一种利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛的分析方法

摘要

本发明主要提供一种利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛的高效液相分析方法，采用C18柱为固定相，流动相采用含三氟醋酸水相和含三氟醋酸的有机相，通过梯度洗脱的方式分离杂质，防止了利奈唑胺对5-羟甲基糠醛出峰的干扰，可以使5-羟甲基糠醛与利奈唑胺注射液中主成分利奈唑胺有效分离，从而进一步提高利奈唑胺注射液的质量，同时又缩短了分析时间。

说明书

技术领域

本发明涉及通过高效液相色谱法检测利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛的分析方法。

背景技术

利奈唑胺注射液是一种静脉滴注用输液制剂，其等渗调节剂为葡萄糖，葡萄糖在灭菌过程中会产生杂质5-羟甲基糠醛，因此成品需要对5-羟甲基糠醛进行控制。2010年版《中国药典》二部收载的“葡萄糖注射液”项下指出：采用紫外-可见分光光度法测定其杂质5-羟甲基糠醛，检测波长为284nm。本品主成分利奈唑胺在284nm处有吸收(附图1)，单纯用紫外分光光度法测定会对5-羟甲基糠醛的检测产生干扰，因而不能用紫外-可见分光光度法。综合以上我们需要提供一种分析方法，可以使5-羟甲基糠醛与利奈唑胺注射液中主成分利奈唑胺有效分离，从而进一步提高利奈唑胺注射液的质量。

发明内容

本发明主要提供一种高效液相检测方法，可以有效的使利奈唑胺与糠醛的峰分离。根据2010年版《中国药典》记载，葡萄糖注射液的5-羟甲基糠醛的限度为：1％的葡萄糖溶液，在284nm的波长处，吸光度不得大于0.32。参照此限度，取5-羟甲基糠醛对照品适量，加水调节制成在284nm波长处吸光度为0.32的对照品溶液；取本品，制成1％葡萄糖溶液，作为供试品溶液，供试品溶液色谱图中如有与5-羟甲基糠醛峰保留时间一致的杂质峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积。

本发明主要提供了一种利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛的分析方法，其特征在于分析方法采用高效液相法，色谱条件为：

检测器：紫外检测器，检测波长为284nm；

色谱柱：C18柱；

柱温：25-40℃；

流动相：流动相A为三氟醋酸水溶液，流动相B为三氟醋酸乙腈溶液；流动相按照以下的程序梯度脱洗：

流动相流速：0.8-1.0ml/min；

如上所述的分析方法，其特征在于所述柱温为30℃。

如上所述的分析方法，其特征在于流动相A为0.05％-0.2％三氟醋酸水溶液，流动相B为0.05％-0.2％三氟醋酸乙腈溶液。

如上所述的分析方法，其特征在于流动相A为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相B为0.1％三氟醋酸乙腈溶液。

如上所述的分析方法，其特征在于流动相流速为1.0ml/min。

如上所述的分析方法，其特征在于其可按下表进行梯度洗脱：

本发明提供的技术方案，在发明研究过程中，显示出了在利奈唑胺注射液杂质5-羟甲基糠醛检测效果及方法学方面的明显优势。

本方法能有效的将5-羟甲基糠醛与利奈唑胺注射液中主成分有效分离，防止了利奈唑胺对5-羟甲基糠醛的干扰，保证了5-羟甲基糠醛的有效分离，同时又缩短了分析时间。

同时发明人将上述实验得出的色谱条件进行了方法学验证。

1)利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法专属性

取空白溶剂(水)、辅料溶液(含枸橼酸、枸橼酸钠和葡萄糖)和利奈唑胺对照品溶液分别进样，考察溶剂、辅料及利奈唑胺是否干扰5-羟甲基糠醛的检测。结果显示，5-羟甲基糠醛与利奈唑胺分离度好，本法专属性较好(表1)。

表1利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法专属性试验结果

组分5-羟甲基糠醛利奈唑胺保留时间(min)3.5688.178

2)利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法检测限

采用信噪比法确定检测限，逐级稀释5-羟甲基糠醛对照品(批号：111626-201007)溶液，至信噪比(S/N)＝3:1，即为该条件下的检测限，本法检测限为0.004μg/ml，相当于对照品溶液浓度的0.03％，供试品溶液浓度的0.007％，可满足分析要求。

3)利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法溶液稳定性

各配制一份5-羟甲基糠醛对照品溶液和供试品(批号：120210)溶液，分别于0、1、2、4、6、8小时依法测定，记录色谱图，以峰面积变化来考察供试液的稳定性。结果显示，供试品溶液中，5-羟甲基糠醛的峰面积与对照品溶液主峰面积的比值，在8小时内几乎无变化，5-羟甲基糠醛检测的供试品溶液在8小时内稳定(表2)。

表2利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法溶液稳定性试验结果

时间(hr)012468供试品溶液5-羟甲基糠醛峰面积Ai343623604036137360483586236128对照品溶液5-羟甲基糠醛峰面积As191066183946184930189641189325184815Ai/As0.20.20.20.20.20.2

4)利奈唑胺注射液5-羟甲基糠醛分析方法耐用性

适当改变柱温(30±5℃)、流速(1.0±0.2ml/min)、检测波长(284±2nm)，考察供试液中5-羟甲基糠醛与相邻色谱峰的分离情况。结果显示，色谱条件有微小变动时，5-羟甲基糠醛仍可以被有效检测，且与相邻峰的分离良好，表明本分析方法耐用性较好(表3)。

表3利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛分析方法的耐用性试验结果

附图说明

附图1为利奈唑胺紫外吸收扫描图。

具体实施方式

实施例1高效液相色谱法检查利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛

仪器设备样品：

高效液相色谱仪，ulimate3000

分析天平：Mettler Toledo XP205DR

紫外分光光度计：UV2450

利奈唑胺注射液样品：120514,120515,120516,120517,120518,120519，江苏正大丰海制药有限公司生产

色谱条件：

紫外检测器，检测波长：284nm；

色谱柱：C18柱；

柱温：30℃；

流动相：流动相A为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相B为0.1％三氟醋酸乙腈溶液；流动相按照以下的程序梯度脱洗：

流动相流速：1.0ml/min；

检测步骤：

(1)精密量取利奈唑胺注射液加水稀释至含葡萄糖为1％，即得供试品溶液；用水稀释5-羟甲基糠醛对照品溶液，紫外分光光度计测定284nm处吸光度，使其吸光度0.32，即得5-羟甲基糠醛对照品溶液；

(2)精密量取供试品溶液和对照品溶液各10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品溶液色谱图中如有与5-羟甲基糠醛保留时间一致的杂质峰；

(3)比较(2)色谱图中与(1)色谱图中5-羟甲基糠醛对照品保留时间一致的杂质峰峰面积大小。

检测结果：

6批样品中5-羟甲基糠醛峰面积均没有超出5-羟甲基糠醛对照品的峰面积，样品中5-羟甲基糠醛含量符合规定。

实施例2高效液相色谱法检查利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛

参照实施例1的部分仪器设备样品，色谱条件和操作步骤，只是色谱条件中流动相为流动相A为0.05％三氟醋酸水溶液，流动相B为0.05％三氟醋酸乙腈溶液；流动相按照以下的程序梯度脱洗：

流动相流速：0.8ml/min；

检测结果：色谱图分离效果良好，6批样品中5-羟甲基糠醛峰面积均没有超出5-羟甲基糠醛对照品的峰面积，样品中5-羟甲基糠醛含量符合规定。

实施例3高效液相色谱法检查利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛

参照实施例1的部分仪器设备和样品，色谱条件和操作步骤，只是色谱条件中流动相为流动相A为0.2％三氟醋酸水溶液，流动相B为0.2％三氟醋酸乙腈溶液；流动相按照以下的程序梯度脱洗：

流动相流速：1.0ml/min；

检测结果：色谱图分离效果良好，6批样品中5-羟甲基糠醛峰面积均没有超出5-羟甲基糠醛对照品的峰面积，样品中5-羟甲基糠醛含量符合规定。