用于预防或治疗冠心病的中药提取物、组合物及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种中药提取物或组合物，其由丹参、川芎、人参、山楂、黄连、泽泻、红曲等七味药材制成。该中药提取物或组合物可制成各种形式用于预防或治疗冠心病及其相关疾病例如血脂异常、心肌梗塞和动脉粥样硬化等。本发明还公开了所述各种形式的中药提取物或组合物的制备方法及其用途。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物或组合物，具体地是一种可用于预防或治 疗冠心病及其相关疾病例如血脂异常、心肌梗塞和动脉粥样硬化等疾病的 中药提取物或组合物。本发明还涉及所述中药提取物或组合物的制备方法 和用途。

背景技术

冠心病(coronary heart disease)是一种严重危害人类健康的常见病和 多发病，随着人们生活水平的提高和人口老龄化，本病的发病率和病死率 在心血管疾病中占据首位且逐年上升趋势明显，成为危害人类健康的“第 一杀手”。世界卫生组织(WHO)最近的报告中指出，2000-2020年心肌 梗死的死亡率将由第5位上升到第1位。《国家中长期科学和技术发展规 划纲要(2006～2020)》和《中医药科学研究发展纲要》将心血管重大疾 病的防治列为重点研究领域。

冠心病的主要病因是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)，以及由此引 起的心肌缺血、坏死的病理改变。其病理发病机制主要是由于脂质代谢紊 乱使血脂升高，血管内壁脂质沉积、浸溶，血管内皮泡沫细胞形成，血管 壁慢性炎性反应使冠脉血管内皮功能和形态的损伤，形成血管内皮粥样斑 块，进一步出现斑块破裂，血栓形成，血管狭窄或闭塞使冠脉血液循环障 碍，心肌缺血，心肌细胞受损，导致心功能不全。临床上冠心病主要分为： (1)隐匿型；(2)心绞痛型；(3)心肌梗塞型；(4)心力衰竭型；(5)猝死型。

冠心病的预防或治疗是以饮食生活习惯的改变及调脂治疗为基础，配 合抗血小板药物、硝酸酯类及β受体阻滞剂等药物治疗以减轻患者的症状， 提高生活质量，改善预后为目标。

祖国医学认为冠心病属于“胸痹心痛”的范畴，本病的发生多由正气亏 虚或痰浊、瘀血、气滞、寒凝而引起心脉痹阻不畅。多年来中医药以“活 血化瘀”为基本治则治疗冠心病，成效显著。如复方丹参片、丹参滴丸、 冠心苏合丸等。近年来临床上针对冠心病患者血管、心肌炎症反应、过氧 化应激损伤、组织坏死等病理改变，分别采用“化痰”、“解毒”、“降浊”等 治法，通过实验研究证实多种中药通过调节脂质代谢、保护血管内皮细胞、 抑制脂质过氧化、抑制血管平滑肌增殖、调节增殖与凋亡之间的平衡、抗 炎症反应等不同的途径和环节，干预和治疗冠心病。如地奥心血康、瓜蒌 半夏薤白汤、黄连解毒汤、姜黄提取物、葛根素提取物、红曲等。

由此可见中成药在冠心病的治疗市场相对来说非常广阔，亟待开发一 种疗效确切并且显著、工艺精良、药品质量稳定的治疗冠心病的中药药物。

现代流行病学研究显示，冠心病患者常以饮食失节为重要病因，而饮 食失节主要损伤脾胃的健运功能，从而聚沣生痰、壅热生痰。长期劳逸失 度、养尊处优、好逸少动者，易导致肥胖，形成痰浊体质，其血液往往处 于“黏浓凝聚”状态，而血黏和肥胖均是冠心病的易患因素。痰和瘀既是病 理产物又是致病因素，在某种特定条件下，有分有合，相互转化。脂质沉 着为痰浊，血细胞黏附为瘀血，痰凝血瘀证可致血管内皮发生炎性反应， 造成内皮损伤，“痰瘀毒结”，导致心脉痹阻更严重，这是由痰致瘀，最终 导致痰凝血瘀毒结的主要病理特征。而目前尚未有针对痰瘀互结证冠心病 的中药新药，有较大的市场需求。

发明内容

为解决本领域中存在的上述问题，本发明人源于中医理论，总结多方 经验和试验验证，经过临床实践检验化裁而完成了本发明。

因此，在第一个方面，本发明提供了一种中药生药组合物，其由包括 以下药材的生粉制成：丹参5～15重量份、川芎3～10重量份、人参1～6重 量份、山楂5～15重量份、黄连1～6重量份、泽泻3～10重量份，优选上述 药材的重量配比为9∶6∶3∶9∶3∶6。该生药组合物优选地还包含1～6 重量份，优选3重量份的红曲粉(即上述七种药材的配比优选为9∶6∶3∶ 9∶3∶6∶3)。

在第二个方面，本发明提供了一种中药组合物，其包含以下成分：丹 参提取物4～10重量份、川芎提取物2～8重量份、人参提取物1～5重量份、 山楂提取物4～10重量份、黄连提取物1～5重量份、泽泻提取物2～8重量 份，优选上述成分的重量配比为9∶6∶3∶9∶3∶6。在一个优选实施方案 中，上述提取物均是乙醇提取物。该组合物优选地还包含1～5重量份，优 选3重量份的红曲粉(即上述六种提取物和红曲粉的配比优选为9∶6∶3∶ 9∶3∶6∶3)。

在本发明中，当采用各种药材的提取物制备中药组合物时，这些提取 物可以采用市售的用作制药原料的药材提取物，例如，人参总皂甙≥80％ 的市售人参提取物。在本发明的中药组合物的一个优选实施方案中，丹参 提取物包含丹酚酸B和丹参酮IIA，川芎提取物包含阿魏酸，人身提取物 包含人参总皂苷，山楂提取物包含总黄酮，黄连提取物包含盐酸小檗碱， 泽泻提取物包含泽泻醇，且红曲粉是洛伐他汀。

也可以根据本领域公知的提取或制备方法(例如，常规的乙醇提取法) 制备上述各种药材的提取物，只要符合下述条件即可：丹参提取物包含丹 酚酸B和丹参酮IIA，川芎提取物包含阿魏酸，人参提取物包含人参总皂 苷，山楂提取物包含总黄酮，黄连提取物包含盐酸小檗碱，泽泻提取物包 含泽泻醇，且红曲粉是洛伐他汀。

在第三个方面，本发明提供了一种中药提取物，其由包括以下药材的 原料提取而成：丹参5～15重量份、川芎3～10重量份、人参1～6重量份、 山楂5～15重量份、黄连1～6重量份、泽泻3～10重量份，优选上述药材的 重量配比为9∶6∶3∶9∶3∶6。在一个优选实施方案中，所述中药提取物 通过本领域公知的乙醇提取法制成。优选所述中药提取物包含丹酚酸B、 丹参酮IIA、阿魏酸、人参总皂苷、总黄酮、盐酸小檗碱、泽泻醇。

本发明的上述中药提取物还可以与1～6重量份，优选3重量份的红曲 粉混合制成中药组合物。所述红曲粉优选是洛伐他汀。

此外，上述任一种组合物或提取物可以与药用辅料一起制成药物。所 述药物可以是口服剂型或胃肠外剂型，其中所述口服剂型包括颗粒剂、片 剂、蜜丸、浓缩水蜜丸、水丸、胶囊剂、散剂、膏剂、口服液或糖浆剂， 优选颗粒剂、片剂或丸剂，更优选颗粒剂；所述胃肠外剂型包括可注射剂 型、栓剂和喷雾剂，优选注射针剂、冻干粉针剂或注射液。

在第四个方面，本发明提供了本发明的中药提取物的制备方法，所述 方法包括将丹参、川芎、人参、山楂、黄连和泽泻药材按配比(丹参5～15 重量份、川芎3～10重量份、人参1～6重量份、山楂5～15重量份、黄连 1～6重量份、泽泻3～10重量份，优选上述药材的重量配比为9∶6∶3∶9 ∶3∶6)称重，加入上述药材总重量3～8倍，优选6倍的量的40～70％，优 选60％乙醇，回流提取2～4次，每次1～2小时，提取液减压浓缩至相对密 度约1.05(60℃)，真空减压干燥，得所述中药提取物成品。如上所述， 还可以向提取物成品中加入1～6重量份，优选3重量份的红曲粉即得中药 组合物。

在本发明的中药组合物的制备方法中，提取的技术条件(提取的最佳 技术参数)是以有效成分含量为指标，先采用单因素考查选择提取溶媒， 后三因素三水平正交试验来确定使用溶媒倍数、提取时间、提取次数。

在第五个方面，本发明提供了本发明的中药提取物、各种组合物或药 物在制备预防或治疗冠心病的药物中的用途。通过本发明的教导，本领域 技术人员很容易理解，本发明的中药组合物不仅可用于预防或治疗冠心 病，而且更适合预防或治疗冠心病的病因、基础疾病或并发症，如血脂异 常(例如，高脂血症)、心肌梗塞和动脉粥样硬化等疾病或功能紊乱。

从中医辩证角度，本发明的中药提取物、各种组合物或药物可用于预 防或治疗胸痹心痛和/或冠心病痰瘀互结证之证。

在其他的用途中，本发明的中药提取物、组合物或药物还可以用于制 备预防或治疗心肌梗塞、血脂异常或动脉粥样硬化，或者用于治疗胸痹心 痛和/或冠心病痰瘀互结证的医疗器械，所述医疗器械诸如心脏或血管支 架、自膨式球囊、人造的机械或生物心脏或血管瓣膜等。在这样的医疗器 械中，本发明的中药提取物、组合物或药物可以作为涂层、被包被或储存 的缓释活性成分等形式来应用。

在另一个优选的用途中，本发明的中药提取物或组合物还可以制成保 健食品，例如，用于预防冠心病、心肌梗塞、血脂异常或动脉粥样硬化的 保健食品。因此，本发明还包括包含本发明的中药提取物或组合物的保健 食品。

在上述用途中，本发明的中药提取物、各种组合物、药物、医疗器械 或保健食品可具有以下作用中的一种或多种：抑制心肌或大血管的炎症反 应，降低血液中的胆固醇和低密度脂肪水平，抑制平滑肌增殖和减少粥样 硬化斑块等。

本发明的有益效果是：

1.本发明的中药提取物、各种组合物或药物是针对冠心病，尤其是以动脉 粥样硬化为主要病因的冠心病而设立的系统治疗方药，其适用于冠心病 痰瘀互结证。

2.本发明的中药提取物、各种组合物或药物为中药复方，注重于自身免疫 体系的增强，无毒副作用，组方合理。

3.本发明的中药提取物、各种组合物或药物的药理作用广泛和明确，其有 效地针对冠心病中的主要发病机制，例如抑制心肌或大血管的炎症反 应，降低血液中的胆固醇和低密度脂肪水平，抑制平滑肌增殖和减少粥 样硬化斑块等。

4.实验证明，本发明的中药提取物、各种组合物或药物的疗效明显优于已 有的治疗冠心病的药物，与之相比，本发明的中药提取物、各种组合物 或药物最大程度地降低了用药量，而且提高了药效，确实达到了高效低 毒。

5.本发明的中药提取物、各种组合物或药物的原料药药材来源广泛，易于 获得，并且即可采用生药也可以根据情况采用提取物(例如用于针剂等 胃肠外剂型)，因而便于制备和大规模生产。

本发明包括以下的实施方案：

1.一种中药生药组合物，其由包括以下药材的生粉制成：丹参5～15 重量份、川芎3～10重量份、人参1～6重量份、山楂5～15重量份、黄连 1～6重量份、泽泻3～10重量份，优选上述药材的重量配比为9∶6∶3∶9 ∶3∶6。

2.实施方案1所述的中药生药组合物，其还包含1～6重量份，优选3 重量份的红曲粉。

3.一种中药组合物，其包含以下成分：丹参提取物4～10重量份、川 芎提取物2～8重量份、人参提取物1～5重量份、山楂提取物4～10重量份、 黄连提取物1～5重量份、泽泻提取物2～8重量份，优选上述成分的重量配 比为9∶6∶3∶9∶3∶6。

4.实施方案3所述的中药组合物，其还包含1～5重量份，优选3重 量份的红曲粉。

5.实施方案3或4所述的中药组合物，其特征在于丹参提取物包含 丹酚酸B和丹参酮IIA，川芎提取物包含阿魏酸，人参提取物包含人参总 皂苷，山楂提取物包含总黄酮，黄连提取物包含盐酸小檗碱，泽泻提取物 包含泽泻醇，且红曲粉是洛伐他汀。

6.一种中药提取物，其由包括以下药材的原料提取而成：丹参5～15 重量份、川芎3～10重量份、人参1～6重量份、山楂5～15重量份、黄连 1～6重量份、泽泻3～10重量份，优选上述药材的重量配比为9∶6∶3∶9 ∶3∶6。

7.一种中药组合物，其包含实施方案6所述的中药提取物和1～6重 量份，优选3重量份的红曲粉。

8.根据实施方案6或7所述的中药提取物或中药组合物，其特征在 于所述中药提取物或中药组合物包含丹酚酸B、丹参酮IIA、阿魏酸、人 参总皂苷、总黄酮、盐酸小檗碱、泽泻醇和洛伐他汀。

9.一种药物，其包含实施方案1-8中任一项所述的组合物或提取物， 和任意药用辅料。

10.实施方案9所述的药物，其特征在于所述药物为口服剂型或胃肠 外剂型，其中所述口服剂型包括颗粒剂、片剂、蜜丸、浓缩水蜜丸、水丸、 胶囊剂、散剂、膏剂、口服液或糖浆剂，优选颗粒剂、片剂或丸剂，更优 选颗粒剂；所述胃肠外剂型包括可注射剂型、栓剂和喷雾剂，优选注射针 剂、冻干粉针剂或注射液。

11.实施方案6所述的中药提取物的制备方法，所述方法包括将丹参、 川芎、人参、山楂、黄连和泽泻药材按配比称重，加入上述药材总重量3～8 倍的量的40～70％乙醇，回流提取2～4次，每次1～2小时，合并提取液， 减压浓缩并真空减压干燥，得到所述中药提取物。

12.实施方案1-10中任一项所述的中药提取物、组合物或药物在制 备预防或治疗冠心病的药物或医疗器械中的用途。

13.实施方案1-10中任一项所述的中药提取物、组合物或药物在制备 预防或治疗胸痹心痛和/或冠心病痰瘀互结证的药物或医疗器械中的用途。

14.实施方案1-10中任一项所述的中药提取物、组合物或药物在制 备预防或治疗心肌梗塞、血脂异常或动脉粥样硬化的药物或医疗器械中的 用途。

15.实施方案1-8中任一项所述的中药提取物或组合物在制备预防冠 心病的保健食品中的用途。

16.实施方案1-8中任一项所述的中药提取物或组合物在制备预防心 肌梗塞、血脂异常或动脉粥样硬化的保健食品中的用途。

17.实施方案12-16中任一项所述的用途，其特征在于所述中药提取 物或组合物具有以下作用中的一种或多种：抑制炎症反应、降低胆固醇和 低密度脂蛋白、抑制平滑肌增殖和减少粥样硬化斑块。

18.实施方案12-16中任一项所述的用途，其特征在于所述药物、医 疗器械或保健食品具有以下作用中的一种或多利：抑制炎症反应、抑制胆 固醇和低密度脂蛋白、抑制平滑肌增殖和减少粥样硬化斑块。

19.一种保健食品，其包含实施方案1-8中任一项所述的中药提取物。

20.一种保健食品，其包含实施方案1-8中任一项所述的中药组合物。

附图说明

图1图示了家兔血清总胆固醇(TC)变化。与正常对照组比较，*P＜0.05， **P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图2图示家兔血清甘油三酯(TG)变化。与正常对照组比较，*P＜0.05， **P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图3图示家兔血清高密度脂蛋白(HDL-C)变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图4图示家兔血清低密度脂蛋白(LDL-C)变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图5图示家兔血清对氧磷酶-1(PON-1)活性变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图6图示家兔血浆同型半胱氨酸(Hcy)含量变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图7图示家兔血清C-反应蛋白(CRP)含量变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图8图示家兔血浆白介素-6(IL-6)含量变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图9图示家兔血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量变化。与正常对照组比 较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图10图示家兔血浆可溶性CD40配体(sCD40L)含量变化。与正常对 照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图11图示家兔血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量变化。与正常 对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图12图示正常对照组家兔主动脉HE染色，正常对照组-1：40×，正 常对照组-2：100×。

图13图示模型组家兔主动脉HE染色，模型组-1：40×，模型组-2： 100×。

图14图示辛伐他汀组家兔主动脉HE染色，辛伐他汀组-1：40×，辛 伐他汀组-2：100×。

图15图示本发明药物5g/kg剂量组家兔主动脉HE染色，本发明药物 5g-组1：40×，本发明药物5g组-2：100×。

图16图示本发明药物2.5g/kg剂量组家兔主动脉HE染色，本发明药 物2.5g组-1：40×，本发明药物2.5g组-2：100×。

图17图示本发明药物1.25g/kg剂量组家兔主动脉HE染色，本发明药 物1.25g组-1：40×，本发明药物1.25g组-2：100×。

图18图示家兔斑块面积/血管内皮面积比率变化。与正常对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图19图示家兔主动脉苏丹III染色结果。

图20图示家兔肝指数变化。与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01； 与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

图21图示正常对照组家兔肝脏HE染色，正常对照组-1：40×，正常 对照组-2：100×。

图22图示模型组家兔肝脏HE染色，模型组-1：40×，模型组-2：100×。

图23图示辛伐他汀组家兔肝脏HE染色，辛伐他汀组-1：40×，辛伐 他汀组-2：100×。

图24图示本发明药物5g/kg剂量组家兔肝脏HE染色，本发明药物5g 组-1：40×，本发明药物5g组-2：100×。

图25图示本发明药物2.5g/kg剂量组家兔肝脏HE染色，本发明药物 2.5g组-1：40×，本发明药物2.5g组-2：100×。

图26图示本发明药物1.25g/kg剂量组家兔肝脏HE染色，本发明药物 1.25g组-1：40×，本发明药物1.25g组-2：100×。

具体实施方式

组方机理

本发明提供了一种中药组方，其可用于预防或治疗冠心病及其相关疾 病例如血脂异常、心肌梗塞和动脉粥样硬化等疾病，该组方由丹参、川芎、 人参、山楂、黄连、泽泻，红曲等七味药材组成。

按照传统医学的方解，本发明的中药组方处方合理，处方中的丹参为 方中君药，川芎、人参、山楂为臣药，黄连、泽泻为佐药，红曲为使药。

本发明的组方主治冠心病痰瘀互结证，血脉瘀阻、痰毒凝结是其主要 病理基础，贯穿该病始终，而方中君药丹参(有效成分为丹酚酸B和丹参 酮IIA)活血化瘀；臣药川芎(有效成分主要为阿魏酸)增强化瘀功能， 人参(主要有效成分为人参总皂苷)益气活血，山楂(主要有效部位为总 黄酮)健脾化痰活血，三药共同增强君药丹参的活血祛瘀功效；佐药黄连 (主要有效成分为盐酸小檗碱)解毒，泽泻(主要有效成分为泽泻醇)化 痰；使药红曲(主要有效成分为洛伐他汀)健脾调中，调和诸药。全方祛 瘀化痰、解毒通脉。

当然，根据本发明，本领域技术人员也可以通过将本发明的组方中各 药材的上述有效成分按本发明中公开的各药材的重量比根据具体情况通 过实验(例如本文中所提到的正交设计法)来简单地组合(例如，通过混合) 成有效成分混合物来实现本发明的目的。

药物剂型

本发明的中药提取物或中药组合物可进一步分别与一种或多种辅料、 赋形剂、稀释剂、溶剂、稳定剂、崩解剂、调味剂、着色剂、PH调节剂、 分散剂、等渗剂和/或其他添加剂等药用载体制成适当的药物剂型。在制备 本发明的药物的剂型过程中，本发明的中药提取物或中药组合物通常与一 种或多种药用载体通过常规的混合、溶解、制粒、制锭研磨、乳化、封装、 包埋或冻干等工艺进行制备，本发明的有效成分(中药组合物或中药提取物) 稀释或包封在其中(见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第十五版， Hoover，J.E.主编，Mack Publishing Co.(2003))。

上述剂型可采取任何合适的给药方式，该方式包括局部、经眼、口服、 全身、经鼻、注射、透皮、直肠、阴道等途径，或吸入或吹入给药的形式。

对于局部给药，本发明的药物可制成溶液、凝胶、油膏、乳膏、悬浮 液等。

全身制剂包括通过注射给药，例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹 膜内注射的剂型，以及用于透皮、透粘膜口腔或肺部给药的剂型。

可注射剂型包括本发明的药物在水性或油性媒介中的无菌悬浮液、溶 液或乳液。所述剂型还可含有悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等。注射剂型可 以单位剂型提供，例如，在安瓿中或多次剂量容器中，可含有防腐剂。

可注射剂型也可选择粉末的形式，在使用前使用合适的媒介物，包括 但不限于无菌无热源水、缓冲液、葡萄糖溶液等重新配制。可注射剂型可 通过直接静脉内注射、静脉快速滴注给药，或通过加入输注溶液如0.9％ 氯化钠注射液或其他相容的输注溶液进行输注给药。

在优选的实施方案中，包含本发明的中药组合物或中药提取物的药物 是口服剂型，其非限制性实例及其制备方法如下：

①颗粒剂型：将每个处方量混合膏粉加入辅料糊精，充分混匀， 70％乙醇浸润，制粒，置60℃干燥，整粒，即得。

②片剂：将每个处方量混合膏粉加入辅料糊精，充分混匀，70％乙 醇浸润，制粒，置60℃干燥，再加入适量润滑剂(例如硬脂酸镁)、崩解 剂(羧甲基淀粉钠)混匀，压片，还可根据需要进行薄膜包衣，即得。

③丸剂：将每个处方量混合膏粉加入辅料糊精，充分混匀，置60℃ 干燥，粉碎；加入蜂蜜或水或蜂蜡或米粉或米糊，按照其他常规丸剂的制 备方法制得。

根据本领域常规技术，本发明的组合物也可制成蜜丸、水蜜丸、水丸、 糊丸、蜡丸、浓缩丸，其工艺步骤均为常规操作，可视药材情况不同酌情 改变工艺条件，其为本领域技术人员所公知。

针对所需要的产品的不同，本发明药物的制备步骤也可不同，但均为 公知常识性制剂工艺，不再一一描述。

实施例

以下通过实施例对本发明做进一步说明。实施例仅用来说明本发明的 实施方法和效果，并不以任何形式限制本发明。下面实施例中所提及的中 药、原料、赋形剂、稀释剂、辅料、试剂或其他药物等，除非另外指明， 均是市售产品。如未具体说明，则其中提到的物质的“％”为重量％，“份” 为重量份。当提及“本发明药物g生药/kg”时，所述“生药”是指药物 中不含辅料的药材成分。本发明所采用的中药材均是2010年版药典所收 载的药材，各项指标均符合药典规定；按中国药典2010年版一部，附录 IXE、IXF项下规定，对3批样品的砷盐和重金属进行检查，结果均在规 定范围内。

制备实施例1

1.处方：

丹参9重量份  川芎6重量份  人参3重量份

山楂9重量份  黄连3重量份  泽泻6重量份

红曲3重量份

2.药材提取物制备：

提取物按以下两种方法制备：

1)将丹参、川芎、人参、山楂、黄连、泽泻分别按常规乙醇提取法制 成提取物，按9∶6∶3∶9∶3∶6∶3的重量配比称重并混合制成提取物成 品；或

2)将丹参9份、川芎6份、人参3份、山楂9份、黄连3份、泽泻6 份，加6倍生药量的60％乙醇，回流提取3次，每次1小时，合并提取液， 提取液减压浓缩至相对密度约1.05～1.10(60℃)，真空减压干燥，得提取 物成品。

3.颗粒剂的制备

在提取物成品中加入红曲粉3份混合，再加入糊精，充分混匀，置50～ 60℃真空干燥，粉碎，制粒，即得本发明组合物的颗粒剂。

性状：棕褐色，气味微香，微苦、甜。

检查：本发明组合物颗粒剂符合中国药典2010年版一部附录I制剂通 则IC颗粒剂项下及卫生部关于药品卫生检查各项规定。

鉴别：丹参鉴别参照中国药典2010年版一部丹参项下，川芎鉴别参照 中国药典2010年版一部川芎项下，人参鉴别参照中国药典2010年版一部 人参项下，山楂鉴别参照中国药典2010年版一部山楂项下，黄连鉴别参 照中国药典2010年版一部黄连项下。

含量测定：

制剂中丹参酮IIA的含量测定：取本品粉末(过三号筛)适量，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得。分别精密称取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱中测定 (以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(70∶30)为流动相；检 测波长为270nm)。

制剂中丹酚酸B的含量测定：取本品粉末(过三号筛)适量，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，加热回流1 小时，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得。分别精密称取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相 色谱中测定(以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲酸-乙腈-甲酸-水 (30∶10∶1∶59)为流动相；检测波长为286nm)。

本制剂中每代含丹参以丹参酮IIA(C₁₉H₁₈O₃)计，不得少于0.5mg； 每代含丹参以丹酚酸B(C₃₆H₃₀O₁₆)计，不得少于3mg。

本发明组合物颗粒剂临床推荐量7g/次(其中药材提取物3.88g，加入 辅料后的颗粒剂成品为7g)每日服用3次。

制备实施例2：

1.处方：

丹参9份  川芎6份  人参3份

山楂9份  黄连3份  泽泻6份

红曲3份

2.生药组合物制备：将上述药材粉碎过20目，即得本发明的生药组合物。

3.颗粒剂的制备：上述药粉混合后加入糊精充分混匀，置50～60℃真空 干燥，粉碎，制颗，即得本发明组合物的颗粒剂。

经检验，本发明组合物颗粒剂符合中国药典2010年版一部附录I制剂 通则IC颗粒剂项下及卫生部关于药品卫生检查各项规定。

定性与定量测定参照制备实施例1。

实施例2的颗粒剂临床推荐量7g/次，每日服用3次。生药组合物用 量则为13g/次，每日服用3次。

实验实施例：药效学及毒理学试验研究

I.对大鼠实验性急性心肌缺血的影响

实验用药：制备实施例1制备的颗粒剂(以下称为本发明药物)；

对照药：辛伐他汀，杭州默沙东制药有限公司生产

实验方法：

动物造模：健康、雄性Wistar大鼠80只，SPF级，体重200±20g。由北 京维通利华实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(京)2002-0003。大 鼠实验性急性心肌缺血模型参照文献制作【李贻奎、宁可永、李连达等.大 鼠冠状动脉结扎心肌缺血模型方法的改进.中国新药杂志，2005，14(4)： 427～428】：动物以水合氯醛3.5g/kg腹腔麻醉，仰位固定，于胸骨左侧第 四五肋间开胸后短暂闭合胸腔，挤出心脏，用左手中指以中等力度顶心脏 靠脊柱侧根部使左心耳根部下方暴露清晰，于冠状动脉左前降支根部迅速 穿线(0号缝合线)，结扎(假手术组不与结扎)，心脏迅速归位，闭合胸 腔，缝合胸壁。术后动物心跳呼吸稳定后于十二指肠给药；3h后，取心脏， 生理盐水冲洗，心脏结扎线以下横切5片，NBT染色，采用多媒体彩色病 理图文分析系统(MPIAS-500型，北京)以固定取象距离测量正常心肌及 梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度。 实验结果：

连续给药4周对各组大鼠心肌梗塞面积的影响

连续灌胃给药2周后，与模型对照组比较，给药组心肌梗死面积明显 降低。

连续给药4周各组大鼠血脂代谢的变化情况

连续灌胃给药2周后，与模型对照组比较，给药组TC、LDL-C和 TC/HDL-C均明显降低。

结论：本发明药物可以显著降低大鼠实验性急性心肌缺血模型的心肌 缺血面积，同时显著降低模型大鼠血清中TC、LDL-C水平，降低 TC/HDL-C，说明本发明药物对急性心肌缺血有较好的治疗作用。

II.对家兔动脉粥样硬化模型的干预作用

实验用药：制备实施例2制备的生药组合物颗粒剂(以下称为本发明 药物)；

对照药：辛伐他汀，杭州默沙东制药有限公司生产

实验方法：

造模：术前家兔耳缘静脉给予肝素125IU/kg进行全身肝素化，导管内 液体肝素化和导管内壁的抗凝处理。家兔于耳缘静脉给予3％戊巴比妥钠 30mg/kg麻醉，清洁消毒，手术在无菌条件下进行。用手指在家兔腹股沟 下内方触摸右侧股动脉搏动部位，在用手术刀以此为中点沿血管走行方向 切开皮肤、皮下组织，切口长约5～6cm，用弯型止血钳采用不断撑开筋膜， 暴露神经血管束，用蚊式钳小心分离血管神经之间的结缔组织。股动脉分 离至暴露充分，干净。在分离好的股动脉下面穿过两根结扎线，一根先在 远心端结扎后，用手轻轻提起结扎线将股动脉向上牵拉，让其有一定的张 力，用眼科剪呈约45°角在离结扎线的上方血管壁上剪开管径的1/3，轻轻 地将准备好的3F动脉取血栓导管从小口逆行插入，将近心端的一根结扎线 于插入口的下方绑扎。缓慢送取血栓导管，若取血栓导管通过受阻无法顺 利通过主动脉弓时，轻柔旋转推送取血栓导管调整方向，若仍不成功，可 在X光下观察局部情况。X光下确定取血栓导管到达胸主动脉水平。球囊 内充以0.2ml生理盐水，自近心端缓慢回拉至腹主动脉，机械扩张整个主 动脉，重复3次，每次30s，使主动脉内膜机械损伤，撤出动脉取血栓球囊 导管，结扎股动脉。缝合肌肉皮肤，肌肉注射青霉素80万U/只，每日1次， 连续3天预防感染。单笼喂养观察。

分组及给药：

造模后实验动物分为6组：

(1)正常对照组，普通饲料，不拉伤主动脉，n＝6；

(2)模型组照组，高脂饲料+主动脉拉伤，n＝6；

(3)阳性对照药辛伐他汀，高脂饲料+主动脉拉伤+辛伐他汀2mg/Kg，n＝6；

(4)本发明药物5g/kg剂量组，高脂饲料+主动脉拉伤+本发明药物5g生药 /kg，n＝6；

(5)本发明药物2.5g/kg剂量组，高脂饲料+主动脉拉伤+本发明药物2.5g 生药/kg，n＝6；

(6)本发明药物1.25g/kg剂量组，高脂饲料+主动脉拉伤+本发明药物1.25g 生药/kg，n＝6。

实验0周时各高脂饲料喂养组家兔开始给于高脂饲料直至实验结束， 各给药组家兔在4周时开始分别灌胃给药持续8周至实验结束。辛伐他汀给 药剂量按人临床剂量折算，本发明药物5g/kg剂量为临床折算剂量的2倍， 本发明药物2.5g/kg剂量为临床折算等效剂量，1.25g/kg剂量为临床折算等 效剂量一半。各给药组把药物溶于10ml蒸馏水中，每日灌胃给药。

1.血脂代谢变化

本发明药物对家兔TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度 脂蛋白胆固醇、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组家兔TC水平明显高于正常对照 组。与模型组比较，本发明药物各剂量组的TC水平均降低，其中5g/kg 剂量组和2.5g/kg剂量组差异明显(P＜0.01)，见表1，图1。

检测结果显示，实验结束时，模型组和各给药组家兔血清TG水平均 较正常对照组显著升高(P＜0.01)，各组间无差异，见表1，图2。

检测结果显示，实验结束时，模型组及各给药组血清HDL-C与正常 对照组比较无差异，各组间无差异，见表1，图3。

检测结果显示，实验结束时，模型组家兔LDL-C水平明显高于正常 对照组。模型对照组比较，本发明药物各剂量组的LDL-C水平均降低， 其中5g/kg剂量组和2.5g/kg剂量组差异明显(P＜0.01)，见表1，图4。

由此可见，本发明药物对家兔血脂代谢的作用主要是在降血清TC和 LDL-C方面，对血清TG的改变不是十分明显。

表1 家兔血脂代谢变化(n＝6)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

2.对家兔血清PON-1活性的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的PON-1活性较正常对照组明显 降低(P＜0.01)。本发明药物各剂量组可以有效的升高血清PON-1活性， 其中5g/kg剂量组和模型组比较差异十分明显(P＜0.01)，2.5g/kg剂量组 和模型组比较差异也有统计学意义(P＜0.05)，见表2-2，图5。

表2 家兔血清PON-1活性变化(U/ml)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

3.对家兔血浆Hcy含量变化影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的Hcy含量较正常对照组明显升 高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组可以降低Hcy含量，其中5g/kg剂量 组和模型组比较差异十分明显(P＜0.01)，见表3，图6。

表3 家兔血浆Hcy含量变化(μmol/L)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

4.对家兔血清CRP(C-反应蛋白)变化的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的CRP含量较正常对照组明显 升高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组均可以有效的降低家兔血清CRP， 和模型组比较差异十分均明显(P＜0.01)各剂量组间无差异。见表4，图 7。

表4 家兔血清CRP变化(ng/mL)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

5.对家兔血浆IL-6含量变化的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的IL-6含量较正常对照组明显升 高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组均可以有效的降低家兔血浆IL-6，和 模型组比较差异十分均明显(P＜0.01)各剂量组间无差异。见表5，图8。

表5 家兔血浆IL-6含量变化(pg/mL)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

6.对家兔血清TNF-α含量变化的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的血清TNF-α含量较正常对照 组明显升高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组均可以有效的降低家兔血清 TNF-α，和模型组比较差异十分均明显(P＜0.01)各剂量组间无差异。见 表2-6，图9。

表2-6 家兔血清TNF-α变化(pg/mL)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

7.对家兔血浆sCD40L变化的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的血浆sCD40L含量较正常对照 组明显升高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组均可以有效的降低家兔血浆 sCD40L，和模型组比较差异十分均明显(P＜0.01)各剂量组间无差异。 见表7，图10。

表7 家兔血浆sCD40L变化(ng/mL)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

8.对家兔血清MMP-9变化的影响

检测结果显示，实验结束时，模型组的血清MMP-9含量较正常对照 组明显升高(P＜0.01)。本发明药物各剂量组均可以有效的降低家兔血清 MMP-9，和模型组比较差异十分均明显(P＜0.01)各剂量组间无差异。见 表8，图11。

表8 家兔血清MMP-9变化(ng/mL)

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

9.家兔主动脉组织病理改变

HE染色样本光镜下(40倍和100倍)观察看见：正常对照组主动脉血 管壁三层结构清晰，内膜光滑完整，内皮下未见脂质及炎性细胞浸润， 中层平滑肌细胞(smooth muscle cell，SMC)排列整齐，外膜结构清楚，见图 12。模型组可见血管壁弥漫性隆起，突向管腔面，形成明显斑块，内膜明 显增厚，内膜下大量排列不规则平滑肌细胞，内有脂质沉积，形成大小不 等、形态不规则的泡沫细胞，内膜中有大量巨噬细胞浸润，中层结构紊乱， 平滑肌增生，有炎性细胞浸润，见图13。各给药组内膜亦有增厚，可见脂 质空泡和平滑肌细胞增生。本发明药物5g生药/kg剂量组内膜下可见少量 泡沫细胞，未见平滑肌细胞增殖，主动脉病变较模型组明显减轻，见图15。 本发明药物2.5g生药/kg剂量组和辛伐他汀组主动脉，较模型组泡沫细胞 形成和主动脉病变也减轻，分别见图16和图14。本发明药物1.25g生药/kg 剂量组病变和模型组相似，见图17。

10.对家兔主动脉斑块比率及病变程度影响

实验结束时，与模型组板块百分比(0.74±0.13)相比，本发明药物5g 生药/kg剂量组、辛伐他汀组的斑块面积百分比显著减少，分别为 0.46±0.12、0.49±0.07(P＜0.01)。本发明药物2.5g生药/kg剂量组板块面积 百分比也明显减少(P＜0.05)。本发明药物1.25g生药/kg剂量组斑块面积百 分比和模型组比较无统计学意义，见表9和10，图18，图19。

表9 家兔主动脉斑块比

注：ND：未能检出。与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

表10 家兔主动脉病变程度

注：其中P值为与模型组比较所得。

11.对家兔肝脏、肝指数和肝组织病理形态学变化的影响

实验结束时，正常对照组兔肝脏色泽红润，表面光滑，模型组和个给 药组家兔肝脏表面呈乳黄色，欠光滑，各给药组间肉眼观察无差别。各给 药组肝指数有下降的趋势，但无统计意义，表11，图20。

表11 家兔肝指数变化

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

肝脏HE染色样本光镜下(40倍和100倍)观察看见：正常对照组肝 组织的形态学正常，肝小叶结构完整，未见脂肪变性的肝细胞，见图21。 模型组肝组织出现了中度至重度的肝细胞脂肪变性，肝细胞肿大，胞浆内 充满大小不等的脂肪空泡或脂滴，肝脏汇管区增生，肝细胞损坏严重，见 图22。本发明药物5g生药/kg剂量组和辛伐他汀组可见脂肪空泡，但肝细 胞尚完整，脂滴明显减少，肝细胞病变较轻，见图23，图24。本发明药 物2.5g生药/kg肝细胞病变较模型组也轻，见图25。本发明药物1.25g生 药/kg肝细胞病变和模型组相似，见图26。

结论：本发明药物可显著降低家兔动脉粥样硬化模型血清中TC、 LDL-C水平，升高模型家兔血清PON-1活性，降低血清Hcy、CRP、IL-6、 TNF-α及MMP-9含量，降低模型家兔血浆sCD40L含量，同时可显著改 善模型家兔的主动脉病变，减少泡沫细胞形成，明显降低主动脉斑块面积 百分比，明显降低模型家兔的肝指数，并显著改善肝细胞病变，提示本发 明药物对动脉粥样硬化有较好的治疗作用，其机制可能与抑制炎症反应、 降低胆固醇和低密度脂蛋白、抑制平滑肌增殖有关。