帕潘立酮缓释微球及其注射剂和该缓释微球的制备方法

摘要

本发明提供了帕潘立酮缓释微球及其注射剂和该缓释微球的制备方法。本发明的帕潘立酮缓释微球包含：帕潘立酮以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物；其中，所述的帕潘立酮与所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的重量比为(0.160-0.190):(0.5-0.9)；并且所述的帕潘立酮缓释微球的粒径为20-50μm。本发明首次制备得到了帕潘立酮缓释微球，其载药量高，缓释期长，并且生物相容性好。

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体而言，本发明涉及包含帕潘立酮 的长效缓释微球，以及该缓释微球的制备方法和由该缓释微球制得的 注射剂。

背景技术

帕潘立酮为利培酮的活性代谢产物，英文名为Paliperidone，化学 名为6,7,8,9-四氢-3-(2-(4-(6-氟-1,2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基)乙 基)-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[2,1-a]嘧啶-4-酮，由美国强生公司开发， 2006年12月经美国FDA批准上市。研究显示其可有效延迟精神分裂 症的复发率，能够用于精神分裂症急性短期和长期维持性治疗减轻病症 长期使用可有效稳定患者病情。临床实验证明，其对精神分裂症阳性 症状和阴性症状均有疗效。

中国专利申请公开No.CN102058517A公开了一种缓释剂及其制 备方法。其中的方法是用缓释骨架、腹控包衣层、稀释剂、粘合剂、 润滑剂制成的一种缓释片剂。该方法主要是通过利用特殊的辅料是该 药品在体内能够达到以恒定的速度释放药物的作用，是口服给药，用 药相对来说要比注射用药剂量低，所持续时间短的缺点。

中国专利申请公开No.CN102274164A提到用帕潘立酮或帕潘 立酮衍生物和聚丙交酯-乙交酯/二甲基亚砜构成的一种化合物制成一 种缓释注射剂，但该方法在体内代谢之后会增加代谢副产物，增加药 物的毒副作用。

而微球制剂作为一种新技术，具有缓释或控释给药的特点，缓释 微球注射制剂具有以下优点：①与普通注射剂相比，长效注射微球显 著延长给药间隔，大大提高了病人用药的依从性；②可以持续维持最 低有效浓度，因而可以减少总的给药剂量，减轻某些副作用。如亮丙 瑞林微球的给药剂量可减少至每日给药剂量的1/4~1/8；③生物可降 解微球注射剂不需手术植入，仅肌肉注射，释药后载体可生物降解， 其降解物被机体吸收，克服了以往植入剂使用上的不便，为患者提供 了一种很好的给药方式。

但是，目前现有技术中尚没有出现帕潘立酮缓释微球，特别是长 效的帕潘立酮缓释微球，其原因主要在于，目前制备帕潘立酮缓释微 球释放度是一个难点，若所制得的微球载药量过低，将达不到延长给 药时间的效果。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种帕潘立酮 缓释微球及其注射剂和该缓释微球的制备方法。

具体而言，本发明提供：

（1）一种帕潘立酮缓释微球，其包含：帕潘立酮以及聚乳酸羟 基乙酸共聚物；其中，所述的帕潘立酮与所述的聚乳酸羟基乙酸共聚 物的重量比为(0.160-0.190):(0.5-0.9)；并且所述的帕潘立酮缓释微球 的粒径为20-50μm。

（2）根据（1）所述的帕潘立酮缓释微球，其中，所述的帕潘 立酮与所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物的重量比为0.175:0.7。

（3）一种由（1）或（2）所述的帕潘立酮缓释微球制得的注射 剂。

（4）一种（1）或（2）所述的帕潘立酮缓释微球的制备方法， 该方法包括下列步骤：

1）提供帕潘立酮和聚乳酸羟基乙酸共聚物的有机溶液，以及提 供乳化剂的水溶液；

2）将所述的有机溶液加入到所述的水溶液中，进行乳化；以及

3）分离，得到含有微球的有机相，去除其中的有机溶剂，从而 制得帕潘立酮缓释微球；

其中，所述的有机溶液和水溶液的体积比为(7-9):(100-120)。

（5）根据（4）所述的方法，其中，所述的有机溶液中的有机 溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯或其混合物。

（6）根据（4）所述的方法，其中，在所述的有机溶液中，所述 聚乳酸-羟基乙酸共聚物的浓度为0.0085-0.0100g/ml，所述帕潘立酮 的浓度为0.0020-0.0025g/ml。

（7）根据（4）所述的方法，其中，步骤1）所述的水溶液中乳 化剂的浓度为0.03-0.05g/ml。

（8）根据（4）所述的方法，其中，所述的乳化剂选自聚乙烯 醇、聚维酮、三油酸山梨醇酯、油酸钠中的一种或几种；优选为聚乙 烯醇。

（9）根据（4）所述的方法，其中，步骤2）所述的乳化是在搅 拌条件下进行的，搅拌速度优选为60-80rmp；乳化时间优选为7-9小 时；乳化温度优选为25-30℃。

（10）根据（4）所述的方法，其中，步骤3）所述的去除有机 溶剂是通过冷冻干燥的方式进行的。

（11）根据（10）所述的方法，其中，所述的冷冻干燥为间歇式 冷冻干燥，优选为在-38～-45℃下冷冻80-90分钟，再在-10℃下冷冻 5-6小时。

本发明的帕潘立酮缓释微球与现有技术相比具有以下优点和积 极效果：

1.本发明首次制备得到了帕潘立酮缓释微球，特别是长效的帕 潘立酮缓释微球。所制备微球表面光滑，外观均匀，颗粒规则无粘连， 平均粒径在20~50μm。

2.本发明的帕潘立酮缓释微球的载药量高，可高达20%，并且 缓释期在30天左右，因此能够有效地延长给药间隔，可达到每一个 月注射一次的效果，从而能够大大减少给药次数和药量，减轻患者的 痛苦，最大限度减少药物对全身特别是肝、肾的毒副作用。

3.本发明的帕潘立酮缓释微球的制剂的生物相容性好，从而可 用于皮下、肌肉等非静脉形式给药，可提高药物的生物利用率。

附图说明

图1为粒径大小对释放度的影响示意图；

图2为PLGA浓度大小对释放度的影响示意图；

图3为载药量对释放度的影响示意图；

图4为干燥方式对释放度的影响示意图；

图5为实施例1的帕潘立酮缓释微球的光镜图（1000×）。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本发明作进一步说 明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本 思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想， 均在本发明的范围之内。

在本文中，术语“聚乳酸-羟基乙酸共聚物”简称为PLGA，是由 丙交酯（LA）和乙交酯（GA）两种单体在催化剂的作用下聚合而成 的高分子共聚物。PLGA具有良好的生物相容性和生物降解性，在生 物体内可以降解成乳酸、水和二氧化碳（参见文献“Anderson JM,Shive  MS.Adv Drug Deliv Rev1997,28(1):5-24”），参与体内的新陈代谢， 在体内不会引起任何毒性反应，可广泛应用于生物医学组织工程（参 见文献“Okada,H.Adv.Drug Deliver.Rev.1997,28,43”），如药物控 制释放体系、生物体吸收缝合材料、骨科固定及组织修复材料等。该 材料已被美国FDA批准为药用高分子辅料使用。如Takeda公司的亮 丙瑞林微球Lupron Depot，Debiopharm公司的曲普瑞林微球Trelstar  Depot和Novartis公司的奥曲肽微球Sandostatin Depot等。

在本文中，术语“PVA”指的是聚乙烯醇。PVA溶于水且具有很 低的表面张力，在制备载药微球或微囊中，既可作微球或微囊的致孔 剂，也可作分散介质。

本发明人通过大量的实验摸索后发现，在制备帕潘立酮缓释微球 的过程中，如果提高载药量，药物的释放度将加快，从而降低了缓释 效果，降低了缓释期，而较低的载药量难以实现延长帕潘立酮给药间 隔的效果。因此，本发明人全面考察了帕潘立酮缓释微球的影响因素， 例如，进行了以下因素的考察：影响微球粒径的因素；影响微球释放 度的因素；粒径大小对微球释放度的影响；PLGA浓度对帕潘立酮缓 释微球释放度的影响；载药量对帕潘立酮缓释微球释放度的影响；干 燥方式对微球释放度的影响等。

本发明人发现，影响微球质量的因素包括分散体的密度和粘度、 两相间的界面张力。在乳液形成过程中，PLGA的浓度影响成球过程 中的沉积速度，浓度越高，沉积速度越慢，微球粒径越大，结构疏松， 释药速度越快；而温度对微球质量的影响是通过对系统的粘度及两相 间的表面张力的改变达到的，温度太低，介质将变得粘稠，从而对微 球的外观和释放产生影响，温度过高，一方面可能影响到微球中活性 剂的稳定性，另一方面过高的温度可能使得介质蒸发较快，影响成壁 材料而对微球的内部结构有缺陷；另外通常加入乳化剂来降低界面张 力，以期得到合适大小的微球，对乳化剂的选择要求其在分散相中不 溶解而微溶于连续相中，通常优选的乳化剂有聚乙烯醇、聚维酮、三 油酸山梨醇酯、油酸钠。

微球制剂中药物的释放主要是分两个阶段，第一阶段药物的释放 主要是微球表面药物的解吸附及从微球孔隙中的扩散，第二阶段主要 是PLGA的降解溶蚀释放药物。一般来说第一阶段药物量释放量大则 造成突释；影响第二阶段的主要因素包括PLGA的浓度，以及除去有 机相的温度等，这主要是上述因素的改变将影响微球内部结构的致密 程度。另外制备工艺过程中洗涤介质的温度和干燥方式对微球的释放 也会有影响，为了得到适合释放度的微球，可先采用低于玻璃转化温 度的萃取介质洗涤微球，再采用高于玻璃化温度的萃取介质洗涤微 球，推究原因先采用低温洗涤可以保证微球很好固化，使微球内部结 构致密，后高温是为了保证能有效的去除微球中的有机溶剂，另外采 用间歇干燥方式可以得到没有突释效应的呈S型释放曲线的微球。

在微球制备过程中采用了有机溶剂（例如二氯甲烷），因此在制 备工艺过程中需有除有机溶剂的工艺，最后再采用冷冻干燥方式收集 微球。

在这些研究的基础上，本发明人采用乳化-溶剂挥发法，进一步 得到了本发明的帕潘立酮缓释微球。

本发明的目的在于提供一种包含帕潘立酮的长效缓释微球，以及 该缓释微球的制备方法和由该缓释微球制得的注射剂。

具体而言，本发明第一方面提供了一种帕潘立酮缓释微球，其 包含：帕潘立酮以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物；其中，所述的帕潘立 酮与所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的重量比为(0.160-0.190): (0.5-0.9)；并且所述的帕潘立酮缓释微球的粒径为20-50μm。

优选的是，所述的帕潘立酮和所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的 重量比为0.175:0.7。

优选的是，所述的帕潘立酮缓释微球的平均粒径为35μm。

本发明第二方面提供了一种由所述的帕潘立酮缓释微球制得的 注射剂。

本发明第三方面提供了一种帕潘立酮缓释微球的制备方法，该 方法包括下列步骤：

1）提供帕潘立酮和聚乳酸-羟基乙酸共聚物的有机溶液；以及 提供乳化剂的水溶液；

2）将所述的有机溶液加入到所述的水溶液中，进行乳化；以及

3）分离，得到含有微球的有机相，去除其中的有机溶剂，从而 制得帕潘立酮缓释微球；

其中，所述的有机溶液和水溶液的体积比为(7-9):(100-120)， 优选为7:100。

优选的是，所述的有机溶液中的有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸 乙酯或其混合物。

优选的是，在所述的有机溶液中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物 的浓度为0.0085-0.0100g/ml，所述帕潘立酮的浓度为0.0020-0.0025 g/ml。

优选的是，所述的乳化剂选自聚乙烯醇、聚维酮、三油酸山梨 醇酯、油酸钠中的一种或几种；优选为聚乙烯醇。

优选的是，步骤1）所述的水溶液中乳化剂的浓度为0.03-0.05 g/ml。

优选的是，步骤2）所述的乳化是在搅拌条件下进行的，搅拌速 度优选为60-80rmp；乳化时间优选为7-9小时；乳化温度优选为25-30 ℃。

优选的是，步骤3）所述的去除有机溶剂是通过冷冻干燥的方法 进行的。

优选的是，所述的冷冻干燥为间歇式冷冻干燥，优选为在-38～ -45℃下冷冻80-90分钟，再在-10℃下冷冻5-6小时。

根据本发明的实施方式，本发明所采用的乳化溶剂挥发法，是 一种改进的S/O/W方法，将二氯甲烷加入混有PLGA的帕潘立酮中， 将形成的悬浊液加入到水相溶液中，有机溶剂挥发后得到微球。

例如，本发明的帕潘立酮缓释微球的制备方法的一个具体实施方 案可以是：

1）称取适量PVA，加水在90-100℃（如100℃）下溶解，放冷 至室温，定容，配制成0.03-0.05g/ml的PVA溶液，得水相溶液。

2）取步骤1）得到的水相溶液取适量（如1000ml）置于弗鲁克 （Fluko）反应容器中，备用。

3）按处方量称取帕潘立酮原料药和PLGA，加入二氯甲烷使其 完全溶解，得有机相溶液，备用。

4)将有机相溶液以分液漏斗滴加至Fluko反应容器水相溶液中， 滴加的同时进行机械搅拌，搅拌6-8小时（如8小时）后离心，弃去 上层溶液，收集下层微球，将所得微球用水进行洗涤三次后收集微球， 分装后进行冷冻干燥，得帕潘立酮缓释微球。

在步骤1）中，配制成0.03-0.05g/ml的PVA溶液，得水相溶液， 其中优选的是0.03g/ml的PVA溶液。

在步骤3）中，加入PLGA:帕潘立酮（重量比）为(0.5-0.9): (0.160-0.190)，优选3:1到5:1，更优选为4:1。

在步骤4）中，对于干燥方式，优选的是冷冻干燥。

以下通过例子的方式进一步解释或说明本发明内容，但这些例 子不应被理解为对本发明保护范围的限制。

在以下例子中，各化学试剂均可得自重庆鹏博化工有限公司；帕 潘立酮可得自大连美仑生物技术有限公司。

在以下例子中，采用HPLC法测定帕潘立酮的含量。色谱条件为 色谱柱：十八烷基硅胶键合色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相： 水-甲醇-三乙胺-冰醋酸（体积比为28:52:0.075:0.16）；检测波长 277nm；流速：1.0mL·min^-1；柱温：25℃；进样量：20μL。

在以下例子中，帕潘立酮缓释微球的释放度测定方法如下：按《中 华人民共和国药典》（2005年版）第二部附录XC第3法改进而来， 将称量好10mg微球置于事先处理好的透析袋中，加入pH7.4的 PBS4ml，扎紧透析袋口，置于转篮中，以500ml pH7.4的PBS为溶 出介质，转速50rpm，温度37℃，分别于2h、4h、6h、12h、24h取 样0.5ml，之后每48h更换一次新介质，并取样0.5ml备测。将取出 的备测样品经0.45μm的滤膜过滤，采用HPLC法测定帕潘立酮的量， 计算得到累积释放百分率，累积释放百分率的计算公式为： Q_n=C_n*V₀+(C₁+C₂+C₃+……+C_n-1)*V；Q_n为第n个取样点的累积释药 量；C_n为第n个取样点的浓度；V₀为释放介质体积；V为每次的取 样体积。包封率的计算公式为：包封率=实际载药量/理论载药量 ×100%。

在以下例子中，在光学显微镜下观察帕潘立酮缓释微球的形态， 并测定微球的粒径分布，其中粒径分散度用SPAN表示，计算公式： SPAN=（D₉₀-D₁₀）/D₅₀，式中的D₁₀、D₅₀、D₉₀分别表示有10%、50%、 90%的微球直径均小于该值所示的粒径。

平均粒径的计算公式为：D_平=（D₁+D₂+D₃+……+D_n)/n，其中， D为微球直径，n为微球数量。

在以下例子中，帕潘立酮缓释微球的载药量的计算公式为载药量 =微球中所含药物的重量/微球的总重量×100%。

实施例1

实验步骤：

1.称取适量PVA，加水在90℃下溶解，放冷至室温，定容，配 制成0.03g/ml的PVA溶液，得水相溶液。

2.取步骤1得到的水相溶液取1000ml置于弗鲁克（Fluko）反 应容器中，备用。

3.称取帕潘立酮原料药0.175g、PLGA0.7g，加入二氯甲烷70ml 使其完全溶解，得有机相溶液，即在该有机相溶液中，帕潘立酮原料 药的浓度为0.0025g/ml、PLGA的浓度为0.01g/ml。

4.将有机相溶液以分液漏斗滴加至Fluko反应容器水相溶液中， 滴加的同时进行机械搅拌，搅拌速度为60rmp；搅拌6小时后离心， 弃去上层溶液，收集下层微球，将所得微球用水进行洗涤三次后收集 微球，分装后进行冷冻干燥，冷冻干燥的方式为在-40℃下冷冻80分 钟，再在-10℃下冷冻6小时，得帕潘立酮缓释微球0.857g。

实验结果：

帕潘立酮缓释微球的光镜图可参见图5，从图5可以看出，帕潘 立酮缓释微球表面光滑，外观均匀，颗粒规则无粘连，粒径为23-50μm， SPAN=2.10，载药量为20%，包封率90%，缓释期为30天。

实施例2

实验步骤：

1.称取适量PVA，加水在95℃下溶解，放冷至室温，定容，配 制成0.03g/ml的PVA溶液，得水相溶液。

2.取步骤1得到的水相溶液取1000ml置于弗鲁克（Fluko）反 应容器中，备用。

3.称取帕潘立酮原料药0.185g、PLGA0.8g，加入二氯甲烷80ml 使其完全溶解，得有机相溶液。

4.将有机相溶液以分液漏斗滴加至Fluko反应容器水相溶液中， 滴加的同时进行机械搅拌，搅拌速度为60rmp，搅拌7小时后离心， 弃去上层溶液，收集下层微球，将所得微球用水进行洗涤三次后收集 微球，分装后进行冷冻干燥，冷冻干燥的方式为在-40℃下冷冻85分 钟，再在-10℃下冷冻6小时，得帕潘立酮缓释微球0.936g。

实验结果：

帕潘立酮缓释微球表面光滑，外观均匀，颗粒规则无粘连，粒径 为20-45μm，SPAN=2.09，载药量为18%，包封率88%，缓释期为30 天。

实施例3

实验步骤：

1.称取适量PVA，加水在100℃下溶解，放冷至室温，定容， 配制成0.05g/ml的PVA溶液，得水相溶液。

2.取步骤1得到的水相溶液取1000ml置于弗鲁克（Fluko）反 应容器中，备用。

3.称取帕潘立酮原料药0.190g、PLGA0.9g，加入二氯甲烷90ml 使其完全溶解，得有机相溶液。

4.将有机相溶液以分液漏斗滴加至Fluko反应容器水相溶液中， 滴加的同时进行机械搅拌，搅拌速度为60rmp，搅拌8小时后离心， 弃去上层溶液，收集下层微球，将所得微球用水进行洗涤三次后收集 微球，分装后进行冷冻干燥，冷冻干燥的方式为在-45℃以下干燥90 分钟，在-10℃下冷冻6小时，得帕潘立酮缓释微球1.046g。

实验结果：

帕潘立酮缓释微球表面光滑，外观均匀，颗粒规则无粘连，粒径 为25-50μm，SPAN=2.12，载药量为19%，包封率85%，缓释期为30 天。

实施例4

1.称取适量PVA，加水在100℃下溶解，放冷至室温，定容， 配制成0.03g/ml的PVA溶液，得水相溶液。

2.取步骤1得到的水相溶液取1000ml置于弗鲁克（Fluko）反 应容器中，备用。

3.称取帕潘立酮原料药0.160g、PLGA0.5g，加入二氯甲烷90ml 使其完全溶解，得有机相溶液。

4.将有机相溶液以分液漏斗滴加至Fluko反应容器水相溶液中， 滴加的同时进行机械搅拌，搅拌速度为60rmp，搅拌8小时后离心， 弃去上层溶液，收集下层微球，将所得微球用水进行洗涤三次后收集 微球，分装后进行冷冻干燥，冷冻干燥的方式为在-43℃下冷冻90分 钟，再在-10℃冷冻干燥6小时，得帕潘立酮缓释微球0.634g。

实验结果：

帕潘立酮缓释微球表面光滑，外观均匀，颗粒规则无粘连，粒径 为20-50μm，SPAN=2.11，载药量为20%，包封率85%，缓释期为30 天。

试验例1-4

本发明人首先考察了影响帕潘立酮缓释微球的释放度的因素，影 响药物释放的原因归因于两个方面，一是形成微球的内部结构的致密 性，二是微球表面药物的多少，一般微球结构疏松和其表面药物量大 将使药物的突释量大，因此本发明人对影响微球内部结构和药物载药 量的因素进行考察，包括：粒径大小；PLGA浓度；载药量；干燥方 式等。

试验例1-4所用帕潘立酮缓释微球1和2可分别参照实施例1的 方法进行制备，所采用的用量和参数见表1。

表1

实验结果可参见图1-4。

试验例1粒径大小对微球释放度的影响

粒径大小差异对释放度的影响原因可能归因于两个方面：一方面 是因为对表面积的影响，其中小粒径的微球具有更大的总表面积，因 此药物有更大的空间释放出来；另一方面是药物从小粒径微球中释放 经过的路径更短，从而对药物的释放度产生影响。因此考察了不同粒 径微球的释放度，试验结果表明，随着粒径的减小，微球在以药物扩 散溶解释放为特征的初始阶段小粒径微球释放量大于大粒径微球，但 在释放后期，微球中主药的释放是依靠聚合物的降解，此时大粒径微 球释放速率及释放量超过小粒径微球。试验结果见图1。

试验例2PLGA浓度对帕潘立酮缓释微球释放度的影响

PLGA的浓度对微球的释放会产生影响，其中PLGA浓度大，制 备的微球粒径较大，结构疏松。推究原因是因为PLGA浓度的不同将 影响微乳形成过程中所受的剪切力大小，随着PLGA浓度的增加，有 机相溶液的粘度增加，高粘度溶液具有更好的抗剪切力作用，使得微 乳不至于被分裂得更小，从而使形成的微球结构疏松，粒径较大，使 释药速度加快。试验结果见图2。

试验例3载药量对帕潘立酮缓释微球释放度的影响

随着载药量的增加，微球表面镶嵌的药物量增加，导致初期药物 释放加快，而后期药物释放主要是主药通过微球内部的空隙释放或者 因为聚合物的降解，载药量的增加，微球内部空隙更多，因此，高载 药量将使药物的释放度加快。试验结果见图3。

试验例4干燥方式对微球释放度的影响

干燥方式对微球释放度有影响，采用连续干燥制备的微球具有突 释效果，而采用间歇干燥工艺制备的微球突释量小。分别考察了连续 干燥和间歇干燥制备微球的释放度。试验结果见图4。

试验例5影响微球粒径因素的考察

本发明人还考察了微球粒径的大小及其分布的影响因素。微球粒 径的大小及其分布是微球制剂最重要的特征之一，其大小是在油滴形 成过程中决定的，可以通过调节乳化剂的浓度、油水相比例、搅拌速 度、搅拌时间、PLGA的浓度等控制，本发明人共考察了五组，即 A-E组，其中所用帕潘立酮缓释微球可参照实施例1的方法进行制备， 具体如下：

A组有机相溶液中PLGA的浓度分别为0.006、0.008、0.010g/ml， 其它条件同实施例1，所得平均粒径分别为23μm、30μm、35μm；

B组水相溶液中乳化剂的浓度分别为0.03、0.04、0.05g/ml，其 它条件同实施例1，所得平均粒径分别为35μm、30μm、23μm；

C组油水相的体积比分别为7:100、8:100、9:100，其它条件同实 施例1，所得平均粒径分别为35μm、40μm、50μm；

D组的搅拌速度分别为60、70、80rpm，其它条件同实施例1， 所得平均粒径分别为35μm、23μm、21μm；

E组的搅拌时间分别为6、7、8小时，其它条件同实施例1，所 得平均粒径分别为35μm、30μm、21μm。

实验结果表明，随着乳化剂浓度、搅拌速度、搅拌时间的增加， 微球粒径减小，而随着油水相比例、PLGA的浓度的增加，微球粒径 增大。