太白楤木总皂苷提取物的新用途

摘要

本发明提供了太白楤木总皂苷提取物在制备治疗胃溃疡的药物中的用途及含有太白楤木提取物的药物组合物。本发明药物用于治疗胃溃疡，药效明确。本发明药物属于纯天然制剂，不经有机溶剂处理，安全可靠；毒性小，长期使用无不良反应；对各种原因引起的胃溃疡均有预防和治疗作用。

说明书

技术领域

本发明涉及太白楤木总皂苷提取物的新用途。

背景技术

五加科楤木属(Aralia Linn1)植物,全世界共有40余种,大多数分布于亚 洲和北美，我国广泛分布28种，其中20种可供药用。楤木属一些植物芽苞 及嫩叶富含蛋白质、氨基酸、维生素、粗纤维和胡萝卜素等,是高档山野菜, 素有“山菜之王”的美誉。目前对楤木属植物研究主要是辽东楤木 (A.schmidtii Pojark)、黄毛楤木(Aralia decaisneana Hance)、棘茎楤木 (Aralia echinocaulis Hand.Mazz)、太白楤木、白背叶楤木(Var.nuda Nakai) 等。楤木(Aralia chinensis)在我国分布广泛，太白楤木(Aralia taibaiensis) 则为近年建立的楤木属一新种，特产于我国中西部秦巴山区及其余脉，主要 为陕西南部及西部、甘肃兰州以东、四川川北及川东北、山西中条山及宁夏 六盘山区，特别在陕西太白、周至、户县、佛坪、留坝、凤县、宁强、南郑、 略阳、勉县、洋县、宁陕、柞水、镇巴、紫阳、安康、平利、岚皋、旬阳、 合阳、华山以及甘肃榆中、天水，四川穆坪等地有丰富的野生资源。

太白楤木(Aralia taibaiensis L)亦称楤木白皮，飞天蜈蚣七。其性 平、味甘、微苦，具有驱风除湿、利水消肿、活血散瘀、止痛、健脾的功效。 民间常用于风湿性关节炎，肾炎水肿，肝硬化腹水，急慢性肝炎，胃痛，淋 虫，血崩，跌打损伤，痈肿等的治疗。

研究表明，楤木的根、茎、叶中含有多种化学成分，树皮含皂苷，可以 水解成楤木皂苷元，即齐墩果酸。同时还含有鞣质，胆碱和挥发油等。种子 富含油脂，含量达26％。除此之外，楤木根皮嫩芽含有天门冬氨酸、苏氨酸、 丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、 苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸等多种氨基酸和人体所需的钙、锰、铁、 镍、铜、钴、锗等多种微量元素。楤木中研究最多的是皂苷类成分。其苷元 主要是齐墩果酸(Oleanolic acid，I)和常春藤皂苷元(Hederagenin，II)， 它们经常在3位或28位与糖连接形成苷。所连接的糖主要有D-葡萄糖、D- 葡萄糖醛酸、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、L-鼠李糖和D-木糖及其衍生物。少数 皂苷其葡萄糖醛酸的6位以甲酯形式存在。一般情况下，常见葡萄糖醛酸与 葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等形成直链或支链糖链后与3β-OH成苷，和28 位羧基成酯苷的多为葡萄糖。

太白楤木具有保肝、降血糖等多种药理作用。目前太白楤木的文献报道 较多，如：郭东艳，等，太白楤木不同部位皂苷类成分分析，《中药材》， 2012年35卷第7期，比较太白楤木不同部位的总皂苷含量，为太白楤木的 利用提供参考，其报道的方法是采用紫外分光光度法进行总皂苷含量测定， 采用高效液相色谱法进行齐墩果酸含量测定。结果：太白楤木不同部位定性 鉴别均能检出竹节参皂苷Iva,根皮与茎皮中均可检出太白楤木皂苷TA-16； 总皂苷含量根皮、茎皮、叶子依次减小；游离齐墩果酸和总齐墩果酸含量根 皮、茎皮、叶子依次减小。结论：所建方法有助于进行太白楤木不同部位的 皂苷类成分定性分析及定量研究,为进一步完善太白楤木的药用标准及规范 太白楤木资源的开发应用奠定基础。洪良健，楤木和太白楤木中抗糖尿病皂 苷成分的研究，第四军医大学硕士论文，2012年，通过综合运用硅胶柱色谱、 反相ODS柱色谱、SephadexLH-20柱色谱以及制备高效液相色谱等分离手段 从楤木根皮中分离得到了10个化合物，从太白楤木根皮中分到5个化合物， 通过化学方法(包括酸水解、糖衍生等)和波谱解析(包括核磁共振谱、质谱等) 鉴定了这15个化合物的结构，均为三萜皂苷，对从太白楤木中分离到的5 个皂苷开展了抗氧化、抗糖基化活性测试，发现它们均表现出抗氧化和抗糖 基化的活性，对该类皂苷抗糖尿病构效关系进行分析，得到了较为明确的结 论，楤木和太白楤木总皂苷的抗糖尿病作用可能是皂苷单体通过这些不同作 用机制协同产生的。郭东艳，等，太白楤木抗肝损伤药效物质基础的初步研 究，医学研究杂志，2012年41卷第10期，采用经典的系统溶剂法(极性由 小到大:石油醚-氯仿-乙酸乙酯-正丁醇)依次对太白楤木提取液进行萃取,将 各提取液分别灌胃给予四氯化碳(CCl₄)致急性肝损伤模型小鼠,检测血清及 肝组织中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧 化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平,比较 各部位的抗肝损伤作用；将筛选出的活性部位用大孔吸附树脂进行分离纯化， 不同浓度乙醇进行梯度洗脱，洗脱液分别灌胃给予肝损伤模型小鼠,检测血清 及肝组织中ALT、AST、SOD的活性和MDA、GSH-Px的水平,比较各洗脱部位的 抗肝损伤作用。结果与模型对照组比较,正丁醇部位可明显降低CCl4引起的 ALT、AST、MDA升高,增加肝组织中SOD的活性和GSH-Px的水平；70％乙醇洗 脱的正丁醇提取物可明显降低CCl4引起的ALT、AST、MDA升高,增加肝组织 中SOD的活性和GSH-Px的水平,且洗脱液剂量与保肝作用有明显的正相关性。 结论太白楤木保肝作用的药效活性物质大多存在于70％乙醇洗脱的正丁醇部 位,其抗肝损伤作用的活性成分可能与该部位主要成分皂苷类有关。郭东艳， 等，基于谱效相关的星点设计-效应面法优化太白楤木提取工艺，西北药学杂 志，2012年27卷第5期，以乙醇体积分数、溶媒比、提取时间为自变量,各 指纹峰相对于太白楤木皂苷TA-16的含量的加和为因变量,对自变量各水平 进行多元线性回归及二项式拟合,用效应面法优选最佳工艺,并对结果进行预 测分析。结果太白楤木最佳提取工艺为:13倍量70％乙醇,提取3次,每次 60min,提取预测值与理论值偏差为-2.16％,二项式拟合复相关系数 r＝0.9131。结论星点设计-效应面法优化的太白楤木提取工艺方法简便,预测 性较高。郭东艳，等，太白楤木总皂苷纯化工艺研究，陕西中医学院学报， 2009年32卷第4期，采用大孔吸附树脂吸附法，以总皂苷为考察指标,研究 树脂吸附容量、上样浓度、洗脱溶媒及其用量等工艺条件。结果通过HPD300 型大孔树脂吸附后,先用4BV的去离子水水洗除杂,然后用2BV的70％的乙醇 以1BV/h的速度洗脱,总皂苷纯度可达60.08％。此法能较好地分离纯化太白 楤木总皂苷,是简便、可行的纯化方法。

目前尚无太白楤木用于防治胃溃疡方面的相关报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了太白楤木的新用途。

本发明提供了太白楤木总皂苷提取物在制备治疗胃溃疡的药物中的用 途。

进一步优选地，所述的药物是治疗急慢性胃溃疡的药物。

其中，所述的提取物中总皂苷的含量为5.06％-83.9％。

其中，所述的提取物中含有楤木皂苷A

其中，所述的大白楤木来源于五加科楤木属植物太白楤木Aralia  taibaiensis L的根皮。

其中，所述的药物是由太白楤木总皂苷提取物为活性成分，加上药学上 可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂。

其中，所述的药物是治疗胃溃疡的药物。

本发明药物用于治疗胃溃疡，药效明确。本发明药物属于纯天然制剂， 不经有机溶剂处理，安全可靠；毒性小，长期使用无不良反应；对各种原因 引起的胃溃疡均有预防和治疗作用。

具体实施方式

实施例1本发明太白楤木提取物的制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L的根皮，加12倍量的水煎煮提取两 次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏。总皂苷含量为4.88％。

实施例2本发明太白楤木提取物的制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L的根皮，加12倍量的10％乙醇回流 提取两次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏。总皂苷含量为5.06％。

实施例3本发明太白楤木提取物的制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L的根皮，加12倍量的70％乙醇回流 提取两次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏。总皂苷含量为16.82％。

实施例4本发明太白楤木提取物的制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L的根皮，加12倍量的90％乙醇回流 提取两次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏。总皂苷含量为12.38％。

实施例5本发明太白楤木提取物的制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L的根皮，加12倍量的70％乙醇回流 提取两次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏，上HPD100大孔树脂，70％ 乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。总皂苷含量为83.9％。

实施例6太白楤木正丁醇部位单体化合物制备

取太白楤木Aralia taibaiensis L，加12倍量的70％乙醇回流提取两 次，每次0.5-2小时，过滤减压浓缩成浸膏。上HPD100大孔树脂，2-4BV水 洗脱除杂，2-4BV70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥。将楤木皂苷初 提物上样于硅胶柱氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱梯度依次为85:15、80:20、 75:25、70:30、68:32、65:35、62:38、60:40、55:45、50:50，得到编号为 1-10的馏分，然后用氯仿-甲醇-水体系梯度洗脱，洗脱梯度依次为 50:50:10、45:55:12、40:60:14，得到编号为11-13的馏分。经薄层色谱点 板分析(展开剂为正丁醇：冰乙酸：水＝4:1:5)，取65:35、62:38、60:40、 55:45、50:50、50:50:10和45:55:12体系的馏分做HPLC分析，分析条件如 下：戴安液相，高效液相色谱柱Welch UltimateC18(250×4.6mm，5μm)。 流动相为乙腈：0.01％乙酸溶液＝35:65；检测波长为205nm；进样量为20μL； 流速为1mL/min；柱温为室温。根据分析结果，选取65:35、62:38、60:40、 和45:55:12体系的馏分合并经中压制备高效液相(乙腈/0.01％乙酸溶液 ＝35:65(V/V)35:65检测波长205nm)得到楤木皂苷A。分子式：C₄₇H₇₄O₁₈分 子量927.1

该化合物为白色无定形粉末，Molish反应阳性，Liebermann-Burchard 反应阳性，20％硫酸乙醇显紫红色，薄层酸水解检测到含有葡萄糖醛酸、葡萄 糖和阿拉伯糖。ESI-MS m/z:927[M+H]⁺，提示分子式为C₄₇H₇₄O₁₈。¹³C NMR(100 MHz，Pyridine-d₅)δ_C：38.7(C-1)，26.2(C-2)，89.4(C-3)，39.5(C-4)， 55.8(C-5)，18.6(C-6)，34.1(C-7)，39.5(C-8)，48.0(C-9)，36.9(C-10)， 23.7(C-11)，122.6(C-12)，144.2(C-13)，42.2(C-14)，28.1(C-15)， 23.7(C-16)，47.1(C-17)，41.8(C-18)，46.3(C-19)，30.8(C-20)，34.1 (C-21)，33.2(C-22)，28.1(C-23)，17.0(C-24)，15.6(C-25)，17.5 (C-26)，26.2(C-27)，176.5(C-28)，33.2(C-29)，23.7(C-30)，105.2 (GluA-1)，74.2(GluA-2)，75.6(GluA-3)，78.9(GluA-4)，76.0(GluA-5)， 175.7(GluA-6)，106.2(Ara-1)，82.3(Ara-2)，76.5(Ara-3)，87.5(Ara-4)， 62.3(Ara-5)，95.8(Glc-1)，75.6(Glc-2)，78.9(Glc-3)，71.1(Glc-4)， 79.3(Glc-5)，62.3(Glc-6)。以上数据与文献^[1]比较基本一致，故鉴定化 合物为楤木皂甙A(Araloside A)。(1.姜永涛,徐绥绪,顾晓华,任力,陈 英杰,姚新生,缪振春.辽东楤木化学成分的研究[J].药学学报,1992, 27(7):528-532.)

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1太白楤木总皂苷、楤木皂苷A的抗溃疡实验

1实验材料

1.1实验动物

KM小鼠，18-22g，由三峡大学动物实验中心提供(生产许可证： SCXK(鄂)2011-0012；使用许可证：SYXK(鄂)2011-0061)。

1.2实验试剂

太白楤木总皂苷(由实施例5制备而成，其中总皂苷含量为83.9％)，太 白楤木水提物(由实施例1制备而成，其中总皂苷含量为4.88％)，太白楤木 醇提物(由实施例2制备而成，其中总皂苷含量为5.06％)，楤木皂苷A(由 实施例6制备而成，其中纯度为99.2％)，H+，K+-ATPase试剂盒活性，由 南京建成生物工程研究所。奥美拉唑肠溶胶囊，江苏飞马药业有限公司。阿 司匹林肠溶片，苏平光制药有限责任公司。95％乙醇，武汉化工厂。基础液： NaH₂PO₄，0.5mmol/L，Na₂HPO₄，1mmol/L，NaHCO₃，20mmol/L，NaCl，80mmol/L， KCl，5mmol/L，HEPES，50mmol/L，glucose，11mmol/L，A液(MA)：基础 液+(EDTA，2mmol/L，BSA，20g/L)，pH 7.4；B液(MB)：基础液+(BSA， 10g/L，CaCl₂，1mmol/L，MgCl₂，1.5mmol/L)，pH 7.4；C液(MC)：B液+(DTT(二 硫苏糖醇)，1mmol/L)，pH 7.4；消化液：A液(胰酶：1g/L)。HEPES配制 时应单独溶解，为无色溶液,若颜色变黄时会影响细胞分离结果。DTT在临用 前加入，所用各种营养液均用NaOH调整pH值7.0～7.5，酶的用量应控制在 1g/L，EDTA用量为2mmoL/L。

1.3仪器

ME215S型十万分之一电子天平(德国Sartorios公司)；Stat Fax-2100 型酶标仪；自动平衡离心机(LDZ5-2型)：北京医用离心机厂；冰箱，中国Haier 公司；DK-S26型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司。美国Scinco S-3150型紫外可见光光度计(SCINCO CO.,LTD.)；美国SHELLAB 2424/2-2 型二氧化碳培养箱。

2方法与结果

2.1体内实验

2.1.1体内实验方法

取18-22gKM小鼠,随机分成生理盐水组、奥米拉唑组(2mg/kg)，太白楤 木总皂苷高低剂量(60mg/kg，30mg/kg)，每组8只,雌雄各半。试验组每天 灌胃给予相应药物共五天,第四天给药后禁食不禁水,于未次给药后1小时后, 灌胃阿斯匹林-乙醇溶液(将阿斯匹林200mg/kg用40％的乙醇溶解),4h后处 死小鼠，将小鼠沿胃大弯处剪开，翻转后用清水洗去内容物，于解剖显微镜 下观察胃溃疡点，根据病变程度记分。局部充血发红为1分，点状出血或糜 烂各为1分，线状糜烂1个为3分，总计后作为溃疡指数。

取各相同部位胃组织按试剂盒说明分别用于检测H⁺,K⁺-ATPase活性。

2.1.2实验结果

模型组小鼠胃内壁光滑，溃疡面积较大，有众多出血点。药物干预后， 小鼠胃内壁有褶皱，溃疡面积、出血点明显减少。表明太白楤木总皂苷对阿 司匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡模型有明显的抗溃疡作用。结果见表1。

表1 太白楤木总皂苷对阿司匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡的影响(n＝8)

与模型组相比，**p﹤0.01

(注：楤木皂苷A高、低剂量分别与总皂苷高、低剂量中的楤木皂苷A含有量相当)

2.2体外实验

2.2.1体外实验方法

采用经典的EDTA-酶消化法获得小鼠胃壁细胞，用H⁺，K⁺-ATP酶活性测定 试剂盒测定酶活性，计算各个化合物对小鼠胃H⁺，K⁺-ATP酶的抑制率。

胃溃疡模型的建立：取体18～22g昆明种小鼠1只，实验前禁食12h。在 清醒状态下，灌胃阿司匹林-乙醇溶液(阿司匹林200mg/kg，40％的乙醇溶解)， 在4h后，将动物处死，于70％酒精中灭菌10min，无菌条件下剖检。

胃壁细胞的获得：取小鼠剖腹，在贲门和胃体部、胃体和胃窦部分别结 扎，将胃取出，弃去胃窦，在胃底做一小切口，用一玻璃棒将胃翻转，在胃 底和胃体之间结扎，弃去胃底，用PBS缓冲液清洗，洗去食物碎屑和血迹， 用注射器将消化液注入胃袋，每胃2mL。将胃袋放入MA 50mL～100mL(根 据胃袋多少)，37℃水浴消化90min，水浴振荡速度150次/min。在30min 和60min换一次新鲜的MA。整个过MA皆充以950mL/L O₂+50mL/L CO₂。 消化结束后，将胃袋放入MB，在室温下用磁力搅拌器轻轻搅拌60min，打下 的细胞每10min收集1次，200目滤膜过滤，1000r/min离心5min，沉淀 用MC洗2次，每次900r/min离心5min。最后沉淀用MC悬浮，此为混合 细胞悬液。用Percoll作梯度递质富集壁细胞。在试管依次铺入400g/L和 600g/L percoll分离液各2ml，将混合细胞悬液约1ml铺在percoll上面， 1500r/min离心15min。离心后可见细胞分层形成较明显的条带，最上面颜 色较淡的一层为胀破和破损的死细胞，；最下面一层主要为主细胞，并夹杂着 少量小的壁细胞；中间一层则以壁细胞为主。用移液枪小心地将中间一层吸 出，用MC洗两次以洗去Percoll(900r/min离心5min)，沉淀用5mLDMEM 培养基悬浮，此为胃壁细胞悬液(细胞密度约为4×10⁵个/mL)。

药物对H+，K+-ATPase的作用：纯化后的壁细胞悬液转入96孔细胞培 养板，加入待测药物(每种浓度加6个复孔)37℃孵育4h后，合并相同浓度 的两孔培养液，每种药物浓度共计三个平行测定样，用H+，K+-ATPase活性 测定试剂盒测定酶活性，计算抑制率。利用Origin7.5插值法得到IC50值。

2.2.2体外实验结果

实验表明，太白楤木皂苷能明显抑制H+，K+-ATPase活性，楤木皂苷A 活性较强。显示太白楤木皂苷抗溃疡作用机制与抑制H+，K+-ATPase活性有 关，楤木皂苷A是活性成分之一。结果见表2。

表2 太白楤木总皂苷对H+，K+-ATPase活性的影响(n＝3)

与模型组相比，**p﹤0.01

(注：楤木皂苷A高、低剂量分别与总皂苷高、低剂量中的楤木皂苷A含有量相当)

小结：楤木总皂苷、楤木皂苷A对胃溃疡具有良好的治疗作用，在给予 含有相同剂量楤木皂苷A的楤木皂苷提取物时，太白楤木总皂苷提取物对阿 司匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡模型的抗溃疡作用优于楤木皂苷A单一成 分。同样给予相同剂量的太白楤木水提物及太白楤木醇提物，太白楤木醇提 物对阿司匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡模型的抗溃疡作用优于太白楤木水 提物。太白楤木总皂苷可用于胃溃疡的治疗。

消化性溃疡是一种全球性的多发病和常见病，人群中约10％罹患此病。 胃溃疡是消化性溃疡最为常见的类型。胃溃疡的发病和复发机理较为复杂， 目前尚未完全阐明。目前胃溃疡发病机制主要可概括为3个方面：(1)幽 门螺杆菌(HP)感染与胃溃疡之间存在着非常密切的关系，是引起胃溃疡 的主要病因。HP引起胃黏膜损伤，可能是因为病原菌产生的尿素酶可分解 尿素生成氨，使胃上皮pH升高，病原菌得以在胃环境中生存，破坏胃黏膜 屏障，导致上皮损伤。HP产生的细胞毒素也与宿主的上皮损伤有关。(2) 胃酸和胃蛋白酶在胃溃疡发病中起主导作用。由于迷走神经运动纤维的功能 低下，胃排空延缓造成胃窦停滞，胃内容物(主要为胃酸及胃蛋白酶)刺激 胃窦部引起胃泌素释放，而胃酸分泌增加，最终形成溃疡。(3)黏膜屏障 的损害是胃溃疡发病的基本条件，因十二指肠内容物返流入胃，造成胆汁和 溶血性卵磷脂对胃黏膜上皮细胞的损伤，使胃壁黏膜屏障遭到破坏。引起H+ 逆向弥散至黏膜内，刺激黏膜内的肥大细胞释放组织胺，造成胃内H+更加增 高；同时，还可造成胃壁毛细血管扩张、黏膜炎性水肿。

由于其病因及发病机制尚未完全清楚，至今仍无良好的治疗方法。本研 究通过对小鼠灌胃阿斯匹林-乙醇溶液，造成胃溃疡模型，证明楤木总皂苷、 楤木皂苷A可通过抑制H+，K+-ATPase活性，表现出抗溃疡作用，在给予含 有相同剂量楤木皂苷A的楤木皂苷提取物时，太白楤木总皂苷提取物对阿司 匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡模型的抗溃疡作用优于楤木皂苷A单一成分。 该实验结果为其治疗胃溃疡提供了实验依据。

综上所述，本药物或保健食品可用于多种原因引起的胃溃疡，具有抑制 H+，K+-ATPase活性，抗溃疡作用，适用于胃溃疡等疾病的预防和治疗。