美洲大蠊油脂的超临界提取方法及脱脂美洲大蠊的制备

摘要

本发明提供了脱脂美洲大蠊的制备方法，它是将美洲大蠊药材，粉碎，置于超临界CO2萃取装置中提取，分别收集油脂和药渣，取药渣即得脱脂美洲大蠊。本发明研究表明，本发明制备的脱脂美洲大蠊药材明显降低了胃溃疡治疗时的副作用，为临床用药提供了新的选择。同时，本发明方法脱脂率高，且操作方便、快速，适用于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及美洲大蠊油脂的提取方法及脱脂美洲大蠊的制备。

背景技术

美洲大蠊(PeriplanetaAmericana)属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，“蟑螂”为其 俗名，首见于《本草纲目拾遗》，也称其为石姜、滑虫，在地球上已经生存了 3.5亿年，是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。 美洲大蠊药用主癥瘕、破积聚，通利血脉，外用可敛疮、拔毒、化腐、生肌， 现代研究表明其还具有良好的抗菌作用。

康复新液主要成分为美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物，功能通利血脉， 养阴生肌，现代医学认为康复新液具有促进肉芽组织生长、抗炎及消除炎性 水肿、提高机体免疫功能、抑制胃酸分泌等药理作用，临床用于十二指肠溃 疡，胃溃疡，烧烫伤等的治疗。

目前对美洲大蠊药材的前处理还鲜有研究。

发明内容

本发明的目的在于提供美洲大蠊油脂的提取方法及脱脂美洲大蠊的制 备。

本发明提供了美洲大蠊油脂的提取方法，它包括如下操作步骤：

取美洲大蠊药材，粉碎，置于超临界CO₂萃取装置中提取，收集油脂即 得。

进一步地，所述超临界CO₂萃取的条件为：压力20～40MPa，温度 30～50℃，CO₂流量10～30L/h，提取1～3小时。

优选地，所述超临界CO₂萃取的条件为：压力30MPa，温度40℃，CO₂流量20L/h，提取2小时。

其中，所述美洲大蠊药材是由活体美洲大蠊经窒息或电击处死后，除杂、 干燥得到的药材。

本发明还提供了脱脂美洲大蠊药材的制备方法，取美洲大蠊药材，按照 权利要求1～3任意一项所述方法提取油脂后，收集药渣，即得脱脂美洲大蠊。

本发明还提供了上述方法制备的脱脂美洲大蠊。

本发明还提供了脱脂美洲大蠊或其提取物在制备治疗消化性溃疡的药物 中的用途。

进一步地，所述提取物为水或乙醇提取物。

其中，所述乙醇浓度为50～95％v/v。

更进一步地，所述乙醇浓度为70～80％v/v。

优选地，所述乙醇浓度为75～80％v/v。

本发明研究表明，本发明制备的脱脂美洲大蠊药材明显降低了胃溃疡治 疗时的副作用，为临床用药提供了新的选择。同时，本发明方法脱脂率高， 且操作方便、快速，适用于工业化生产。

具体实施方式

实施例1 美洲大蠊油脂的提取

美洲大蠊药材粉碎成粗粉，称取250g粗粉，置于超临界CO₂萃取装置 中，在压力30MPa，温度40℃，CO₂流量20L/h的状态下提取2小时，收集 美洲大蠊油脂即得。

实施例2 美洲大蠊油脂的提取

美洲大蠊药材粉碎成粗粉，称取250g粗粉，置于超临界CO₂萃取装置 中，在压力20MPa，温度30℃，CO₂流量10L/h的状态下提取1小时，收集 美洲大蠊油脂即得。

实施例3 美洲大蠊油脂的提取

美洲大蠊药材粉碎成粗粉，称取250g粗粉，置于超临界CO₂萃取装置 中，在压力40MPa，温度50℃，CO₂流量30L/h的状态下提取3小时，收集 美洲大蠊油脂即得。

以美洲大蠊油脂得率为评价指标，对超临界流体萃取的压力、温度、CO₂流量和提取时间进行考察，结果如下：

根据上表可知，本发明使用超临界萃取方法，可以有效提取美洲大蠊油 脂，其中，以实施例2的操作条件提取率最佳。

实施例4 脱脂美洲大蠊的制备

美洲大蠊药材粉碎成粗粉，称取250g粗粉，置于超临界CO₂萃取装置 中，在压力30MPa，温度40℃，CO₂流量20L/h的状态下提取2小时，收集 药渣，即得。

本发明使用的美洲大蠊药材，是由活体美洲大蠊经窒息或电击处死后， 除杂、干燥得到的。

实施例5 脱脂美洲大蠊超微粉的制备

称取脱脂美洲大蠊100kg，置于灭菌混合干燥一体机中，加入75％乙醇 20L,在40～60℃灭菌1～2小时，回收乙醇，40～60℃真空干燥至水分≤6％， 经高效万能粉碎机在4000～5000rpm/min进行粉碎，粉末用超微振动磨在振幅 5mm，工作温度0～10℃，粉碎20min，制成10～50μm的颗粒。美洲大蠊超 微粉的比表面积增大，有效组分的溶出速度和溶出量增加，提高了疗效或减 少了该产品的用量，生物利用度大大提高，药用价值得到大大提高，可作为 原料药应用于散剂、丸剂、片剂、栓剂、颗粒剂、膜剂、胶囊剂、微囊剂、 滴丸剂、气雾剂、注射剂、膏剂、酒剂、糖浆剂或口服溶液剂。

实施例6 脱脂美洲大蠊纳米粉的制备

称取脱脂美洲大蠊100kg，经高效万能粉碎机在4000～5000rpm/min粉碎， 粉末加3～10倍水配成混悬液，用胶体磨磨1～2次，再经超高压均质机在压 力100～180MPa进行高压均质，均质液40～80℃喷雾干燥，制得粒径小于 100nm的脱脂美洲大蠊纳米粉。美洲大蠊纳米粉的比表面积大大增大，有效 组分的溶出速度和溶出量大大增加，提高了疗效或减少了该产品的用量，生 物利用度大大提高，药用价值得到大大提高，可作为原料药应用于散剂、丸 剂、片剂、栓剂、颗粒剂、膜剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、注射 剂、膏剂、酒剂、糖浆剂或口服溶液剂。

实施例7 脱脂美洲大蠊醇提物的制备

称取脱脂美洲大蠊100kg，粉碎成粗粉，置于多功能提取罐中，加8倍 80％乙醇，回流提取4.5小时，过滤，，加10～20倍水搅拌均匀，静置，冷至 室温，过滤，减压浓缩至密度1.1～1.3，40～80℃喷雾干燥制成美洲大蠊提取 物。该发明具有方法简单、易操作等特点。该产品有效成分含量高、易吸收、 保质期长，具有提高免疫作用、保肝作用、促进组织修复作用。以提取物为 活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制成的丸剂、散剂、片 剂、栓剂、颗粒剂、膜剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、注射剂、膏 剂或者口服溶液剂。

实施例8 脱脂美洲大蠊醇提物的制备

称取脱脂美洲大蠊100kg，粉碎成细粉，置于超声波提取罐中，加8倍 80％乙醇，超声提取1～2小时，过滤，40～60℃减压浓缩至密度1.1～1.3，浓 缩液40～60℃喷雾干燥制成美洲大蠊提取物。该提取物的干燥品中含总氨基 酸以丙氨酸(C3H7NO2)计为15％(质量百分比)。该发明具有提取效率高、 提取时间短、提取温度低、高效、节能、环保的特点。该产品有效成分含量 高、易吸收、保质期长，具有提高免疫作用、保肝作用、促进组织修复作用。 以提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制成的丸剂、 散剂、片剂、栓剂、颗粒剂、膜剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、注 射剂、膏剂或者口服溶液剂。

以下通过试验例说明本发明的有益效果。

试验例1 美洲大蠊药材脱脂前后治疗消化性溃疡药效对比

1 实验材料

1.1 实验动物

清洁级SD大鼠，60只，雄性，体重180-220g，由成都达硕生物科技有 限公司提供。动物质量合格证：SCXK(川)2008-24号。

1.2 受试药物

①美洲大蠊药材粉末：活体美洲大蠊经窒息或电击处死后，除去杂质， 60℃烘干，再采用高速粉碎机粉碎。

②美洲大蠊药材粉末：活体美洲大蠊经窒息或电击处死后，除去杂质， 60℃烘干，然后采用超临界CO₂流体萃取法(实施例4)，再采用高速粉碎机 粉碎。

③美洲大蠊粉：样品制备方法沿用市售美洲大蠊精粉制备工艺。

1.3 实验仪器及试剂

▲电子天平(北京赛多利斯天平有限公司，型号BS-200S-WEI)；

▲离心机(飞鸽牌，型号：LXJ-ⅡB)；

▲数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-500DB)；

▲高精度电子计重称(福州日辰电子有限公司，型号：AWH-30KC)；

▲旋转蒸发仪、冷凝管、铁架台、圆底烧瓶(1000ml、2000ml)

▲其他：EP管(5ml，10ml)、烧杯、量筒、锥形瓶、称量纸、手术缝合 针、手术缝合线、玻璃棒、棉签、灌胃针、注射器、恒温水浴装置、大鼠固 定板、注射器、持针器、镊子数把、大小手术剪数把、皮筋适量等。

▲水合氯醛(成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20100920，规格： 250g)；

▲甲醛(成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20120320，规格：500ml)；

▲无水乙醇(成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20110820，规格：500ml)；

▲氯化钠注射液(昆明南疆制药有限公司，生产批号：D101211A2，规 格：500ml：4.5g)；蒸馏水等。

2 实验方法

2.1 实验分组及给药

将60只SD大鼠按体重随机平均分为5组：①假手术组(JSS组)：等 体积纯净水；②模型组(MD组)：等体积纯净水；③美洲大蠊药材组(MZDL 组)；④美洲大蠊药材脱油脂组(TYZ组)。⑤美洲大蠊精粉组(DLJF组)。每组 12只大鼠，自实验当天开始，各实验组药材粉末，大鼠按组别、剂量灌胃给 予相应药物或纯净水，连续7天。

2.2 禁食

末次给药后，各组大鼠单笼饲养，禁食不禁水24h(禁食期间照常给药)。

2.3 模型复制

禁食24h后，各实验组大鼠以10％水合氯醛溶液(剂量：0.3ml/100g)腹腔 注射麻醉大鼠，沿腹中线自剑突下切开腹壁约2-3cm，在左肋缘部位，用手 轻推，使胃十二指肠交界处的幽门暴露于切口，除空白组外，将其余各组大 鼠胃幽门结扎，空白组仅进行麻醉开腹假手术，结扎后各组动物均经十二指 肠末次注射给相应药物，将胃和十二直肠送回腹腔原处，然后再分层缝合腹 壁切口，记录造模时间。

2.4 取材

术后各组大鼠单笼饲养，禁食禁水18h后，将大鼠处死，打开腹腔，结 扎贲门取出全胃，将胃浸入1％甲醛溶液中，固定5-10min，然后将胃沿胃大 弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开，平铺白纸上，用肉眼或放大镜观 察胃黏膜面，记录每组产生溃疡的动物数、溃疡面积病变情况。

3 观测指标

3.1 溃疡抑制率

用游标卡尺测量每个溃疡的面积，溃疡直径>1mm计算溃疡面积，面积 小于1mm的溃疡点，10个相当于溃疡面积1mm²。以溃疡面积总和的平方毫 米数作为溃疡指数，计算溃疡抑制百分率。

溃疡抑制百分率(％)＝(对照组溃疡面积总和-给药组溃疡面积总和)/对照 组溃疡面积总和×100％。

3.2 病理损伤指数

对胃组织显微观察情况进行病理评分，评分结果以损伤指数计。

胃组织显微镜检查评分标准：0分：无损伤或炎症；1分：轻度充血、水 肿，表面光滑，无糜烂或溃疡；2分：充血水肿，炎细胞浸润，有糜烂或胃黏 连；3分：高度充血水肿，表面有坏死及溃疡形成，溃疡最大纵径<1cm，胃 壁增厚或表面有坏死及炎症；4分：高度充血水肿，黏膜坏死及溃疡形成，溃 疡最大纵径>1cm，或全壁胃坏死。

4 统计学处理

用SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差()表示，组间 采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行 Tamhane’s T2检验。

5 实验结果

5.1 溃疡抑制率比较

结果见表1。

表1 对大鼠胃溃疡抑制率的影响(n＝10)

注：与MD组比较，^**P<0.01，^*P<0.05；与MZDL组比较，^△△P<0.01，^△P<0.05； 与DLJF组比较，^▲▲P<0.01，^▲P<0.05。

由表1可知，与假手术组比较，模型组大鼠胃溃疡面积极显著性增大 (P<0.01)，与模型组比较，DLJF组大鼠胃溃疡面积显著减小(P<0.05)，TYZ 组极显著减小(P<0.01)；与MZDL组比较，DLJF组大鼠胃溃疡面积显著减小 (P<0.05)，TYZ组极显著减小(P<0.01)；与DLJF组比较，TYZ组大鼠胃溃疡 面积显著减小(P<0.05)。

5.2 胃组织病理损伤指数比较

结果见表2。

表2 各组大鼠胃组织病理损伤指数n＝10)

注：与MD组比较，^**P<0.01，^*P<0.05；与MZDL组比较，^△△P<0.01，^△P<0.05； 与DLJF组比较，^▲▲P<0.01，^▲P<0.05。

由表1可知，与假手术组比较，模型组大鼠胃组织病理损伤指数极显著 性增大(P<0.01)，与模型组比较，DLJF组大鼠胃组织病理损伤指数显著减小 (P<0.05)，TYZ组极显著减小(P<0.01)；与MZDL组比较，DLJF组大鼠胃组 织病理损伤指数显著减小(P<0.05)，TYZ组极显著减小(P<0.01)；与DLJF组 比较，TYZ组大鼠胃组织病理损伤指数显著减小(P<0.05)。

6 实验结论

采用CO₂超临界流体萃取对美洲大蠊药材进行脱油脂处理后可明显降低 其对胃溃疡的毒副作用，并且能提高对胃溃疡的治疗效果。