一种检测活体植物细胞中两种膜蛋白共定位程度的方法

摘要

本发明提供了一种检测活体植物细胞中两种膜蛋白共定位程度的方法。具体步骤为：(1)使植物中共表达如下两种融合蛋白，以获得对待测两种蛋白进行了双色标记的植物材料：荧光蛋白A标记的待测蛋白A，荧光蛋白B标记的待测蛋白B，荧光蛋白A与荧光蛋白B发不同颜色的荧光；(2)用可变角全内反射荧光显微镜对待测植物材料进行观察，获得双通道图像；(3)用ImageJ软件将所得双通道图像保存为无损压缩的TIFF格式，然后在PPA软件中对两个图像进行校准，再用中值滤波对图像进行去背景处理，最后通过双高斯拟合计算待测蛋白A和待测蛋白B的接近指数，从而得到待测蛋白A和待测蛋白B的共定位程度。本发明获得两种膜蛋白共定位程度的方法简单、重复性好，避免了细胞内部荧光信号的干扰，并且获得的数值具有明确的生物学意义。