证明，本申请的蛹虫草子实体干粉可用来缓解压力性尿失禁。