一种利用FLAG标签从酿酒酵母细胞中分离RAVE复合物的方法

摘要

一种利用FLAG标签从酿酒酵母细胞中分离RAVE复合物的方法，涉及酿酒酵母中RAVE复合物蛋白的修饰与纯化，属于分子生物学及蛋白组学领域。本发明提供了一种利用FLAG标签的亲和层析原理从酿酒酵母重组菌株BY4742rav2-FLAG细胞中分离RAVE复合物的方法，为后续研究复合物的结构打下了坚实基础。本发明利用FLAG标签亲和层析原理，从大量的细胞破碎液上清中分离出易降解的多亚基调节蛋白RAVE复合物，使得RAVE复合物的浓度与纯度得到极大的提升；由于FLAG标签只含有8个氨基酸，对蛋白的结构与功能的影响微乎其微，在最大程度上保证了分离的RAVE复合物具有活性；此外，通过FLAG标签亲和层析可以一起分离得到与RAVE复合物存在相互作用的一系列蛋白，结合质谱签定可以丰富与RAVE复合物相关的蛋白组学的研究资料。