一种原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法

摘要

本发明公开了一种原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法，通过建立项空气相色谱分析法，将测定的四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯的标准品溶液色谱与原料药米非司酮供试品溶液的色谱进行比较、计算，来完成原料药米非司酮中残留溶剂的检测方法。该测定方法操作快速简单，灵敏度高，重复性好，结果准确，并能定量检出原料药米非司酮中可能残留的四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯等溶剂，为控制原料药米非司酮生产工艺中有机溶剂残留提供了良好的参考，保证米非司酮原料药的质量，从而提高了临床用药的安全性，为提高米非司酮原料药的质量标准提供了方法依据。

说明书

技术领域

本发明涉及一种甾体抗孕激素原料药残留溶剂的测定方法，具体涉及原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法。 

背景技术

米非司酮为中国药典2005年版收载的品种，是近年来研制的一种抗早孕的药物，具有终止早孕、抗着床、诱导月经和促进子宫收缩的作用。该药在制备工艺中需使用乙醇、四氢呋喃、异丙醚、乙酸乙酯、乙腈、苯、二氯甲烷以及吡啶等有机溶剂，苯属于一类熔剂，由于二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、吡啶属第二类溶剂，毒性较大，应该限制使用，而乙醇、乙酸乙酯属第三类溶剂，在药品GMP或其他质量要求限制使用，故有必要在质量标准中对它们的含量进行有效的控制。 

四氢呋喃、醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈、苯都属于有机溶剂，对皮肤、呼吸道黏膜、眼结膜等具有一定的刺激作用，接触高浓度可以导致中毒性脑病，出现有头晕、头疼、不同程度的意识障碍乃至昏迷。 

其中，苯是一种无色、具有特殊芳香气味的液体，能与醇、醚、丙酮和四氯化碳互溶，微溶于水，为IARC第一类致癌物，经常接触苯，皮肤可因脱脂而变干燥，脱屑，有的出现过敏性湿疹；长期吸入苯能导致再尘障碍性贫血。四氢呋喃具有刺激和麻醉作用；吸入后引起上呼吸道刺激、恶心、头晕、头痛和中枢神经系统抑制；能引起肝、肾损害；液体或高浓度蒸气对眼有刺激性。 

乙醇属微毒类，但麻醉作用比甲醇大，其主要效应是对中枢神经系统产生抑制所致。当乙醇摄入量增大时，其中枢神经系统抑制作用增强，首先作用于大脑皮质，继而影响皮质下中枢，可引起延髓血管运动中枢和呼吸中枢麻痹。异丙醚侵入途径：吸入、食入、经皮吸收；其健康危害：蒸气或雾对眼睛、粘膜、皮肤和上呼吸道有刺激性；接触后能引起恶心、头痛、呕吐和麻醉作用；反复皮肤接触，可引起接触性皮炎。 

乙酸乙酯对眼、鼻、咽喉有刺激作用；高浓度吸入可引起缓慢而渐进的麻醉作用；持续大量吸入，可致呼吸麻痹；有致敏作用，因血管神经障碍而致牙龈路充血及粘膜炎 症；可致湿疹样皮炎。二氯甲烷有麻醉作用，主要损害中枢神经和呼吸系统；其毒性：经口属中等毒性；其急性毒性：暴露时间增加，有轻度肝萎缩、脂肪变性和细胞浸润。 

吡啶健康危害：有强烈刺激性；能麻醉中枢神经系统；对眼及上呼吸道有刺激作用；高浓度吸入后，轻者有欣快或窒息感，继之出现抑郁、肌无力、呕吐；重者意识丧失、大小便失禁、强直性痉挛、血压下降；误服可致死。慢性影响：长期食入出现头晕、头痛、失眠、步态不稳及消化道功能紊乱；可发生肝肾损害。可引起皮炎。 

乙腈急性中毒发病较氢氰酸慢，可有数小时潜伏期。主要症状为衰弱、无力、面色灰白、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、胸闷、胸痛；严重者呼吸及循环系统紊乱，呼吸浅、慢而不规则，血压下降，脉搏细而慢，体温下降，阵发性抽搐，昏迷。可有尿频、蛋白尿等。 

如果不对药品中溶剂残留进行限度检查，将会使药品存在极大的安全隐患。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法，建立项空气相色谱分析法对原料药米非司酮中可能残留的有机溶剂进行检测，操作快速简单，灵敏度高，重复性好，结果准确，并能定量检出原料药米非司酮中可能残留的四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈、苯等有机溶剂，为控制原料药米非司酮生产工艺中有机溶剂残留提供了良好的参考，保证米非司酮原料药的质量，从而提高了临床用药的安全性，为提高米非司酮原料药的质量标准提供了方法依据。 

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案： 

一种原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法，包括以下步骤： 

(1)选择对照物质：选择四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯作为对照物质；上述对照物质的纯度级别均为分析纯AR； 

(2)制备供试品溶液：准确称取米非司酮供试品，置于顶空进样瓶中，加入二甲基亚砜，超声溶解，摇匀后作为供试品溶液，其中所述米非司酮供试品溶液中米非司酮的浓度优选为0.2g/ml； 

(3)制备标准品溶液：分别准确称取对照品乙醇、四氢呋喃、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈溶于具有二甲基亚砜的容量瓶中，并用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀得第一混合溶液；准确称取对照品苯置于具有二甲基亚砜的容量瓶中，并用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀得第二溶液； 

将一定量的第一混合溶液和第二溶液置于一容量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀后得到标准品溶液，该标准品溶液作为对照溶液； 

其中，所述标准品溶液中各对照品的浓度优选为：乙醇200μg/mL；四氢呋喃144μg/mL；异丙醚200μg/mL；乙酸乙酯400μg/mL；二氯甲烷120μg/mL、吡啶40μg/mL、乙腈82μg/mL、苯0.4μg/mL； 

(4)采用顶空气相色谱法分别进样标准品溶液多针和供试品溶液多针，分别获得标准品溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，通过标准品溶液色谱图中各对照品相应峰的峰面积和供试品溶液色谱图中各残留溶剂相应峰的峰面积，采用以下公式计算获得原料药米非司酮中各残留溶剂的含量，即米非司酮中四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯的含量： 

式中：As-供试品溶液中各个残留溶剂的峰面积； 

V-米非司酮供试品的稀释体积，单位mL；即步骤(2)的稀释体积； 

C-标准品溶液中相应残留溶剂的浓度，单位mg/mL； 

W_样-样品称量，单位mg； 

-标准品溶液中相应残留溶剂的平均峰面积。 

其中，采用顶空气相色谱法进行测定要求各溶剂峰峰面积的相对标准偏差RSD≤10％；相邻溶剂间的分离度≥1.5。 

优选的，进样标准品溶液多针和供试品溶液多针前先进样空白溶液1针作为空白对照；进样标准品溶液多针为6针，进样供试品溶液多针为2针。 

优选的，采用顶空气相色谱法测定原料药米非司酮中各残留溶剂的含量时，其测定条件为： 

采用AgilentDB-624弹性石英毛细管柱(30m×0.53mm×3μm)作为分析用色谱柱，检测器为FID检测器； 

色谱分离参数：载气：氮气；载气流速：3.0mL/min；分流比：10：1； 

检测器温度：250℃；进样口温度：200℃； 

柱温：起始温度为45℃，保持10min，以15℃/min的升温速率至150℃，保持3min； 

顶空检测参数：加热箱：105℃；定量环：115℃；传输线：125℃； 

气相GC循环时间：25min；进样时间：1min； 

样品平衡时间：20min；压力平衡时间：0.2min。 

本发明由于原料药米非司酮样品涉及残留溶剂种类多，沸点比较广，为适应原料药米非司酮中残留溶剂的检测，需要选择比较合适的检测条件，对所采用的起始柱温、升温速率进行调整，经过对上述其他各控制条件的优化，最终确定柱温起始温度45℃，保持10min，以15℃/min的升温速率至150℃，保持3min。顶空检测参数：加热箱：105℃定量环：115℃，传输线：125℃，GC循环时间：25min，进样时间：1min，样品平衡时间：20min，压力平衡时间：0.2min。 

本发明的原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法，其系统适应性对照液中各溶剂峰面积的RSD≤10％；相邻溶剂间的分离度≥1.5；专属性为以下三点：①空白没有其它杂质峰，如果有则不得干扰所检测的溶剂；②所有验证的溶剂应彼此分离并且与有关系的溶剂分开，分离度≥1.5；③所有未知的残留溶剂应该与所有被验证的残留溶剂分离。其精密度、重复性各溶剂峰面积的RSD≤10％。 

本发明的原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法，通过建立顶空气相色谱分析法，将测定的四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯的标准品溶液色谱与原料药米非司酮供试品溶液的色谱进行比较、计算，来完成原料药米非司酮中残留溶剂的检测方法。该测定方法操作快速简单，灵敏度高，重复性好，结果准确，并能定量检出原料药米非司酮中可能残留的四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯等溶剂，为控制原料药米非司酮生产工艺中有机溶剂残留提供了良好的参考，保证米非司酮原料药的质量，从而提高了临床用药的安全性，为提高米非司酮原料药的质量标准提供了方法依据。 

附图说明

图1-1是空白溶液色谱图。 

图1-2是第1针标准品溶液的顶空气相色谱图。 

图1-3是第2针标准品溶液的项空气相色谱图。 

图1-4是第3针标准品溶液的顶空气相色谱图。 

图1-5是第4针标准品溶液的顶空气相色谱图。 

图1-6是第5针标准品溶液的顶空气相色谱图。 

图1-7是第6针标准品溶液的顶空气相色谱图。 

图2-1是1#原料药米非司酮供试品溶液第1针的顶空气相色谱图。 

图2-2是1#原料药米非司酮供试品溶液第2针的项空气相色谱图。 

图2-3是2#原料药米非司酮供试品溶液第1针的的顶空气相色谱图。 

图2-4是2#原料药米非司酮供试品溶液第2针的的顶空气相色谱图。 

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的保护范围。 

实施例1原料药米非司酮中残留溶剂的测定 

(一)分析方法：顶空气相色谱分析法。 

色谱系统： 

色谱柱：AgilentDB-624弹性石英毛细管柱(30m×0.53mm×3μm)、FID检测器。 

色谱参数： 

色谱分离参数：载气：氮气；载气流速：3.0mL/min；分流比：10：1； 

检测器温度：250℃；进样口温度：200℃； 

柱温：起始温度45℃，保持10min，以15℃/min的升温速率至150℃，保持3min。 

顶空检测参数：加热箱：105℃；定量环：115℃；传输线：125℃； 

GC循环时间：25min；进样时间：1min； 

样品平衡时间：20min；压力平衡时间：0.2min。 

(二)溶液配制： 

1、对照品溶液(即标准品溶液)： 

准确称取乙醇200mg、四氢呋喃144mg、异丙醚200mg、乙酸乙酯400mg、二氯甲烷120mg、吡啶40mg、乙腈82mg溶于有适量二甲基亚砜的100mL容量瓶中，并用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀得溶液①。 

准确称取苯40mg置于有适量二甲基亚砜的100mL容量瓶中，并用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀。准确量取此溶液1.0mL于100mL容量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀得溶液②。 

移取溶液①和溶液②各10.0mL于100mL容量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。移取对照品溶液5.0mL置于20mL顶空瓶中即得。其中对照品溶液中各对照品的浓度为：乙醇200μg/mL；四氢呋喃144μg/mL；异丙醚200μg/mL；乙酸乙酯400μg/mL；二氯甲烷120μg/mL、吡啶40μg/mL、乙腈82μg/mL、苯0.4μg/mL。 

2、供试品溶液： 

准确称取1.000g供试品，置于20mL项空进样瓶中，加入5.0mL二甲基亚砜，超声溶解，摇匀，作为供试品溶液。 

(三)测定步骤： 

进样空白溶液1针，其色谱图如图1-1所示； 

进样对照品溶液6针，获得色谱图，记录各对照品相应峰的峰面积(如表2所示)，要求各对照品峰面积的RSD不得大于10％； 

进样供试品溶液2针，记录色图谱，通过对照品溶液色谱图中各对照品相应峰的峰面积和供试品溶液色谱图中各残留溶剂相应峰的峰面积，采用以下公式计算获得原料药米非司酮中各残留溶剂的含量，即米非司酮中四氢呋喃、乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、乙腈和苯的含量： 

根据峰面积计算各残留溶剂含量，计算公式如下： 

式中：As-样品溶液中各个残留溶剂的峰面积； 

V-米非司酮样品稀释体积，单位mL； 

C-标准溶液中相应残留溶剂的浓度，单位mg/mL； 

W_样-样品称量，单位mg； 

-标准溶液中相应残留溶剂的平均峰面积。 

(四)检测与结果： 

对照溶液中各对照品组分的系统适应性称量值如表1所示。 

表1系统适应性称量值 

按上述步骤检测进样对照品溶液6针，获得色谱图(如1-2到图1-7所示)记录各峰峰面积，要求RSD不得大于10％，其结果如表2所示： 

表2系统适应性测试结果 

注：R'min为最难分离组分(乙腈与二氯甲烷)之间的分离度。 

分别取2批原料药米非司酮样品(如表3所示)，按上述确定后的色谱条件进行顶空气相色谱法分析，记录检测结果，其中的系统适应性结果如表2所示的相同。 

表3 

原料药批号 30011204001 3001120402 1# 1.0095g 0.9993g 2# 1.0102g 1.0012g

进样供试品溶液2针，记录色图谱，将供试品溶液通过顶空气相色谱仪测定时，其色谱条件与标准品溶液的色谱条件相同，得到供试品色谱图，其色谱图如图2-1和图2-2所示。 

按上述原料药米非司酮中各残留溶剂的含量公式计算得到的具体结果如表4所示。比较供试品溶液与标准品溶液的色谱图可知，乙醇和乙腈峰面积小于标准品溶液乙醇和乙腈峰面积，则乙醇和乙腈组分限度符合法定标准，其他溶剂四氢呋喃、异丙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、吡啶、苯未检出。 

表4 

(五)对上述原料药米非司酮中各残留溶剂的检测方法进行方法学验证：包括系统适应性对照液中各溶剂峰峰面积RSD≤10％(如表2所示的RSD最大为5.57％)；相邻溶剂间的分离度≥1.5(如表2所示的最难分离组分乙腈与二氯甲烷之间的分离度≥2.66)。 

专属性：①空白没有其它杂质峰，如果有则不得干扰所检测的溶剂；②所有验证的溶剂应彼此分离并且与有关系的溶剂分开，分离度≥1.5；③所有未知的残留溶剂应该与所有被验证的残留溶剂分离。 

精密度、重复性各溶剂峰面积RSD≤10％，置信区间(95％计)。 

由表5可知，其准确度、平均回收率为80％～120％。 

表5准确度测试结果 

注：上述表5中的A₀为供试品溶液中各溶剂的平均峰面积，A_u为准确度溶液中各溶剂的峰面积。 

由表5可知，各溶剂的回收率均符合要求，表明此检测方法准确度良好。 

检测限和定量限：对所有需验证的溶剂配制一份信噪比≥10的低浓度溶液进行测定。按下式通过计算得出定量限QL。检测限由定量限的关系得出。 

QL＝10C/(S/N) 

其中：S/N：≥10的低浓度溶液的信噪比， 

C：代表上述的低浓度溶液的浓度。 

检测限(DL)：由定量限QL推断计算得出： 

$\frac{\mathrm{QL}}{3.3}$

(1)具体配制过程如下：按照实施例1中溶液配制项下的对照品溶液(即标准品溶液)的方法进行配置，其中对照品的称量值和对照品溶液中各对照品的浓度如表6所示。 

(2)进样操作步骤：各对照品溶液重复进样3次，按程序记录相应色谱图。 

(3)测试结果如表6所示。 

表6各溶剂定量限及检测限测试结果 

注：*表示相对于对照品的ppm浓度。 

其检测结果：由表6可知，混合对照品溶液中各溶剂的QL和DL远小于限度值。 

线性相关度考察： 

考察杂质限度在定量限至限度的120％之间的线性情况，线性相关系数R²应≥0.99。 

分别取六点做线性考察，按照上述溶液配制标准品溶液并稀释浓度为20％，40％， 60％，80％，100％，120％μg/mL。 

分别取各浓度的线性溶液5mi，采用顶空气相色谱法顶空进样，各重复测定3次，按程序记录色谱图，获得线性回归方程结果如下： 

乙醇：y＝0.5735×-0.2467R²＝0.9992； 

乙腈：y＝0.4536×-1.4736R²＝0.9967； 

二氯甲烷：y＝0.5639×+0.0231R²＝0.9993； 

异丙醚：y＝0.0225×+1.0181R²＝0.9990； 

乙酸乙酯：y＝0.1647×+0.1476R²＝0.9994； 

苯：y＝0.798×-0.1028R²＝0.9949； 

四氢呋喃：y＝0.0966×-0.0339R²＝0.9995； 

吡啶：y＝1.3109×-0.7997R²＝0.9960。 

上述的线性相关度中的各线性相关系数R²≥0.99，符合要求。 

耐用性、初始柱温±5℃，载气流速+0.2mL/min，溶液稳定性符合系统适应性要求；各溶剂峰面积RSD≤10％。 

本发明的原料药米非司酮中残留溶剂的测定方法中，原料药米非司酮中残留溶剂通过上述的实验验证，其结果都在接受标准之间，符合要求，因此该测定方法能够检测原料药米非司酮中残留溶剂检测。 

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。